一種增敏腫瘤細胞藥劑的篩選方法及其應用的製作方法

2023-06-14 19:18:16

專利名稱：一種增敏腫瘤細胞藥劑的篩選方法及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及能減輕甚至逆轉腫瘤對抗腫瘤藥耐藥性的藥物及其篩選技術。

背景技術：
目前臨床上抗癌藥種類用的最多的是烷化劑和氧化-還原循環物，這兩類藥物包括環磷醯胺(CTX)、異環磷醯胺、美法蘭、瘤可寧、噻替派、馬利蘭、亞硝脲類藥物、順鉑等十多種抗癌藥。烷化劑類抗腫瘤藥物具有高度的化學活性、能直接作用於對腫瘤細胞生長具有重要意義的蛋白質、酶、核酸的關鍵部分，與這些組織中的氨基、巰基、羧基及磷酸基等起烷化反應，使細胞的蛋白質、酶及核酸發生變性、結構或生理功能發生變異，從而阻止腫瘤細胞增殖使其死亡。因本類藥物直接與生物大分子發生烷化反應，故又稱生物烷化劑。烷化劑類抗腫瘤藥物按化學結構還可分為氮芥類、乙烯亞胺類、磺酸酯類、滷代多元醇類及亞硝基脲類等。瘤可寧(Chlorambucil)為烷化劑類抗腫瘤藥，是一種氮芥衍生物，對多種腫瘤有抑制作用。鉑類金屬抗癌藥與烷化劑作用類似，均能與DNA分子內鳥嘌呤鹼基上N7或鳥嘌呤N3的分子形成交叉聯節。這些作用導致細胞因功能失調而死亡，其中的順鉑(Cisplatin)屬細胞周期非特異性藥物，具有細胞毒性，可抑制癌細胞的DNA複製過程，並損傷其細胞膜結構，有較強的廣譜抗癌作用。
因腫瘤而死亡的患者中90％與腫瘤細胞的耐藥性有關，特別是多藥耐藥性(multidrugresistance，MDR)，這是指腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物產生耐藥性的同時，對結構和作用機制不同的其他抗腫瘤藥物也都產生交叉耐藥性。導致產生多藥耐藥性的因素中，與細胞膜有關的主要因素有P-糖蛋白(P-gp)、多藥耐藥性相關蛋白(MRP)和肺多藥耐藥性相關蛋白(LRP)等，與細胞質有關的主要因素有凋亡抑制蛋白(I-APs)、拓撲異構酶II、蛋白激酶C和穀胱苷肽氧化還原系統等。但最重要、最常見的為P-gp，也稱典型MDR，其為一種廣泛存在於多種腫瘤細胞胞膜上的蛋白，負責將細胞內的藥物泵出細胞外，從而引起腫瘤細胞的多藥耐藥性，降低腫瘤化療的療效。另一方面可能是因為一些耐藥蛋白的表達增加或活力升高導致細胞自身的生存能力增強所致，從而腫瘤細胞產生了耐藥性。理論上，克服多藥耐藥性主要有兩種途徑，一種是開發對MDR、細胞不具有耐藥性的新抗癌藥物，另一種途徑是尋找MDR的逆轉劑與抗癌藥物合用，恢復MDR細胞對抗癌藥物的敏感性。在腫瘤化療領域中，克服多藥耐藥性的研究一直方興未艾，也是腫瘤化療領域急需解決的難題。
研究發現，Nrf2/ECH(NF-E2-related factor2或Chicken erythroid-derivedCNC-homology factor)是一種66-kDa蛋白，含有一高度保守的鹼性亮氨酸拉鏈(bZIP)結構，屬於CNC(cap-『n』-collar)轉錄因子家族成員，最初被Moi等人分離得到。常態下，胞漿中的Nrf2被胞漿蛋白伴侶分子Keapl(Kelch-like ECH-associated proteinl)的DGR區結合從而處於抑制狀態，Keapl同時可促進Nrf2的泛素蛋白酶體途徑降解過程。活性氧及親核劑等氧化應激源作用下，Nrf2脫離Keapl，轉移入核，通過bZIP與小分子Maf蛋白異二聚化之後二聚體與抗氧化元件ARE上GCTGAGTCA位點結合，啟動受ARE調節的基因的轉錄表達。基因分析顯示，ARE是一個特異的DNA-啟動子結合部位，位於穀胱甘肽S轉移酶(GSTs)、NAD(P)H醌氧化還原酶1(NQO1)、UDP-葡萄糖醛酸轉移酶(UGT)、微粒體環氧化物水解酶、穀氨醯半胱氨酸連接酶GCL(含GCLC和GSLM兩個亞基)、穀胱甘肽合成酶、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物岐化酶(SOD)、血紅素氧化酶(HO-1)、醛脫氫酶、醛酮還原酶、AKR1C1(醇醛酮還原酶家族1，成員C1)等II相解毒酶和抗氧化酶基因的5』側翼區域，其能被多種抗氧化性和(或)親電性物質激活，從而激活II相解毒酶和抗氧化酶基因的表達，進而增加細胞對氧化應激的抗性。