一種純中藥護肝保健食品的製作方法

2023-05-15 08:01:21

專利名稱：一種純中藥護肝保健食品的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥領域，特別是涉及一種護肝用中藥保健食品。
背景技術：
肝臟功能十分複雜、多樣，在機體的物質代謝中佔有極其重要的地位。化學性肝損傷，顧名思義，是由化學性肝毒性物質所造成的肝損傷。這些化學物質包括酒精、環境中的化學毒物及某些藥物。作為人體的重要解毒器官的肝臟，化學物質可通過胃腸道門靜脈或體循環進入肝臟進行轉化，因此肝臟容易受到化學物中的毒性物質損害。大自然和人類工業生產過程中均存在一些對肝臟有毒性的物質，稱為″親肝毒物″，這些毒物在人群中普遍易感，潛伏期短，病變的過程與感染的劑量直接相關，可引起肝臟不同程度的肝細胞壞死、脂肪變形、肝硬化和肝癌。
我國是肝病大國，近年來病毒性肝炎、脂肪肝、酒精性肝病、藥物性肝損害及肝癌等肝病已成為威脅人類健康的主要疾病之一。且由於生活習慣及社會風俗問題導致有些人長期飲酒甚至飲酒過量，酒精已成為僅次於病毒性肝炎的肝臟第二大殺手。有調查顯示，我國一般人群的飲酒率為59.5％，男性嗜酒人群酒精肝患病率為21.77％，女性嗜酒人群為1.26％；重度飲酒者中80％以上有一定程度的脂肪肝，10％～35％可發展成酒精性肝炎，10％～20％將發展成肝硬化，且酒精性肝硬化預後較差，5年生存率約為23～50％。調查還指出，我國酒精性肝病在所有肝病中的比例有逐年增加趨勢，但目前對酒精性肝病尚無特效治療藥物。
西醫對酒精性肝病的研究大多集中在具體的發病機制上，而其發病機制尚不清楚，所以，目前尚無確切有效的治療方法和藥物。西醫理論認為由於長期飲酒會導致原發性和繼發性營養不良，患酒精性肝病的患者體內一般缺乏多種維生素，飲酒導致體內蛋氨酸代謝異常，使其轉變成S-腺苷甲硫氨酸(SAME)減少，還影響肝臟穀胱甘肽過氧化物酶(GSH)的合成，從而引起肝臟細胞膜受損；飲酒還導致磷脂和磷脂醯膽鹼減少，最終引起肝臟纖維化和肝硬化的發生。依照此發病機制研製出一些相關治療藥物，如凱西萊(通用名硫普羅寧)、甘利欣(通用名甘草酸二銨)、易善復(又名肝得健，通用名多烯磷脂醯膽鹼)、進口產品思美泰(通用名腺苷蛋氨酸)及阿拓莫蘭(通用名穀胱甘肽)等，以上藥物多為抗內毒素、抗氧化劑、糖皮質激素、對抗和改善乙醇代謝、以及其他如磷脂、己酮可可鹼、秋水仙鹼、S-腺苷蛋氨酸、熊去氧膽酸類藥物，有些藥物存在療效低或不確定、不良反應大的缺點，有些藥物還處於試驗階段，沒有病理學的多年臨床研究，其確切療效還有待探討。綜上而論，以西醫手段治療酒精性肝病雖有一定療效，但因其發病機制不清，治療手段僅處於指標而非治本階段。
雖然酒精性肝損傷的發病率持逐年上升趨勢，人們逐漸認識到過量飲酒會對身體造成一定危害，但由於大多數人認為酒精引起的肝損傷或因此引起的輕、中度脂肪肝不屬於嚴重疾病，也不影響日常生活，一般不用到醫院專門治療。然而隨著飲酒人數的不斷遞增，人們希望減輕飲酒帶來的負面影響也越來越迫切，這就造成了解酒、保肝、護肝類食品、保健食品市場的逐漸升溫。一般歐美、日本暢銷的解酒劑多為添加興奮劑、止痛劑、維生素和礦物質等類型的產品，只能暫時緩解宿醉引起的症狀，但對於酒精引起的肝損傷並無確切療效。從國內的衛生部和藥監局網站獲悉，目前申報成功的護肝類保健食品為200餘種(包括緩解化學性肝損傷)，但真正上市銷售的產品寥寥無幾，在市場上更多的為療效不確定，質量無保證，未經過衛生部、藥監局鑑定的三無產品。而在市場上銷售的正規產品，劑型比較單一，多為袋泡茶、衝劑、口服液等劑型，無論在產品的口感上，服用方法上還是產品的保存、攜帶上都無法滿足廣大消費者的需求。就目前來看，現今的緩解酒精性肝損傷的保健食品的種類與日益增長的需求人群之間存在著巨大的差距，因此，此類保健食品市場還有著相當大的發展空間。

