用於誘導飽腹感和/或飽食的益生菌的製作方法

2023-06-01 01:32:56 1

專利名稱：：用於誘導飽腹感和/或飽食的益生菌的製作方法
技術領域：
：本發明涉及營養領域，特別涉及新益生菌株、包含至少一種新益生菌株或者包含可從至少一種這些菌株的培養基(特別是發酵培養基)獲得的無細胞培養基的組合物以及用於製備和/或使用這類組合物和/或菌株和/或無細胞培養基的方法。所述組合物適合用於誘導飽腹感和/或飽食，因此，該組合物適合用於導致體重減輕和/或預防和/或治療體重增加和超重相關的疾病，例如肥胖和相關的心臟疾病。
背景技術：
：已知諸如Fabuless(DSM)和PinnoThin(LipidNutrition)的天然脂肪製劑在消化時具有飽食效果。PinnoThin含有源自紅松果樹(Koreanpinenuttree)((闊葉紅松)Pinuskoraiensis)的種子的多不飽和脂肪酸皮諾斂酸(pinolenicacid)，該多不飽和脂肪酸增強食慾抑制激素(胰高血糖素樣肽-DGLP-I和縮膽囊素(CCK)的表達。這些激素與飽腹感、飽食的現象有關。(參考文獻C.deGraafetal，Am.J.ClinNutr(2004)79946-61)。Fabuless含有棕櫚油和燕麥油，並且在消化時，身體在相對晚期的消化過程中，識別相對高水平的未消化的脂肪，從而抑制或延遲飢餓信號。因此，諸如脂肪的某些大量營養物增強了飽腹感激素的分泌，例如CCK和GLP-1。CCK在脂肪和蛋白的存在下，在十二指腸中被釋放。腸L-細胞對碳水化合物和脂肪作出反應而釋放GLP-1，儘管中樞神經系統也可以刺激GLP-I的分泌。激素GLP-I和蛋白肽Y(PYY)(這兩者都是由小腸和大腸的腸內分泌L-細胞分泌的)可以在「迴腸中斷」機制中起作用，並且與胃腸分泌和活動性的控制有關。激素生長激素釋放肽是在胃的底部產生的，並且其合成能夠被碳水化合物所抑制，從而減少飢餓感。W02007/043933描述了三種公知的益生菌株(乾酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)F19-LMGP-17806；嗜酸乳桿菌(Lactobscillusacidophilus)NCFB1748和乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis)Bbl2DSM10140)在影響脂肪代謝和肥胖中的用途。基於設計為鑑定調節飽腹感和/或飽食的菌株的功能性測定沒有鑑定這些公知的益生菌株，但是該菌株看起來由於它們對體重減輕的作用而被選擇，所述體重減輕為與膽固醇降低有關的人體試驗中的次級參數。此外，向酸化乳中添加所述菌株，即，向最終測試產品中添加，而不讓發酵發生。而且，本發明涉及菌株，該菌株直接調節飽腹感激素水平的誘導，因此非常有效地增強進食(consumption)後的飽腹感和/或飽食。本領域仍需鑑定能夠導致攝食量或採食量的顯著減少、並且有效地明顯減少攝食量或採食量的LAB和LAB衍生的代謝產物。這些LAB、LAB衍生的代謝產物和包含LAB、LAB衍生的代謝產物的組合物能夠用於治療和/或預防體重增加、肥胖、超重相關的疾病(心臟疾病、中風、糖尿病等)並且使得體重減輕。定義「乳酸菌」(LAB)和「產乳酸菌」在本文中互換地使用，並且意指產生乳酸或其它有機酸(例如，丙酸)作為發酵終產物的益生細菌，例如但不限於乳桿菌屬(Lactobacillus)、鏈球菌屬(Str印tococcus)、乳球菌屬(Lactococcus)、酒球菌屬(Oenococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、片球菌屬(Pediococcus)、肉桿菌屬(Carnobacterium)、丙酸桿菌屬(Propionibacterium)、腸球菌屬(Enterococcus)禾口雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)的細菌。「益生菌」或「益生菌株」意指細菌的菌株，其被個體消化時對宿主具有有益的作用並且通常被認為對人是安全的(GRAS)。「上清液」是通過諸如過濾或離心的技術，從培養基(例如優選的發酵液)除去細菌細胞後可獲得的無細胞培養基。可以在使用前將該上清液分級或濃縮。此後，「上清液」將等同地稱為「無細胞培養基」。「發酵培養基」和「發酵液」在本文中互換地使用，並且取決於上下文意指向其中添加所述細菌菌株的培養基(即，沒有菌株的培養基)或通過添加的細菌發酵期間和/或之後的培養基(肉湯)(即，包括發酵產物)。從上下文將清楚該術語的含義。本文的「個體」意指人或非人的動物，特別是脊椎動物。「調節食物攝入」或「減少食物攝入」意指由於飽腹感和/或飽食而顯著地減少食物的攝入。「飽腹感」或「增強的飽腹感」意指進食後延長的滿足(fullness)感和至下一次進食前延長的時間段。「飽食」或「增強的飽食」意指由於提早的滿足感而提早結束的進食。「飽腹感有關的激素」或「飽腹感激素」意指當誘導或抑制時，對飽腹感和/或飽食有作用的激素，例如但不限於CCK和/或GLP-1、鈴蟾肽、促生長素抑制素、胰島素、瘦蛋白、葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)、生長激素釋放肽、肽YY(PYY)、腸抑素。「激素誘導」意指諸如GLP-I和/或CCK水平的胃腸激素合成的誘導(刺激)，其能夠在血漿和/或在體外細胞系測定中進行測量。「激素抑制」意指諸如生長激素釋放肽水平的胃腸激素合成的減少，其能夠在血漿和/或在體外細胞系測定中進行測量。「體外細胞系」和「體外細胞系測定」意指使用能夠產生諸如CCK和/或GLP-I的胃腸激素的細胞系培養物、特別是哺乳動物細胞系來鑑定益生菌株和/或確定益生菌株導致激素誘導和/或抑制的能力的功能性。「代謝」是發生在活細胞中的化學反應。「代謝產物」是代謝所產生的分子，在本文中包括在分解代謝反應(產生能量的反應)和合成代謝反應(利用能量的反應)中產生的代謝產物。因此，代謝產物還包括細胞培養基(例如，無細胞培養基)中的化合物，例如培養基/生長培養基/生長環境的一種或多種組分的降解產物或細菌細胞合成的特定組分。「百分比」或「平均」通常意指重量平均百分比，除非另外指明或清楚地表明了另一■石出。術語「包括」被解釋為指明所述部分、步驟或組分的存在，但是不排除一種或多種額外部分、步驟或組分的存在。術語「a(冠詞)」或「an(冠詞)」不限制為一種/個，而是被解釋為至少一種/個。發明詳述本發明人發現，體外細胞系測定能夠有效地用於鑑定和/或分離在人和/或哺乳動物個體中顯著地誘導飽腹感和/或飽食的(益生)細菌菌株。通過在體外細胞系測定中篩選能夠刺激諸如CCK和/或GLP-I的胃腸飽腹感激素產生的菌株，能夠鑑定能夠誘導諸如CCK和/或GLP-I的胃腸飽腹感激素產生的菌株。不作為對本發明的限制，據信所述菌株通過在體內刺激胃腸飽腹感激素的產生(之前攝取合適量的包含一種或多種這類菌株的組合物和/或合適量的從培養一種或多種這類菌株獲得的/可獲得的無細胞培養基、特別是從在發酵條件下培養所述菌株獲得/可獲得的無細胞培養基)，來誘導(或者顯著增強或刺激)飽腹感和/或飽食的感覺。本發明的篩詵方法在一實施方案中，提供了用於鑑定和/或分離能夠誘導或增強飽腹感和/或飽食的細菌的方法，該方法包括下述步驟(a)在培養基上培養一種或多種細菌菌株，(b)收集(a)的細菌細胞和/或細菌細胞與培養基和/或無細胞培養基，(c)向哺乳動物細胞系培養物中添加該細菌細胞和/或細菌細胞與培養基和/或無細胞培養基，(d)在(c)的添加後，分析該細胞系所產生的飽腹感激素(例如，GLP-I和/或CCK)的量，並且(e)鑑定與對照(未處理的哺乳動物細胞系、用對照樣品處理的哺乳動物細胞系，例如只有緩衝液或沒有細菌的另一培養基)相比，用細菌細胞和/或細菌細胞與培養基和/或無細胞培養基處理後，(直接地或通過培養基或存在於培養基中的代謝產物間接地)產生了(優選顯著地)較大量的飽腹感激素(例如，GLP-I和/或CCK)的細菌菌株，以及(f)任選地，將所鑑定的細菌菌株和/或細菌細胞與培養基和/或從培養所鑑定的菌株獲得的/可獲得的無細胞培養基，用於製備用於減少食物攝入、誘導和/或增強飽腹感和/或飽食、治療或預防肥胖和/或用於導致體重減輕的組合物。