中間球海膽與光棘球海膽雜交技術的製作方法
2023-06-28 23:19:01 2
專利名稱：中間球海膽與光棘球海膽雜交技術的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，尤其是一種用中間球海膽卵子與光棘球海膽精子進行雜交的方法。
背景技術：
中間球海膽原本主要分布在日本的北方及俄羅斯的遠東地區部分沿海，由於它生長快、經濟價值較高，我國於1989年從日本引進了該養殖新品種，其成品海膽出口率高，每年為我國創收了大量的外匯。然而，近幾年該品種海膽卻在我國出現大批死亡現象，嚴重影響了產品的出口創匯，人們一直在尋求解決此問題的辦法。光棘球海膽是西北太平洋沿岸水域較常見的經濟海膽，雖然它的經濟價值沒有中間球海膽高，但卻是我國北方沿海所產海膽中最重要的經濟種類。為此，許多水產研究人員欲將中間球海膽與光棘球海膽進行雜交，以使雜交子一代海膽在滿足出口要求的前提下，利用其雜交優勢，提高養殖成活率。據《水產學報》(2000年6月)報導，現有的中間球海膽與光棘球海膽的雜交技術是首先在3月份選取未成熟中間球海膽親體(中間球海膽的繁殖季節為9～11月)，進行人工培育。人工培育方法為入池後在自然海水(6℃)下培養3天，每天升溫1℃，升至15℃後穩定10天左右，再將溫度升至18℃恆溫培養。同樣，也需要選取光棘球海膽種膽，進行人工培育。當中間球海膽積溫達到800℃、中間球海膽積溫達到1000℃時，用注射氯化鉀方法對中間球海膽及光棘球海膽進行催產，分別取中間球海膽卵子及光棘球海膽精子，並用自交組精子用量10～20倍的光棘球海膽精子與中間球海膽卵子混合，進行受精。該雜交方法人工培育期長，不僅操作複雜，浪費較多的人力物力，而且，經過長期人工培育後的海膽卵子、精子質量下降，受精卵成活率低。《水產學報》同時也報導用此雜交方法產生的中間球海膽(♀)*光棘球海膽(♂)受精卵發育到囊胚期後胚胎滯育、死亡。
發明內容
本發明的目的是為了解決現有技術中所存在的技術問題，提供一種受精率高、受精卵成活率高的中間球海膽與光棘球海膽雜交技術。
本發明的技術解決方案是一種中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於包括如下步驟a.取自然成熟中間球海膽及光棘球海膽個體並進行催產；b.分別取中間球海膽卵子及光棘球海膽精子；c.將中間球海膽卵子與光棘球海膽精子混合，光棘球海膽精子的數量為自交精子用量的20～40倍，待受精膜舉起後，洗卵；d.孵化中間球海膽(♀)*光棘球海膽(♂)受精卵至產生浮遊幼體；e.培育浮遊幼體。
所述的a步驟的催產可為注射氯化鉀催產方法。
所述的b、c步驟為在16～18℃的海水中進行，從b步驟開始到c步驟的精卵混合完畢的完成時間為不大於1小時。
所述的d步驟為用16～18℃海水、1～2個/毫升的密度，微量充氣孵化。
所述的e步驟為以16～18℃海水、0.1～0.8個/毫升密度、日換水1～2次、日投餌料0.6～6萬細胞/毫升、微量充氣、弱光光照進行培育。
其日換水1～2次可為每次換水1/3～2/3，餌料可為牟氏角毛藻、鹽藻、角刺藻及湛江叉鞭金藻單一或混合餌料，弱光可為光照強度20～100lux。
本發明是直接採用自然成熟的海膽進行催產而取得中間球海膽卵子及光棘球海膽精子，並用數量為自交精子用量的20～40倍光棘球海膽精子與中間球海膽卵子混合進行受精，受精率高；合適的受精卵孵化條件以及合適的浮遊幼體培育條件，使受精卵胚胎發育正常，海膽幼苗成活率高，試驗結果見表1、2。整個雜交過程簡單易行，同現有技術相比，節省了人工促熟期所用的大量人力物力，節省了時間。用該雜交方法獲得的海膽幼苗長成後，完全符合海膽出口標準，具有很高的經濟價值。
中間球海膽、光棘球海膽雜交及自交受精率 表1
注N*n光棘球海膽自交；N*I光棘球海膽卵子、中間球海膽精子雜交；I*n中間球海膽卵子、光棘球海膽精子雜交；I*i中間球海膽自交。
中間球海膽、光棘球海膽及其正反交的長腕幼蟲特徵 表2