發明內容
本發明針對上述領域的缺陷，提供一種純中藥護肝保健食品，對化學性肝損傷具有很好的輔助保護作用。
一種純中藥護肝保健食品，特徵在於其有效成分中含有下列組分的提取物為薑黃8-15份，丹參3-8份，決明子3-8份和青皮2-5份。
優選薑黃10-15份，丹參4-7份，決明子4-7份和青皮2-3份。
更優選薑黃12份，丹參6份，決明子6份和青皮3份。
所述保健食品的劑型為膠囊。
上述保健食品的製備方法，其特徵在於薑黃用醇提取，丹參、決明子和青皮混合後用水提取，合併提取液濃縮製得浸膏，真空乾燥後粉碎裝膠囊。
所述醇為乙醇。
所述浸膏的相對密度為1.30。
所述真空乾燥溫度為60-80℃。
中醫學認為，化學性肝損害的主要病機是外邪為患，導致脾虛肝鬱，肝失舒瀉，氣侈血瘀，最終導致肝、脾、腎等臟腑功能失常和衰竭。
本產品是以薑黃、丹參、決明子、青皮為主要原料製成得保健食品，具有對化學性肝損傷有輔助保護作用的功能。
薑黃薑黃為姜科植物Curcuma longa L.的乾燥根莖，主產於日本、美國、非洲、中國等地。聯合國世界衛生組織/食品藥品管理局批准薑黃為天然食品添加劑。中醫認為薑黃性味辛、苦，溫。歸脾、肝經。功能破血行氣、通經止痛。用於胸脅刺痛，閉經，徵瘕等。
現代藥理學研究表明，薑黃主要含精油(4.2％-14％)、脂肪油(4.4％-12.7％)等揮髮油及薑黃素(curcumin，difesuloylmethane)類成分，此外還有樹脂類、糖類、甾醇類、脂肪酸、多肽類、生物鹼及微量元素，其中類薑黃素類(curcurninoids)是二苯基炔類成分，有酚性和非酚性成分，現已分離並鑑定出20多個類薑黃素化合物。薑黃的黃色物質為略帶酸性的酚性物質，是薑黃素、去甲氧基薑黃素、雙去甲氧基薑黃素的混合體，稱之為薑黃色素，是薑黃發揮藥理作用的主要成分，而薑黃素是其中最重要的活性成分。薑黃素溶於乙醇、鹼、醋酸、丙酮和氯仿等有機溶劑，不溶於水，其分子式為C21H20O6，其主鏈為不飽和脂族及芳香族基團。
研究表明，薑黃具有抗炎、抗氧化、保肝、對抗纖維化、抗癌等作用。試驗證明，薑黃和薑黃素在體內和體外對各種毒物如四氯化碳、黃麴黴素B1、對乙醯氨基酚、鐵和環磷醯胺誘導的肝損傷都有保護作用，可抑制黃麴黴素B1誘導菌株thyphimurium沙門菌TA98和TA100的突變，抑制率超過80％。此外，薑黃素可顯著降低酒精加多不飽和脂肪酸餵飼動物的血中鹼性磷酸酶、γ-穀氨醯轉移酶及組織中膽固醇、TG和游離脂肪酸的含量，使肝和腎組織中的磷脂顯著降低，與組織病理學結果一致。因此薑黃素具有防止實驗性脂肪肝的作用。一般認為薑黃素的保肝作用是通過抗脂質過氧化而間接實現的。
在四氯化碳誘導的肝損害大鼠中，薑黃素可減少肝臟膠原沉積、α-平滑肌肌動蛋白陽性染色面積以及I型膠原mRNA的表達；在體外，薑黃素可減少星形細胞DNA的合成，下調α-平滑肌肌動蛋白、I型膠原蛋白及α1鏈mRNA的表達。無論在體內還是體外均提示薑黃素可能是一種抗纖維化製劑。
第一軍醫大學的劉永剛等人的研究結果證明，薑黃素對3種試驗動物模型的肝損傷具有明顯的保護作用。薑黃素可顯著降低肝損傷所致血清ALT，AST，NO的升高，降低損傷肝組織MDA的含量。劉永剛的另一項試驗證明，薑黃素能使升高的HA、LN、肝Hyp水平顯著降低，且病理觀察提示薑黃可以明顯抑制膠原纖維的增生，說明薑黃素確能抑制肝臟膠原纖維的合成和沉降，具有抗肝纖維化的作用，其機制可能與抑制NO、MDA的產生有關。
丹參丹參是唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge的乾燥根及根莖，具有活血祛淤、安神寧心、止痛等功效，至今，已經從丹參中分離出30多種化學成份，丹參素、丹參酮是其主要藥理成份。現代藥理研究表明，丹參是天然的抗氧化劑，丹參具有清除毒性自由基、抑制正常及損傷肝細胞脂質過氧化的作用。丹參素、丹參酮對四氯化碳和D-氨基半乳糖誘導的小鼠急性肝損傷和四氯化碳誘導的大鼠肝纖維化有保護作用。
南京醫科大學的李菁等的試驗證明，丹參素對能使正常肝細胞增殖，能消除活性氧自由基，增強肝細胞SOD活力，抑制膜的脂質過氧化反應，減輕肝細胞變性壞死。白求恩醫科大學的葉紅軍等人的研究顯示，丹參減輕肝細胞壞死、脂肪變性、促進肝細胞再生，改善肝脾血液循環及減輕其淤血及缺血狀態作用均優於輔酶Q10。遼寧中醫學院附屬醫院的吳百靈的研究表明，丹參可抑制ALT、AST酶活性增高，其作用是因為丹參具有顯著的抗脂質過氧化作用。山西醫科大學鄭曉賓等人的研究證明了丹參防治實驗性肝損傷的途徑之一可能是減少了TNF-α的釋放，降低了TNF-α的毒性而發揮作用。南京鐵道醫學院附屬醫院的劉怡晟等人研究表明，丹參對CCl4所致肝損傷有明顯的保護作用。丹參能明顯降低血清ALT、血清和肝勻漿MDA以及肝細胞的鈣含量，也能減少血清及肝組織SOD活力的下降，光鏡和電鏡下肝組織病理病變明顯減輕，同時發現丹參能明顯降低血清TNF-α，表明丹參的作用機制是通過減輕肝細胞膜脂質過氧化，保持自由基清除能力，減輕鈣超載，同時抑制TNF-α的釋放，加速其滅活。