在步驟(a)中可以使用任何細菌菌株，但是優選菌株是益生菌株，更優選地使用屬於LAB的菌株。優選地，所述培養基優選是其上能夠發生生長和/或發酵的培養基(發酵培養基)，例如基於乳製品或基於乳的培養基(例如，脫脂乳等)，或植物來源的「乳」(例如，豆奶)，儘管其它培養基也是合適的。因此，允許產生諸如乳酸和/或其它有機酸的發酵產物的基質應當是可用的。培養條件(發酵時間)應當允許發酵過程發生，即，如本領域所公知的，相應地選擇孵育時間和溫度等。通常的發酵時間是幾小時至幾天。由於有機酸的產生，發酵期間的PH下降。任選地，可以在發酵末期調整pH，例如通過另外添加的一種或多種有機酸(例如，乳酸)或PH緩衝物質。任選地，可以向所述發酵培養基補充益生素、蛋白水解產物(例如，酪蛋白胺基酸)、蛋白腖、礦物質、維生素、酵母提取物等。在步驟(b)中收集所述細菌細胞和/或培養基與細菌細胞。能夠通過例如離心和/或過濾和/或濃縮來進行收集，並且能夠在處理哺乳動物細胞系培養物的合適緩衝液中再懸浮所述細胞(和/或培養基與細胞)(在步驟(c)中)。優選地，將所述細菌細胞稀釋至合適的濃度，例如對哺乳動物細胞系本身沒有負作用的濃度。稀釋系列能夠用於檢測最合適的細胞濃度(CFU)。可以在使用前任選地洗滌所述細菌細胞(例如，除去全部培養基)，但是在一實施方案中，優選地，在收集後和再懸浮前或與哺乳動物細胞系接觸前，不洗滌收集的細菌細胞。因此，在一實施方案中，將所述細胞收集(例如，通過離心和/或過濾和/或濃縮)，並直接用於製備懸浮液或稀釋液，然後使該細胞與哺乳動物細胞系接觸。可選擇地，將通過例如通過離心或過濾而除去(全部或基本上全部)細菌細胞獲得的無細胞培養基或其獲得的一種或多種部分收集並用於(C)中。為了鑑定所述無細胞培養基的哪種組分(例如，哪種代謝產物)能夠刺激飽腹感激素的產生(例如，GLP-I和/或CCK的產生)，可以使用該無細胞培養基的部分純化的或基本上純化的部分。然後能夠將保留飽腹感激素誘導活性的部分最終用於鑑定一種或多種具有飽腹感激素誘導活性的具體組分。另一替代選擇是使用細菌細胞和培養基(例如，發酵液)本身的組合，其任選地經濃縮或稀釋。在步驟(c)中，進行體外測定來檢測所述細菌細胞和/或細菌細胞與培養基和/或無細胞培養基(或其部分)是否對培養中生長的哺乳動物細胞具有飽腹感激素誘導作用。本領域中能夠使用的許多哺乳動物細胞系是可用的。在優選的實施方案中，例如，如McLaughlinetal.(1998)JPhysiol513:11_18所述或如下述出版物所述，所用的細胞系是STC-I(來自轉基因小鼠的小腸的內分泌腫瘤的原腸內分泌細胞)Gevreyeta1.Diabetο1οgia(2004)47926-936；Cordier-Bussatetal.Endocrinology1381137-1144(1997)；Hiraetal.J.Biol.Chem.(2004)279(25)26082-26089；Kazmietal.J.Physiol(2003),553759-773；Trinhetal.Diabetes(2003)52425-433；Bensonetal.J.Physiol.(2002)538121-131；Wangetal.AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol(2002)28216-22；Cordier-Bussatetal.Diabetes(1998)47:1038_1045。其它合適的細胞系包括例如，細胞系GLUTag(來自轉基因小鼠的大腸的腸內分泌月中瘤細胞系)(參見，Brubakeretal.Endocrinology(1998)139:4108_4114，1998；Reimannetal.Diabetologia(2004)471592-1601；Reimannetal.JPhysiol(2005)563161-175；Reimannetal.JPhysiol(2005)569)761-772；Aninietal.Diabetes.(2003)52:252-259；和Reimannetal.Diabetes(2002)51:2757_63，)、NCI-H716(人腸細胞系)(參見，Aninietal.Endocrinology(2003)144:3244_3250；Caoetal.Endocrinology(2003)1442025-2033；Aninietal.Diabetes(2003)52252-259；Reimeretal.Endocrinology(2001)142:4522_4528)、FRIC(大鼠胎兒腸細胞系)(參見，Brubakeretal.Endocrinology.(1991)129:3351_8；禾口Aninietal.Endocrinology(2002)143:2420_2426)、分離的犬L-細胞(參見，Damholtetal.Endocrinology(1998)1392085-2091)、Caco-2MM(HyaeGyeongCheonBiochemPharmacol.(2005)70:22-29)以及其它。技術人員能夠鑑定能夠產生一種或多種飽腹感激素的合適細胞系，例如GLP-I和/或CCK(基礎水平和/或誘導後)。能夠以各種方式進行步驟(d)。例如，能夠利用例如ELISA(g卩，利用基於抗體的篩選來檢測蛋白)或其它方法來鑑定和任選地定量如GLP-I和/或CCK蛋白(或「肽」，其在本文中互換地使用來意指胺基酸鏈)的激素。可選擇地，能夠利用本領域已知的方法來分析基因表達(mRNA轉錄)，所述方法例如定量RT-PCR或其它分子生物學方法。人GLP-I肽的胺基酸序列是SEQIDNO1(hdeferhaegtftsdvssylegqaakefiawlvkgrg)，參見GenBank登錄號P01275。小鼠的同系物與人的肽相同，參見GenBankP55095。大鼠CCK蛋白前體的登錄HP01355(SEQIDNO:2,mkcgvclcvvmavlaagalaqpvvpveavdpmeqraeeaprrqlravlrpdseprarlgallaryiqqvrkapsgrmsvlknlqgldpshrisdrdymgwmdfgrrsaedyeyps)並曰.小鼠的登錄號是P09240(SEQIDNO3,mksgvclcvvmavlaagalaqpvvpaeatdpveqraeeaprrqlravlrpdreprarlgallaryiqqvrkapsgrmsvlknlqsldpshrisdrdymgwmdfgrrsaedyeyps)。因此蛋白和cDNA序列在本領域都是可用的，能夠檢測所述蛋白(或其同系物，例如包括與SEQIDN0:l、2或3的至少80%、90%、95%、98%或更高的胺基酸序列一致性的蛋白，所述一致性的確定利用例如，諸如EmbossWin的程序「needle」或「water」的雙序列比對(pairwisealignment)，並且空位開放罰分10.0，空位延伸罰分0.5，利用Blosum62取代矩陣)的抗體和檢測諸如GLP-I和/或CCK蛋白的飽腹感激素的相對或絕對水平的方法也是可用的。還參見上文關於合適的哺乳動物細胞系的參考文獻，該參考文獻還測量了用例如蛋白腖、脂肪酸或其它試劑刺激後的GLP-I和/或CCK的釋放。