從對葉大戟中製備山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法

2023-06-05 05:49:41

專利名稱：從對葉大戟中製備山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法
技術領域：
本發明涉及天然產物分離領域，具體涉及採用常用的提取方法和柱層析分離技術從對葉大戟中山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的提取與分離，利用IH NMRU3C NMR,ES1-MS等波譜技術確定了所分離化學成分的結構。
背景技術：
對葉大戟(Euphorbia sororia A.)為大戟科大戟屬植物，以全草入藥和果實入藥，是一年生草本，維吾爾名為「蘇孜阿甫」。主要分布於中亞和我國新疆和田等地區。功能主治為利水消腫、降壓清腦、瀉下雜蟲，用於大便秘結、尿頻、高血壓頭痛、肝硬化、水腫以及疥瘡腫痛。據文獻報導，對葉大戟中含有萜類、黃酮類、生物鹼類、脂肪油、留醇類、酯類等多種生物活性的成分。本發明中，我們採用常用的提取方法和柱層析分離技術對「對葉大戟」化學成分進行了提取與分離，利用1H nmr、13c nmr,ES1-MS等波譜技術確定了所分離化學成分的結構。該成分為山奈酚-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷。對葉大戟中黃酮類化合物的生理活性作用主要體現在具有生物抗氧化性、抗衰老、治療心腦血管疾病、降血脂、降血壓、降低血糖作用、抗腫瘤作用等。新疆具有豐富的藥用植物資源，為了有效、合理地利用藥用植物資源，對天然藥物有效成分的提取分離及分析研究十分必要。

發明內容
本發明的目的是提供一種從對葉大戟中山奈酚-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的提取與分離方法。本發明的目的是通過下述方案實現:一種從對葉大戟中山奈酚-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的提取與分離方法，其特徵在於包含以下步驟:
1、提取與分離
Mj將10 kg對葉大戟地上部分粉碎後經95 %乙醇超聲波提取三次(每次2h)，過濾，合併濾液，回收乙醇得95 %乙醇浸膏物。其殘渣用70 %乙醇超聲波再次提取三次(每次2h)，過濾，合併濾液，提取溶液濃縮回收得水提浸膏物，將95 %乙醇浸膏物與水提浸膏合併，力口水混懸後依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，對萃取物進行減壓濃縮，得到四個部分的浸膏物。 [21用大孔樹脂分離:將正丁醇萃取部分加入至大孔樹脂中吸附，先用少量水洗，然後依次用20 %、50 %、80 %乙醇進行洗脫，分別收集下柱洗脫液，濃縮，薄層色譜檢測，合併相同部分，在流動相為50 %的流分中得到了粗提取物。
[31用矽膠吸附樹脂分離:將上述粗提取物以適量矽膠拌樣，上矽膠柱，進行矽膠色譜層析分離，分別用氯仿一甲醇(20:1，10:1, 6:1, 2:1,)為流動相進行梯度洗脫，薄層色譜檢測，合併相同部分，在流動相氯仿一甲醇為2:1的流分中得到了粗提取物。I4I用葡萄糖凝膠(S^hadex HL-20)純化:將上述粗提取物上凝膠柱，進行凝膠色譜層析分離，用氯仿一甲醇2:1為流動體系進行梯度洗脫，薄層色譜檢測，合併相同部分，流分中得到了純度很高的黃酮類成分，即山奈酚-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷。