決明子決明子為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明C.tora L.的乾燥成熟種子，始載於《神農本草經》，性味甘、苦、鹹、微寒，歸肝、大腸經，具有清肝明目、潤腸通便的作用。現代研究證明決明子具有降血壓、降血脂、保肝及抑菌等活性。決明子主要含大黃素(Emodin)、大黃酸Rhein)、大黃酚(chrysophanol)、蘆薈大黃素(Aloe-emodin)、大黃素葡萄糖甙(Emodin-b-monogl-ueoside)、大黃素蒽酮(Emodinanthrone)、大黃素甲醚(phy-Sseion)、決明子素(obtusifolin)，以及新月孢子菌玫瑰色素、決明松、決明內酯，尚含VA，還有糖類、蛋白質、脂肪、胺基酸、β胡蘿蔔素和人體必須的微量元素Fe、Zn、Mn、Cu等。現代藥理研究表明，決明子具有保肝、抑菌、降壓、通便、降血脂的作用。
研究表明，決明子具有保肝作用。據報導口服670mg/kg決明子水提取物對四氯化碳中毒的小鼠肝臟有弱的解毒作用。1989年德國學考證實小決明中含大黃酚為母核的一個三葡萄糖甙和一個四葡萄糖甙具有弱的保肝作用。同年該學者進一步證明決明子的抗肝毒的主要成分為萘並吡喃酮類成分，其中決明甙，紅鐮黴素-6-β-D-龍膽二糖甙和紅鑲男素-6-α-芹菜糖基-(1-6)-O-β-D-葡衙糖甙等萘並γ-吡喃酮甙具有顯著的對抗半乳糖胺對肝臟損傷作用。
青皮亦稱青桔皮或青柑皮，為芸香科柑橘屬植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培變種的乾燥幼果或末成熟果實的果皮。青皮藥材包括個青皮、四花青皮。除用桔類的未成熟果實外，其同屬植物甜橙C.sinensis Osbeck、香櫞C.wilsonii Tanaka以及茶枝柑C.chachiensis Hort等柑類未成熟果實亦作青皮用。青皮性味苦、辛，微溫，歸肝、膽、胃經。有舒肝破氣、消積化滯之功效。中醫用煎劑內服治療胸肋脹痛、胃部痞滿、疝氣、食積、乳腫、乳核等症。現代藥理研究表明，青皮的有效成分為左旋辛弗林乙酸鹽，天門冬氨酸等多種胺基酸、揮髮油和黃酮類化合物。對心血管、消化、呼吸系統等有廣泛的藥理作用，使用安全有效。
研究表明，青皮揮髮油對胃腸道有溫和的刺激作用，能夠促進消化液分泌和排除腸內氣體，主要表現為調整胃腸功能的作用；青皮還有利膽作用，青皮注射液能顯著增加大鼠的膽汁排出並能舒張豚鼠離體膽囊平滑肌，對抗氨甲醯膽鹼引起的膽囊收縮。青皮水煎劑對正常及四氯化碳肝損傷大鼠均有較強的利膽作用，可促進膽汁分泌，提高膽汁量，並對肝細胞功能有保護作用。
中醫理論認為過量飲酒之後，溼熱毒邪蘊結體內，損傷肝脾，致肝之疏洩與脾之運化功能失職，肝鬱脾虛，氣血不和，痰濁內生，氣血痰溼相互搏結，停於脅下，形成積塊(酒癖)。遷延日久，肝脾腎三髒俱損而功能失調，氣血水互結而成臌脹(酒臌)。其病機則可歸納為脾胃氣虛、痰溼內阻、水溼內停、氣血不和、氣滯血瘀等。其中，酒傷肝脾、聚溼生痰為發病之關鍵；而素體稟賦不足、脾胃虛弱為發病之本。因此調和肝脾、行氣活血、利水化痰、清熱解毒為治療之關鍵所在，缺少任何一項都不能確保護肝效果，都不是完整意義上的緩解酒精性肝損傷的產品。本發明由薑黃、丹參、決明子、青皮等4味中藥組成，薑黃是君藥，丹參是臣藥，決明子和青皮是佐使藥物，薑黃調和肝脾、破血行氣、健胃利膽；丹參活血化瘀、清熱安神；青皮疏肝瀉肺、破氣散結、發汗解熱、消痰下食；決明子清肝潤腸，利水通便，諸藥合用，補益調和、活血理氣、利水化痰、清熱解毒四效合一，保肝護肝更全面更徹底。從現代醫學方面來看，薑黃、丹參都有比較明顯的對抗化學性肝損傷的作用，決明子對化學性肝損傷有弱的解毒作用，而青皮通過溫和刺激胃腸道，同時促進膽汁分泌，協助對抗化學性肝損傷出現的食慾下降、消化不良等臨床症狀，四者協同，對化學性肝損傷有很好的保護作用。
本發明四味中藥提取物最終產物中每100g中含薑黃素約3.1g，製備成粒重為0.3g的膠囊，內容物為淺棕色粉末。推薦用量口服每日2次，每次3粒。
動物實驗分別以75、150、300mg/kg·BW(相當於人體推薦用量2.5、5、10倍)劑量給大鼠連續灌胃30天，能降低酒精性肝損傷模型大鼠的肝組織中的甘油三酯(TG)含量，提高其肝組織中的還原型穀胱甘肽(GSH)含量，減輕其肝組織的脂肪變性過程度，對大鼠的體重無明顯影響。由此可見，該樣品具有對酒精性肝損傷有輔助保護功能。
本發明還可以將上述四味中藥提取物製備成藥學上可接受的各種劑型，如片劑，顆粒劑，液體製劑等，還可以加入到其它常用食品中起到保肝護肝的作用。
本品是祖國傳統醫學理論對中草藥保肝護肝的科學應用，所用原料源於天然中草藥，不含有任何對人體產生副作用的西藥成分。產品採用成熟先進提取生產工藝，摒棄了傳統中藥材需要長時間煎煮，服用劑量較大，服用不便，口感較差等因素，採用硬膠囊劑型，既保證了產品的品質及療效，產品安全性高、密封性好，減少二次汙染的風險；又遮蓋了中藥的苦澀氣味，更易吞咽，使消費者服用時感覺更為舒適；且產品保存、攜帶十分方便，在適於消費者日常居家使用的同時，更適於人們在外出度假、旅遊及野外工作時使用。