將處理後產生的諸如GLP-I和/或CCK轉錄物(mRNA或相應的cDNA)的飽腹感激素和/或蛋白的相對或絕對量與合適的對照進行比較，來確定所述處理是否誘導了轉錄和蛋白的產生。合適的對照包括，例如，i)未處理的哺乳動物細胞(用於測定例如，GLP-I和/或CCK的基礎水平)，ii)用缺乏所述細菌細胞和/或缺乏所述細菌細胞與培養基和/或缺乏所述無細胞培養基的緩衝液處理的哺乳動物細胞，或者iii)用對照培養基(例如，用例如乳酸酸化的脫脂乳)處理的哺乳動物細胞。任選地，步驟(e)使用統計學分析來鑑定這些細菌菌株，與對照相比，該菌株導致(直接或通過培養基間接地，例如，通過存在於培養基中的一種或多種代謝產物)顯著增加的諸如GLP-I和/或CCK的一種或多種飽腹感激素的產生。本文的「顯著增加」意指至少1.5x的所述對照中產生的量，優選至少2x、3x、4x、5x、6x或更多所述對照中產生的量。若需要，能夠重複各種步驟。例如，可以使用兩種或更多種細菌細胞培養物和/或細菌細胞與培養基和/或無細胞培養基(或其各種部分)的混合物來檢測該混合物的飽腹感激素誘導活性。此外，可以在處理後檢測不同的哺乳動物細胞系的如GLP-I和/或CCK的飽腹感激素的誘導。通過上文的方法獲得的菌株也是本發明的實施方案，包含一種或多種這類菌株(具有或不具有培養基，例如發酵培養基)的組合物和/或包含一種或多種諸如發酵培養基(或其部分)的這類菌株的無細胞培養基(或其部分)的組合物也是本發明的實施方案。步驟(f)是任選的，並且使用所鑑定的細菌菌株和/或細菌細胞與培養基和/或從培養所鑑定的菌株獲得/可獲得的無細胞培養基來製備組合物。開始，可以製備包含這些中的一種或多種的組合物，並將該組合物飼餵給諸如大鼠的動物來驗證體內的飽腹感和/或飽食誘導作用，優選地，隨後進行人體試驗。優選地，在攝取後減少攝食量/採食量。與對照食物/餵食相比，所述作用可以被視為提早的進食終止和/或進食/飼餵之間更長的間隔。所述作用還被視為有下一次進食慾望前延長的時間段。與對照食物/餵食組合物相比，利用包含所述細菌和/或包含所述細菌與培養基和/或包含無細胞培養基(優選作為發酵結果的培養基)的食物/餵食組合物的延長時間段的食物攝取/飼餵也可以導致較輕的體重。在人個體中，還能夠利用如本領域公知的，例如直觀模擬量表(VisualAnalogueScale,VAS)(參見例如Luscombe-Marshetal.，Am.J.Clin.Nutr.(2005)81762~772或Moranetal.，J.Clin.Endocrinol.Metabol.(2005)90:5205_5211)來評價在所述組合物的攝取前和所述組合物的攝取後某些時間間隔時的主觀評定(例如，主觀飢餓、滿足、飽腹感、食慾等)。詢問個體以在極端(例如，飢餓或不飢餓)之間的每級做標記，來表明他們在那個時間的感覺。然後定量從基線的評定的變化。本發明的菌株和培養基在一實施方案中，本發明提供人和/或動物個體給藥(例如，攝取)後，能夠刺激飽腹感和/或飽食的(益生)菌株。優選地，所用的細菌菌株是產乳酸或產諸如丙酸的其它有機酸的益生菌，並且優選地屬於乳桿菌屬。雙歧桿菌屬或丙酸桿菌屬的細菌也是優選的。所述細菌應當是食品等級的，即，它們在被人或動物個體攝取時，應當被考慮為無害的。應當理解，非食品等級的細菌，例如被修飾從而在被個體攝取時不再有害的病原菌也被包括在本發明的範圍內。優選地，所述菌株屬於乳桿菌屬。該乳桿菌屬菌株可以屬於下述物種鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)、幹酷乳桿菌(L.casei)、畐Ij幹酷乳桿菌(L.paracasei)、瑞士乳桿菌(L.helveticus)、戴爾布呂克氏乳桿菌(L.delbrueckii)、羅伊氏乳桿菌(L.reuteri)、短乳桿菌(L.brevis)、捲曲乳桿菌(L.crispatus)、米酒乳桿菌(L.sakei)、詹氏乳桿菌(L.jensenii)、舊金山乳桿菌(L.sanfransiscensis)、食果糖乳桿菌(L.fructivorans)、高加索酸奶乳桿菌(L.kefiri)、彎曲乳桿菌(L.curvatus)、類植物乳桿菌(L.paraplantarum)、高加索酸奶粒乳桿菌(L.kefirgranum)、類高加索酸奶乳桿菌(L.parakefir)、發酵乳桿菌(L.fermentum)、胚芽乳桿菌(L.ρlantarum)、嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)、約氏乳桿菌(L.johnsonii)、格氏乳桿菌(L.gasseri)、木糖乳桿菌(L.xyl0SUS)、唾液乳桿菌(L.salivarius)等。優選的物種是戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckiisspbulgaricus)、乾酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、副乾酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、食果糖乳桿菌、唾液乳桿菌、彎曲乳桿菌和米酒乳桿菌等。能夠生物化學地或通過DNA測序(例如，保守區域)或通過諸如脈衝場凝膠電泳的本領域已知的方法來確定微生物的物種身份。通常，如果細菌菌株在16SrRNA區域中表現出至少97%的核酸序列一致性(例如，通過例如，利用默認參數的程序GAP或BESTFIT的最佳比對時)，則它們屬於相同的物種。所述細菌菌株能夠在體外細胞系測定和/或在個體體內刺激諸如胰高血糖素樣肽-I(GLP-I)和/或縮膽囊素(CCK)的飽腹感激素的產生和/或釋放。在體外細胞系測定中，能夠如上文所述地檢測誘導飽腹感激素(例如，GLP-I和/或CCK)產生的能力。在人或哺乳動物的體內試驗中，能夠通過測量給藥或攝取所述菌株或包含本發明的一種或多種菌株和/或本發明的無細胞培養基(或其部分)的組合物前和之後的一個或多個時間點時的這些蛋白的血漿水平，來比較諸如GLP-I和/或CCK的飽腹感激素的產生/誘導。如上文所述，所述菌株的特徵在於，它們能夠(直接或通過培養基間接地)導致相對於對照處理和/或基礎水平產生的顯著增加的激素產生、特別是GLP-I和/或CCK的產生。當然，所述菌株的特徵還在於它們對個體的飽腹感和/或飽食作用。因此，能夠利用標準方法來使一種或多種菌株生長並收穫。可選擇地，能夠使用無細胞培養基，其可以包含一種或多種飽腹感調節代謝產物。能夠在諸如緩衝液、水、食材(例如，脫脂乳等)的合適介質中製備所述細菌細胞和/或所述無細胞培養基(或其部分)的各種稀釋液，來製備測試組合物。能夠利用優選地允許進行合適的統計學分析的實驗設置(例如，雙盲、安慰劑對照試驗)來向測試動物和/或人個體給藥這些測試組合物(優選口服)。能夠通過評分例如下一次進食前的滿足的時間段來確定所述測試組合物對飽腹感的作用。如果滿足感的時間段顯著地長於對照，例如，至少長1%、2%、3%、5%、10%、20%或更長，則觀察到了飽腹感作用。另外或可選擇地，能夠通過測量進食含有活性成分(例如該測試組合物)的產品後某時間段(例如4小時)後的進食期間消耗的食物的量(直到達到令人愉快的滿足感)來確定所述飽腹感作用。如果消耗的熱量比食用不含所述活性成分的對照產品後消耗的熱量低至少1%、2%、3%、4%、5%或10%或15%(或更高的值)，則觀察到了飽腹感作用。能夠通過評分進食終止的時間點來確定對飽食的作用。如果進食終止時消耗的熱量顯著地低於對照中消耗的熱量，例如至少1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%或更多，則觀察到了飽食作用。