非腸道給藥的穩定的生長激素的製作方法

2023-05-21 13:22:31

專利名稱：非腸道給藥的穩定的生長激素的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種含有生長激素(也稱為促生長素)和芳香醛的複合物。更具體地說，本發明涉及一種豬生長激素(PST)-芳香醛複合物以及生產一種可改善豬的飼養率(feedefficiency)並使PST持續釋放的穩定的PST組合物的方法。
當每天以顯著提高飼養率(即飲料與增量比)的基量(basis)給豬使用豬生長激素(PST)時，與對照動物相比，服藥動物進食較少而體重增加卻相同或較高。然而，由於給一大批動物中的每隻提供該藥物需要很高的代價和大量的時間，每天以基量給豬服藥是很麻煩的。因此，使用單劑量並在一個較長時期內釋放PST會更為方便。服用PST最容易的方法似乎是放入飼料中。然而，象大多蛋白質和大分子藥物一樣，PST口服不被生物吸收。一般地，文獻中沒有描述過經口服途徑提供蛋白質類和肽類的重要性。在歐州申請0177342中公開了使用水楊性酸鹽和礦物油類來提高這些藥物的口腔釋放。美國專利4，548，922，還公開了使用甾類化合物增強劑如梭鏈孢酸。
非腸道給藥，例如植入劑已用於其它大分子藥物而得到了如美國專利4，666，704號中所公開的持續性釋放效果。PST是一種不穩定的蛋白，易被酶解和水解。它自身能夠反應並容易被蛋白酶裂解。的確，PST植入劑的不穩定性被認為是因在植入部位發生炎性反應而生成蛋白酶的緣故(美國專利5，015，627)。因為這種不穩定性，給豬使用PST，至今為止，即使真正成功，也僅是勉強地(如見美國專利4，837，381;4，857，505;5，045，312，和歐州申請0193917和0458064)。
商業上需要改進具有生長激素活性的大分子藥物非腸道給藥的持續釋放植入劑。
所以，本發明一個目的就是提供一種在動物體內長時期穩定並釋放生物活性的生長激素的組合物及製備方法。
本發明的另一個目的是提供一種PST的穩定形式，它能在豬體內長時期釋放並使生物利用度和飼養率得到改善。
按照本發明，已發現當PST與一種芳香醛反應而形成一種複合物時，可提高動物的飼養率(即，增重以及飼料與增重比)。這種新的複合物不僅具有與PST相同的生物活性，也在一個持續時期內提供了類似於每天注射PST的效力。
如上所述，已進行了許多嘗試來製備一種PST產品，使它能克服上述所提到的不足並能成功地給豬使用。例如，美國專利5，015，627公開了PST和亮肽素(一種三肽醛)以乾粉形式混合，制粒並由該顆粒形成植入劑。這些植入劑是無效的。
意外地發現，當將PST和一種本發明的芳香醛溶於水中並從該溶液中分離複合物，所得到的結晶產物能使該生長激素持續釋放。該複合物可以從水溶液中採用現有技術公知的任何方法來分離，例如，濃縮、蒸發、或冷凍乾燥。由該複合物製備植入劑並給予豬，可使血漿PST水平持續長達7天。
該複合物中所存在的和本發明方法所用的芳香醛優選由下式表示
其中X是CHO或CH2CHO，而R1和R2各自是氫、羥基、甲氧基、乙氧基、甲基或乙基。
體現在複合物和本發明方法中優選的芳香醛是式Ⅰ的化合物，其中X是CHO而R1和R2各自為羥基或甲氧基。體現在複合物和本發明方法中最佳的芳香醛是2-羥基-3-甲氧基苯甲醛。該醛也常稱為鄰一香草醛。
製備本發明穩定的PST複合物所採用的芳香醛及其製備方法是現有技術中公知的。
在本發明優選體現的複合物中也含有一種動物生長激素，例如，人、牛、鳥、豬、馬或羊的生長激素。有利地，該複合物和方法適用於豬的生長激素。
