一種測定土壤微生物生物量碳的方法

2023-07-26 18:09:01 1

專利名稱：：一種測定土壤微生物生物量碳的方法一種測定土壤微生物生物量碳的方法
技術領域：
本方法涉及土壤中微生物生物量碳的測定，具體的說是一種改進土壤微生物生物量碳的測定方法。技術背景土壤微生物生物量是指土壤中體積小於5^11113-10^113活的微生物總量，其養分佔土壤中相應元素的比例很小，但在評價其對作物營養的作用時意義很大。因為它非常活躍並可迅速參與養分循環，既是養分循環過程的動力和迸入土壤的有機物質的"轉化者"，又是土壤能量和養分特別是C、N、P、S等元素內部供應機制的"源"和"庫"(文獻l:JenkinsonDS，LaddJN，Microbialbiomassinsoil:Measurementandturnover,SoilBiochemistry,1981，(5):415-471)。微生物生物量碳在土壤全碳中所佔比例很小，一般只佔土壤有機碳全量的1%-4%，但對土壤有效養分而言，卻是一個很大的給源和庫存,因為它是土壤有機質中最為活躍的部分，可反映土壤養分有效狀況和生物活性，能在很大程度上反應土壤微生物數量，是評價微生物量和活性的參數指標。微生物量碳轉化迅速，能在檢測到土壤總量碳變化之前反映土壤有機質的變化，是更具敏感性的土壤質量指標(文獻2:樊軍，郝明德，長期輪作施肥對土壤微生物碳氮的影響，水土保持研究，2003，10(1):85-87)。微生物量碳對不同土壤培肥措施非常敏感，不受無機氮的直接影響，這是微生物量碳用作土壤生物學評價指標的一大優勢(文獻3:宋秋華，李鳳民，劉洪升，王俊，李世清，黃土區地膜覆蓋對麥田土壤微生物體碳的影響，應用生態學報，2003，14(9):1512-1516)，通常被用於估計土壤生物狀態，對評價土壤質量狀況至關重要。現階國內外測定土壤微生物量碳的方法多採用氯仿燻蒸浸提法，主要步驟包括①燻蒸-浸提取新鮮土壤30g(相當於幹土25g左右)於小燒杯中，放入裝有30ml氯仿(帶沸石)、30mlNaOH和溼潤濾紙的真空乾燥器中，密閉抽氣至氯仿沸騰3min，關閉閥門。在25t:黑暗條件下培養24h，打開乾燥器檢驗是否漏氣，若不漏氣，取出氯仿和NaOH，用真空泵反覆抽氣，直到土壤聞不到氯仿氣味為止。另作不燻蒸作為對照。將燻蒸和不燻蒸土樣用100ml硫酸鉀溶液振蕩浸提30min，過濾。②測定(重絡酸鉀法)吸取浸提液5.0ml，K2Cr2O72.0ml，HgO0.07g，雙酸溶液15ml放入消煮瓶中，緩慢加熱沸騰回流30min，冷卻後，力fll滴鄰啡囉啉指示劑，用FeS04滴定剩餘的&20207(文獻4:魯如坤，土壤農業化學分析方法，北京中國農業科技出版社，2000:228-233)。使用該方法對土壤微生物量碳進行測定有以下缺點①消煮瓶底部面積大，而加入的樣品溶液及其他溶液體積少，加熱的邊緣效應很大，而且其坐入爐體後，不容易觀察到沸騰回流現象。②加熱方式過於籠統，對消煮過程來說，沸騰和回流是兩個過程，且回流要先於沸騰，通過多次實驗發現，以沸騰計時和以回流計時30min都不能取得良好的實驗結果，況且沸騰現象比較明顯，計時誤差較小，而回流現象不明顯，計時誤差較大。③回流需要冷凝裝置，試驗操作比較繁瑣，且對大批樣品來說，設置回流步驟既耗時又費事。
發明內容本發明的目的是提供一種重複性好，重現性高，並且簡單易行的測定土壤中微生物生物量碳的方法。為實現上述目的，本發明採用的技術方案如下燻蒸步驟不變(見文獻4)，測定時改用消煮儀作為消煮加熱裝置，消煮管代替消煮瓶盛裝試樣和試劑溶液，採用梯度升溫的方式實現緩慢加熱的目的，使用消煮儀對消煮管進行加熱時，消煮管上方蓋一尾部彎曲的小漏鬥，溶液沸騰後再次調整溫度並開始計時，50min後，將消煮管取下，冷卻。最後用FeS04反滴定剩餘的K2Cr207。一種測定土壤微生物生物量碳的方法，1)採用燻蒸-浸提的方法對土樣進行處理，以不燻蒸土樣為對照組；將燻蒸和不燻蒸土樣分別用4倍重量體積的硫酸鉀溶液振蕩浸提，過濾；2)重鉻酸鉀法測定向消煮管中一次加入浸提液5.0ml，K2Cr2070.5-5.0ml，HgO0.05-0.1Og，雙酸112804-11304溶液10-20ml，並在消煮管上方加蓋一尾部彎曲的小漏鬥；3)採用梯度升溫的方式對溶液進行加熱，溶液於40-5(TC時開始梯度升溫，加熱於6-8min內升溫至70-80"C，恆溫2-3min;加熱於8-10min內升溫至95-105°C，恆溫2-3min;加熱於10-13min內升溫至120-130°C，恆溫2-3min;加熱於13-15min內升溫至140-155°C，恆溫2-3min;加熱於15-18min內升溫至170-180。C，溶液開始沸騰並計時；恆溫180"C、50min後，冷卻；4)將消煮管中的溶液倒入容器中，用10-30ml蒸餾水分2-3次衝洗試管，加入一滴鄰菲囉啉指示劑，用FeS04進行滴定；1)計算FeS04溶液濃度其中^2&2。7—^0"207溶液濃度，~.禍一&0207溶液體積，CF,—FeS04溶液濃度，^,。^"FeS04溶液體積。2)計算回收率回收率％=_——-xioo%n標準物質xV標淮物質其中Vea—滴定空白時所消耗的FeS04溶液體積，V旨,一滴定乙醯苯胺標準溶液時消耗的FeS04溶液體積，n標準物質一標準物質的濃度，V標準物質的體積。