在更長的時間段內(例如，1、2、3、4、5周或更長)，還可以評分與對照飲食相比的體重減輕或體重變化。與對照個體相比，給予了規律量的測試組合物(例如，每天一次、每天兩次或更多)的個體的體重優選地被顯著地控制了(減輕或較少地增加)。在優選的實施方案中，提供了下述的菌株(及其複製物或衍生物)和包含這些中的一種或多種的組合物和/或包含從生長這些中的一種或多種(例如，在發酵條件下)獲得/可獲得的培養基的組合物荷蘭CampinaNederlandBV在皇家荷蘭生物科技研究所培養物保藏中心(CentraalbureauvoorSchimmelcultures)(CBS,Uppsalalaan8,3584CTUtrecht，TheNetherlands)，於2007年7月5日保藏的嗜酸乳桿菌MUH41、戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH192、乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacilluscaseisspparacasei)MUH142、戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH190，並且指定的保藏號是CBS121540(嗜酸乳桿菌MUH41)、CBS121543(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH192),CBS121541(乾酪乳桿菌副乾酪亞種MUH142)和CBS121542(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH190)；RhodiaChimie，France在美國典型微生物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)，於2002年11月15日保藏為PTA-4797的嗜酸乳桿菌NCFM；RhodiaChimie，France在美國典型微生物保藏中心，於2002年11月15日保藏為PTA-4800的唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)33；DaniscoNiebullGmbH在德國微生物菌禾中保藏中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenandZellkulturenGmbH)於2003年7月23日保藏為DSM15794的唾液乳桿菌1502，DaniscoNiebullGmbH在德國微生物菌種保藏中心於2003年7月23日保藏為DSM15793的彎曲乳桿菌(Lactobacilluscurvatus)853；以及DaniscoA/S在在德國微生物菌種保藏中心，於2003年9月2日保藏為DSM15889的米酒乳桿菌(Lactobacillussakei)570。這些菌株和/或它們的衍生物和/或它們的複製物(和/或從培養這些而可獲得的培養基)適合用於製備減少攝食量/採食量的組合物。應當理解，本發明包括本發明的所述保藏的菌株或任何其它菌株的複製物和/或衍生物。術語「複製物」意指生物學物質，其代表所述材料基本上未被修飾的拷貝，例如通過微生物生長產生的材料，所述生長例如培養基中細菌的生長。術語「衍生物」意指從生物學材料創造的物質，其被實質上修飾而具有新的性質，例如，通過遺傳材料中可遺傳的改變所導致的那些。如本領域中公知的，這些變化能夠自發地發生或者是應用的化學和/或物理試劑(例如，誘變劑)和/或重組DNA技術的結果。當涉及「衍生」自其它菌株的菌株時，應當理解，既包括了該菌株的「複製物」又包括了該菌株的「衍生物」，只要所述衍生的菌株仍然保留減少攝食量/採食量的作用。在一實施方案中，所述菌株不是選自乾酪乳桿菌F19-LMGP-17806、嗜酸乳桿菌NCFB1748和乳雙歧桿菌Bb-12DSM10140的菌株。本發明的組合物本發明還提供包含飽食和/飽腹感誘導量的一種或多種細菌菌株和/或細菌細胞與優選地發酵後的培養基和/或其衍生的無細胞培養基的組合物。當本文中涉及「上清液」或「培養上清液」或「無細胞培養基」，應當清楚，優選地，繁殖(生長/培養)了此處優選乳酸菌的細菌的培養基意指發酵培養基，但是在例如發酵後，再次從該培養基中除去了全部(100%)或基本上全部(>90%，優選地>95%或>99%)細菌。因此，這個定義包括無細胞培養基(即，例如，通過離心、過濾或其它方式從其中除去了全部或基本上全部所述菌株的細菌細胞的培養基)或這類無細胞培養基的部分。任選地，可以以殺死任何潛在地殘留的細菌細胞的方式處理所述無細胞培養基。本發明的各種發酵培養基是適合的，例如(但不限於)，首先例如生長了所述菌株的工業培養基，並且該工業培養基被直接使用或濃縮(例如，乾燥)後使用或添加至其它食物基質或產品(例如酸乳和/或奶)後使用，其次或乳或基於乳或包含乳的培養基，如添加了維生素和/或蛋白腖和/或礦物質的乳，其中所述菌株單獨地或與其它LAB聯合地生長，並且該培養基被直接地使用或濃縮(例如，乾燥)後使用或與其它食物基質或產品(例如水果製品)組合後使用。可選擇地，可以使用細菌細胞或細菌細胞與培養基(例如，所述發酵液)或這種包含細胞的培養基(即，具有所述菌株的培養基)的部分。所述細胞或所述包含細胞的培養基還可以包含所述菌株的活的或存活的細菌細胞和/或死的或未存活的細菌細胞。因此，可以通過，但不限於加熱或超聲處理以殺死所述菌株的部分或全部細菌來處理所述培養基。本文還包括了冷凍乾燥的或冷凍的細菌和/或無細胞培養基(其可以被濃縮)。包含一種或多種細菌菌株本身和/或細菌細胞與培養基和/或一種或多種無細胞培養基(或其部分)的組合物包括藥物組合物、完全的食品組合物或飼料組合物、食品或飼料補充劑、營養組合物等。可以在所述組合物的製備過程中的任何時間添加所述菌株(本身或與培養基)和/或無細胞培養基，例如，可以在製備過程的開始向食物基質中添加它們，或者可以向最終食物產品中添加它們。「食物」意指液體、固體或半固體飲食組合物，特別是全食物組合物(食物替代物)，其不需要額外的營養攝入或者食物補充劑組合物。食物補充劑組合物不完全地代替其它方式的營養攝入。優選實施方案的食物組合物和食物補充劑組合物是發酵的乳製品或基於乳品的產品，其被優選地給藥或腸內攝取，優選每天口服一次或多次。可選擇地，食物組合物和/或食物補充劑組合物可以是非乳製品或乳品非發酵的產品(例如，非發酵的乳或另外的食物培養基中的菌株或無細胞培養基)。在另一實施方案中，能夠將菌株或無細胞培養基包囊並分散於食物(例如，在乳中)或非食物培養基中。能夠利用本發明的細菌在製備過程中直接製備發酵的乳製品，其通過例如，利用本身已知的方法向食物基質中添加。在這些方法中，除了常用的微生物以外，還可以使用本發明的菌株和/或本發明的菌株可以代替常用的微生物的一個或多個或部分。例如，在諸如酸乳或基於酸乳的飲料的發酵乳製品的製備中，可以將本發明的細菌添加至促酵物培養物或用作促酵物培養物的部分，或者可以在這種發酵期間合適地添加本發明的細菌。任選地，可以在製備過程的晚期滅活或殺死所述細菌。發酵的乳製品包括基於乳的產品，例如(但不限於)甜品、酸乳、酸乳飲品、凝乳酪(quark)、牛乳汽酒(kefir)、基於發酵乳的飲品、酪乳、奶酪、調料、低脂塗抹食品、新鮮奶酪、基於大豆的飲品、冰激凌等。非發酵的乳製品可以包括冰激凌、營養棒(nutritionalbar)和調料等。非乳製品可以包括粉末衝泡飲料(powderedbeverage)和營養棒等。可以利用已知的方法來製備所述產品，例如向諸如已知的脫脂乳或乳或基於乳的組合物和發酵物的食品基質中添加有效量的所述菌株和/或所述無細胞培養基。