一種穆薩樹甙Ⅱ的提純方法

2023-06-10 08:39:16

專利名稱：一種穆薩樹甙Ⅱ的提純方法
技術領域：
本發明屬於天然植物技術領域，涉及一種穆薩樹甙II的提純方法。
背景技術：
穆薩樹甙II (Butrom),又名紫礦春，分子式為C27H32O15,分子量為596.54，mp.19CTC。穆薩樹式II是從豆科植物紫鉚及/iea monospeerma (Lam.) Kuntze的花中分離得到的一種黃酮苷類化合物。穆薩樹的樹皮提取物穆薩樹甙II和異穆薩樹甙II在印度多用於治療肝病。麥軍利通過在氯仿和半乳糖胺引起的肝細胞損害的實驗表明，穆薩樹的樹皮提取物顯示有護肝作用，並證實可增強小鼠幹細胞核的RNA合成，從而提高部分肝切除小鼠幹細胞的再生率。麥軍利分離穆薩樹甙II是通過溶劑層析、TLC和HPLC分離，該方法製備量小，成本高，僅適用於實驗室化學成分分析少量製備。經檢索，尚未發現適宜於大量製備穆薩樹甙II的工業化方法的專利或文獻報導。

發明內容
本發明的目的是提供一種穆薩樹甙II的提純方法，成品穆薩樹甙II含量高、生產成本低，可適用於工業化生產。本發明是通過如下技術方案實現的:
(1)以穆薩樹的樹皮為原料，加8-12倍量5(Γ70%乙醇水溶液微波提取2-3次，微波功率為2_8kw，收集提取液；
(2)將提取液通過超濾膜系統，得透過液； (3)將透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用50-65%的乙醇水溶液洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，離心，將清液乾燥，得粗提物；
(4)以乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統，上相為固定相，下相為流動相，將上述得到的粗提物應用高速逆流色譜法進行分離純化，即得到高純度的穆薩樹甙II。步驟(2)中所述超濾膜為中空超濾膜，材質為聚醚碸，截留分子量為2000-3000道爾頓。步驟(3)中所述乙酸乙酯-甲醇-水的體積比為(4-7):(2-4): (6-11)。本發明的有益效果是:採用微波提取，提取率高，耗時短，且避免目標產品的損失，是一種低耗能環保的提取方法；聚醯胺樹脂吸附洗脫，提高了產品的純度；採用高速逆流色譜法進行穆薩樹甙II的分離純化，與以往技術手段相比，具有分離能力強、分離時間短、樣品損失小、廣品質量聞等優點。
具體實施方式
:
下面結合具體實施方式
對本發明進行進一步說明。實施例1:
取200g穆薩樹的樹皮粉碎過20目篩，加入8倍量70%乙醇微波提取lOmin，提取2次，微波功率為4kw，合併提取液，再用2000道爾頓的中空聚醚碸超濾膜過濾，透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用6BV50%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液乾燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例4:2:6混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機,調節分離柱轉速為950rpm,將流動相以2.5ml/min的流速泵入,將150mg穆薩樹式II粗提物溶於IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合併，低溫真空濃縮至幹，得到穆薩樹甙II，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，穆薩樹甙II的含量為98.2%。實施例2:
取Ikg穆薩樹的樹皮粉碎過40目篩，加入9 倍量60%乙醇微波提取30min，提取2次，微波功率為2kw，合併提取液，再用2000道爾頓的中空聚醚碸超濾膜過濾，透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用5BV50%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液乾燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例4:2:10混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機,調節分離柱轉速為900rpm,將流動相以3ml/min的流速泵入,將200mg穆薩樹式II粗提物溶於IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合併，低溫真空濃縮至幹，得到穆薩樹甙II，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，穆薩樹甙II的含量為
98.6%。實施例3:
取2kg穆薩樹的樹皮粉碎過20目篩，加入10倍量65%乙醇微波提取15min，提取3次，微波功率為5kw，合併提取液，再用3000道爾頓的中空聚醚碸超濾膜過濾，透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用4BV65%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液乾燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例7:3:11混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機,調節分離柱轉速為850rpm,將流動相以3ml/min的流速泵入,將200mg穆薩樹式II粗提物溶於IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合併，低溫真空濃縮至幹，得到穆薩樹甙II，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，穆薩樹甙II的含量為
99.2 %。實施例4:
取2kg穆薩樹的樹皮粉碎過60目篩，加入12倍量50%乙醇微波提取20min，提取3次，微波功率為5.5kw，合併提取液，再用3000道爾頓的中空聚醚碸超濾膜過濾，透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用5BV55%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液乾燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例5:4:7混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機,調節分離柱轉速為IOOOrpm,將流動相以3ml/min的流速泵入，將200mg穆薩樹式II粗提物溶於IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合併，低溫真空濃縮至幹，得到穆薩樹甙II，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，穆薩樹甙II的含量為98.1%。實施例5:
取IOkg穆薩樹的樹皮粉碎過40目篩，加入10倍量50%乙醇微波提取lOmin，提取2次，微波功率為8kw，合併提取液，再用2000道爾頓的中空聚醚碸超濾膜過濾，透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用4BV55%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液乾燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例6:3:8混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機,調節分離柱轉速為900rpm,將流動相 以3.5ml/min的流速泵入,將150mg穆薩樹式II粗提物溶於IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合併，低溫真空濃縮至幹，得到穆薩樹甙II，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，穆薩樹甙II的含量為98.2%。實施例6:
取20kg穆薩樹的樹皮粉碎過20目篩，加入9倍量65%乙醇微波提取25min，提取2次，微波功率為2kw，合併提取液，再用3000道爾頓的中空聚醚碸超濾膜過濾，透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用6BV65%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液乾燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例5:3:9混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相，將固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機,調節分離柱轉速為850rpm,將流動相以3ml/min的流速泵入,將200mg穆薩樹式II粗提物溶於IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合併，低溫真空濃縮至幹，得到穆薩樹甙II，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，穆薩樹甙II的含量為98.0%。
權利要求
1.一種穆薩樹甙II的提純方法，其特徵在於包括以下步驟: (1)以穆薩樹的樹皮為原料，加8-12倍量5(Γ70%乙醇水溶液微波提取2-3次，微波功率為2-8kw，收集提取液； (2)將提取液通過超濾膜系統，得透過液； (3)將透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，先用水洗脫，再用50-65%的乙醇水溶液洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，離心，將清液乾燥，得粗提物； (4)以乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統，上相為固定相，下相為流動相，將上述得到的粗提物應用高速逆流色譜法進行分離純化，即得到高純度的穆薩樹甙II。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟(2)中所述超濾膜為中空超濾膜，材質為聚醚碸，截留分子量為2000-3000道爾頓。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟(3)中所述乙酸乙酯-甲醇-水的體積比為(4-7): (2-4): (6-11)。
全文摘要
本方法提供一種穆薩樹甙Ⅱ的提純方法，其特徵在於包含以下步驟(1)以穆薩樹的樹皮為原料，加8-12倍量50~70%乙醇水溶液微波提取2-3次，收集提取液；(2)將提取液通過超濾膜系統，得透過液；(3)將透過液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚醯胺樹脂柱吸附，乙醇水溶液洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，離心，將清液乾燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統，上相為固定相，下相為流動相，將上述得到的粗提物應用高速逆流色譜法進行分離純化，即得到高純度的穆薩樹甙Ⅱ。
文檔編號C07H17/07GK103232505SQ20131019467
公開日2013年8月7日 申請日期2013年5月23日 優先權日2013年5月23日
發明者蘇劉花, 萬冬梅 申請人:南京澤朗農業發展有限公司