圖1本發明生產工藝流程圖。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明。
實施例11.1配料1000粒膠囊(粒重0.3g)產品含有下列成分薑黃1200g丹參600g決明子 600g青皮300g1.2製備方法1、將薑黃用75％乙醇回流提取兩次，第一次8倍量乙醇回流1.5h，第二次6倍量乙醇回流1h，合併濾液；2、將清洗後的丹參、決明子、青皮放入提取罐內，加水提取兩次，第一次加水8倍量，煮沸2.5小時之後過濾，提取上清液；第二次加水6倍量，煮沸2小時之後過濾，提取上清液，合併濾液，減壓濃縮至原藥液的1/2量；3、將1、2中的濾液合併，減壓濃縮至相對密度1.30的稠膏；4、所得浸膏60-80℃真空乾燥；5、粉碎，過80目篩得膠囊內容物；6、裝膠囊，檢驗，裝瓶或鋁塑板包裝。
實施例22.1配料1000粒膠囊(粒重0.3g)產品含有下列成分薑黃1500g丹參300g決明子 700g
青皮200g2.2製備方法方法同1.2。
實施例33.1配料1000粒膠囊(粒重0.3g)產品含有下列成分薑黃800g丹參600g決明子 800g青皮500g3.2製備方法方法同1.2。
實施例44.1配料1000粒膠囊(粒重0.3g)產品含有下列成分薑黃1000g丹參800g決明子 500g青皮400g4.2製備方法方法同1.2。
實驗例1對化學性肝損傷有輔助保護作用動物實驗報告1材料和方法1.1樣品及供試液製備實施例1製備的膠囊(下面簡稱薑黃膠囊)人體推薦用量為每人(成人)每日2次，每次3粒，按60kg體重折算成30mg/kg·BW。室溫保存。試驗前用蒸餾水將樣品分別配成7.5、15.0、30.0mg/ml的溶液供試驗用。
1.2實驗動物選用廣西醫科大學醫學實驗動物中心(合格證號桂動許字2000第001號)繁殖的SPF級(III級)SD種雄性大白鼠60隻，體重190±12.4g。本中心SPF級實驗動物房合格證號桂醫動字第23003號。動物室溫度22～25℃，相對溼度55～70％。
1.3劑量選擇與受試物給予方式根據樣品的人體推薦用量，設75、150、300mg/kg·BW3個劑量組(分別相當於推薦量的2.5、5、10倍)，另設一個酒精肝損傷模型組(模型對照組)和一個陰性對照組。每組12隻動物。以經口方式給予受試溶液，灌胃量為1.0ml/100g BW。
1.4主要儀器與試劑儀器半自動生化分析儀、冷凍切片機、754-紫外可見光光度計、電子分析天平、顯微鏡、離心機、組織均漿器、旋渦混勻器、水浴鍋及微量加樣器等。
試劑無水乙醇、還原型GSH、磺基水楊酸、5，5』-二硫硝基甲酸、Na2HPO4、NaH2PO4、KH2PO4、NaN3、EDTA-Na2等；MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所生產，批號20030116)，TG試劑盒(中生北控科技股份有限公司生產，批號222053)1.5實驗方法依據《保健食品檢驗與評價技術規範-2003》中對化學性損傷有輔助保護作用試驗方法，採用酒精肝損傷模型方案。大鼠在SPF級動物實驗室內飼養觀察5天後，根據體重分層隨機分為5組，即3個劑量組和2個對照組，每組12隻雄性大鼠。開始試驗後，各劑量組大鼠灌胃給予相應濃度的樣品溶液，肝損傷模型對照組和陰性對照組給予蒸餾水，灌胃量為1.0ml/100g BW。每天灌胃一次，每周稱重兩次，連續30天。試驗至第30天時，肝損傷模型對照組及樣品各劑量組動物一次灌胃給予50％乙醇溶液1.2ml/g BW，製造肝損傷模型；陰性對照組灌給等量蒸餾水。禁食16小時後處死大鼠，快速取出肝臟，其中一部分(左葉)用作冷凍切片，進行病理組織學檢查，觀察脂滴在肝臟中的分布、範圍和面積並進行評分；另一部分用於製成勻漿分別測定丙二醛(MDA)、還原穀胱甘肽(GSH)及甘油三酯(TG)含量。
在模型成立的條件下，受試樣品組各項指標與肝損傷模型對照組比較，MDA含量下降、GSH含量升高、TG含量降低、脂肪變性減輕，且與模型對照組差異有顯著性，可判定其結果陰性。
1.6試驗數據處理用方差分析進行統計處理。
1.7結果判定滿足以下任一條件，可判定受試樣品具有對化學性肝損傷有輔助作用。
1.7.1肝臟MDA、還原型GSH和TG三項檢測指標陽性。
1.7.2肝臟MDA。還原型GSH和TG三項檢測指標中任兩項指標陽性和病理組織學檢查結果陽性。
2.試驗結果2.1樣品對大鼠體重的影響表1 試驗前後各組大鼠體重變化(X±S)