可以向其中添加所述細菌細胞和/或所述無細胞培養基(包含所述細菌細胞和/或所述無細胞培養基的組合物)的其它食物基質是肉、肉替代物或植物基質。所述組合物可以是固體、半固體或液體的。所述組合物可以是食物產品或食物補充劑的形式，例如，片劑、凝膠、粉末、膠囊、飲品、棒等的形式。所述組合物包含有效量的細菌細胞和/或無細胞培養基，從而所述有效量是適合實現飽腹感和/或飽食作用(與給藥方案聯合)的量。該有效量可以變化，但是能夠容易地被技術人員確定。合適的範圍包括每天至少約IxlO6Cfu,優選每天約lxl06-lxl012CfU(菌落形成單位)，更優選約IxIO7-IxIO11Cfu/天，更優選約IxIO8-SxIOiciCfu/天，最優選Ixl09-2xl010cfu/天，和/或從培養物生長至所述水平的無細胞培養基(濃縮的或非濃縮的)。應當理解，營養組合物優選地包含適合人和/或動物食用的碳水化合物和/或蛋白質和/或脂類。所述組合物可以含有或不含有其它生物活性成分，例如其它(益生)菌株和支持該益生菌株的益生素。在優選的實施方案中，所述食物組合物或飼料組合物的熱量低，即，該食物組合物或飼料組合物適合減食療法或減輕體重或體重控制。優選地，該組合物包含少量的脂肪或不含脂肪。該組合物還包含少量的蛋白質和/或碳水化合物，或不含蛋白質和/或碳水化合物。食物補充劑可以包含一種或多種載體、穩定劑、益生素等。當利用所述菌株的活的或存活的細胞時，該細胞可以以包囊的形式存在從而保護該細胞免受胃的傷害。例如，所述組合物可以是包裝於能夠溶解於水、果汁、乳或其它飲料中的小藥囊中的粉末的形式。合適劑量的細菌菌株和/或無細胞培養基還可以用於製備用於、肥胖、超重和超重相關的疾病的治療、療法或預防的藥物組合物。藥物組合物通常用於腸(例如，口服)或鼻/吸入給藥。除了本發明的菌株以外，藥物組合物通常包含藥物載體。優選形式取決於給藥和(治療)應用的預期模式。所述藥物載體能夠是適合將所述菌株遞送至諸如個體的腸的期望體腔的、任何相容的無毒物質。例如，無菌水或惰性固體可以用作所述載體，該載體通常補充了藥物可接受的佐劑、緩衝劑、分散劑等。藥物組合物還可以包含另外的生物活性或藥物活性成分。食物組合物、食物補充劑組合物、營養組合物或藥物組合物是諸如所述菌株的穩定的懸浮液的液體形式的，或者諸如粉末的固體形式的，或者半固體形式或無細胞培養基形式的。例如，對於口服給藥，能夠以諸如膠囊劑、片劑和粉劑的固體劑型給藥所述菌株或無細胞培養基，或者以諸如酏劑、糖漿和懸浮液的液體劑型給藥所述菌株或無細胞培養基。能夠將所述菌株或無細胞培養基與無活性成分和粉末載體共同包囊在明膠膠囊中，所述載體例如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、澱粉、纖維素或纖維素衍生物、硬脂酸鎂、硬脂酸、糖精鈉、滑石、碳酸鎂等。所述組合物可以包含另外的組分，例如蛋白質、碳水化合物、維生素、礦物質、微量元素、胺基酸、其它生物活性或藥物活性化合物、載體、穩定劑、調味劑、其它益生菌株、益生素等。本發明還提供了容器，該容器包含如上文所述的本發明的組合物。這種容器可以是裝有1-100、和諸如1、5、10、20、30、40、50、100的1至100的每個單個值或更多劑量的包裝，其以片劑、膠囊劑、粉劑、安瓿劑、小藥囊等形式。同樣地，包裝可以裝有1至200、1至500或更多的劑量。當共給藥不同的菌株和/或無細胞培養基(包含不同菌株和/或無細胞培養基的組合物)時，應當理解，容器可以含有每種包含菌株和/或無細胞培養基的組合物的單獨劑量。優選地，該容器包括在其外面表明所述組合物的有益效果或健康效果的書面標籤。例如，所述容器可以表明，所述組合物「用於減食療法」、「用於體重減輕」、「用於體重控制」等。所述容器可以是紙板、玻璃、塑料、金屬等的。如果所述組合物是液體或粉末形式，則所述容器還可以包括適合給藥所述組合物的工具。另外，所述容器可以包括用途的書面指導。本發明的用塗本文提供了本發明的一種或多種菌株、衍生自這些菌株的一種或多種無細胞培養基和/或包含這些的組合物，在製備用於治療、控制和/或預防肥胖、超重和超重相關疾病的藥物和/或營養(食物或食物補充劑)組合物中的用途。此外，本文提供了本發明的一種或多種菌株、衍生自這些菌株的一種或多種無細胞培養基和/或包含這些的組合物，在製備用於減少食物攝入和/或用於增強飽腹感和/或飽食的藥物和/或營養(食物或食物補充劑)組合物中的用途。下文的非限制性實施例描述了本發明的用途和方法。除非另外指明，本發明的實施將使用分子生物學、藥學、免疫學、病毒學、微生物學或生物化學的標準常規方法。下述文獻中描述了這些技術SambrookandRussell(2001)MolecularCloning:ALaboratoryManual,ThirdEdition(分子克隆實驗室手冊，第3版)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY,inVolumes1and2ofAusubeletal.(1994)CurrentProtocolsinMolecularBiology,CurrentProtocols(最新分子生物方法，最新方法)，USAandRemington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCompany,Philadelphia,Pa.，17thed.(1985),Microbiology:ALaboratoryManual(6thEdition)(微生物學實驗室手冊(第6片反))byJamesCappuccino,LaboratoryMethodsinFoodMicrobiology(3rdedition)(食品微生物學試驗方法(第3版))byW.Harrigan(Author)AcademicPress，所有的文獻在此處通過引用被併入。實施例1.材料與方法1.196孔板中哺乳動物細胞系的製備在37°C和補充了5%CO2的空氣氣氛下，使細胞系STC-I在含有青黴素/鏈黴素和小牛血清的D-MEM(Dulbecco改進的Eagle培養基)中生長3天至4天，直到該細胞系達到約85%的密度(每孔約500000個細胞)。將培養基除去，並將該細胞用200μ1HBSS(Hanks'緩衝鹽溶液)/孔洗滌。1.2用於體外哺乳動物細胞系測定的測試樣品的製備使細菌菌株(參見下文)新鮮地生長於MRS培養基(Mann-Rogosa-Sharpe)中，並測定CFU(菌落形成單位)。通過離心，從所述生長培養基分離所述細菌菌株，來製備用於STC-I刺激測定的無細胞培養基。用HBSS將所述無細胞培養基110地稀釋，並用於STC-I刺激測定。利用不同的細菌菌株(參見下文)，將添加了0.5%的酪蛋白胺基酸(酸水解的酪蛋白；BectonDickinsonandCompany)(以刺激細菌生長)的脫脂乳在37°C下發酵至細胞數為5xl07CFU/mL至5xl09CFU/mL。發酵時間隨菌株變化，並且在達到穩定期前為約15h至約48h。當所述發酵乳的pH至少達到5.5時，使用所述發酵乳，然後1.用乳酸將pH調整至4.35，離心以使細胞成團並使蛋白凝結。將上清液收集、冷凍並保存在-80°C至用於STC-I細胞培養刺激。在用STC-I細胞培養物孵育前，將該上清液在HBSS緩衝液中稀釋10倍。這種類型試驗中的對照是用乳酸酸化至pH為4.35的乳或HBSS緩衝液本身。2.將不同最終pH的發酵乳離心以使細胞成團和並使蛋白凝結，將上清液收集、冷凍並保存在-80°C至用於STC-I細胞培養刺激。在用STC-I細胞孵育前，將該上清液在HBSS緩衝液中稀釋10倍。將STC-I細胞培養物與發酵乳的上清液孵育後分泌的CCK水平與酸化至相當的pH的對照乳和/或HBSS緩衝液本身刺激的分泌的CCK水平比較。