一種黃秋葵黃酮的提純方法
2023-04-24 15:26:36 1
專利名稱：一種黃秋葵黃酮的提純方法
技術領域：
本發明屬於植物化學領域，涉及一種黃秋葵黃酮的提純方法。
背景技術：
黃秋葵是錦葵科(Malvaceae)秋葵屬(Abelmoschu Medic)咖啡黃葵 (Abelmoschusesculentus)植物，又名秋葵、補腎草、咖啡葵等。原產於印度，現廣泛栽培於 熱帶和亞熱帶地區。富含黃酮、多糖等成分。北美、日本等發達國家已將新鮮秋葵作為運動 員抗疲勞的首選蔬菜及老年人的保健蔬菜，其種子經過加工可作為咖啡替代物，具有較好 的提神作用，而且不含咖啡因。李建華等研究表明黃秋葵水提取液可顯著延長小鼠遊泳時 間、耐缺氧時間，提高高溫、寒冷條件下小鼠存活率，消除運動後的乳酸堆積，降低血清尿素 氮含量，所以黃秋葵水提取液可提高小鼠在應激狀態下的生存能力，對疲勞恢復、抗疲勞能 力提高具有促進作用。Si是多種酶的活性中心，通過IL-2系統介導引起淋巴細胞活化，增 強兒童免疫功能，以減少呼吸道感染和哮喘發病頻率，呂美雲等對食用秋葵微量元素進行 分析發現食用秋葵富含Zn，因此為其藥用價值提供了理論依據。近年來還發現黃秋葵有抗 癌等作用，還能緩解淋巴癌的擴散功效。目前國內對黃秋葵的研究主要集中在其外觀形態、 營養成分含量、終止條件方面，對其利用方面研究甚少。方晴霞等採用UV-2401 PC紫外可 見分光光度計在493nm波長處測定黃秋葵中總黃酮含量為2.8%，含量較高，因此，黃秋葵 的開發具有很好的前景。建立成本低、工藝簡單、可行性強的黃秋葵黃酮的提純方法對促進 黃秋葵資源的開發利用有重要意義。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是，提供一種黃秋葵黃酮的提純方法，尤其是一種工 藝簡單、針對性強、成本低從黃秋葵中提純黃秋葵黃酮的工藝。為解決上述技術問題，本發明所採用的技術方案是一種黃秋葵黃酮的提純方法，其特徵在於包括以下步驟(1)提取步驟取適量黃秋葵乾果，粉碎，用乙醇以冷滲或回流提取法提取，再用 丙酮與甲醇的混合液浸提，將所得的兩種提取液合併，減壓濃縮；(2)萃取步驟濃縮物用水飽和的正己烷萃取3次，除去脂溶性成分，保留剩餘浸 膏，用二氯甲烷萃取，合併二氯甲烷萃取液，減壓蒸餾回收溶劑，得到二氯甲烷萃取物；(3)分離純化步驟將二氯甲烷萃取物用柱層析分離，用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙 腈或它們的混合溶液洗脫，收集含黃酮的洗脫液，濃縮並用有機溶劑結晶即可獲得黃秋葵黃酮。步驟(1)所述乙醇體積百分比濃度為50-85%，用量為4-12倍質量比；丙酮和甲 醇的混合溶液中丙酮的含量佔40-80%。步驟(3)所述柱層析填料為大孔樹脂，可選AB-8、HPD100, DM103、LD605、D140、 D145、X-5，洗脫劑為乙醇、甲醇、丙酮或乙腈的水溶液或它們的混合溶液，其中水的比例為0-60 %，進行梯度洗脫或等梯度洗脫。步驟(3)所述結晶有機溶劑是丙酮、甲醇或它們的混合溶劑。本發明的黃秋葵黃酮的提純方法，採用水、醇、丙酮等無毒或低毒可回收溶劑提 取，有機溶劑萃取以及柱層析分離純化，所用試劑均易回收利用，工藝簡單，降低了提取成 本，適合工業化生產，為進一步研究黃秋葵黃酮的藥理作用提供了依據。