3)有機碳含量的計算CV未豕a—V駭)xCV戰4x3xtsx1000其中V未燻『滴定未燻蒸樣品時所消耗的FeS04溶液體積，V燻蒸一滴定燻蒸樣品時所消耗的FeS04溶液體積，ts—樣品的稀釋倍數，m—烘乾土質量。ts—稀釋倍數m—烘乾土質量4)微生物生物量碳的計算其中Ec—薰蒸土樣有機碳量與未薰蒸土樣有機碳量之差，KEc—氯仿薰蒸殺死微生物體中的碳被浸提出來的比例。採用燻蒸-浸提的方法對土樣進行處理過程為取土壤25g，放入帶沸石的裝有25-40ml氯仿、20-40mlNaOH和溼潤濾紙的真空乾燥器中，密閉抽氣至氯仿沸騰3-5min，關閉閥門；在室溫黑暗條件下培養24-48h，打開乾燥器檢驗是否漏氣，若不漏氣，取出氯仿和NaOH，用真空泵反覆抽氣，直到土壤聞不到氯仿氣味為止；另作不燻蒸作為對照；將燻蒸和不燻蒸土樣用100ml硫酸鉀溶液振蕩浸提30min，過濾。使用改進方法對土壤微生物生物量碳進行測定，有如下優點1.加熱效果理想。消煮瓶底面積大，加熱的邊緣效應很大，其坐入爐體後不易觀察少量液體樣品的沸騰和回流，使用消煮管卻可以克服這一難題。在消煮管中加入上述液體後，液體的液面正好與鋁錠平面平行。我們對鋁錠加熱模塊進行隨機測溫試驗發現，不同位置的鋁錠加熱模塊之間溫度相差不超過±0.5°C，溫度計顯示溫度與設定溫度相差不超過士0.8°C,說明消煮儀將待加熱的液體包裹後，對液體的加熱均勻，液體幾乎是同時沸騰，減小了加熱過程中可能出現的邊緣差異，較消煮瓶加熱效果更加理想。2.精度高，準度度好。改進的方法還試驗了不同的升溫方式對試驗結果可能產生的影響。如果將初始溫度定在175。C，消煮儀顯示恆溫後，溶液尚不能沸騰，至溶液沸騰，所需時間有時長，有時短，測定結果也不穩定。改用梯度升溫，溶液升溫至175。C後l-3min，溶液一定沸騰，且測定結果精確度高，準確度好。3.儀器簡單，操作簡便。加熱回流需要冷凝裝置，這本身就加大了試驗的成本以及複雜程度。本方法改用尾部彎曲的小漏鬥蓋在消煮管頂部，以代替冷凝裝置。因為在該實驗中，沒有在18(TC以下揮發損失的物質，這樣就可以省略使用冷凝裝置。蓋上小漏鬥的作用有兩個一是減小熱量散失，起到保溫的作用；二是起到部分回流的作用。具體實施方式實施例1對比原有的方法和改進的方法測定乙醯苯胺標準溶液中的碳含量，以及不同的加熱方式對以乙醯苯胺標準溶液中碳含量測定結果的影響。參照文獻4，使用改進的重鉻酸鉀法對進口乙醯苯胺標準溶液中的碳含量進行測定(文獻4:魯如坤，土壤農業化學分析方法，北京中國農業科技出版社，2000:228-233)。向消煮管中依次加入乙醯苯胺標準溶液5.0ml，0.0667mol/l的K2Cr2070.5-5.Oml，催化劑HgO0.07g，濃112804:濃H3P04體積比為2:1的雙酸溶液10-20ml，並在消煮管上方加蓋一尾部彎曲的小漏鬥。採用梯度升溫的方式對溶液進行加熱，至溶液沸騰，調溫計時，50min後，停止加熱，冷卻。將試管中的溶液倒入錐形瓶中，用20ml蒸餾水分兩次衝洗試管，加入一滴鄰菲囉啉指示劑，用FeS04進行滴定。具體過程如下1)配製乙醯苯胺標準溶液取德國進口乙醯苯胺試劑0.1407克，加二次蒸餾水溶解，定容至1000ml容量瓶中，此溶液含有有機碳100mg/l。將該儲備液按一定倍數稀釋，得到一定濃度的溶液。2)向消煮管中依次加入乙醯苯胺標準溶液5.0ml，氧化劑K2Cr2072.0ml(氧化劑K2Cr207的加入量不固定，若樣品中含碳量高，則需多加入氧化劑，若樣品中含碳量低，則可少加氧化劑，只要保證燻蒸、不燻蒸的成對樣品加入的氧化劑量一致即可)，催化劑HgO0.07g，雙酸溶液(H2S04-H3P04)15ml，並在消煮管上方加蓋一尾部彎曲的小漏鬥。3)採用梯度升^的方式對溶液進行加熱，即從40-5(TC開始升溫，加熱6-8min，消煮儀顯示溫度至70-80°C，保持2-3min後調溫，再經過8-10min，消煮儀顯示溫度至95-105。C繼續保持2-3min，調溫，再經過10-13min後，消煮儀顯示溫度至120-13(TC後，保持2-3min，再調溫，加熱13-15min後，至溫度升至145-155°C，保持2-3min，再調溫，加熱15-18min左右，溫度升至170-175。C。溶液開始沸騰，再次調溫至180。C，計時。50min後，關閉消煮儀，將消煮管取下，冷卻。4)將試管中的溶液倒入錐形瓶中，用20ml蒸餾水分兩次衝洗試管，加入一滴鄰菲囉啉指示劑，用FeS04進行滴定。本方法的原理如下1)有機碳與重鉻酸鉀在加熱的條件下發生反應2K2Cr207+8H2S04+3C=2K2S04+2Cr2(S04)3+3C02T+8H202)滴定時剩餘的重鉻酸鉀與滴定劑硫酸亞鐵在常溫下反應K2Cr207+6FeS04+7H2S04=Cr2(S04)3+K2S04+3Fe2(S04)3+7H203)到達滴定終點時稍微過量的F^+與鄰啡囉啉生成紅色絡合物，顯示滴定終點的到達Fe2++3C12H8N2=Fe(C12H8N2)32+試驗結果的計算1)計算FeS04溶液濃度formulaseeoriginaldocumentpage8利用消煮瓶加熱回流方法和發明的改進方法對乙醯苯胺標準溶液中的碳進行測定，回收率和精密度結果列於表l。由結果可以看出，使用消煮瓶加熱回流測定結果既不穩定也不準確，而改進方法靈敏度高準確性也好。表l原方法與改進方法測tableseeoriginaldocumentpage8本文還實驗了不同加熱方式對溶液中有機碳測定結果的影響，回收率和精密度結果見表2。