Nrf2的激活受多個水平的調控，主要涉及Nrf2與Keapl的相互作用。Nrf2從Keapl解離是Nrf2激活的重要環節，主要通過兩種途徑，其一是親核物質或活性氧(reactive oxygen species，ROS)直接攻擊作用；其二是磷酸化的間接作用。目前認為促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、蛋白激酶C(PKC)和磷脂醯肌醇-3-激酶(PI3K)等幾條蛋白激酶途徑參與了Nrf2-ARE通路激活和其依賴基因表達的調控。Nrf2、Keapl和ARE是Nrf2-ARE信號系統的軸心元件。激活Nrf2-ARE信號通路能上調很多II相解毒酶和抗氧化酶基因的轉錄活性，從而表達一些抗致癌物、氧化劑和其他有毒化學物質的基因產物，起細胞保護作用。Nrf2是調控細胞對抗有害環境因素的關鍵轉錄因子，Nrf2缺失或激活障礙，會引起細胞對應激源的敏感性增高，可加重氧化應激源的細胞毒性，導致細胞功能障礙、凋亡甚至死亡，其與化學促癌的發生、炎症修復進程延長、細胞凋亡等病變密切相關。
近幾年來，對一些抗癌藥的耐藥性研究表明Nrf2調控的一系列基因與多藥耐藥性的典型蛋白MDR有很大的關係，這是腫瘤細胞對抗腫瘤藥產生耐藥性的一條重要途徑。某些抗腫瘤藥能在腫瘤細胞中激活Nrf2轉錄而導致第II相解毒酶和抗氧化酶基因表達量的增加，提高腫瘤細胞對氧化應激的抵抗能力，增強腫瘤細胞對抗癌藥的抗性，引起很多種腫瘤對這些抗癌藥物產生耐藥性。從而，以Nrf2為研究腫瘤耐藥性的分子靶標，篩選Nrf2的拮抗劑，可能起到致敏腫瘤細胞的作用，降低腫瘤耐藥性。


發明內容
本發明的目的是要解決腫瘤化療領域急需解決的難題，提供一種增敏腫瘤細胞藥劑的方法，獲取與抗癌藥物合用的能有效克服多藥耐藥性的藥劑。
為實現上述目的，本發明在Nrf2與腫瘤耐藥性關係的基礎上，建立了靈敏、穩定、以Nrf2為分子靶標的細胞篩藥平臺。採用以叔丁基對苯二酚(tBHQ)為Nrf2誘導劑，取Nrf2抑制劑視黃酸Retinoid acid(RA)或X為陽性對照，通過螢光素酶活力檢測，篩選有效抑制tBHQ和萊菔硫烷Sulforaphane誘導的螢光素酶活力的Nrf2抑制劑，作為降低腫瘤耐藥性的藥劑。據此試驗可知某些生物鹼小分子化合物可能使腫瘤細胞對化療藥物-烷化劑和氧化還原循環物更敏感。抗氧化性誘導劑tBHQ能強誘導II相解毒酶，而不會誘導其它藥物代謝酶，為單功能誘導劑。
通過本方法實驗中的螢光素酶活性檢測技術，我們篩選得到生物鹼類小分子化合物ZDAK02(硫代乙酸酯甲氧檗因coralyne sulfoacetate)可以成為Nrf2抑制劑，能有效抑制瘤瘤可寧Chlorambucil等抗腫瘤藥對Nrf2-ARE信號通路的激活作用。
硫代乙酸酯甲氧檗因ZDAK02結構式為
本發明的有益效果 本發明所篩選的藥劑ZDAK02(硫代乙酸酯甲氧檗因coralyne sulfoacetate)能增強烷化劑抗癌藥瘤可寧Chlorambucil對腫瘤細胞的毒性並能減輕甚至逆轉腫瘤對該抗癌藥的耐藥性。以人乳腺癌MCF-7細胞株和人結腸腺癌Caco2細胞株為實驗細胞，用報告基因技術檢測不同加藥組細胞中螢光素酶活力，ZDAK02能有效抑制該誘導作用；ZDAK02能使瘤可寧Chlorambucil對細胞的毒性增加。實踐證明本發明對抗腫瘤具有顯著效果。