注表中各組間比較差異均無顯著性(P＞0.05)。
由表1可見，試驗前各組大鼠體重一致，試驗過程各周大鼠的體重及試驗結束時的增重量相互比較，差異均沒有顯著性(P＞0.05)，表明該樣品對大鼠的體重增長滿意明顯影響作用。
2.2樣品對酒精性肝損傷大鼠的肝組織過氧化脂降解產物丙二醛(MDA)含量的影響表2 各組大鼠肝組織勻漿丙二醛(MDA)含量(X±S)

注表中P值為各組與模型對照組比較的統計結果從表2可見，肝損傷模型對照組大鼠的肝組織MDA含量顯高於陰性對照組，且兩者的差異具有極顯著性(P＜0.01)，說明肝損傷模型成立。樣品各劑量組大鼠的肝組織MDA含量均低於肝損傷模型對照組，但各劑量組與肝損傷模型對照組的差異均無顯著性(P＞0.05)，表明該樣品對酒精性損傷的大鼠肝組織中的過氧化脂質含量具有一定降低作用，但不是很明顯。
2.3樣品對酒精肝損傷大鼠的肝組織甘油三酯(TG)含量的影響表3 各組大鼠肝組織勻漿TG含量(X±S)

注表中P值為各組與模型對照組比較的統計結果從表3可見，肝損傷模型對照組大鼠的肝組織TG含量明顯高於陰性對照，兩者的差異具有極顯著性(P＜0.01)，說明肝損傷明顯成立。樣品各劑量組大鼠的肝組織TG含量均低於肝損傷模型對照組，且各劑量組與肝損傷模型對照組的差異均具有極顯著性(P＜0.01)，說明該樣品具有降低酒精性損傷的大鼠的肝組織甘油三酯(TG)含量的作用。
2.4樣品對酒精性損傷的大鼠的肝組織還原型谷光甘肽(GSH)含量的影響表4 各組大鼠肝組織勻漿GSH含量(X±S)

