抗微生物組合物的製作方法

2023-05-07 07:24:17

自古以來，蜂蜜已被用於治療微生物感染。近年來，人們對蜂蜜的治療功效(特別是在傷口癒合領域)的興趣再度興起。臨床試驗已表明，蜂蜜是有效的廣譜抗微生物劑，其對抗常見的傷口感染生物體諸如銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、白色念珠菌(Candidaalbicans)和大腸桿菌(Escherichiacoli)有效，並且在抗細菌的抗生素抗性菌株方面有效。作為一種天然產品，蜂蜜也提供了有吸引力的替代藥物治療。許多不同類型的蜂蜜具有抗菌活性。該活性主要歸因於摩爾滲透壓濃度、pH、過氧化氫產生和植物化學組分的存在。與大多數其它蜂蜜相比，源自麥盧卡樹(Leptospermumscoparium)的麥盧卡蜂蜜已被認為具有優異的抗微生物活性，這是由於這種蜂蜜中存在高水平的抗菌植物化學活性。然而，麥盧卡蜂蜜的供應相對有限，不能滿足全球市場的需求。除了其抗微生物作用之外，蜂蜜的幾種其它活性被認為有助於傷口癒合，特別是慢性傷口的癒合。具體地，蜂蜜具有對傷口自溶性清創和除臭的能力。清創是去除死的，損壞的或感染的組織以改善剩餘健康組織的癒合潛力。蜂蜜也已被報導具有抗炎性質，能夠刺激組織生長，並且控制疼痛和最小化瘢痕形成。目前市場上有幾種基於蜂蜜的傷口護理敷料。這些敷料中有許多使用麥盧卡蜂蜜或具有高水平的非過氧化物抗菌活性的其它蜂蜜，因為存在於傷口流體中的酸性、過氧化氫酶活性和蛋白質消化酶可降低過氧化氫的抗菌效力。目前市售的基於蜂蜜的敷料包括由Comvita/DermaSciences製造的Medihoney系列產品，其包含麥盧卡蜂蜜，以及由Advancis製造的Activon(一種無添加劑的純麥盧卡蜂蜜)。其它基於蜂蜜的敷料含有蜂蜜和一種或多種另外的成分。這些成分包括MelladermPlus，其是由SanoMed製造的抗菌傷口凝膠。該凝膠含有來自保加利亞的多花山區的蜂蜜，所述蜂蜜具有天然高的葡萄糖氧化酶和酚含量(蜂蜜中的主要植物化學成分是酚類化合物)。在加工期間，蜂蜜不被加熱或輻照，因為這被認為破壞其癒合性質(特別是通過葡萄糖氧化酶產生過氧化氫)。替代地使用WO2008/049578中描述的臭氧化方法滅菌，其中將臭氧氣體鼓泡通過耐臭氧容器中的液化蜂蜜。然而，臭氧已經被美國食品和藥物管理局(FDA)批准為僅用於可重複使用的醫療裝置的滅菌劑，因此目前沒有被美國FDA授權用於對用於傷口癒合的基於蜂蜜的產品進行滅菌。Mesitran系列是另一系列富含蜂蜜的傷口護理產品。由Triticum製造的L-Mesitran軟膏含有48％的醫用級蜂蜜和幾種其它組分，包括羊毛脂、向日葵油、鱈魚肝油、萬壽菊、蘆薈、維生素C和E以及氧化鋅。蜂蜜間抗微生物能力的差異可以超過一百倍，這取決於蜂蜜的地理、季節和植物來源，以及收穫、加工和儲存條件。因此，基於蜂蜜的敷料根據所使用的蜂蜜的類型具有不同的抗微生物功效。由Jenkins，Burton和Cooper(「ThedeterminationofantimicrobialactivityofthreehoneyimpregnatedwounddressingsbychallengetestwithEMRSA-15」,Advancis)撰寫的研究發現，含有Activon、Medihoney或Mesitran產品的基於蜂蜜的敷料均具有抗EMRSA-15的不同效力。Activon浸漬的敷料是最有效的，然後是Medihoney敷料，Mesitran產品具有大大減小的作用。因此，需要降低蜂蜜的抗微生物能力的可變性，並提高具有低抗微生物能力的蜂蜜的抗微生物活性。還期望提供不依賴於使用具有高水平植物化學組分的蜂蜜的有效的基於蜂蜜的傷口護理產品。還期望提供沒有通過臭氧化滅菌的有效的基於蜂蜜的傷口護理產品。還有幾種其它不包含蜂蜜的抗菌傷口護理敷料。這些敷料包括含銀敷料，諸如ConvaTec’sAg敷料，隨著傷口滲出物被吸收至敷料中，其以受控的方式釋放離子銀。然而，已經報導了耐銀生物體，諸如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和腸球菌屬(enterococci)，並且所述生物體可促進傷口癒合中的無痛。聚維酮碘(PVP-I)是聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮，PVP)和元素碘的穩定化學複合物。其是用於局部應用以治療和預防傷口感染的廣譜殺菌劑。已經證明細菌不產生對PVP-I的抗性。自1994年以來，PVP-I已被美國FDA批准用於急性小傷口的急救治療。然而，其安全性和有效性存在一些爭議，並且未被美國衛生和人類服務部推薦用於壓力性潰瘍。氯己定對廣譜的非芽孢細菌具有快速的殺菌活性。已經記錄了針對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和一系列臨床分離株的抗菌活性。然而，已經觀察到甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)對氯己定有抗性。在英國，藥品和保健產品監管機構(MHRA)還發布了關於使用醫療器械和含有氯己定的藥物產品引起的過敏反應風險的患者安全警示。因此，還需要提供具有廣譜活性的無毒的，可用於治療慢性傷口的抗微生物傷口護理產品。本申請人已認識到，蜂蜜的抗微生物活性取決於天然抑制劑與活化劑之間的微妙相互關係，並且已經開發了組合物，其中蜂蜜的天然抗微生物活性可隨不同類型的蜂蜜以及蜂蜜的不同收穫物之間的可變性減小少而釋放，並且其中可以改善具有差的抗微生物效力的蜂蜜的抗微生物性質。本申請人還發現，即使在通過暴露於γ輻照的滅菌之後，此類組合物還具有顯著的傷口癒合性質。