圖1為tBHQ濃度0、1、5、10、20μM所誘導的螢光素酶活性； 圖2為Sul濃度0、1、5、10μM所誘導的螢光素酶活性； 圖3為ZDAK02(硫代乙酸酯甲氧檗因coralyne sulfoacetate)(cs)濃度0、10、20、25、40、50μM對20μM tBHQ的所誘導的螢光素酶活性的抑制百分比曲線； 圖4為抑制劑50μM CS增加XW細胞對瘤可寧Chlorambucil的敏感性； 圖5為抑制劑50μM CS增加Caco2細胞對瘤可寧Chlorambucil的敏感性。

具體實施例方式 本發明篩選增敏腫瘤細胞藥物的方法，其具體實施過程如下，參照附圖可以對結果進行統計分析 1、材料 1.1 試劑 DMEM(GIBCO)每包Dulbecco’s Modified Eagle Medium(10.3g)溶於高純水中，再緩慢加3.7g NaHCO3體積調至1L，過濾分裝並4℃保存。
MEM(GIBCO)每包Minimum Essential Medium(10.3g)溶於高純水中，再緩慢加2.2gNaHCO3體積調至1L，過濾分裝並4℃保存。
胎牛血清(FBS，GIBCO) 抗生素Antibiotic-Antimycotic(GIBCO，100*) G418(GIBCO，100*)稱取G418粉1.6g，溶於20ml1*PBS中，抽濾除菌，分裝後-20℃保存。
胰酶Nacl(百達)8g+Kcl(天龍)0.2g+Na2HPO4(湖試)3.2g+KH2PO4(湖試)0.2g+胰酶(trypgin，生工)2.5g+EDTA(生工)0.2g溶於雙蒸水1000ml中，抽濾除菌，分裝後-20℃保存，注意在加入胰酶粉後不能加熱和劇烈攪拌。
10*磷酸鹽緩衝液(PBS)Nacl(百達)80g+Kcl(天龍)2.0g+Na2HPO4(湖試)14.4g+KH2PO4(湖試)2.4g，加水調至1L，調PH值至7.2-7.4。使用時，要稀釋成1*PBS且經過高溫滅菌。
臺盼蘭溶液稱臺盼蘭粉(沃凱)0.2g溶於50ml的生理鹽水中，放入50℃水浴中加熱，經過過濾後常溫保存。
1.2 藥品 tBHQ、Sulforaphane ZDAK02(coralyne sulfoacetate)，順鉑Cisplatin(APS)、苯丁酸氮芥Chlorambucil L-Buthionine-[S，R]-sulfox-imine(bso，SIGMA)抑制還原型穀胱甘肽(GSH)合成的限速酶穀氨醯半胱氨酸合成酶(GCS)，使GSH合成減少。使用bso1h後檢測到細胞內的氧活性物質(ROS)增多，3h達高峰，此時GSH水平降至正常的30％，GSH在24h後完全耗竭，48h後線粒體失去功能。
MTT250mg MTT粉溶於50ml 1*PBS中，抽濾除菌後，分裝後4℃避光保存。
螢光素酶發光底物試劑盒Luciferase Assay System(Promega) 裂解液Passive lysis(5*Buffer，Promega)、 Dimethyl sulfoxide minimum 99.5％ GC(DMSO，GIBCO) 1.3 實驗器材 96孔板購自Greiner Bio-one Millex Syringe Driven Filter Unit 0.22μM(MILLIPORE) Steriltop Vacuum Driven Disposable Filtration System(MILLIPORE) 電子天平FA2004N(上海精密科學儀器有限公司) 培養箱Thermo Series II Water Jacketed CO2 Incubator 全波長酶標儀Thermo MULTISKAN SPECT RUM 螢光化學發光儀Thermo FLUOROSKAN ASCENT FL EPPENDORF MIX MATE 1.4 細胞 本實驗室建立了一非常靈敏、穩定、以Nrf2為分子靶標的、人類乳腺癌MCF-7螢光素酶報告蛋白細胞株ARExw(xw)。這一細胞株具有一ARE-報告蛋白基因質粒，此報告蛋白基因定位在8個連鎖排列的ARE序列下遊。將需要篩選的化合物加到細胞中，就能檢測所篩選的化合物是否能降低誘導或降低報告蛋白基因的表達。這一細胞篩藥平臺確保了所獲取的藥物先導物的可溶性及細胞膜穿透性。