注表中P值為各組與模型對照組比較的統計結果從表4可見，肝損傷模型對照組大鼠的肝組織GSH含量明顯低於陰性對照組，兩者的差異有極顯著性(P＜0.01)，表明肝損傷模型成立。樣品各劑量組大鼠的肝組織GSH含量均明顯高於模型對照組，且各劑量組與模型對照組的差異均具有極顯著性(P＜0.01)，表明該樣品具有提高酒精性肝損傷的大鼠肝組織中GSH含量的作用。
2.5樣品對酒精性肝損傷大鼠的肝組織脂肪變性的影響表5 各組大鼠肝組織脂肪變性檢查結果(X±S)

注表中P值為各組與模型對照組比較的統計結果從表5可見，肝損模型對照組大鼠的肝組織脂肪變性評分值顯著高於陰性對照組，兩者的差異具有極顯著性(P＜0.01)，表明肝損模型成立。樣品各劑量組大鼠的肝組織脂肪變性評分值均低於肝損模型對照組，且各劑量組與模型對照組的差異均具有極顯著性(P＜0.01)，表明該樣品具有減輕酒精性肝損傷的大鼠肝組織脂肪變性的作用。
3.小結分別以75、150、300mg/kgBW(相當於人體推薦用量2.5、5、10倍)劑量的薑黃膠囊給大鼠連續灌胃30天，能降低酒精性肝損傷模型大鼠的肝組織中的甘油三酯(TG)含量，提高其肝組織中還原型谷光甘肽(GSH)含量，減輕其肝組織的脂肪變性程度，對大鼠的體重無明顯影響。由此可見，該樣品具有對酒精性肝損傷有輔助保護功能。
實驗例2毒理學安全性評價試驗報告1材料和方法1.1樣品薑黃膠囊人口服推薦為1.8g/天/人。
1.2試驗動物與環境湖南農業大學動物科技學院實驗動物養殖場提供的清潔級SD大鼠、昆明種小鼠，實驗動物生產許可證號為SCXK(湘)2003-0003。環境溫度為23℃～25℃，溼度48％～64％，實驗動物使用許可證號為SYXK(湘)2003-0002。
1.3小鼠急性毒理試驗選用體重為18g～22g的健康昆明種小鼠20隻，雌雄各半。設計劑量為21500mg/kg·bw，取樣品53.75g加蒸餾水定容至100ml，間隔4h經口灌胃兩次，每次灌胃體積為0.2ml/10g·bw。灌胃前禁食16h，灌胃後連續觀察兩周，記錄中毒表現及死亡情況。
1.4Ames試驗採用經鑑定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株進行試驗。五個試驗劑量分別為5000、1000、200、40、8μg/皿，同時設自發回變、溶劑對照(蒸餾水)和陽性突變劑對照。樣品配置時，取1.25g樣品加蒸餾水定容至25ml，混勻，配成5000μg/皿濃度組受試液從中取5.0ml加蒸餾水定容至25ml，混勻，配成1000μg/皿濃度組受試液從1000μg/皿濃度組受試液中取5.0ml加蒸餾水定容至25ml，混勻，配成200μg/皿濃度組受試液依次類推，配成40、8μg/皿濃度組受試液，滅菌後備用。試驗採用多氯聯苯(PCB)誘導的大鼠肝微粒體酶(S-9)作為體外代謝活化系統(試驗前鑑定合格)。在頂層瓊脂中加入0.1ml試驗菌株增菌液、0.1ml受試液和0.5ml S-9混合液(當需要代謝活化時)，混勻後倒入底層培養基平板上。37℃培養48小時，計數每皿菌落數。如果受試物的回變菌落數超過自發回變菌落數的2倍以上，並有劑量-反應關係者定為陽性。整套試驗在相同試驗條件下重複做兩次。
1.5小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗採用間隔24小時兩次經口灌胃法進行試驗。取體重為25g～30g的健康昆明種小鼠50隻，隨機分為5組，每組10隻，雌雄各半。以40mg/kg·bw劑量的環磷醯胺為陽性對照，蒸餾水為陰性對照。試驗組3個劑量分別為10000、5000、2500mg/kg·bw，試驗時分別取樣品25.00g、12.50g、6.25g加蒸餾水定容至50ml，環磷醯胺陽性對照取100mg環磷醯胺加生理鹽水定容至50ml，給小鼠按0.2ml/10g·bw體積間隔24小時灌胃2次。末次灌胃後6小時頸椎脫臼處死動物，取胸骨骨髓用小牛血清稀釋塗片，甲醇固定，Giemsa染色。光學顯微鏡下，每隻動物計數1000個嗜多染紅細胞(PCE)，微核發生率以含微核的PCE千分率計，按Poisson分步處理。同時觀察200個PCE，計算PCE與成熟紅細胞(NCE)比值。
1.6小鼠精子畸形試驗取體重25g～35g的雄性昆明種小鼠25隻，隨機分為5組，每組5隻。以40mg/kg·bw劑量的環磷醯胺為陽性對照，蒸餾水為陰性對照。試驗組三個劑量分別為10000mg/kg·bw、5000mg/kg·bw、2500mg/kg·bw，試驗時分別取樣品25.00g、12.50g、6.25g加蒸餾水定容至50ml，環磷醯胺陽性對照取100mg環磷醯胺加生理鹽水定容至50ml，給小鼠按0.2ml/10g·bw體積灌胃，每日灌胃一次，連續5天，於末次灌胃後的第30天處死動物，取副睪塗片，伊紅染色，每隻動物計數1000個結構完整的精子，計算畸變精子的發生率。按x2檢驗統計處理。
1.730天餵養試驗選擇斷乳的SD大鼠隨機分為四組，即對照組及三個受試物組，每組20隻，雌雄各半。按人體推薦劑量，設低、中、高三個受試組劑量分別為1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw，約相當於人體推薦劑量的50、75、100倍，分別取樣品30g、45g、60g加蒸餾水定容至200ml配至所需濃度，對照組予以等體積的蒸餾水。分別給以受試動物灌胃，每天觀察一次，灌胃體積為1ml/100g·bw，連續30天。各組動物均餵以普通飼料，單籠餵養，自由飲食、飲水。每天觀察動物的活動和生長情況，記錄進、退食量，每周稱一次體重，計算食物利用率。實驗末，禁食14小時，摘眼球採血至抗凝管，抗凝管全血用雅培CD3700全自動血球計數儀測定血紅蛋白(Hb)、紅細胞壓積(HCT)，進行紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血小板(PLT)計數及WBC分類；非抗凝管血分離血清後用OLYMPUSAU400全自動生化分析儀測定總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、谷丙轉氨酶(ALT)、穀草轉氨酶(AST)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)和血糖(GLU)。頸椎脫臼處死動物作大體解剖，稱肝、腎、脾、睪丸重量，計算髒/體比值，如大體解剖未見異常，只對高劑量組與對照組取肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢做病理切片檢查，如發現病變，對其他劑量進行相應器官及組織進行檢查。
1.8實驗數據統計用Excel、Spss軟體進行數據轉化和統計分析。用Spss軟體統計比較時，先對數據進行方差齊性檢驗，若方差齊，採用單因素方差分析進行總體比較，發現差異再用Dunnett檢驗比較各劑量組與對照組。若方差不齊，則對原始數據進行適當的變量轉換，滿足方差齊性檢驗後，用轉換後的數據進行統計；若變量轉換後仍未達到方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計，發現總體比較有差異，則採用不要求方差齊性的Tamhane’sT2檢驗進行兩兩比較。
2結果2.1急性經口毒性試驗見表6，以21500mg/kg·bw劑量的薑黃膠囊給兩種性別的小鼠灌胃後，觀察14天，未見明顯的中毒症狀，也無死亡。第15天處死動物，解剖檢查，各主要臟器未見明顯異常改變。薑黃膠囊對雌、雄小鼠的急性經口LD50大於21500mg/kg·bw。根據《保健食品檢驗與評價技術規範》中的急性毒性分級標準，該樣品屬無毒物。
表6 薑黃膠囊對小鼠的急性毒性