1.3STC-1細胞系培養物的CCK刺激和分泌的測試為了鑑定和/或分離能夠刺激(通過細菌細胞或通過無細胞培養基)胃腸飽腹感激素的產生的(益生)細菌，使用了體外細胞系測定。向96孔板中的每個孔添加200μ1的測試溶液(即，200000個細胞，因為該濃度是不給STC-I細胞或HBSS中的細菌細胞培養物上清液帶來不利影響的最高濃度)，並在37°C下和5%CO2的存在下孵育2h。通過每孔的顯微鏡觀察來檢查用各種測試稀釋液孵育後的STC-I細胞的「健康」狀態。孵育後，將該測試板以1200rpm離心3min來避免所述測試樣品中漂浮細胞的存在。通過可商購的ELISA試劑盒(NuClilab，Ede，TheNetherlandS)來測定所述測試樣品中的CCK水平。所用的菌株使用了下述9種菌株嗜酸乳桿菌MUH41(CBS121540)戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH192(CBS121543)乾酪乳桿菌副乾酪亞種MUH142(CBS121541)戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH190(CBS121542)唾液乳桿菌1502(DSM15794)嗜酸乳桿菌NCFM(PTA-4797)米酒乳桿菌570(DSM15889)唾液乳桿菌Ls-33(PTA-4800)彎曲乳桿菌853(DSM15793)2.結果和討論2.1發酵乳上清液(無細胞培養基)將乾酪乳桿菌副乾酪亞種142、保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus)190、保加利亞乳桿菌192、嗜酸乳桿菌41、唾液乳桿菌1502、唾液乳桿菌Ls-33和嗜酸乳桿菌NCFM的上清液的PH調整至4.35，與對照乳(用乳酸酸化至pH4.35)相比，這些上清液被刺激了更高的CCK分泌(表1)。表1暴露於pH被調整至4.35的發酵乳上清液的STC-I細胞的CCK分泌tableseeoriginaldocumentpage16以單份製備的樣品相同菌株的上清液(但是不調整pH)也刺激了高於該pH下預期對照值的CCK分泌(表2)。表2暴露於標出的pH(未用乳酸修正)的發酵乳上清液的STC-I細胞的CCK分泌tableseeoriginaldocumentpage17用乳酸鹽酸化的乳中的pH依賴性CCK=0,0836*pH-0，3002表3通過生長於添加了酪蛋白胺基酸的乳中的LAB的上清液誘導的CCK。值是三個單獨實驗的平均值。tableseeoriginaldocumentpage17利用MRS作為發酵培養基來代替類似測定中的乳獲得了類似的結果。2.2培養於MRS中的米酒乳桿菌570和彎曲乳桿菌853的無細胞培養基表4中的數據表明，與HBSS和MRS相比，米酒乳桿菌570和彎曲乳桿菌853的無細胞培養基都強烈地刺激了CCK的分泌。表4通過米酒乳桿菌570和彎曲乳桿菌853的無細胞培養基誘導的CCK(來自重複的結果)tableseeoriginaldocumentpage18結論全部9種菌株的上清液(無細胞培養基)刺激了STC-I細胞中CCK的產生和分泌。3.人的驗證實驗在人的個體交叉試驗中，以隨機、雙盲、安慰劑對照的方式評價了諸如嗜酸乳桿菌41的飽腹感誘導乳桿菌菌株的作用。30名志願者(女性，年齡20至59歲，BMI24_29kg/m2)參與了這個試驗。在兩個時候研究每個個體，時間間隔為1周。要求所述個體在測試日的前一天晚上20:00開始禁食。按下述方法製備測試產品將含有0.5%乳蛋白水解產物(DMVInternational)的脫脂乳加熱至95°C，保持5min並冷卻至37°C。然後將該脫脂乳用冷凍乾燥的嗜酸乳桿菌MUH41(108cfu/ml)接種。在37°C下發酵，至pH到達5.4。添加含糖和檸檬酸的10%的草莓製劑，並添加另外的糖漿至糖的終濃度為7%，pH為4.4。將所述製劑冷卻至4°C並保存在350ml的密封燒杯中。利用葡糖酸_δ-內酯酸化含有蛋白水解產物的乳來製備安慰劑，後處理與所述測試產物相同。參加人(15個使用安慰劑，15個使用測試產品)在9:00h服用1燒杯酸乳。利用直觀模擬量表(VAS)來測量飢餓和飽腹感分數。在12:00時，提供烤寬麵條(Iasagna)食物，並且要求該參加人進食至舒服地滿足。與使用安慰劑的參加人相比，使用測試產品的參加人報告了較低的飢餓感並食用了較少的烤寬麵條。對諸如嗜酸乳桿菌NCFM和唾液乳桿菌1502的其它所述菌株進行了類似的實驗。4.基於發酵乳的產品4.1.用單一菌株嗜酸乳桿菌MUH41制各的產品參見上文的第3部分，人的驗證。4.2.用乾酪乳桿菌副乾酪亞種MUH142制各的產品將含有0.5%乳蛋白水解產物(DMVInternational)的脫脂乳(加熱至95°C並冷卻至37°C後)用冷凍乾燥的乾酪乳桿菌副乾酪亞種MUH142(108CfU/ml)接種。在37°C下發酵至PH到達5.3。添加乳酸至pH為4.4。將這種製劑以11的比率與可商購的水果0%脂肪酸乳(用乙醯舒泛和阿斯巴甜作為增甜劑)(CampinaOptimelPeach)混合。用其它所述的單獨菌株製備了類似的產品。4.3.戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH192與嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)的共發酵在37°C下，在技術人員已知的乳清滲透物培養基上，從MUH192製備促酵物。在PH4.5下收穫細胞，並通過離心將其濃縮20-50倍。在液氮中使濃縮的細胞懸浮液堆積(palletize)，並在使用後將其保存在低於-40°C的溫度下。從乳和奶粉製成酸乳以獲得5%的蛋白含量，在冷卻至37°C的發酵溫度前，將該酸乳在95°C下加熱5分鐘。將這種乳用可商購的、推薦劑量的嗜熱鏈球菌菌株和製備的MUH192(0.05%)聯合接種，然後在37°C下發酵。在pH為4.5時，將發酵停止，在20°C下，將發酵物組織(structure)並裝入合適的包裝中。能夠通過上文所述的平板計數技術來驗證所述菌株的最終細胞計數。用其它所述的單獨菌株製備了類似的產物。4.4.用嗜酸乳桿菌MUH41製備的酸乳在37°C下，在鹼性乳清滲透物培養基上，從MUH41製備促酵物。在pH4.5下收穫細胞，並通過離心將其濃縮20-50倍。在液氮中使濃縮的細胞懸浮液堆積，並在使用後將其保存在低於-40°C的溫度下。從乳和奶粉製成酸乳以獲得5%的蛋白含量，在冷卻至37°C的發酵溫度前，將該酸乳在95°C下加熱5分鐘。將這種乳用可商購的、推薦劑量的酸乳促酵物(嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌)和製備的MUH41(0.05%)聯合接種，然後在37°C下發酵。在pH為4.5時，將發酵停止，在20°C下，將發酵物組織並裝入合適的包裝中。用其它所述的菌株製備了類似或等同的乳製品，例如，用嗜酸乳桿菌NCFM和/或唾液乳桿菌1502。5.產品中的穩定件評價了酸乳類產物環境中的選擇的乳桿菌菌株在冷藏條件下的存活率。使乳桿菌預培養物在MRS中過夜生長。將用於製備酸乳類產品的蛋白酶陽性嗜熱鏈球菌培養物在於115°C下處理10分鐘的乳中過夜預培養。以0.的密度接種嗜熱鏈球菌預培養物，以及接種量的已冷卻至37°C的巴氏消毒(85°C下5分鐘)的脫脂乳(從奶粉製備)中的乳桿菌預培養物。將接種的培養物等分成每份100ml。將脫脂乳培養物在37°C下生長15小時，然後用無菌移液管攪拌，冷卻至4°C並保存於冰箱中(4-6°C)。