最有利地，本發明的複合物含有2-羥基-3-甲氧基苯甲醛和豬生長激素。
式Ⅰ的芳香醛可以約0.5%到約10%(按重量計)的含量存在於該複合物中。優選地，該芳香醛以約0.5%到約5.0%(按重量計)存在。
本發明的式Ⅰ芳香醛和PST複合物是如下製備的實施例1豬生長激素99.0%w/w式Ⅰ的芳香醛1.0%w/w將該PST和醛溶於水中，並在39℃下反應6到24小時，慢慢將水分離並把所得到的產物懸浮於乙醇中。過濾該懸浮液並在一個真空箱中過夜乾燥該沉澱，得到乾燥的晶體。
把該晶體複合物用一臺3/16英寸衝壓機和衝模製成35mg小丸(植入劑)並壓制約500個PST實施例2豬生長激素99.0w/w2-羥基-3-甲氧基苯甲醛1.0%w/w按實施例1中的方法製備該複合物和植入劑。
實施例3豬生長激素99.0w/w4-羥基-3-甲氧基苯甲醛1.0%w/w實施例4豬生長激素99.0w/w4-甲氧基苯甲醛1.0%w/w按照實施例1的方法製備上述複合物。
小丸或植物劑的形狀並不重要，任何適於植入的形狀都可使用。除該生長激素和該芳香醛外，本發明組合物中包括其它藥物賦形劑也是有益的。例如，該植入劑可以包含潤滑劑，如，硬脂酸鎂或硬脂酸;填充劑，如，蔗糖或乳糖以及粘合劑，如阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
本發明組合物可以採用任何已知植入的方法非腸道給予動物，如皮下、肌肉內、腹膜內。優選地，使用任一公知技術給動物皮下植入該植入劑組合物。
用此方法處理的動物可以包括(並不局限於此)哺乳動物如牛、羊、山羊、豬等，和鳥如家禽。
以下方法是用來測定血漿PST水平，耗食量，平均每日增量以及飼料與增量比。
把豬圈在穀倉中並於每圈有7-8頭豬的圈中適應3-4周。在各圈中，豬都有進入熱棚和隨意進食和飲水的機會。
當這些大多數豬達到約75Kg重時，統計比較其體重並分為4個不同的處理組，每組9頭豬。起始日計為0天，記錄這天的體重，取對照血樣並引入植入劑。在21天結束時，停止這些豬的實驗。
使用一種商業上出售的家畜植入注射器給這些豬的耳後皮下注入1個小丸(取決於治療組)並用70%EtoH擦淨給藥部位。在頸部用11/2英寸16g針頭以5mg/頭/天給豬每天注射。如下處理;
1.對照-假植入劑。
2.PST-每天注射-(5mg/頭/天)3.PST-鄰-香草醛植入劑-1小丸(35mgPST)4.PST-亮肽素植入劑-1小丸(35mgPST)。
用一隻有11/2英寸針頭的Vacutainer從捕獲的豬頸脈抽取血樣。把該血液凝固，離心並分出血漿。冷凍該血漿試樣為日後測定PST所用。
耗食量(feedConsumption)在整個實驗過程中所有的豬得到EnhancedFinisherdiet＃634。在0天，給餵料器中加入兩袋飼料並稱得起始重量。每天檢查該餵料器並按需(不允許餵料器空著)加入一袋預先稱重的飼料。記下從圈中除去所有豬當天的餵料器的最終重量。用初始重量減去最終重量並與所加的總飼料相加得每圈的總耗食量。
餵料器的初始重量(－ 餵料器的最終重量)/(總量)(＋ 所加飼料袋的總重量)/(每圈的總耗食量)在0天和整個實驗中的七天間隔時分別給這些豬稱重(用幹克表示)。每天增量總平均值是從這些豬的最終重量減去在0天的初始重量並除以實驗的天數得到的。
在實驗過程中每圈的飼料與增量比是由每圈所有耗食量相加並除以每圈的總的體重增加量得到的。
