一種盤果菊苷a的提取純化方法

2023-12-06 04:14:51 6

專利名稱：一種盤果菊苷a的提取純化方法
技術領域：
本發明屬於製藥領域，具體涉及一種盤果菊苷A的提取純化方法。
背景技術：
盤果菊苷A (Prenantheside A)為倍半職類化合物,分子式為C21H3tlO9,分子量為426.46。呈無定形粉末狀,來源於菊科植物槭葉盤果菊acerifolia Benth.全植物，槭葉盤果菊在我國河北、遼寧等省區有廣泛分布。現代藥理研究表明，盤果菊苷A具有一定的細胞毒活性，對L-5178Y細胞株的ID5tl為4. O μ g/mL。經檢索，尚無盤果菊苷A的工業生產方法的專利文獻報導
發明內容
本發明的目的是提供一種盤果菊苷A的提取純化方法。本發明的盤果菊苷A的提取方法的技術方案包括以下步驟
A.取槭葉盤果菊藥材粉碎，用有機溶劑加熱提取後，減壓濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶於水，用水飽和正丁醇萃取4-5次，萃取液減壓回收正丁醇至盡，得正丁醇萃取物；
B.將正丁醇萃取物溼法裝柱，葡聚糖凝膠LH-20為吸附劑，用量為被分離樣品量的20-30倍，以甲醇或乙醇水溶液洗脫，減壓回收試劑並濃縮，得濃縮液；
C.將濃縮液進行高壓矽膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然後進行薄層層析收集含盤果菊苷A的流分，濃縮、乾燥即得。步驟A中所述提取用有機溶劑可選80-95%的乙醇、甲醇、丙酮溶液，提取方法可選回流、微波或超聲提取。步驟B中所述甲醇或乙醇的體積百分比濃度為50%_70%。步驟C中所述高壓矽膠柱的柱壓為2. 1-3. 4MPa，柱內徑為150_200mm，層析柱徑高比為1:12-15，矽膠目數為100-300目。本發明的優點在於本發明通過提取、萃取、連續柱層析分離純化以及結晶等步驟製備得到盤果菊苷A，耗時短、得率高、操作簡單、易於工業化；且本發明所提供的盤果菊苷A的提取純化方法所得產品含量高，為進一步開發利用提供了藥理原料、理論及實踐支持。
具體實施例方式 實施例I:
取槭葉盤果菊粗粉10kg，按質量比1:4加入85%的乙醇，65°C條件下加熱回流提取I. 5小時，提取2次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水混懸，用水飽和正丁醇萃取5次，合併正丁醇層，減壓回收正丁醇至盡，裝入S^hadex LH-20凝膠柱(用量為流浸膏的20倍)上，以60%乙醇洗脫，根據TLC合併洗脫液，減壓回收試劑並濃縮，得到盤果菊苷A濃縮液，將濃縮液用甲醇溶解溼法上樣至填料200-300目矽膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 8MPa，柱內徑為200mm，層析柱徑高比為1:15，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:1、100:2、100:5、100:20洗脫，分段收集各流分，將含盤果菊苷A流分合併，減壓回收溶剤，自然乾燥得到盤果菊苷A54mg，含量為98. 26%。實施例2:
取槭葉盤果菊粗粉IOkg,按質量比1:5加入80%的甲醇,60°C條件下加熱回流提取2. O小時，提取3次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水混懸，用水飽和正丁醇萃取4次，合併正丁醇層，減壓回收正丁醇至盡，裝入S印hadex LH-20凝膠柱(用量為流浸膏的20倍)上，以55%こ醇洗脫，根據TLC合併洗脫液，減壓回收試劑並濃縮，得到盤果菊苷A濃縮液，將濃縮液用甲醇溶解溼法上樣至填料100-200目矽膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為3. 2MPa，柱內徑為150mm，層析柱徑高比為1:12，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:1、100:2、100:5、100:20洗脫，分段收集各流分，將含盤果菊苷A流分合井，減壓回收溶剤，自然乾燥得到盤果菊苷A48mg，含量為96. 42%。實施例3:
取槭葉盤果菊粗粉IOkg,按質量比1:6加入95%的甲醇,70°C條件下微波提取20min, 提取4次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水混懸，用水飽和正丁醇萃取5次，合併正丁醇層，減壓回收正丁醇至盡，裝入S印hadex LH-20凝膠柱(用量為流浸膏的30倍)上，以65%甲醇洗脫，根據TLC合併洗脫液，減壓回收試劑並濃縮，得到盤果菊苷A濃縮液，將濃縮液用甲醇溶解溼法上樣至填料150-250目矽膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 5MPa，柱內徑為180mm，層析柱徑高比為1:13，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100: I、100: 2、100: 5、100:20洗脫，分段收集各流分，將含盤果菊苷A流分合併，減壓回收溶齊U，自然乾燥得到盤果菊苷A56mg，含量為97. 31%。實施例4:
取槭葉盤果菊粗粉10kg，按質量比1:5加入80%的丙酮，65°C條件下超聲提取I. O小時，提取2次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水混懸，用水飽和正丁醇萃取5次，合併正丁醇層，減壓回收正丁醇至盡，裝入S印hadex LH-20凝膠柱(用量為流浸膏的28倍)上，以70%こ醇洗脫，根據TLC合併洗脫液，減壓回收試劑並濃縮，得到盤果菊苷A濃縮液，將濃縮液用甲醇溶解溼法上樣至填料100-200目矽膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. IMPa，柱內徑為150mm，層析柱徑高比為1:14，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:1、100:2、100:5、100:20洗脫，分段收集各流分，將含盤果菊苷A流分合井，減壓回收溶剤，自然乾燥得到盤果菊苷A64mg，含量為96. 59%。實施例5
取槭葉盤果菊粗粉10kg，按質量比1:10加入90%的こ醇，65 °C條件下微波提取O. 5小時，提取3次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水混懸，用水飽和正丁醇萃取4次，合併正丁醇層，減壓回收正丁醇至盡，裝入S印hadex LH-20凝膠柱(用量為流浸膏的25倍)上，以60%甲醇洗脫，根據TLC合併洗脫液，減壓回收試劑並濃縮，得到盤果菊苷A濃縮液，將濃縮液用甲醇溶解溼法上樣至填料200-300目矽膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為3. 4MPa，柱內徑為160mm，層析柱徑高比為1:15，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100: I、100: 2、100: 5、100:20洗脫，分段收集各流分，將含盤果菊苷A流分合併，減壓回收溶剤，自然乾燥得到盤果菊苷A53mg，含量為98. 44%。
權利要求
1.ー種盤果菊苷A的提取純化方法，其特徵在於包括以下步驟 A.取槭葉盤果菊藥材粉碎，用有機溶劑加熱提取後，減壓濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶於水，用水飽和正丁醇萃取4-5次，萃取液減壓回收正丁醇至盡，得正丁醇萃取物； B.將正丁醇萃取物溼法裝柱，葡聚糖凝膠LH-20為吸附劑，用量為被分離樣品量的·20-30倍，以甲醇或こ醇水溶液洗脫，減壓回收試劑並濃縮，得濃縮液； C.將濃縮液進行高壓矽膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然後進行薄層層析收集含盤果菊苷A的流分，濃縮、乾燥即得。
2.根據權利要求I所述的提取方法，其特徵在於步驟A中所述提取用有機溶劑可選80-95%的こ醇、甲醇、丙酮溶液，提取方法可選回流、微波或超聲提取。
3.根據權利要求I所述的提取方法，其特徵在於步驟B中所述甲醇或こ醇的體積百分比濃度為50%-70%。
4.根據權利要求I所述的提取方法，其特徵在於步驟C中所述高壓矽膠柱的柱壓為·2. 1-3. 4MPa，柱內徑為150-200mm，層析柱徑高比為1:12-15，矽膠目數為100-300目。
全文摘要
本發明涉及一種盤果菊苷A的提取純化方法，其步驟如下取藥材粉碎，用有機溶劑提取後，減壓濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶於水，用正丁醇萃取，減壓回收正丁醇，加入葡聚糖凝膠柱層析分離，減壓回收試劑並濃縮，取濃縮液進行高壓矽膠柱層析，石油醚-丙酮梯度洗脫，收集盤果菊苷A流分，濃縮、乾燥即得。本發明方法操作簡單、設備投入小、產品純度好，適合工業化生產。
文檔編號C07H1/08GK102863490SQ201210356698
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月24日 優先權日2012年9月24日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司