本申請人已經認識到，這些發現也適用於其它天然物質。申請人已經發現，組合物的抗微生物效力可以在寬範圍內得以精確地增強和控制。這使得可能提供具有最適於預期用途的抗微生物效力的組合物。在其最廣泛的意義上，本發明提供了用於生成抗微生物活性的組合物，其包含能夠轉化底物以釋放過氧化氫的酶和包含酶的底物的物質。所述酶是除了可能存在於所述物質中的夠轉化底物以釋放過氧化氫的任何酶活性(本文稱為「底物轉化活性」)以外的酶(即，作為人幹預的結果添加的)。優選地，組合物是儲存穩定的組合物，其不包括足以允許所述酶轉化所述底物的游離水。根據本發明，提供了用於生成抗微生物活性的儲存穩定的組合物，其包含：能夠轉化底物以釋放過氧化氫的純化的酶；和包括所述酶的底物的物質；其中所述組合物不包括足以允許所述酶轉化所述底物的游離水。根據本發明，還提供了產生用於生成抗微生物活性的儲存穩定的組合物的方法，其包括：將能夠轉化底物以釋放過氧化氫的純化的酶與包括酶的底物的物質接觸，其中所述組合物不包括足以允許所述酶轉化所述底物的游離水。根據本發明，還提供了用於生成抗微生物活性的儲存穩定的組合物，其包含：能夠轉化底物以釋放過氧化氫的酶；和缺乏過氧化氫酶活性並且包括所述酶的底物的物質；其中所述組合物不包括足以允許所述酶轉化所述底物的游離水。根據本發明，還提供了產生用於生成抗微生物活性的儲存穩定的組合物的方法，其包括：將能夠轉化底物以釋放過氧化氫的酶與缺乏過氧化氫酶活性並且包括所述酶的底物的物質接觸，其中所述組合物不包括足以允許所述酶轉化所述底物的游離水。在足夠的水存在下，儲存穩定的組合物的酶能夠轉化底物並釋放過氧化氫。已知過氧化氫在抗多種不同的微生物方面是有效的。因此，在稀釋本發明的儲存穩定的組合物後生成抗微生物活性。根據本發明，還提供了用於產生抗微生物組合物或溶液的方法，其包括用足夠的水稀釋本發明的儲存穩定的組合物以允許酶轉化底物並釋放過氧化氫。根據本發明，還提供了抗微生物組合物或溶液，其包含用足夠的水稀釋的本發明的儲存穩定的組合物，以允許通過酶轉化底物而釋放過氧化氫。過氧化氫酶是催化過氧化氫分解成水和氧的酶。使用缺乏過氧化氫酶活性的物質意味著在來自不同來源的相似物質之間或來自相同來源的不同收穫物之間，這種活性的量沒有可變性。這降低了可以從此類物質生成的抗微生物活性的可變性。或者，如果物質包括過氧化氫酶活性，並且不可能或不需要在物質與酶接觸之前使物質中的過氧化氫酶活性失活，則可以使用足夠的酶，以使得過氧化氫酶活性對可從所述物質生成的過氧化氫的影響減小。這也降低了可從所述物質生成的抗微生物活性的可變性。在一些實施方案中，優選所述物質缺乏過氧化氫酶活性。過氧化氫酶存在於許多植物和動物中。可在物質的加工或提取期間除去過氧化氫酶活性，或者在物質用於本發明的組合物之前滅活過氧化氫酶活性。過氧化氫酶活性可被熱滅活，例如通過巴氏滅菌。用於熱滅活過氧化氫酶活性的合適溫度為至少60℃、70℃或80℃，優選持續至少2分鐘。術語「儲存穩定的」在本文中用於指組合物可在環境溫度下儲存至少數天，優選至少一周，更優選至少一或兩個月，同時在稀釋組合物後保留生成抗微生物活性的能力。優選的儲存溫度低於37℃，優選20-25℃。優選地，將組合物避光儲存。過氧化氫在環境溫度下通常是不穩定的。本發明的儲存穩定的組合物中缺乏足夠的游離水防止酶轉化底物以釋放過氧化氫，從而有助於在環境溫度下長時間保持組合物的穩定性。本發明的儲存穩定的組合物可包括一些水，條件是沒有足以允許酶轉化底物的游離水。水的適當量將根據組合物的精確組分而變化。然而，通常，本發明的儲存穩定的組合物優選包含少於20％的總水含量，例如10％-19％的水。過氧化氫可在稀釋本發明的組合物後持續釋放一段時間，這取決於組合物中存在的底物的量和酶的活性。應當理解，可以選擇組合物中底物的量和/或酶的活性，以在組合物稀釋後提供相對高水平的過氧化氫在短時間內的釋放，或較低水平的過氧化氫在較長時間內的釋放。優選地，在稀釋組合物後，組合物提供過氧化氫的持續釋放至少24小時，更優選至少48小時的時間。優選地，在稀釋組合物後，組合物以小於2mmol/升的水平提供持續至少24小時的時間的過氧化氫的持續釋放。存在於本發明的組合物中的酶是除了可存在於物質中的能夠轉化底物以釋放過氧化氫的任何酶活性(本文稱為「底物轉化活性」)以外的酶，即本發明的組合物包含所述物質和添加的酶。在一些實施方案中，優選在所述物質中不存在底物轉化活性。應當理解，在本發明的儲存穩定的組合物中應存在足夠的酶以在稀釋組合物後根據需要轉化底物並形成過氧化氫。鑑於在足夠的水存在下通過本發明的儲存穩定的組合物生成過氧化氫的重要性，應當理解本發明的組合物不應含有任何添加的過氧化物酶。優選地，酶是純化的酶。術語「純化的酶」在本文中用於包括酶製劑，其中酶已經與當酶產生時最初存在的至少一些雜質分離。優選已被除去或減少的雜質包括否則會干擾酶轉化底物釋放過氧化氫的能力的雜質。純化的酶處於高水平的純度可以不總是必要或需要的，條件是酶能夠轉化底物以釋放過氧化氫。在一些情況下，可能需要使用相對粗製的酶製劑。合適的純度水平的實例包括至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的純度。然而，優選的是，生產酶時可最初存在的任何過氧化氫酶的量已經減少。該酶可以通過重組或非重組方法產生，並且可以是重組或非重組酶。該酶可以從微生物來源，優選地從非遺傳修飾的微生物純化。酶的純度水平可以根據組合物的預期用途適當地選擇。例如，如果組合物預期用於人消費，則食品級的純度可能是適當的。對於醫療用途，應使用醫療級或醫療裝置級的純度。優選地該酶是氧化還原酶。可轉化底物以釋放過氧化氫的氧化還原酶的實例包括葡萄糖氧化酶、己糖氧化酶、膽固醇氧化酶、半乳糖氧化酶、吡喃糖氧化酶、膽鹼氧化酶、丙酮酸氧化酶、乙醇酸氧化酶和胺基酸氧化酶。