實驗結果顯示，由本發明採用的梯度加熱方式，可以很好的控制溫度升高，使全部溶液沸騰的時間間隔不超過2min，這在一般的加熱過程中很難做到，說明使用梯度加熱可以很好的抑制邊緣效應，使測定結果更加穩定準確。表2不同加熱方式對測定結果的影響tableseeoriginaldocumentpage8注使;甲改進的方法測定乙醯苯胺中碳含量的差異源於每次加熱的方式不盡相同編號l:從40"C開始升溫，7min至消煮儀顯示溫度為7(TC，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95"C繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155。C，保持3min，再調溫，加熱16min左右，溫度升至175°C，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號2:從4(TC開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至70°C，保持3min後調溫，再經過9min，消煮儀顯示溫度至IO(TC繼續保持2min調溫，再經過llmin後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155i:，保持2min，再調溫，加熱18min左右，溫度升至175'C，溶液開始沸騰，調溫度至180。C並計時。50min後，關閉消煮儀，將消煮管取下，冷卻。編號3:從45。C開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至75°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95"C繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至120。C後，保持3min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至145。C，保持2min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175。C。溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，將消煮管取下，冷卻。編號4:從40。C開始升溫，加熱8min，消煮儀顯示溫度至80°C，保持2min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95"C繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至120。C後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155'C，保持3min，再調溫，加熱16min左右，溫度升至175。C，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號5:從50。C開始升溫，加熱6min，消煮儀顯示溫度至70°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95"C繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155。C，保持3min，再調溫，加熱16min左右，溫度升至175"，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號6:從45。C開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至75°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95。C繼續保持2min調溫，再經過llmin後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持3min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至145。C，保持2min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175t:。溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，將消煮管取下，冷卻。編號7:從45。C開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至75°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95。C繼續保持2min調溫，再經過12min後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持2min，再調溫，加熱15min後，至溫度升至155。C，保持2min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175。C。溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，將消煮管取下，冷卻。