具體實施例方式下面的實施案例是對本發明的進一步詳細描述，但不意味著對本發明的任何限 制。實施例1 稱取Ikg黃秋葵乾果，粉碎，用4倍80 %乙醇冷滲提取提取2次，控制流速5ml/ min，再用丙酮-甲醇(1 1)混合溶液提取，合併兩種提取液，減壓濃縮，濃縮物用水飽 和的正己烷萃取3次，保留剩餘浸膏，用二氯甲烷攪拌萃取3次，合併萃取液並減壓蒸餾回 收二氯甲烷，得二氯甲烷萃取物，將所得萃取物以500g X-5大孔樹脂吸附，乙腈水梯度洗 脫，其中水佔混合溶液的比例由60%，間隔10%，梯度遞減至0%，用薄層層析跟蹤監測流 出液，收集含黃酮的流出液，減壓濃縮得黃秋葵黃酮濃縮物，再經丙酮結晶，得16. 8g純度 87%的黃秋葵黃酮。實施例2:稱取Ikg黃秋葵乾果，粉碎，用5倍70 %乙醇加熱回流提取2小時，提取3次，再 用丙酮-甲醇(3 幻混合溶液提取，合併兩種提取液，減壓濃縮，濃縮物用水飽和的正己 烷萃取3次，保留剩餘浸膏，用二氯甲烷攪拌萃取2次，合併萃取液並減壓蒸餾回收二氯甲 烷，得二氯甲烷萃取物，將所得萃取物以500gHPD100大孔樹脂吸附，乙腈水梯度洗脫，其中 水佔混合溶液的比例由60%，間隔15%，梯度遞減至0%，用薄層層析跟蹤監測流出液，收 集含黃酮的流出液，減壓濃縮得黃秋葵黃酮濃縮物，再經丙酮-甲醇(1 幻結晶，得18g 純度83%的黃秋葵黃酮。實施例3:稱取3. 5kg黃秋葵乾果，粉碎，用7倍75%乙醇冷滲提取2次，控制流速lOml/min， 再用丙酮-甲醇O 幻混合溶液提取，合併兩種提取液，減壓濃縮，濃縮物用水飽和的正 己烷萃取3次，保留剩餘浸膏，用二氯甲烷攪拌萃取3次，合併萃取液並減壓蒸餾回收二氯 甲烷，得二氯甲烷萃取物，將所得萃取物以1700gAB-8大孔樹脂吸附，丙酮水梯度洗脫，其 中水佔混合溶液的比例由60%，間隔15%，梯度遞減至0%，用薄層層析跟蹤監測流出液， 收集含黃酮的流出液，減壓濃縮得黃秋葵黃酮濃縮物，再經丙酮-甲醇(1 1)結晶，得56g 純度85%的黃秋葵黃酮。實施例4 稱取7kg黃秋葵乾果，粉碎，用10倍50%乙醇冷滲提取提取2次，控制流速7ml/ min，再用丙酮-甲醇0 1)混合溶液加熱回流提取3小時，合併兩種提取液，減壓濃縮， 濃縮物用水飽和的正己烷萃取3次，保留剩餘浸膏，用二氯甲烷攪拌萃取4次，合併萃取液 並減壓蒸餾回收二氯甲烷，得二氯甲烷萃取物，將所得萃取物以3. 5kg D145大孔樹脂吸附， 甲醇水梯度洗脫，其中水佔混合溶液的比例由60 %，間隔15 %，梯度遞減至O %，用薄層層析跟蹤監測流出液，收集含黃酮的流出液，減壓濃縮得黃秋葵黃酮濃縮物，再經丙酮-甲醇 (2 1)結晶，得112g純度89%的黃秋葵黃酮。實施例5 稱取15kg黃秋葵乾果，粉碎，用9倍60%乙醇加熱回流提取3小時，提取2次，再 用內酮-甲醇(1 1)混合溶液提取，合併兩種提取液，減壓濃縮，濃縮物用水飽和的正己 烷萃取3次，保留剩餘浸膏，用二氯甲烷攪拌萃取2次，合併萃取液並減壓蒸餾回收二氯甲 烷，得二氯甲烷萃取物，將所得萃取物以^g DM103大孔樹脂吸附，乙醇水梯度洗脫，其中水 佔混合溶液的比例由60 %，間隔15 %，梯度遞減至0 %，用薄層層析跟蹤監測流出液，收集 含黃酮的流出液，減壓濃縮得黃秋葵黃酮濃縮物，再經丙酮結晶，得257g純度82%的黃秋 葵黃酮。