這些氧化還原酶的相應底物分別是D-葡萄糖、己糖、膽固醇、D-半乳糖、吡喃糖、膽鹼、丙酮酸鹽、乙醇酸鹽和胺基酸。一種或多種氧化還原酶和一種或多種氧化還原酶的底物的混合物可以存在於本發明的組合物中。根據本發明的優選實施方案，氧化還原酶是葡萄糖氧化酶，底物是D-葡萄糖。所述物質可以是包括酶的底物的任何物質。優選地，所述物質缺乏過氧化氫酶活性。優選地，物質是未精製的物質。術語「未精製的」在本文中用於指未被加工成純形式的物質。未精製的物質包括可能已經濃縮(例如通過乾燥或煮沸)的物質。優選地，所述物質包括來自天然來源(本文稱為「天然物質」)的一種或多種底物。天然物質的實例包括來自植物來源的物質，包括來自樹液、根、花蜜、花、種子、果實、葉或枝條的物質。更優選地，物質是未精製的天然物質。優選地，該物質包括一種或多種下列底物：D-葡萄糖、己糖、膽固醇、D-半乳糖、吡喃糖、膽鹼、丙酮酸鹽、乙醇酸鹽或胺基酸。優選地，所述物質是糖物質。術語「糖物質」在本文中用於表示包括一種或多種糖的任何物質。術語「糖」在本文中用於指具有通式Cm(H2O)n的碳水化合物。優選的糖包括單糖，諸如D-葡萄糖、己糖或D-半乳糖。優選地，糖物質包括來自天然來源的一種或多種糖(本文稱為「天然糖物質」)。更優選地，天然糖物質是未精製的天然糖物質。未精製天然糖物質可以是(或衍生自)天然糖產品。在優選實施方案中，未精製天然糖產物是蜂蜜。在一些優選實施方案中，蜂蜜是已被處理以除去過氧化氫酶活性或使過氧化氫酶活性失活的蜂蜜。或者，未精製天然糖物質可以是加工的天然糖，諸如糖漿或轉化糖漿。如上所述，所述物質本身可優選缺乏能夠轉化底物以釋放過氧化氫的酶活性(稱為「底物轉化活性」)。缺乏來自物質的底物轉化活性具有的優點是，來自不同來源的相似物質之間或來自相同來源的不同收穫物之間的活性的量沒有變化。這進一步降低了可從這些物質生成的抗微生物活性的可變性。然後僅通過與物質接觸的酶提供底物轉化活性，因此可控制組合物中存在的底物轉化活性的量。可將底物轉化活性在物質的加工或提取期間除去，或者在物質用於本發明的組合物中之前滅活。底物轉化活性可以通過熱滅活，諸如通過巴氏滅菌失活。用於使底物轉化活性熱失活的合適溫度為至少80℃，優選持續至少2分鐘。熱失活的有利方面是過氧化氫酶活性和底物轉化活性都可以在單一熱滅活步驟中失活。本發明的儲存穩定的組合物可包括抗微生物劑。例如，如果通過將酶與水溶液中的物質在用於通過酶轉化底物的條件下接觸形成儲存穩定的組合物，然後乾燥組合物以將其水含量降低至一定水平(其中游離水不足以允許酶轉化底物)，則可以存在過氧化氫。然而，優選地，儲存穩定的抗微生物組合物不包括任何可檢測的過氧化氫。此種組合物可以諸如通過在沒有足夠游離水以允許酶轉化底的情況下將酶與底物接觸物來形成。可存在於本發明的儲存穩定的組合物中的其它抗微生物劑的實例包括：抗生素、抗病毒劑或抗真菌劑。特別優選的是，本發明的組合物是食品標準組合物。此類組合物可用於人消費。在其它特別優選實施方案中，組合物是醫療級或醫療裝置級組合物。或者，本發明的組合物可具有用於動物食用的動物食物標準。特別優選的是，組合物的每種組分是天然物質(即每種組分來源於天然來源)。僅含有天然成分的本發明的組合物提供了對基於藥物的抗微生物製劑的有吸引力的替代品。優選地，所述物質是蜂蜜。蜂蜜優選地可以是醫療級或醫療裝置級蜂蜜。在一些實施方案中，優選的是，蜂蜜是已被處理以除去最初存在於蜂蜜中的過氧化氫酶活性或使該活性失活的蜂蜜。根據本發明的優選實施方案，所述物質是巴氏滅菌的蜂蜜，並且所述酶是葡萄糖氧化酶。根據優選實施方案，物質是醫療級或醫療裝置級蜂蜜，並且酶是醫療級或醫療裝置級酶，優選葡萄糖氧化酶。蜂蜜是由蜜蜂使用花的花蜜製成的天然產品。其是飽和或過飽和的糖溶液。蜂蜜在食品法典國際食品標準中被定義為「由蜜蜂從植物花蜜或植物生活部分的分泌物或植物吮吸昆蟲在植物生活部分上的排洩物(蜜蜂收集所述花蜜、分泌物或排洩物，通過將其與它們自已的特定物質結合進行轉化、沉積、脫水、儲存和留在蜂巢中以熟化和成熟)產生的天然甜味物質」(RevisedCodexStandardforHoney，2001)。花蜜通常包括約14％的單糖(w/w)、1％的酚化合物和85％的水。酚化合物賦予蜂蜜其味道、香氣和顏色。在蜂巢的溫暖條件(通常36℃)下，花蜜將很快發酵。為了防止這種情況，將花蜜與來自覓食蜂的唾液腺和下咽腺的含有酶的分泌物混合。在蜂巢中，花蜜從蜜蜂傳遞至蜜蜂，並且在其被存儲在蜂巢的小室中之前被添加了更多的分泌物。存在的酶的量隨著蜜蜂的年齡、飲食和生理階段(當蜜蜂是覓食者時，其腺體會產生更多的消化酶)、集落的強度、蜂巢的溫度以及花蜜流和其糖含量而變化。由蜜蜂添加到花蜜的酶包括催化澱粉轉化為糊精和糖的澱粉酶，催化蔗糖轉化為果糖和葡萄糖的轉化酶和催化葡萄糖轉化成過氧化氫和葡萄糖酸的葡萄糖氧化酶。低劑量的過氧化氫阻止將快速發酵花蜜的酵母的生長。當蜜蜂逐漸乾燥花蜜以形成蜂蜜時，葡萄糖酸使蜂蜜產生酸性(在pH3.5與4.5之間)。水被有效地捕獲至蜂蜜中的糖分子並且不可用於進一步的化學反應。蜂蜜中『游離』水的量被測量為水活度(aw)。蜂蜜中發現的aw的範圍已報導為0.47-0.70，平均值為0.562和0.589(RCIEGG,M；BLANC,B,1981,Thewateractivityofhoneyandrelatedsugarsolutions.Lebensmittel-WissenschaftundTechnologie14:1-6)。熟化的蜂蜜的aw太低，以至不支持任何菌種的生長，如果水含量低於17.1％，則沒有發酵(Molan,P.C.