編號8:從4(TC開始升溫，加熱8min，消煮儀顯示溫度至80°C，保持2min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95。C繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至122。C後，保持3min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至145。C，保持3min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175。C，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號9:從5(TC開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至75°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95°(3繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155。C，保持3min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175'C，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號10:從5(TC開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至75°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95。C繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至120。C後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155。C，保持3min，再調溫，加熱16min左右，溫度升至175。C，溶液開始沸騰並，調溫度至1S0。C並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號ll:從45"C開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至75°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95"繼續保持2min調溫，再經過13min後，消煮儀顯示溫度至123。C後，保持2min，再調溫，加熱15min後，至溫度升至155。C，保持2min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175"。溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，將消煮管取下，冷卻。編號12:從45。C開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至75°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95X:繼續保持2min調溫，再經過13min後，消煮儀顯示溫度至123。C後，保持2min，再調溫，加熱16min後，至溫度升至157'C，保持2min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175。C。溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，將消煮管取下，冷卻。編號13:從50。C開始升溫，加熱6min，消煮儀顯示溫度至70°C，保持3min後調溫，再經過8min二消煮儀顯示溫度至95。C繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155"C，保持2min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175。C，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號14:從5(TC開始升溫，加熱6min，消煮儀顯示溫度至70°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至97'C繼續保持2min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持2min，再調溫，加熱15min後，至溫度升至160。C，保持2min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175'C，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號15:從5(TC開始升溫，加熱8min，消煮儀顯示溫度至80°C，保持2min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95"繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至120。