結腸癌Caco2株來源於人體結腸癌細胞，同源性好，在培養條件下可自發進行上皮樣分化並可形成緊密連接，其形態學、標誌酶的表達等特徵與人類腸道黏膜相似。
上述兩種細胞株均購自上海細胞所。
2、方法 2.1 細胞復甦 ARExw細胞培養基為DMEM+10％ FBS+抗生素(1100)+G418(1100)，Caco2細胞培養基為MEM+10％ FBS+抗生素(1100)，兩種細胞培養條件為5％CO2，(37±0.5)℃，溼潤。
(1)從液氮中取出細胞株，立刻化凍。
(2)把冰凍管內的細胞懸液轉移至離心管內，加入5ml培養基。
(3)以1000轉/秒，離心5min後，去掉上清液，再加入5ml的培養基並多次吹打細胞沉澱，使之完全分散。
(4)取小號的培養瓶，在其表面註明復甦細胞名稱、培養基類型、代數、時間。最後離心管內細胞懸液轉移至培養瓶內，把培養瓶的瓶蓋旋鬆放入培養箱內。
2.2 細胞擴增 (1)在顯微鏡下觀察細胞，若細胞覆蓋率超過70％，則準備擴增細胞。
(2)吸去廢液，再用1*PBS(與原培養瓶內的培養基相同的量)洗一遍，往培養瓶內加入胰酶(小號瓶1-2ml，中號瓶5ml)，再把培養瓶放入培養箱內加熱3-5min，消化至細胞從鋪展開的多邊形稍縮為圓形。
(3)取出培養瓶，往裡面加入含10％NCF的培養液停止消化(小號瓶2-3ml，中號瓶5ml)，並吹打數次，再把細胞懸液體轉移至離心管內。
(4)以1000轉/秒，離心5min後，去掉上清液，再加入培養基並多次吹打細胞沉澱，使之完全分散。
(5)按細胞量取相應個數的中瓶加入培養基，再加入離心管內的細胞液，中瓶保持總體積為15ml/瓶。
(6)在培養瓶表面註明復甦細胞名稱、培養基類型、代數、時間。最後把培養瓶的瓶蓋旋鬆放入培養箱內。
2.3種細胞 (1)吸去廢液，再用1*PBS洗一遍，往培養瓶內加入胰酶消化。
(2)加入含10％FBS的培養液停止消化，並吹打數次，再把細胞懸液體轉移至離心管內。
(3)以1000轉/秒，離心5min後，去掉上清液，再加入培養基並多次吹打細胞沉澱，使之完全分散。
(4)吸50ul的細胞懸液到0.5ml的小離心管內，再加入100ul的1*PBS和50ul的臺盼藍，用槍混勻。再吸10ul到數細胞的玻片內，進行數細胞。
(5)根據細胞數，算好體積，則即以每孔200ul細胞懸液種到96孔板中，注意96孔板最外面的一圈孔不加，因此只有60孔。最後把種好的96孔板放入培養箱內。
2.4 細胞加藥 (1)現有藥品的濃度tBHQ 5mM和100mM、Sul(sulforaphan)5mM、ZDAK02(coralynesulfoacetate)5mM、Chlorambucil 50mM和bso 10mM (2)bso預處理是96孔板每孔200ul中加入1ul的100mM bso，則終濃度為50μM bso，然後放入培養箱內過夜，不要超過24h。
(3)設計加藥分組，一般以三個孔為一組，有一個空白對照、DMSO1％對照、加誘導藥組、抑制劑組、誘導藥和抑制劑混合組。
(4)把藥與含抗生素的無血清的培養液混勻，並取出96孔板去其廢液，用1*PBS洗一遍，進行加藥。最後放入培養箱內過夜。
2.5 螢光素酶測定 (1)取發光底物和裂解液化凍。
(2)取加藥24h的96孔板，去掉廢液，用1*PBS洗一遍，然後每孔加入20ul的裂解液，放到MIX MATE上1000rpm，25min。
(3)25min後避光往每孔加100ul的發光底物，1000rpm，60s。最後去螢光化學發光儀讀數。
2.6 細胞增殖抑制實驗(MTT法) (1)種細胞，放入培養箱內過夜。
(2)設計加藥分組，一般以三個孔為一組，則96孔板的60個孔可以分為上下各十組。一般設計有一個空白，一個DMSO，抑制劑組，上層不同濃度抗癌藥組，對比下層相應不同濃度抗癌藥加抑制劑組。
(3)把藥品與含抗生素的無血清的培養液混勻，並取出96孔板，去廢液，用1*PBS洗一遍後加藥，放入培養箱內24h。