(1992).Theantibacterialactivityofhoney:1.Thenatureoftheantibacterialactivity.BeeWorld,73(1),5-28)。蜂蜜的酸性和游離水的缺乏防止了發酵的進一步風險，並停止葡萄糖氧化酶的工作。蜂蜜還含有可變量的源自花蜜的過氧化氫酶。開花蜂蜜的典型化學組成是：表1此外，存在痕量的花粉，其可以用於鑑定蜂蜜的植物來源，以及酶轉化酶、澱粉酶、過氧化氫酶和葡萄糖氧化酶。還有植物化學組分。這是變化的，但通常高達～1％，這取決於蜂蜜的來源。一旦稀釋，存在於天然蜂蜜中的葡萄糖氧化酶能夠轉化稀釋的蜂蜜中的葡萄糖底物以釋放過氧化氫。然而，蜂蜜含量(特別是葡萄糖氧化酶活性、葡萄糖和過氧化氫酶活性的含量)的可變性意味著來自不同來源的蜂蜜或來自相同來源的蜂蜜的不同收穫物在其抗微生物效力方面可具有非常大的可變性。根據本發明的實施方案，可對蜂蜜進行巴氏滅菌。蜂蜜的巴氏滅菌使存在於蜂蜜中的過氧化氫酶和葡萄糖氧化酶活性失活。任選地，可過濾巴氏滅菌的蜂蜜以除去可在收穫後存在於蜂蜜中的任何顆粒(諸如蠟顆粒和蜂翅)。為了形成本發明的儲存穩定的組合物，一旦葡萄糖氧化酶已冷卻至不會使添加的葡萄糖氧化酶失活並且蜂蜜保持足夠的液體，以促進與葡萄糖氧化酶的混合的溫度(適當地為35-40℃)，就可將葡萄糖氧化酶與巴氏滅菌的蜂蜜接觸。可在足以使過氧化氫酶活性熱失活的溫度下對蜂蜜進行巴氏滅菌。合適的最低溫度為60℃至80℃。該溫度應優選保持至少2分鐘。熱過程的控制可以是重要的，因為加熱蜂蜜的雙產物是HMF(羥基甲基糠醛)的形成，所述HMF用作蜂蜜中的熱和儲存變化的指示劑。HMF通過在酸的存在下果糖的分解形成。熱增加了該反應的速度。速度的增加隨著熱量的增加而呈指數增長。對於蜂蜜升至高於40℃(接近正常蜂巢環境溫度)的每一度數，HMF迅速增加。HMF不是有害產物。果醬、糖蜜、金糖漿等可具有為蜂蜜水平的10至100倍的HMF水平。然而，HMF水平用作蜂蜜降解的指示，並且根據食品法典標準，40mg/l是歐盟對餐桌蜂蜜的最大允許水平。為了防止HMF的形成，優選將蜂蜜迅速升高至使過氧化氫酶失活的溫度水平，然後使用熱交換機制將蜂蜜迅速降溫至最高40℃至45℃。在該優選實施方案的過程中不添加水，因此所得組合物不包括足夠的游離水，以允許葡萄糖氧化酶轉化存在的葡萄糖以釋放過氧化氫。儲存穩定的組合物包括：巴氏滅菌的蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。沒有可檢測的過氧化氫存在。組合物可在環境溫度下儲存至少數天。在本發明的其它實施方案中，可不對蜂蜜進行滅菌。根據一些優選實施方案，蜂蜜(巴氏滅毒的或未巴氏滅菌的)是乳酪型蜂蜜。乳酪型蜂蜜是已被處理以控制結晶的蜂蜜。乳酪型蜂蜜含有大量的小晶體，其防止可在未加工的蜂蜜中發生的較大晶體的形成。美國專利1,987,893中描述了用於產生乳酪型蜂蜜的方法。在該方法中，首先將生蜂蜜進行巴氏滅菌，然後將預先加工的乳酪型蜂蜜添加至巴氏滅菌的蜂蜜中，以產生10％乳酪型蜂蜜與90％巴氏滅菌蜂蜜的混合物。然後將混合物在14℃的控制溫度下靜置。該方法在約一周內產生一批乳酪型蜂蜜。種子批料可以通過使正常蜂蜜結晶並將晶體破碎成所需尺寸來製備。大規模生產者已通過使用槳攪拌蜂蜜混合物同時將混合物保持在14℃來改進了該方法。在替代性乳化法中，可以省略巴氏滅菌步驟，取而代之以將蜂蜜緩慢溫熱至37℃。葡萄糖氧化酶優選是具有用於人類消費的食品標準的或具有用於醫療應用的醫療級或醫療裝置級的純化的天然葡萄糖氧化酶製劑。葡萄糖氧化酶的活性可根據在儲存穩定的組合物稀釋後所需的過氧化氫生成速率來選擇。幾種葡萄糖氧化酶製劑是可商購的(葡萄糖氧化酶根據參考文獻CAS：9001-37-0來鑑定)。來自非遺傳修飾的生物體的葡萄糖氧化酶的常見微生物來源包括黑麴黴(Aspergillusniger)、尼崎青黴(Penicilliumamagasakiense)、變幻青黴(Penicilliumvariabile)、特異青黴(Penicilliumnotatum)的選定菌株。來自GMO黑麴黴的醫療裝置級葡萄糖氧化酶可獲自BiozymeUK，活性為240iu/mg。來自黑麴黴的食品標準葡萄糖氧化酶可獲自BIO-CATINC，活性為15,000個單位/g。非遺傳修飾的葡萄糖氧化酶可獲自BIO-CATINC，活性為12,000/g。來自黑麴黴的葡萄糖氧化酶(GO3B2)可獲自BBIEnzymesLimited，活性為360個單位/mg。汙染物：α-澱粉酶不超過0.05％，糖精不超過0.05％，麥芽糖酶不超過0.05％，以及GO/Cat不超過2000。酶活性(諸如，葡萄糖氧化酶活性)可在例如1-400IU/mg或1-300IU/mg，諸如250-280IU/mg的範圍內。所使用的酶的量可取決於幾個因素，包括組合物的期望用途，物質中存在的任何過氧化氫酶活性的量，物質中存在的底物的量，期望的過氧化氫釋放水平，以及過氧化氫釋放所需的時間長度。本領域普通技術人員可以容易地確定合適量的酶，如果需要，使用如下文實施例2中所述的孔擴散測定來測定不同量的酶的過氧化氫釋放的程度。酶(諸如葡萄糖氧化酶)的合適量可以為0.0001％w/w至0.5％w/w的組合物。可選擇酶的用量，以便產生用於產生等效於選擇的酚標準物(諸如10％、20％或30％的酚標準物)的抗微生物活性的組合物。本發明的組合物，特別是其中物質是蜂蜜(諸如未經巴氏滅菌的蜂蜜)，並且酶是能夠轉化蜂蜜中的D-葡萄糖以釋放過氧化氫的葡萄糖氧化酶的本發明的組合物，可包含每克組合物至少1個單位，優選高達1500個單位的葡萄糖氧化酶。所述葡萄糖氧化酶是除了可天然存在於物質中的任何葡萄糖氧化酶活性以外的葡萄糖氧化酶活性(即，作為人幹預的結果添加的)。「單位」在本文中定義為在pH7.0、25攝氏度下每分鐘引起1微摩爾葡萄糖的氧化的酶的量。