2.2Ames試驗由表2、3可見，對TA97、TA98、TA100、TA102四株試驗菌株，加與不加S-9，樣品各劑量組回變菌落數均未超過自發回變菌落數的2倍，亦無劑量-反應關係，說明該受試物為誘變陰性。
表7 薑黃膠囊Ames試驗結果(第一次)

表8 薑黃膠囊Ames試驗結果(第二次)

注表7、表8結果為3個平皿的均值±標準差2.3小鼠骨髓嗜多染菌微核試驗表9 薑黃膠囊對小鼠骨髓微核發生率的影響


由表9可見，樣品各劑量組微核率與陰性對照組比較差異無顯著性，而環磷醯胺組與陰性對照組比較差異有顯著性(P＜0.05)，各劑量組與PCE與NCE比值在正常範圍。樣品對小鼠骨髓細胞未見損傷作用。
2.4小鼠精子畸形試驗由表10可見，樣品對小鼠精子畸形發生率未產生明顯改變，樣品各劑量組與陰性對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)，而環磷醯胺陽性對照組與陰性對照組比較差異有顯著性(P＜0.05＝。薑黃膠囊對小鼠精子不產生畸變作用。
表10 薑黃膠囊對小鼠精子畸變發生率的影響

2.5 30天餵養試驗2.5.1薑黃膠囊對大鼠體重、進食量及食物利用率的影響見表11-13。以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw劑量的薑黃膠囊給大鼠灌胃30天，餵養期間，各劑量組雌、雄大鼠各時點體重、進食量、食物利用率及總計食物利用率與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
表11 薑黃膠囊對大鼠體重的影響(X±s)


表12 薑黃膠囊對大鼠進食量的影響(X±s)