下表顯示了平均每天的增量(ADG)和飼料與增量比的結果表1平均每天與對照相比飼料與增量對照PST處理組增量(Kg)增長的百分率的比的百分率對照(無PST)0.71～4.4～5mg/頭/天0.86212.739鄰-香草醛/PST(1小丸)0.7911.93.5221(35mg)亮肽素/PST(1小丸)0.70-1.44.120(35mg)血漿中PST水平結果每天注射PST24小時後(如果有的話)血漿PST水平是非常小的。相對應的，本發明小丸植入後，表現出一個持續的血漿PST水平。
以上結果清楚表明當用植入法給予豬鄰-香草醛/PST複合物時，在這些豬中所觀察的平均每日增量和飼料與增量比較對照組都有所增加。
而且，該結果表明在此PST中不需加入蛋白酶抑制劑。我們現在看到一種非蛋白酶抑制劑(鄰-香草醛)以一種積極的方式與PST相互作用而能夠在21天期間內維持功效。
按照本發明的方法包括一個足以延長PST血液水平並提高飼養率的量的上述PST-芳香醛複合物非腸道給予動物體。該劑量取決於好幾種因素，例如，動物的大小和所需的效果。至於給予豬，該複合物優選為10mg到約500mg的用量，更好地為約30mg到約75mg，以約7到約42天的間隔給予相同劑量。
權利要求
1.一種使生長激素持續釋放的方法，它包括非腸道給予動物足以產生所述釋放量的生長促進劑，該生長促進劑是一種生長激素和一種具有下式的芳香醛的複合物
其中X是CHO或CH2CHO，而R1和R2各自是氫、羥基、甲氧基、乙氧基、甲基或乙基。
2.權利要求1的方法，其中X是CHO，而R1和R2各自是羥基或甲氧基，且生長激素選自豬、人、牛、鳥、馬或羊的生長激素。
3.權利要求2的方法，其中醛是2-羥基-3-甲氧基苯甲醛而生長激素是豬生長激素。
4.權利要求1的方法，其中芳香醛在複合物中存在的量是從約0.5%到約10%(按重量計)。
5.權利要求1的方法，其中給予複合物的量是從約10mg到約500mg。
6.權利要求5的方法，其中以約7到約42天的間隔進行給藥。
7.權利要求1的方法，其中複合物是以一種植入劑皮下給藥。
8.一種能夠使生長激素持續釋放的生長促進複合物，它含有一種生長激素和一種具有下式的芳香醛
其中X是CHO或CH2CHO，而R1和R2各自是氫、羥基、甲氧基、乙氧基、甲基或乙基。
9.權利要求8的複合物，其中X是CHO而R1和R2各自是羥基或甲氧基且生長激素選自豬、人、牛、鳥、馬和羊生長激素。
10.權利要求9的複合物，其中醛是2-羥基-3-甲氧基苯甲醛而生長激素是豬生長激素。
11.一種提高動物飼養率的方法，它包括給予動物體內足以產生所述功效的量的權利要求8的複合物。
12.權利要求11的方法，其中複合物是豬生長激素和2-羥基-3-甲氧基苯甲醛。
13.權利要求11的方法，其中複合物的使用量是從約10mg到約500mg。
14.權利要求13的方法，其中以約7到42天的間隔進行給藥。
15.權利要求11的方法，其中芳香醛是以從約0.5%到約10%(按重量計)的量存在於複合物中。
全文摘要
一種含有生長激素和芳香醛的穩定的複合物。特別是，該複合物含有豬生長激素和一種取代的苯甲醛並提供一種持續釋放該生長激素且改善動物飼養率的方法。
文檔編號A61P15/00GK1085804SQ93108908
公開日1994年4月27日 申請日期1993年6月11日 優先權日1992年6月11日
發明者M·T·克拉克, R·J·蓋尤裡克, S·K·路易斯, M·C·默雷, M·J·雷蒙 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司