本申請人已經發現，本發明的組合物的抗微生物效力可僅通過增加組合物中存在的葡萄糖氧化酶活性的量來增加。在本發明的一些實施方案中，本發明的組合物包含每克組合物多於15個單位，例如至少30個單位、至少50個單位或至少100個單位，並適當地少於685個單位，例如100-500個單位的葡萄糖氧化酶。已經發現此類組合物具有比每克組合物具有高達15個單位的葡萄糖氧化酶的組合物優異的抗微生物性質。具體地，此類組合物具有增強的抗廣泛的微生物(包括MSSA、MRSA、組A和B鏈球菌屬(Streptococci)、腸球菌(Enterococcus)、大腸桿菌(E.coli)、大腸桿菌ESBL、液化沙雷菌AmpC(Serr.liquefaciensAmpC)、肺炎克雷伯菌(Kleb.pneumoniae)、銅綠假單孢菌(Pseud.aeruginosa)和白色念珠菌(Candidaalbicans))的效力。在本發明的其它實施方案中，本發明的組合物包含每克組合物至少500個單位，例如500-1000個單位或685-1000個單位的葡萄糖氧化酶。已發現此類組合物具有甚至更優異的抗微生物性能。具體地，此類組合物具有進一步增強的抗廣泛的微生物(包括MSSA，MRSA，大腸桿菌ESBL和金黃色葡萄球菌)的效力。巴氏消毒過程使存在於蜂蜜中的任何酶活性失活，因此來自不同來源的巴氏滅菌的蜂蜜之間或來自相同來源的蜂蜜的不同收穫物之間的過氧化氫酶和底物轉化活性沒有可變性。底物轉化活性的量可通過添加具有確定量和活性的酶的純化葡萄糖氧化酶製劑來控制。因此，不同類型的蜂蜜以及蜂蜜的不同收穫物之間的抗微生物性質的固有可變性顯著降低，並且具有低抗微生物能力的蜂蜜的抗微生物性質得到改善。根據本發明的另外的優選實施方案，所述物質可以是轉化物質，優選轉化糖漿，諸如轉化楓糖漿。術語「轉化的」在本文中用於表示最初存在於物質中的蔗糖已例如通過轉化酶或蔗糖酶的活性轉化為葡萄糖和果糖。此類轉化物質然後可用於具有酶葡萄糖氧化酶的本發明的組合物。楓糖漿由糖楓或黑槭樹汁製成。在氣候寒冷的地區，這些樹在冬季到來之前將澱粉儲存在其莖和根中，所述澱粉當在春季被轉換為糖時，在樹汁中升高。可叩擊楓樹，並且收集並濃縮滲出的汁液以形成楓糖漿。楓糖漿通常包含約66％的蔗糖，33％的水和1％的葡萄糖和果糖。由於存在低量的葡萄糖，當與葡萄糖氧化酶組合時楓糖沒有強效的生成抗菌性的性質。然而，如果蔗糖首先被轉化為葡萄糖和果糖(例如通過用轉化酶或蔗糖酶處)，則所得的轉化糖漿包括高得多的水平的葡萄糖氧化酶的底物。根據本發明，還提供了抗微生物組合物或用於生成抗微生物活性的組合物，其包含缺乏過氧化氫酶活性的物質和能夠轉化所述物質中的底物以釋放過氧化氫的酶。根據本發明還提供了產生抗微生物組合物或用於生成抗微生物活性的組合物的方法，所述方法包括：將能夠轉化底物以釋放過氧化氫的酶與缺乏過氧化氫酶活性並且包括所述酶的底物的物質接觸。根據本發明還提供了抗微生物組合物或用於生成抗微生物活性的組合物，所述組合物包含：物質；和能夠轉化所述物質中的底物以釋放過氧化氫的純化的酶。根據本發明還提供了產生抗微生物組合物或用於生成抗微生物活性的組合物的方法，所述方法包括：將能夠轉化底物以釋放過氧化氫的純化的酶與包括所述酶的底物的物質接觸。本發明的組合物或抗微生物組合物還可包含過氧化氫。根據本發明還提供了包含本發明的組合物或抗微生物組合物的抗微生物溶液。本發明的組合物和溶液可用於治療可用過氧化氫治療的任何微生物感染。實例包括由革蘭陽性細菌、革蘭陰性細菌、耐酸細菌、病毒、酵母、寄生或病原微生物或真菌引起的感染。具體地，可治療由以下微生物引起的感染：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、痤瘡丙酸桿菌(Propionibacteriumacnes)，金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)、腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophytics)、A組或B組β溶血型鏈球菌(BetahaemolyticStreptococci)、結腸彎曲桿菌(Campylobactercoli)、空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejuni)、甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MethicillinResistantStaphylococcusAureus)(MRSA)、甲氧西林敏感性金黃色葡萄球菌(MethicillinSensitiveStaphylococcusAureus)(MSSA)、灰葡萄孢(Botrytiscinerea)、結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)、隱孢子蟲屬(Cryptosporidium)、瘧原蟲屬(Plasmodium)和弓形體屬(Toxoplasma)。根據本發明還提供了本發明的組合物或溶液用於預防或抑制微生物生長的用途。根據本發明還提供了用作藥劑的本發明的組合物或溶液。根據本發明還提供了用於預防、治療或緩解微生物感染的本發明的組合物或溶液。本發明還提供了本發明的組合物或溶液在製備用於預防、治療或緩解微生物感染的藥劑中的用途。根據本發明，還提供了用於預防、治療或緩解微生物感染的方法，其包括向需要此類預防、治療或緩解的受試者施用本發明的組合物或溶液。受試者可以是人或動物受試者。可局部施用本發明的組合物。本申請人已經發現，本發明的組合物，特別是其中未精製的天然物質是蜂蜜的本發明的組合物，具有顯著的傷口癒合性質。