圖1為山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的1H- NMR譜圖。圖2為山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的13C-NMR譜圖。圖3為山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的MS譜圖。
具體實施例方式實施方式I
將10 kg對葉大戟地上部分粉碎後經95 %乙醇超聲波提取三次(每次2h)，過濾，合併濾液，回收乙醇得95 %乙醇浸膏物。其殘渣用70 %乙醇超聲波再次提取三次(每次2h)，過濾，合併濾液，提取溶液濃縮回收得水提浸膏物，將95 %乙醇浸膏物與水提浸膏合併，加水混懸後依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。採用大孔吸附樹脂柱層析、矽膠柱層析、葡萄糖凝膠柱層析等分離方法對正丁醇萃取部分進行分離，得到山奈酚-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷，測定其含量為98.5%。實施方式2:
將10 kg對葉大戟地上部分粉碎後經95 %乙醇超聲波提取三次(每次2h)，過濾，合併濾液，回收乙醇得95 %乙醇浸膏物。其殘渣用70 %乙醇超聲波再次提取三次(每次2h)，過濾，合併濾液，提取溶液濃縮回收得水提浸膏物。提取物用乙酸乙酯萃取，將其水層用5 %NaHCO3處理後用正丁醇萃取，將其水層過濾後加HCl至pH 6 7，抽濾，，，，，得到的黃色固體重新溶解於10倍量熱水中，採用大孔吸附樹脂柱層析進一步純化，依次用水、30%乙醇和50%乙醇洗脫。50%乙醇洗脫下來的部分為濃縮後得到純度為97%以上的產物一山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷，測定其含量為96%。實施方式3:
將粉碎的I kg對葉大戟地上部分投入8倍量沸水中，煮沸30分鐘後，經棉花過濾得到濾液。用6倍量水同法提取2次，過濾。濾液用乙酸乙酯萃取三次後，向水層中加濃鹽酸調pH 2。冷卻後抽濾，用水洗2次。該粗產物懸浮於8倍量水中，用10 % NaHCO3溶液pH6 7，加入樣品量2%活性炭，45 °C保溫30分鐘。過濾，濾液再用濃鹽酸調pH 2。冷卻後過濾，少量95%乙醇洗滌， 抽乾，乾燥得到純度為60%以上的產物。產物重新溶解於10倍量熱水中，採用大孔吸附樹脂柱層析進一步純化，依次用水、30%乙醇和50%乙醇洗脫。50%洗脫下來的部分為濃縮後得到純度為98 %以上的產物一山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷。2、結構鑑定
綜合分析上述化合物的1H nmr、13c nmr, ES1-MS等波譜數據，鑑定該化合物為山奈酚-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷。上述技術方案可以看出，由於本發明實施例採用常用的提取方法和柱層析分離技術對「對葉大戟」的化學成分進行了提取與分離，利用1H nmr、13c nmr, ES1-MS等波譜技術確定了所分離化學成分的結構。因此得到單體化合物:山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷。所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬於本發明保護的範圍。山奈酚-3-0-β -D葡萄糖醛酸苷的化學結構式為:
權利要求
1.一種從對葉大戟中製備山奈酚-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其提取步驟如下: a.將10kg對葉大戟地上部分粉碎後經95 %乙醇超聲波提取三次，過濾，合併濾液，回收乙醇得95 %乙醇浸膏物，其殘渣用70 %乙醇超聲波再次提取三次，過濾，合併濾液，提取溶液濃縮回收得水提浸膏物，將95 %乙醇浸膏物與水提浸膏合併； b.加水混懸後依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取； c.將正丁醇萃取物經填充吸附材料的吸附柱，用乙醇洗脫，分別收集下柱夜並用旋轉蒸發儀旋幹； d.洗脫前，用體積分數為95%乙醇將層析柱浸泡24小時，然後用蒸餾水淋洗吸附柱至流出液為無乙醇味； e.將上述濃縮物上葡萄糖凝膠吸附，用甲醇洗脫，濃縮； f.將上述濃縮物經重結晶得黃酮單體。
2.根據權利要求1所述的一種從對葉大戟中製備山奈酚-3-Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特徵在於所述的對葉大戟是一種全草入藥和果實入藥的一年生草本植物。
3.根據權利要求1所述的一種從對葉大戟中製備山奈酚-3-Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特徵在於所述步驟c中的吸附材料先選用大孔樹脂ΑΒ-8，後用矽膠吸附樹脂。
4.根據權利要求1所述的一種從對葉大戟中製備山奈酚-3-Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特徵在於所述步驟c中的乙醇濃度為20 % 80 %。
5.根據權利要求1所述的一種從對葉大戟中製備山奈酚-3-Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特徵在於所述 步驟e中的甲醇濃度為20 %。
6.根據權利要求1所述的一種從對葉大戟中製備山奈酚-3-Ο-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特徵在於所述步驟f中可以用甲醇和二氯甲烷作為溶劑。
全文摘要
從對葉大戟中製備山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法採用常用的提取方法和柱層析分離技術對對葉大戟的化學成份進行了研究，得到了一種化合物，並經1HNMR、13CNMR、ESI-MS等波譜技術確定該化學成分為山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。本發明原料利用率高，製備過程安全，成本低，周期短，操作簡單，設備要求低，制的產品純度高等優點。
文檔編號C07H17/07GK103113439SQ20131006161
公開日2013年5月22日 申請日期2013年2月27日 優先權日2013年2月27日
發明者阿布拉江·克依木, 阿瓦罕·蘇來曼, 外塔尼古麗·卡米力 申請人:新疆大學