(4)取出加藥24h的96孔板，每孔加入20ul的MTT，再放入培養箱內。
(5)4h後取出96孔板，小心去掉廢液，注意不能用力。
(6)避光每孔加入200ulDMSO，放到MIX MATE(混勻器)上1000rpm，15min。最後到全波長酶標儀以490nm波長光源讀數。
2.7 結果統計分析 實驗為了提高準確度，把每加藥組做三個孔，並重複三次。數據以均數±標準差(x±s)表示。兩組資料之間的比較採用t檢驗。採用GraphPad Prism 4統計軟體分析。以P<0.05或P<0.01為差別有統計學意義。
結果 1.tBHQ和Sul(sulforaphane)的濃度曲線 通過測量不同濃度tBHQ和Sulforphane所誘導的ARExw細胞螢光素酶活性，可以得到在一定濃度範圍內tBHQ和Sul所誘導的螢光素酶活性呈濃度依賴性增強。其中濃度0表示本底1％DMSO誘導的螢光素酶活性，這是因為藥品都是溶於DMSO的，DMSO相比空白，也具有誘導作用，且DMSO終濃度超過1％會對細胞產生毒性作用。
表1 為不同濃度tBHQ所誘導的螢光素酶活性(x±s，n＝5) 表1
如圖1所示，XW細胞以5.0*104個/ml密度種板過夜，用不同濃度的tBHQ處理XW細胞24h後測量，且每個濃度重複5次。(x±s，n＝5) 選擇Sulforphane濃度為0、1、5μM處理ARExw細胞24h後測量，但在10μM時由於大量XW細胞已經被殺死，所以讀數很小。
表2為不同濃度Sul所誘導的螢光素酶活性(x±s，n＝5) 表2
如圖2所示，XW細胞以5.0*104個/ml密度種板過夜，用不同濃度的Sul處理XW細胞24h後測量，且每個濃度重複5次。。(x±s，n＝5)。
2.如圖1、圖2所示，本發明篩選出的藥劑即小分子抑制劑ZDAK02(coralynesulfoacetate)(cs)對20μM tBHQ和5μM Sul所誘導的螢光素酶活性的抑制百分比曲線 2.1 小分子抑制劑ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)只對20μM tBHQ所誘導的螢光素酶活性有抑制作用，且抑制作用隨終濃度的升高而增強。
表3為不同濃度ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)對20μM tBHQ的所誘導的螢光素酶活性的抑制(％，x±s，n＝2) 表3
如圖3所示XW細胞以5.0*104個/ml密度種板過夜，用不同濃度的cs和20μM tBHQ一起處理ARExw細胞24h後測量，且每個濃度重複3次。數據處理方式為計算出對照組1％DMSO讀數的平均值，其他加藥組的平均值除以1％DMSO的平均值得到倍數。以公式(20μM tBHQ組倍數-不同濃度cs和20μM tBHQ混合組倍數)/20μM tBHQ組倍數*100％可以算出抑制百分比，取3次的百分比求出平均值和標準差。(％，x±s，n＝3)。
3，細胞增殖抑制實驗數據 為了進一步驗證Nrf2小分子抑制劑能夠增敏腫瘤細胞，我們把XW細胞和Caco2細胞暴露於不同濃度的Chlorambucil、相應濃度Chlorambucil+抑制劑、奧沙利鉑和相應濃度奧沙利鉑+抑制劑中24h後測量細胞活力。
抑制劑CS能夠增加XW細胞對Chlorambucil和Caco2細胞對奧沙利鉑的敏感性，如圖4、圖5所示。
如圖4所示，XW細胞以7.5*104個/ml密度種板過夜，50μM CS分別和0、10、25、50、75、100、150、200μM Chlorambucil一起處理XW細胞24h後測量，且每個濃度重複3次。數據處理方式為計算出對照組1％DMSO讀數的平均值作為100％，各濃度Chlorambucil組的平均值/1％DMSO的平均值*100％可以算出活力百分比；計算出50μM CS組的平均值作為100％，50μM CS+各濃度Chlorambucil組的平均值/50μM CS組的平均值*100％可以算出活力百分比。本圖是3次實驗中有代表性的一組數據。