具體地，已經持續一個月至一年以上的慢性傷口在用本發明的組合物治療的幾天內明顯開始癒合。具體地，據信這種組合物的傷口癒合活性是由當本發明的組合物例如通過傷口滲出物稀釋時提供的過氧化氫的持續低水平釋放導致的。這導致氧向傷口部位的遞送。氧在支持傷口癒合中具有多種重要作用。複雜的傷口癒合過程需要大量的能量。如果傷口感染，則存在甚至更大的能量需求，這又意味著對氧的需求更大。氧涉及自然癒合過程的許多機制。其在代謝支持、基質修復、抗菌/感染控制以及信號傳導和細胞反應的控制中具有關鍵作用。與沒有足夠氧合的那些傷口相比，接受足夠氧的傷口通常以增加的速率癒合。缺血/缺氧可以直接抑制傷口癒合過程，諸如血管生成、膠原合成和上皮形成，並且還阻礙白細胞殺死細菌的能力。隨著細菌繁殖，更多的白細胞被募集到傷口部位，進一步增加氧消耗。對於傷口癒合，必須具有足夠的能量和營養物來驅動癒合過程。氧在這些代謝過程中是必需的。組織再生和癒合涉及肉芽組織的形成、上皮形成、收縮和重建模。癒合過程需要各種類型的細胞的增殖，隨著基質建立，形成新的血管並且替換上皮。此類細胞活性取決於允許不受阻礙的呼吸的氧氣可用性。構建所有生物聚合物(例如蛋白聚糖、結構蛋白)所需的生物合成途逕取決於滿足潛在的能量需求的氧氣。需要多種酶，包括基質金屬蛋白酶，並且這些酶在能量和從而氧的需求上也是昂貴的。膠原合成是這些過程的基本部分。膠原的沉積對於重建結締組織和作為血管生成過程的一部分是至關重要的。氧是在原膠原形成期間脯氨酸和賴氨酸的羥基化中所需的輔因子。成熟的膠原合成需要脯氨醯羥化酶和賴氨醯羥化酶，所述二者要行使它們的功能都依賴於氧。新血管形成/血管發生是完全癒合所必需的。這必須由適當的信號觸發。在高氧環境中，巨噬細胞白細胞可觸發該信號，導致涉及組織降解，隨後膠原形成和組織，內皮細胞遷移/定殖和血管形成的協調的、複雜的系列事件。當產生傷口時，身體的自然防禦被激活。中性粒細胞在創傷後不久聚集在創傷部位，釋放殺菌活性氧(ROS)和過氧化氫(H2O2)以殺死細菌並預防感染。巨噬細胞響應於環境刺激到達傷口，吞噬外來顆粒，並釋放血管內皮生長因子(VEGF)(一種對傷口癒合至關重要的血管生成因子)。氧在這些事件中發揮關鍵作用。巨噬細胞和嗜中性白細胞的主要微生物殺傷機制之一是「呼吸爆發」-這些細胞籍以殺死微生物的天然活性。在呼吸爆發過程中有缺陷的個體成為細菌感染的受害者。白細胞需要氧以遞送呼吸爆發效應，並且升高的氧水平可提高其效力。這些白細胞還具有其它細菌殺傷機制，當它們吞噬微生物(吞噬作用)時被觸發。這是一個氧依賴的過程，因為其涉及大量的能量消耗，所以其不能很好地在缺氧環境中工作。其在氧富集的情況下工作最好。氧對厭氧細菌也是致命的，並且在一些抗生素有效發揮作用中是重要的。分子氧是與生長因子和其它信號(例如，氧化還原信號)相互作用以調節信號傳導途徑的重要細胞信號。由巨噬細胞釋放的觸發血管生成的分子信號是「血管內皮生長因子」(VEGF)。高氧水平可引起巨噬細胞白細胞釋放VEGF。許多其它重要因子和酶的基因由高氧水平誘導。一氧化氮(NO)的產生也被認為是傷口癒合中的關鍵信號傳導和控制事件。NO由酶一氧化氮合酶(NOS)產生，並且存在於傷口癒合的早期階段，酶(iNOS)的可誘導形式被上調。然而，其只能在精氨酸和氧氣充足的情況下發揮作用，以使得能以適當的速率產生NO。氧還在發出(刺激)進行上皮形成過程的信號中發揮直接作用，上皮形成是其中新的上皮細胞增殖，組織自身並分化成結構化上皮的關鍵後期癒合事件。因此，通過本發明的組合物向傷口部位持續供應氧被認為在促進傷口癒合中是特別重要的。據認為，除了它們的過氧化氫釋放活性之外，本發明的優選組合物的傷口癒合活性也由組合物的許多活性促成。具體地，優選的組合物據認為具有對傷口清創和除臭，具有抗炎性質，能夠刺激組織生長，以及控制疼痛和使瘢痕形成最小化的能力。惡臭是慢性傷口的常見特徵，並且歸因於從分解的血清和組織蛋白產生惡臭化合物的厭氧細菌菌種的存在。除了抗微生物作用以外，包含葡萄糖(優選按重量計24-40％)的本發明組合物允許細菌優先於胺基酸代謝該惡臭化合物，導致無氣味的代謝物乳酸的產生。具有高摩爾滲透壓濃度(適當地具有在與蜂蜜類似的範圍(即0.47-0.7)內的aw)的本發明的組合物據認為有助於通過組織蛋白酶的自溶作用清除傷口。本發明的組合物通過從傷口組織通過其強滲透作用抽出淋巴液而產生潮溼的傷口環境。這在傷口床與上覆的壞死組織的界面處提供了蛋白酶的恆定供應。該作用也從下面清洗傷口床的表面。通過本發明的組合物與水接觸釋放的過氧化氫對蛋白酶的活化也可以起輔助作用。清除作用還可通過去除死組織來有助於降低傷口的細菌負荷。眾所周知死亡組織為細菌生長提供極好的培養基，並且如果留在傷口中則增加感染的風險。身體的炎症反應標誌著癒合過程的開始，但長時間的反應可抑制癒合，導致對組織的進一步損傷，並使得更難以處理傷口。長期的炎症反應通常與高水平的滲出物有關。抑制炎症以及減輕患者的疼痛，減少了血管的打開，從而減輕水腫和滲出。本發明的組合物清除感染和清創傷口的能力據認為有助於抗炎作用。包括抗氧化劑(優選存在於蜂蜜中的一種或多種抗氧化劑)的本發明組合物還可通過清除自由基來減少過度的炎症。長期的炎症引起纖維化，其在傷口中表現為肥厚性瘢痕形成。本發明的優選組合物可通過減少炎症，促進血管生成和刺激肉芽組織的形成來減少瘢痕形成。本發明的優選組合物還可以刺激上皮的生長。本發明的組合物也被認為具有由白細胞介素-1(IL-1)介導的免疫刺激作用。本發明的組合物被認為促進IL-1從皮膚細胞的釋放。IL-1是也由巨噬細胞、單核細胞和樹突細胞分泌的細胞因子。其是身體對抗感染的炎症反應的重要部分。其增加粘附因子在內皮細胞上的表達，以使白細胞能夠遷移到感染部位。