C後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155。C，保持2min，再調溫，加熱17min左右，溫度升至175'C，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。編號16:從45'C開始升溫，加熱7min，消煮儀顯示溫度至70°C，保持3min後調溫，再經過8min，消煮儀顯示溫度至95'C繼續保持3min調溫，再經過10min後，消煮儀顯示溫度至12(TC後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至155。C，保持2min，再調溫，加熱18min左右，溫度升至175i:，溶液開始沸騰，調溫度至18(TC並計時。50min後，關閉消煮儀，冷卻。實施例2使用改進的方法測定土壤中微生物生物量碳的含量。具體實施過程試驗步驟為1)燻蒸-浸提取新鮮土壤30g(相當於幹土25g左右)於小燒杯中，放入裝有30ml氯仿(帶沸石)、30mlNaOH和溼潤濾紙的真空乾燥器中，密閉抽氣至氯仿沸騰3min，關閉閥門。在25"C黑暗條件下培養24h，打開乾燥器檢驗是否漏氣，若不漏氣，取出氯仿和NaOH，用真空泵反覆抽氣，直到土壤聞不到氯仿氣味為止。另作不燻蒸作為對照。將燻蒸和不燻蒸土樣用100ml硫酸鉀溶液振蕩浸提30min，過濾。2)測定(重鉻酸鉀法)向消煮管中一次加入浸提液5.0ml，K2Cr2072.0ml，HgO0.07g，雙酸溶液15ml，並在消煮管上方加蓋一尾部彎曲的小漏鬥。3)採用梯度升溫的方式對溶液進行加熱，即以5(TC開始升溫，加熱8min，消煮儀顯示溫度至75。C，保持2min後調溫，再經過9min，消煮儀顯示溫度至10(TC繼續保持2min，調溫，再經過12min後，消煮儀顯示溫度至125。C後，保持2min，再調溫，加熱13min後，至溫度升至15(TC，保持2min，再調溫，加熱15min左右，溫度升至175°C。溶液開始沸騰並計時。50min後，關閉消煮儀，將消煮管取下，冷卻。4)將試管中的溶液倒入錐形瓶中，用20ml蒸餾水分兩次衝洗試管，加入一滴鄰菲餵啉指示劑，用FeS04進行滴定。試驗結果的計算1)計算FeS04溶液濃度:2)計算回收率n標準物質xV標推物質3)有機碳含量的計算xl00%0(C)=x3xtsxl0004)微生物生物量碳的計算使用改進的化學分析方法與儀器分析方法測定土壤中微生物生物量碳含量結果如表3所示，經t-檢驗比較，兩組結果平均值之間不存在顯著性差異，說明以所改進的方法測定土壤中微生物生物量碳結果準確可靠。表3化學分析方法和儀器分析方法測定土壤中微生物量碳結果比較(n=3)tableseeoriginaldocumentpage12權利要求1.一種測定土壤微生物生物量碳的方法，其特徵在於1)採用燻蒸-浸提的方法對土樣進行處理，以不燻蒸土樣為對照組；將燻蒸和不燻蒸土樣分別用4倍重量體積的硫酸鉀溶液振蕩浸提，過濾；2)重鉻酸鉀法測定向消煮管中一次加入浸提液5.0ml，K2Cr2O70.5-5.0ml，HgO0.05-0.10g，雙酸H2SO4-H3PO4溶液10-20ml，並在消煮管上方加蓋一尾部彎曲的小漏鬥；3)採用梯度升溫的方式對溶液進行加熱，溶液於40-50℃時開始梯度升溫，加熱於6-8min內升溫至70-80℃，恆溫2-3min；加熱於8-10min內升溫至95-105℃，恆溫2-3min；加熱於10-13min內升溫至120-130℃，恆溫2-3min；加熱於13-15min內升溫至140-155℃，恆溫2-3min；加熱於15-18min內升溫至170-180℃，溶液開始沸騰並計時；恆溫180℃、50min後，冷卻；4)將消煮管中的溶液倒入容器中，用10-30ml蒸餾水分2-3次衝洗試管，加入一滴鄰菲囉啉指示劑，用FeSO4進行滴定；試驗結果的計算1)計算FeSO4溶液濃度2.按照權利要求l所述的方法，其特徵在於採用燻蒸-浸提的方法對土樣進行處理過程為，取土壤25g，放入帶沸石的裝有25-40ml氯仿、20-40mlNaOH和溼潤濾紙的真空乾燥器中，密閉抽氣至氯仿沸騰3-5min，關閉閥門；在室溫黑暗條件下培養24-48h，打開乾燥器檢驗是否漏氣，若不漏氣，取出氯仿和NaOH，用真空泵反覆抽氣，直到土壤聞不到氯仿氣味為止；另作不燻蒸作為對照；將燻蒸和不燻蒸土樣用100ml硫酸鉀溶液振蕩浸提30min，過濾。3.按照權利要求1所述的方法，其特徵在於所述雙酸H2S04-H3P04溶液為濃H2S04:濃H3P04體積比為2:1。全文摘要本方法涉及土壤中微生物生物量碳的測定，具體的說是改進土壤微生物生物量碳的測定方法。本發明改用消煮儀作為消煮加熱儀器，消煮管代替消煮瓶盛裝試樣和試劑溶液，採用梯度升溫的方式實現緩慢加熱的目的，使用消煮儀對消煮管進行加熱時，消煮管上方蓋一尾部彎曲的小漏鬥，溶液沸騰後開始計時，50min後停止加熱，冷卻，最後用FeSO4反滴定剩餘的K2Cr2O7。本發明精密度高，準確性好，而且儀器簡單，操作簡便。文檔編號G01N21/77GK101210882SQ20061013511公開日2008年7月2日申請日期2006年12月27日優先權日2006年12月27日發明者樺周,宇萬太,璐張,強馬申請人:中國科學院瀋陽應用生態研究所