通過MRS-瓊脂板上的每毫升菌落形成單位計數來測定乳桿菌培養物的密度，測量時間是生長和冷卻後直接測量(時間點0)，和在冰箱中保存2、8、15和28天後。除了存活細胞的密度以外，還在相同的時間點測量了該酸乳類產物的PH。所述結果通常地揭示了不同乳桿菌菌株之間的明顯差異。然而，MUH41、MUH142、MUH190、MUH192、嗜酸乳桿菌NCFM、唾液乳桿菌1502、唾液乳桿菌Ls33、彎曲乳桿菌853和米酒乳桿菌570在冷藏中表現出非常好的存活率。這些菌株隨時間的存活力看起來是穩定的，並且在4周的冷藏時間段裡沒有顯著的減少或增加(多於一個對數單位)。ATCC10801UniversityBlvd,Manassas,VA20110-2209電話703-365_2700傳真703-365-2745為專利程序的微生物保藏取得國際承認的布達佩斯條約國際表根據第7.3條出具的微生物保藏證明以及根據第10條出具的微生物存活聲明致(保藏人或代理人名稱及地址)RhodiaIncGregoryLeyer收2802WaltonCommonsWestMadsion,WI53718iX^RhodiaChimie,FranceMiSH保藏人標識號專利保藏指定嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)=NCFMPTA-4797副幹酷乳桿菌(Lactobacillusparacasei):Lbc81PTA—4798胚芽乳桿菌(Lactobacillusplantarum):Lp_115PTA-4799唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius):Ls_33PTA—4800兩歧雙歧桿菌(Bifidobacteriumbifidum):Bb_02PTA-4801乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis):Bi-07PTA—4802所述保藏附有以上說明的—科學性描述—建議的分類描述。本國際保藏機構於2002年11月15日收到所沭保藏，並且所述保藏已被接受。應您的要求我們將向您通知30年內對所述菌種的請求。如果布達佩斯條約成員國專利局證明某人有權收到該菌種，或者如果已出版引用該菌種的美國專利，且美國專利與商標局或本保藏人指示ATCC釋放該菌種，那麼將可獲得該菌種。如果該培養物在所述保藏的有效期內死亡或被破壞，那麼您將負有用相同的活培養物代替它們的責任。在自保藏日起至少30年內，或者在最近的樣品請求之後5年內，該菌種將被維持，所述時間以較長者為準。美國和其他很多國家都是布達佩斯條約成員國。於2002年11月25日檢測以上所引用培養物的存活。在當天，所述培養物是存活的。國際保藏機構AmericanTypeCultureCollection(美國典型微生物保藏中心)，Manassas,VA20110_2209USA(美國維吉尼亞)ATCC授權代表籤字_日期2003年1月3日MarieHarris專利專員ATCC專利保藏中心抄送LaureBerruet為專利程序的微生物保藏取得國際承認的布達佩斯條約DSMZ_國際表德國微生物DaniscoNiebullGmbH菌種保藏中心Busch-JohannsenStr.125899Niebull由本頁末所識別的國際保藏機構根據第7.1條出具的微生物保藏證明tableseeoriginaldocumentpage21當第6.4條(d)可用時，該日期是要求國際保藏機構狀態的日期表DSMZ_BP/4(單頁)12/2001為專利程序的微生物保藏取得國際承認的布達佩斯條約DSMZ_國際表德國微生物DaniscoNiebull菌種保藏中心Busch-JohannsenStr.125899Niebull由本頁末所識別的國際保藏機構根據第10.2條出具的存活聲明T保藏人III.微生物標識-名稱DaniscoNiebtillGmbH國際保藏機構給予的保藏號地址Busch-JohannsenStr.1DSM1579325899Niebull保藏或轉移日期_2003年7月23日_III.存活聲明_於2003年7月23日對上文的II標識的微生物進行存活檢測，在以上指出的日期，所述微生物(X)存活不再存活Iv.進行存活檢測的條件v.國際保藏機構姓名德國微生物菌種保藏中心國際保藏機構的授權代表籤字:地址MascheroderWeglb.D-38124Braunschweig_日期2003年7月25日_表明原始保藏的日期，當進行新的保藏或轉移時，最近的相關日期(新保藏的日期或轉移的日期)當涉及第10.2條(a)(ii)和(iii)，意指最近的存活檢測用叉標記可用框如果要求信息並且如果檢測結果是陰性的，填表表DSMZ-BP/9(單頁)12/2001為專利程序的微生物保藏取得國際承認的布達佩斯條約DSMZ_國際表德國微生物DaniscoNiebullGmbH菌種保藏中心Busch-JohannsenStr.125899Niebull由本頁末所識別的國際保藏機構根據第7.1條出具的微生物保藏證明tableseeoriginaldocumentpage23當第6.4條(d)可用時，該日期是要求國際保藏機構狀態的日期表DSMZ_BP/4(單頁)12/2001為專利程序的微生物保藏取得國際承認的布達佩斯條約DSMZ_國際表德國微生物DaniscoNiebullGmbH菌種保藏中心Busch-JohannsenStr.125899Niebull由本頁末所識別的國際保藏機構根據第10.2條出具的存活聲明tableseeoriginaldocumentpage24表明原始保藏的日期，當進行新的保藏或轉移時，最近的相關日期(新保藏的日期或轉移的日期)當涉及第10.2條(a)(ii)和(iii)，意指最近的存活檢測用叉標記可用框如果要求信息並且如果檢測結果是陰性的，填表表DSMZ_BP/9(單頁)12/2001為專利程序的微生物保藏取得國際承認的布達佩斯條約DSMZ_國際表德國微生物DaniscoA/S菌種保藏中心Langebrogade1POBox17DK-IOlCopenhagenK由本頁末所識別的國際保藏機構根據第7.1條出具的微生物保藏證明tableseeoriginaldocumentpage25當第6.4條(d)可用時，該日期是要求國際保藏機構狀態的日期表DSMZ-BP/4(單頁)12/2001為專利程序的微生物保藏取得國際承認的布達佩斯條約DSMZ_國際表德國微生物DaniscoA/S菌種保藏中心Langebrogade1POBox17DK-IOlCopenhagenK由本頁末所識別的國際保藏機構根據第10.2條出具的存活聲明tableseeoriginaldocumentpage26表明原始保藏的日期，當進行新的保藏或轉移時，最近的相關日期(新保藏的日期或轉移的日期)當涉及第10.2條(a)(ii)和(iii)，意指最近的存活檢測用叉標記可用框如果要求信息並且如果檢測結果是陰性的，填表表DSMZ-BP/9(單頁)12/200權利要求用於誘導或增強飽腹感和/或飽食的感覺的組合物，包含至少一種細菌菌株或從培養所述細菌菌株獲得的無細胞培養基，所述菌株屬於乳酸菌(LAB)，並且其中所述細菌菌株或所述無細胞培養基在利用細胞系STC-1的體外細胞系測定中刺激縮膽囊素(CCK)的產生。2.如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物包含至少部分的所述細菌菌株的培養基。3.如權利要求1或2所述的組合物，其中所述培養基包含乳或由乳組成。4.如權利要求1至3中任一權利要求所述的組合物，其中所述無細胞培養基不包含所述細菌菌株的活的或存活的細胞。5.如權利要求1至4中任一權利要求所述的組合物，其中所述組合物是發酵的乳製品，優選通過所述細菌菌株的發酵而製備的乳製品。