其還作用於大腦的體溫調節中心，導致體溫升高。其被稱為內源性熱原。升高的體溫有助於身體的免疫系統對抗感染。這是炎症性免疫應答的初始階段，其增強了系統的抗微生物活性。炎症反應通過其抗可能的感染的防禦以及通過參與細胞和組織修復和再生長而在傷口癒合中起中心作用。本發明組合物的抗微生物作用據認為通過免疫刺激作用得到輔助和補充，所述免疫刺激作用有助於受損組織和/或細胞的再生長和修復。本發明的組合物，特別是基於蜂蜜的組合物為傷口組織提供潮溼的癒合環境，而無浸軟周圍的風險，並且防止敷料粘附到傷口床上，以使得當更換敷料時沒有疼痛和組織損傷。此類組合物還刺激健康細胞發育並加速傷口中的肉芽形成和上皮形成過程。組合物還具有閉合作用以保護傷口和受損組織。還認為基於蜂蜜的組合物導致傷口pH的顯著降低，這有利於癒合過程。根據本發明的優選方面，本發明的組合物可用於傷口護理的方法，包括傷口的治療，或傷口敗血症的治療或處理。傷口可以是急性傷口、慢性傷口、手術傷口(例如，剖腹產傷)、慢性燒傷或急性燒傷。本發明的組合物可用於預防性預防傷口敗血症。如果使用本發明的儲存穩定的組合物，應當理解，這可通過存在於傷口部位的液體稀釋，這由此導致由稀釋的組合物釋放過氧化氫。當任何組織的完整性受損(例如皮膚破裂、肌肉撕裂、燒傷或骨折)時傷口產生。傷口可由動作(外傷)或外科手術，傳染病或潛在病況引起。急性傷口包括手術切口和創傷性損傷，諸如撕裂傷、擦傷、撕脫全國各地、穿透或咬傷和燒傷。急性創傷通常通過有序和及時的修復過程進行，所述修復過程導致解剖學和功能完整性的持續恢復。慢性傷口是已存在超過三周或未能進行通過有序和及時的過程以產生解剖和功能完整性，或進行通過修復過程而未建立持續和功能結果的傷口(Lazarus等，ArchDermatol.1994；130(4):489-493)。慢性傷口可分為四類：靜脈潰瘍、動脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍和壓力性潰瘍。少數不屬於這些類別的傷口可由諸如輻射中毒或缺血的原因造成。通常發生在腿部的靜脈潰瘍佔慢性傷口的約70％至90％，並且主要影響老年人。它們被認為由靜脈中存在的防止血液向後流動的瓣膜的不當功能引起的靜脈高壓造成。缺血是由功能障礙引起的，並且與再灌注損傷相結合，引起導致傷口的組織損傷。在靜脈疾病中，潰瘍通常位於踝和小腿之間的綁腿區域(通常在腿的內側)。動脈腿潰瘍作為動脈血流量減少和隨後組織灌注的結果而發生。動脈粥樣硬化或外周血管疾病是動脈性腿潰瘍的最常見原因。如果不進行治療，血液供應的減少可導致通過受影響的動脈提供給養的區域中的組織死亡。潰瘍發展通常是組織的迅速、深度破壞。動脈性腿部潰瘍可發生在小腿上的任何地方，並且通常更深且為圓形，具有清楚限定的邊界。糖尿病性潰瘍：糖尿病引起免疫妥協和對小血管的損害，阻止組織的充分氧合，這可引起慢性傷口。糖尿病引起神經病，其抑制傷害感受和疼痛感覺。因此，患者最初可能不會注意到腿和腳的小傷口，因此可能不能防止感染或反覆受傷。壓力也在糖尿病潰瘍的形成中起作用。由於慢性潰瘍，糖尿病患者截肢的風險比普通人群高15％。壓力性潰瘍通常發生在具有抑制通常經受壓力的身體部位(諸如腳跟、肩胛骨和骶骨)的運動的麻痺等病況的人中。壓力性潰瘍由當組織上的壓力大於毛細血管中的壓力，從而限制血液流入該區域時發生的缺血引起。，比皮膚需要更多的氧氣和營養物的肌肉組織，顯示來自長期壓力的最糟糕的影響。如在其它慢性潰瘍中一樣，再灌注損傷損害組織。當治療潰瘍時，希望：產生屏障以在傷口癒合時保護傷口；提供潮溼的傷口環境；脫落傷口；減少細菌負荷；以及理想地通過免疫調節和改善營養促進癒合。常規的傷口處理產品不能實現所有這些作用。一些常規治療具這些作用中的一些作用，但具有相當的毒性，因此不是理想的治療。然而，本發明的組合物，特別是其中物質是蜂蜜的本發明的組合物具有所有這些性質。另外，本發明組合物的抗微生物效力可被控制為遠比其它基於蜂蜜的傷口護理產品有效，並且所述組合物在抗涉及慢性傷口的一系列病原體(包括抗生素抗性生物體，諸如MRSA)方面是有效的。本發明的組合物在尤其是其中傷口可能變得更糟的的患者(諸如糖尿病患者)的傷口的早期治療中是特別有利的。利用本發明的組合物的早期治療防止了在慢性傷口中出現的併發症，保持患者活躍，並且避免了治療併發症的費用。還已發現本發明的組合物在減少或預防手術傷口感染方面是有效的。外科傷口的感染是一個問題，特別是在具有大約10％的相當高的感染率的剖腹產中。本發明的組合物在手術後施用簡單。例如，可將本發明的組合物施用於敷料，然後與傷口接觸，並用第二敷料保持就位。以下實施例40表明，與歷史數據相比，本發明的組合物對手術後的剖腹產傷口的的單次施用將手術部位的感染率降低了60％。外周插入式中央導管(PICC管線)用於施用化療治療和/或其它藥物。PICC管線是一根長而細的柔性管，其被插入手臂靠近肘的轉彎處的大靜脈之一。然後將其穿入靜脈，直至尖端位於正好在心臟上方的大靜脈中。然而，可能在管線內或在其進入靜脈的區域中發展感染。如果感染髮展，患者通常被給予抗生素。如果這些抗生素不能清除感染，或者如果感染是嚴重的，則可除去管線。為了減少感染髮展的機會，可將含有抗微生物劑諸如氯己定或銀的敷料施用到管線入口部位。已發現通過將本發明的組合物局部施用於管線入口位點(參見下文實施例39)，本發明的組合物有效地防止和清除PICC管線的定殖。本發明的組合物可被容易地施加，而無需任何專門醫生培訓或複雜的設備。該組合物非常適合用於第三世界，在第三世界患者通常具有增加的對感染的易感性的，並且用於手術和傷口護理的材料和器械通常比發達國家更容易受感染。本發明的組合物是無毒的，並且不具有與含銀敷料、PVP-I或氯己定相關的任何問題。本發明的組合物也可用於治療供體或受體移植部位。