具體實施例方式首先，在10月上中旬取自然成熟的中間球海膽及光棘球海膽個體，光棘球海膽種膽是在自然海區採捕，並儘量從溫度較低的海水中採集，中間球海膽親膽取自人工筏式養殖或底播增殖的成熟海膽。採集到成熟的海膽後，視殼徑大小自海膽圍口膜處注射濃度為0.5mol/l的KCl溶液，進行催產，光棘球海膽注射量為1～2毫升/個，中間球海膽0.5～1毫升/個。催產後將每個海膽的生殖孔朝下分別放在盛滿海水的燒杯上，海水為16～18℃，使海膽將精卵排放在燒杯中，即分別取中間球海膽卵子及光棘球海膽精子；將數量為自交精子用量的20～40倍的光棘球海膽精子與中間球海膽卵子充分混合，從產卵、排精開始到人工受精，整個過程應在1小時之內操作完畢，待受精膜舉起後，洗受精卵3次，以排除多餘的光棘球海膽精子；得到受精卵後要對受精卵進行孵化，孵化條件為用16～18℃海水、1～2個/毫升的密度，微量充氣孵化。當產生浮遊幼體後再培育浮遊幼體，以16～18℃海水、0.1～1個/毫升密度、日換水1～2次、日投餌料0.6～6萬細胞/毫升、微量充氣、弱光光照進行培育。其日換水1～2次可為每次換水1/3～2/3，餌料可為牟氏角毛藻、鹽藻、角刺藻及湛江叉鞭金藻單一或混合餌料，弱光可為光照強度20～100lux。
權利要求
1.一種中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於包括如下步驟a.取自然成熟中間球海膽及光棘球海膽個體並進行催產；b.分別取中間球海膽卵子及光棘球海膽精子；c.將中間球海膽卵子與光棘球海膽精子混合，光棘球海膽精子的數量為自交精子用量的20～40倍，待受精膜舉起後，洗卵；d.孵化中間球海膽(♀)*光棘球海膽(♂)受精卵至產生浮遊幼體；e.培育浮遊幼體。
2.根據權利要求1所述的中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於所述的a步驟的催產為注射氯化鉀方法。
3.根據權利要求1或2所述的中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於所述的b、c步驟為在16～18℃的海水中進行，從b步驟開始到c步驟的精卵混合完畢的完成時間為不大於1小時。
4.根據權利要求1或2所述的中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於所述的d步驟為用16～18℃海水、1～2個/毫升的密度，微量充氣孵化。
5.根據權利要求1或2所述的中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於所述的e步驟為以16～18℃海水、0.1～1個/毫升密度、日換水1～2次、日投餌料0.6～6萬細胞/毫升、微量充氣、弱光光照進行培育。
6.根據權利要求5所述的中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於所述的日換水1～2次為每次換水1/3～2/3。
7.根據權利要求5所述的中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於所述的餌料為牟氏角毛藻、鹽藻、角刺藻及湛江叉鞭金藻單一或混合餌料。
8.根據權利要求5所述的中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於所述的弱光為光照強度20～100lux。
全文摘要
本發明公開一種中間球海膽與光棘球海膽雜交技術，其特徵在於包括如下步驟取自然成熟中間球海膽及光棘球海膽個體並進行催產；分別取中間球海膽卵子及光棘球海膽精子；將中間球海膽卵子與光棘球海膽精子混合，光棘球海膽精子的數量為自交精子用量的20～40倍，待受精膜舉起後，洗卵；孵化中間球海膽(♀)*光棘球海膽(♂)受精卵至產生浮遊幼體；培育浮遊幼體。合適的受精卵孵化條件以及合適的浮遊幼體培育條件，使受精卵胚胎發育正常，海膽幼苗成活率高。整個雜交過程簡單易行，同現有技術相比，節省了人工促熟期所用的大量人力物力，節省了時間。用該雜交方法獲得的海膽幼苗長成後，雜交優勢明顯，養殖成活率高，完全符合海膽出口標準，具有很高的經濟價值。
文檔編號A01K67/00GK1397160SQ0213277
公開日2003年2月19日 申請日期2002年8月14日 優先權日2002年8月14日
發明者王麗梅, 韓家波, 許偉定, 周遵春, 王笑月, 董穎, 馬志強, 木雲雷 申請人:遼寧省海洋水產研究所