6.如權利要求1至5中任一權利要求所述的組合物，其中所述細菌菌株屬於物種戴爾布呂克氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckii)、唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)>Sfftfflif(Lactobacilluscurvatus)ΜLfflif(Lactobacillussakei)。7.如權利要求1至5中任一權利要求所述的組合物，其中所述細菌菌株屬於物種嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、優選是菌株CBS121540，或者屬於物種唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)、優選是菌株DSM15794。8.如權利要求1至7所述的組合物，其中使用了至少兩種細菌菌株或所述至少兩種細菌菌株的無細胞培養基，其中每種所述細菌菌株或每種所述無細胞培養基能夠在利用細胞系STC-I的體外細胞系測定中刺激縮膽囊素(CCK)的產生。9.如權利要求1至5中任一權利要求所述的組合物，其中所述細菌菌株選自保藏號CBS121540(嗜酸乳桿菌MUH41)、保藏號CBS121543(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckiisspbulgaricus)MUH192)、保藏號CBS121541(乾酪乳桿菌副乾酪亞種(L.caseisspparacasei)MUH142)、保藏號CBS121542(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH190)、保藏號PTA-4797(嗜酸乳桿菌NCFM)、保藏號PTA-4800(唾液乳桿菌33)、保藏號DSM15794(唾液乳桿菌1502)、保藏號DSM15793(彎曲乳桿菌853)和保藏號DSM15889(米酒乳桿菌570)，或其衍生物或複製物。10.如前述權利要求中任一權利要求所述的組合物，其中所述組合物是藥物組合物、食物組合物或食物補充劑組合物。11.提供了用於鑑定和/或分離能夠誘導或增強飽腹感和/或飽食的細菌的方法，所述方法包括下述步驟(a)在培養基上培養一種或多種細菌菌株，(b)收集(a)的細菌細胞和/或細菌細胞與培養基和/或無細胞培養基，(c)向哺乳動物細胞系培養物中添加(b)的所述細菌細胞和/或所述細菌細胞與培養基和/或所述無細胞培養基，(d)在(c)的添加後，分析所述哺乳動物細胞系產生的CCK激素的量，並且(e)鑑定與對照相比，在用細菌細胞和/或無細胞培養基處理後，產生較大量的CCK的所述細菌菌株，以及(f)任選地，利用所鑑定的細菌菌株和/或從培養所鑑定的細菌菌株獲得的無細胞培養基，來製備用於減少食物攝入、誘導和/或增強飽腹感和/或飽食、治療或預防肥胖和/或用於導致體重減輕的組合物。12.如權利要求11所述的方法，其中所述培養基包含乳。13.通過權利要求11或12所述的方法鑑定的細菌菌株。14.以下述保藏號保藏的細菌菌株或其衍生物或複製物CBS121540(嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)MUH41)、CBS121543(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckiisspbulgaricus)MUH192)、CBS121541(乾酪乳桿菌副乾酪亞種(L.caseisspparacasei)MUH142)、CBS121542(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH190)。15.屬於乳酸菌(LAB)的細菌菌株或從培養所述細菌菌株獲得的無細胞培養基，在製備用於治療和/或預防超重、肥胖或超重相關的疾病、或者用於刺激飽腹感和/或飽食的組合物中的用途，其中所述細菌菌株或從所述菌株獲得的所述無細胞培養基在利用細胞系STC-1的體外細胞系測定中刺激縮膽囊素(CCK)的產生。16.如權利要求15所述的用途，其中所述菌株選自保藏號CBS121540(嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)MUH41)、保藏號CBS121543(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckiisspbulgaricus)MUH192)、保藏號CBS121541(乾酪乳桿菌副乾酪亞種(L.caseisspparacasei)MUH142)、保藏號CBS121542(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH190)、保藏號PTA-4797(嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)NCFM)、保藏號PTA-4800(唾液乳桿菌(L.salivarius)33)、保藏號DSM15794(唾液乳桿菌(L.salivarius)1502)、保藏號DSM15793(彎曲乳桿菌(L.curvatus)853)和保藏號DSM15889(米酒乳桿菌(L.sakei)570)，或其衍生物或複製物。17.用於製備飽腹感和/或飽食增強食物組合物、食物補充劑組合物或飼料組合物的方法，所述方法包括下述步驟a)鑑定能夠在利用細胞系STC-1的體外細胞系測定中誘導縮膽囊素(CCK)的產生的細菌菌株，b)在製備食物、食物補充劑或飼料產品的製備過程中，使用所述菌株或從培養所述菌株獲得的無細胞培養基。18.如權利要求17所述的方法，其中步驟(b)中的所述製備過程包括發酵，並且其中在所述發酵過程中使用所述菌株來製備發酵的食物、食物補充劑或飼料產品。19.如權利要求17或18所述的方法，其中所述食物或食物補充劑產品是酸乳、酸乳飲品、牛乳汽酒(kefir)、基於發酵乳的飲品、甜品、酪乳、奶酪、調料、冰激凌、低脂塗抹食品、基於大豆的飲品、營養棒或粉末衝泡飲料。20.如權利要求17至19中任一權利要求所述的方法，其中所述菌株選自保藏號CBS121540(嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)MUH41)、保藏號CBS121543(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckiisspbulgaricus)MUH192)、保藏號CBS121541(乾酪乳桿菌副乾酪亞種(L.caseisspparacasei)MUH142)、保藏號CBS121542(戴爾布呂克氏乳桿菌保加利亞亞種MUH190)、保藏號PTA-4797(嗜酸乳桿菌NCFM)、保藏號PTA-4800(唾液乳桿菌(L.salivarius)33)、保藏號DSM15794(唾液乳桿菌1502)、保藏號DSM15793(彎曲乳桿菌(L.curvatus)853)和保藏號DSM15889(米酒乳桿菌(L.sakei)570)，或其衍生物或複製物。全文摘要本發明涉及營養和醫藥領域。本發明提供了用於誘導或增強飽腹感和飽食以及用於治療或預防肥胖、超重和超重相關疾病的組合物、細菌菌株和方法。文檔編號G01N33/50GK101808527SQ200780100798公開日2010年8月18日申請日期2007年7月25日優先權日2007年7月25日發明者亞瑟·康斯坦丁·奧烏漢德,沃特·赫爾曼·諾德曼,馬爾塔·茲齊斯拉瓦·科爾欽斯卡申請人:康必奶荷蘭控股有限公司;丹尼斯科公司