如圖5所示，Caco2細胞以5.0*104個/ml密度種板過夜，50μM CS分別和0、25、50、75、100、1251μM奧沙利鉑一起處理Caco2細胞24h後測量，且每個濃度重複3次。數據處理方式為計算出對照組1％DMSO讀數的平均值作為100％，各濃度奧沙利鉑組的平均值/1％DMSO的平均值*100％可以算出活力百分比；計算出50μM CS組的平均值作為100％，50μM CS+各濃度奧沙利鉑組的平均值/50μM CS組的平均值*100％可以算出活力百分比。本圖是3次實驗中的一組數據。
綜上所述，Chlorambucil是臨床上常用的抗癌藥，對這類抗癌藥的耐藥性研究表明它們在腫瘤細胞中激活Nrf2轉錄而導致II相解毒酶和抗氧化酶基因表達量的增加，增強腫瘤細胞對抗癌藥的抗性，引起多種腫瘤對這些抗癌藥物產生耐藥性。Nrf2現已成為腫瘤化療增敏解毒藥物研發的新靶點蛋白，以Nrf2-ARE通路為分子靶點的抑制劑的研發和使用，一方面將有可能增敏腫瘤細胞，即減少抗癌藥物的用量從而減輕毒副作用；另一方面也會逆轉耐藥性。因此，以Nrf2-ARE為分子靶點的抑制劑的開發利用將有可能改善化療藥物的治療效果，為癌症的協同治療提供一條新途徑。
本實驗室建立了靈敏、穩定、以Nrf2為分子靶標的螢光素酶報告蛋白細胞株ARExw篩藥平臺。實驗表明，通過檢測細胞螢光素酶發現tBHQ能強有力地誘導Nrf2-ARE信號通路調控的某些基因的蛋白表達水平。因此，選擇tBHQ作為Nrf2誘導劑來篩選Nrf2抑制劑。以tBHQ為Nrf2誘導劑，通過螢光素酶活性檢測發現，ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)能有效抑制tBHQ的誘導作用。
ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)能增加烷化劑瘤可寧Chlorambucil抗癌藥對腫瘤細胞的毒性，聯合使用ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)能改善瘤可寧Chlorambucil抗癌藥的治療效果，ZDAK02(coralyne sulfoacetate)(cs)具有聯合治療的開發前景。
權利要求
1、一種增敏腫瘤細胞藥劑的篩選方法，其特徵是利用以Nrf2為分子靶標的細胞篩選平臺，以叔丁基對苯二酚tBHQ為Nrf2誘導劑，取Nrf2抑制劑視黃酸Retinoid acid(RA)或X為陽性對照，通過螢光素酶活力檢測，來篩選出能有效抑制該誘導作用即抑制Nrf2的抑制劑，該抑制劑即為能增敏腫瘤細胞的藥劑。
2、由權利要求1所述增敏腫瘤細胞藥劑的篩選方法，篩選得到增敏腫瘤細胞的藥劑為一種小分子化合物硫代乙酸酯甲氧檗因ZDAKO2，其結構式為
3、權利要求2所述的增敏腫瘤細胞的藥劑ZDAKO2(硫代乙酸酯甲氧檗因coralynesulfoacetate)的應用，將該藥劑與烷化劑抗癌瘤可寧Chlorambucil或與抗癌藥奧沙利鉑聯合使用，以治療癌症。
全文摘要
一種增敏腫瘤細胞藥劑的篩選方法及其應用。主要為解決在腫瘤化療過程中，有效克服多藥耐藥性，以提高抗癌藥的治療效果。本發明利用以Nrf2為分子靶標的細胞篩藥平臺，以tBHQ為Nrf2誘導劑，通過螢光素酶活力檢測，篩選出能有抑制該誘導作用的抑制劑，這種抑制劑即為增敏腫瘤細胞的藥劑。經過篩選獲得的該藥劑為一種小分子化合物ZDAK02(coralyne sulfoacetate硫代乙酸酯甲氧檗因)。它與抗癌藥瘤可寧Chlorambucil或抗癌藥奧沙利鉑聯合使用，即可增強抗癌藥對癌細胞的毒性，還可有助減輕甚至逆轉腫瘤對抗癌藥的多藥耐藥性。
文檔編號C12Q1/25GK101457251SQ20071016452
公開日2009年6月17日 申請日期2007年12月10日 優先權日2007年12月10日
發明者唐修文 申請人:浙江大學