表13 薑黃膠囊對大鼠食物利用率的影響(X±s)

2.5.2薑黃膠囊對大鼠血液學指標的影響見表14-15。以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw劑量的薑黃膠囊給大鼠灌胃30天，各劑量組對雌雄大鼠的血紅蛋白、紅細胞總數、紅細胞壓積、血小板數、白細胞總數及分類與對照組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。
表14 薑黃膠囊30天餵養試驗血液學檢查結果(X±s)


表15 薑黃膠囊對大鼠WBC的影響(X±s)

2.5.3薑黃膠囊對大鼠生化指標的影響見表16。以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw劑量的薑黃膠囊給大鼠灌胃30天，雌、雄鼠劑量組各項生化指標與對照組比較無明顯差異(P＞0.05)。
表16 薑黃膠囊30天餵養試驗末期生化檢驗結果(X±s)

續表16 薑黃膠囊30天餵養試驗末期生化檢驗結果(X±s)


2.5.4薑黃膠囊對大鼠臟器重量的影響表17-1 薑黃膠囊對大鼠臟器重量的影響(X±s)

表17-2 薑黃膠囊對大鼠髒體比的影響(X±s)

由表17見，以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw劑量的薑黃膠囊給大鼠灌胃30天，各劑量組大鼠的臟器重量、臟器/體重比值與對照組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。
2.5.5大體解剖及組織學檢查結果大體解剖肉眼觀察各劑量組與對照組大鼠，未見異常，因此只對高劑量組與對照組進行組織病理切片檢查，結果(見表18-24)顯示劑量組肝、脾、腎、腸、胃、睪丸、卵巢與對照組比較均未見與樣品有關的病理改變。
表18 肝臟組織病理學檢查結果

注1/10表示10隻動物中1隻動物出現病變(餘表類同)。
表19 脾臟組織病理學檢查結果

表20 腎臟組織病理學檢查結果

表21 胃組織病理學檢查結果

表22 十二指腸組織病理學檢查結果

表23 雌鼠卵巢組織病理學檢查結果

表24 雄鼠睪丸組織病理學檢查結果

3小結樣品薑黃膠囊根據《保健食品檢驗與評價技術規範》(2003年版)有關規定進行安全性毒理學評價，結果如下1.急性毒性試驗對雌、雄小鼠的急性經口LD50均大於21500mg/kg·bw。屬無毒物。
2.三項遺傳毒性試驗三項遺傳毒性試驗(Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗)結果均為陰性。
3.30天餵養試驗以1.50g/kg·bw、2.25g/kg·bw、3.00g/kg·bw劑量的薑黃膠囊給大鼠灌胃30天，試驗期間，各劑量組大鼠體重增長、食物利用率與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。雌、雄鼠血生化指標、血常規指標及肝/體、脾/體、腎/體、雄鼠睪/體比值與對照組比較差異均無顯著性(P＞0.05)。肝、脾、腎、胃、十二指腸、睪丸(卵巢)組織病理檢查無明顯損害。
權利要求
1.一種純中藥護肝保健食品，特徵在於其有效成分中含有下列組分的提取物薑黃8-15份，丹參3-8份，決明子3-8份和青皮2-5份。
2.根據權利要求1所述的保健食品，其中薑黃10-15份，丹參4-7份，決明於4-7份和青皮2-3份。
3.根據權利要求2所述的保健食品，其中薑黃12份，丹參6份，決明子6份和青皮3份。
4.根據權利要求3所述的保健食品，所述保健食品的劑型為膠囊。
5.權利要求4所述的保健食品的製備方法，其特徵在於薑黃用醇提取，丹參、決明子和青皮混合後用水提取，合併提取液濃縮製得浸膏，真空乾燥後粉碎裝膠囊。
6.根據權利要求5所述的保健食品，所述醇為乙醇。
7.根據權利要求5所述的保健食品，所述浸膏的相對密度為1.30。
8.根據權利要求5所述的保健食品，所述真空乾燥溫度為60-80℃。
全文摘要
本發明涉及「一種純中藥護肝保健食品」，特徵在於其有效成分中含有下列組分的提取物薑黃8－15份，丹參3－8份，決明子3－8份和青皮2－5份。本產品是以薑黃、丹參、決明子、青皮為主要原料製成得保健食品，具有對化學性肝損傷有輔助保護作用的功能。動物實驗證明，本發明保健食品能降低酒精性肝損傷模型大鼠的肝組織中的甘油三酯(TG)含量，提高其肝組織中的還原型穀胱甘肽(GSH)含量，減輕其肝組織的脂肪變性過程度，而且對大鼠的體重無明顯影響。由此可見，該樣品具有對酒精性肝損傷有輔助保護功能。
文檔編號A61P1/00GK1883687SQ20061001206
公開日2006年12月27日 申請日期2006年5月31日 優先權日2006年5月31日
發明者楊敦國 申請人:北京藥谷傳奇醫藥科技開發有限公司