實施例6 稱取18kg黃秋葵乾果，粉碎，用8倍65%乙醇冷滲提取，控制流速Sml/min，再用 丙酮-甲醇(3 幻混合溶液提取，減壓濃縮，濃縮物用水飽和的正己烷萃取3次，保留剩 餘浸膏，用二氯甲烷攪拌萃取5次，合併萃取液並減壓蒸餾回收二氯甲烷，得二氯甲烷萃取 物，將所得萃取物以^g LD605大孔樹脂吸附，甲醇水梯度洗脫，其中水佔混合溶液的比例 由60%，間隔15%，梯度遞減至0%，用薄層層析跟蹤監測流出液，收集含黃酮的流出液，減 壓濃縮得黃秋葵黃酮濃縮物，再經甲醇結晶，得302g純度86 %的黃秋葵黃酮。實施例7 稱取30kg黃秋葵乾果，粉碎，用12倍85%乙醇加熱回流提取3小時，提取2次，再 用丙酮-甲醇(4 1)混合溶液冷滲提取，控制流速lOml/min，合併兩種提取液，減壓濃縮， 濃縮物用水飽和的正己烷萃取3次，保留剩餘浸膏，用二氯甲烷攪拌萃取3次，合併萃取液 並減壓蒸餾回收二氯甲烷，得二氯甲烷萃取物，將所得萃取物以15kg D140大孔樹脂吸附， 丙酮水梯度洗脫，其中水佔混合溶液的比例由60%，間隔10%，梯度遞減至0%，用薄層層 析跟蹤監測流出液，收集含黃酮的流出液，減壓濃縮得黃秋葵黃酮濃縮物，再經丙酮-甲醇 (1 3)結晶，得505g純度84%的黃秋葵黃酮。
權利要求
1.一種黃秋葵黃酮的提純方法，其特徵在於包括以下步驟(1)提取步驟取適量黃秋葵乾果，粉碎，用乙醇以冷滲或回流提取法提取，再用丙酮 與甲醇的混合液浸提，將所得的兩種提取液合併，減壓濃縮；(2)萃取步驟濃縮物用水飽和的正己烷萃取3次，除去脂溶性成分，保留剩餘浸膏，用 二氯甲烷萃取，合併二氯甲烷萃取液，減壓蒸餾回收溶劑，得到二氯甲烷萃取物；(3)分離純化步驟將二氯甲烷萃取物用柱層析分離，用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈或 它們的混合溶液洗脫，收集含黃酮的洗脫液，濃縮並用有機溶劑結晶即可獲得黃秋葵黃酮。
2.根據權利要求1所述的一種黃秋葵黃酮的提純方法，其步驟(1)所述乙醇體積 百分比濃度為50-85%，用量為4-12倍質量比；丙酮和甲醇的混合溶液中丙酮的含量佔 40-80%。
3.根據權利要求1所述的一種黃秋葵黃酮的提純方法，其步驟C3)所述柱層析填料為 大孔樹脂，可選AB-8、HPD100, DM103、LD605、D140、D145、X-5，洗脫劑為乙醇、甲醇、丙酮或 乙腈的水溶液或它們的混合溶液，其中水的比例為0-60%，進行梯度洗脫或等梯度洗脫。
4.根據權利要求1所述的一種黃秋葵黃酮的提純方法，其步驟C3)所述結晶有機溶劑 是丙酮、甲醇或它們的混合溶劑。
全文摘要
本發明涉及一種黃秋葵黃酮的提純方法，其包括下列內容1)取適量黃秋葵乾果，粉碎，用乙醇以冷滲或回流提取法提取，再用丙酮與甲醇的混合液浸提，將所得的兩種提取液合併，減壓濃縮；2)濃縮物用水飽和的正己烷萃取3次，除去脂溶性成分，保留剩餘浸膏，用二氯甲烷萃取，合併二氯甲烷萃取液，減壓蒸餾回收溶劑，得到二氯甲烷萃取物；3)將二氯甲烷萃取物用柱層析分離，用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈或它們的混合溶液洗脫，收集含黃酮的洗脫液，濃縮並用有機溶劑結晶即可獲得黃秋葵黃酮。本發明操作簡單、工序少，所使用的溶劑和柱填料均可反覆使用，節省了成本，其純度不低於80％。
文檔編號C07D311/40GK102040577SQ20101029323
公開日2011年5月4日 申請日期2010年9月27日 優先權日2010年9月27日
發明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司