根據本發明，提供了治療傷口的方法，其包括向傷口施用本發明的組合物。據本發明還提供了用於治療傷口的本發明的組合物。根據本發明還提供了本發明的組合物在製備用於治療傷口的藥劑中的用途。根據本發明還提供了治療炎症的方法，其包括向炎症部位施用本發明的組合物。根據本發明還提供了用於治療炎症的本發明的組合物。根據本發明還提供了本發明的組合物在製備用於治療炎症的藥劑中的用途。根據本發明還提供了刺激組織生長的方法，其包括向需要此類刺激的部位施用本發明的組合物。根據本發明還提供了用於刺激組織生長的本發明的組合物。根據本發明還提供了本發明的組合物在製備用於刺激組織生長的藥劑中的用途。根據本發明還提供了清創傷口的方法，其包括向需要清創的傷口施用本發明的組合物。根據本發明還提供了用於清創傷口的本發明的組合物。根據本發明還提供了本發明的組合物在製備用於清創傷口的藥劑中的用途。根據本發明還提供了對傷口除臭的方法，其包括向需要除臭的傷口施用本發明的組合物。根據本發明還提供了用於對傷口除臭的本發明的組合物。根據本發明，還提供本發明的組合物在製備用於對傷口除臭的藥劑中的用途。對於傷口癒合應用，本發明的組合物可以由保健提供者確定的適當頻率施用。合適地，本發明的組合物可以至少每幾天施用，諸如每周施用，但優選每天或隔天施用。施用的本發明的組合物的量將取決於許多因素，諸如組合物的抗微生物性質的強度和組合物的其它傷口癒合性質，取決於傷口的大小以及待治療的受試者的年齡和狀況。然而，對於許多應用，預期施用2-100g，或5-100g本發明的組合物將是合適的，優選10-50g。根據本發明的優選實施方案，本發明的組合物是無菌的。無菌組合物優選用於醫療應用，諸如傷口癒合。本發明的組合物可通過任何合適的方法滅菌。本申請人已經發現，在通過暴露於γ輻照滅菌後，本發明的組合物保持葡萄糖氧化酶活性(並因此保持稀釋時釋放過氧化氫的能力)。因此，根據本發明，提供了已通過暴露於γ輻照而被滅菌的本發明的組合物。根據本發明還提供了對本發明的組合物滅菌的方法，其包括將組合物暴露於γ輻照。合適的γ輻照水平為10-70kGy，優選25-70kGy，更優選35-70kGy。由於臭氧沒有被美國FDA批准用於對用於傷口癒合的基於蜂蜜的產品的滅菌，本發明的組合物優選一直未通過臭氧化滅菌，並且不包括臭氧或已通過臭氧化進行滅菌的任何組分。具體地，本發明的組合物不應包含臭氧化蜂蜜或臭氧化油。用於醫療用途的本發明的優選組合物是無菌的單次使用的組合物。在避光儲存的本發明的經滅菌的組合物預期保持穩定至少6個月。例如，可將此類組合物包裝在高密度聚乙烯/低密度聚乙烯(HDPE/LDPE)管或聚酯-鋁-聚乙烯(PET/AI/PE)小袋中。本發明的組合物優選是醫療級或醫療裝置級組合物。優選地，未精製的天然物質是蜂蜜，合適地是醫療級或醫療裝置級蜂蜜。優選地，本發明的組合物包含乳酪型蜂蜜，更優選未巴氏滅菌的乳酪型蜂蜜。可容易地局部施用此類組合物，因為已通過乳化法使大晶體的存在或數量減少至最少。對於包含蜂蜜的本發明的組合物，應當理解的是，如果組合物被滅菌，則可以不需要在組合物中使用巴氏滅菌的蜂蜜。可替代地優選使用未巴氏滅菌的蜂蜜(優選乳酪型蜂蜜)或其它未精製的天然物質。在特別優選的實施方案中，本發明的組合物包含未巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶。因此，根據本發明，提供了用於生成抗微生物活性的儲存穩定的組合物，其包含未經巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶，所述葡萄糖氧化酶在足夠的游離水存在下能夠轉化蜂蜜中的D-葡萄糖以釋放過氧化氫，其中所述組合物不包括足以允許葡萄糖氧化酶轉化D-葡萄糖的游離水。根據本發明，還提供了一種產生用於生成抗微生物活性的儲存穩定的組合物的方法，其包括：將未經巴氏滅菌的蜂蜜與純化的葡萄糖氧化酶接觸，所述純化的葡萄糖氧化酶在足夠的游離水的存在下能夠轉化蜂蜜中的D-葡萄糖以釋放過氧化氫，其中所述組合物不包括足以允許葡萄糖氧化酶轉化D-葡萄糖的游離水。此類組合物優選包含每克組合物至少1個單位，優選至多1500個單位的葡萄糖氧化酶。合適地，此類組合物包含每克組合物多於15個單位的葡萄糖氧化酶，例如每克組合物至少100個單位，優選100-500個單位的葡萄糖氧化酶，或每克組合物至少500個單位，優選500-1000個單位的葡萄糖氧化酶。此類組合物的蜂蜜可包含未經巴氏滅菌的乳酪型蜂蜜。還根據本發明，提供了包含本發明的組合物以及藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。根據本發明的某些優選方面，提供了包含本發明的組合物的敷料。合適的敷料包括紗布、繃帶、薄紗、薄膜、凝膠、泡沫、水膠體、藻酸鹽、水凝膠或多糖糊劑、顆粒或珠。本發明的組合物可以與傷口敷料基質諸如膠原或膠原-糖胺聚糖基質一起存在。本發明的組合物可呈固體或半固體製劑的形式。固體或半固體製劑的實例包括膠囊劑、丹劑、凝膠帽、粉劑、水凝膠、丸劑、小丸劑或小球劑。或者，本發明的組合物可呈液體製劑的形式。液體製劑的實例包括糖漿劑、糊劑、噴霧劑、滴劑、軟膏劑、乳膏劑、洗劑、油劑、搽劑或凝膠劑。典型的凝膠包括醇凝膠，諸如異丙醇、乙醇或丙醇凝膠，或水凝膠。本發明的組合物可呈適於向人或動物受試者施用的形式。合適的形式包括適於局部或口服施用的形式。適於局部施用的形式包括局部軟膏、乳膏、洗劑、油劑、搽劑、液體、凝膠或可溶性條帶。適於口服施用的形式包括膠囊劑、丹劑、凝膠帽、丸劑、小丸劑、小球劑、錠劑、牙線、牙膏、漱口劑、可溶性薄膜條。如果使用本發明的儲存穩定的組合物，則該組合物可被存在於施用部位的液體(例如，通過用於口服給藥的唾液，或通過來自傷口的滲出液)稀釋，從而導致過氧化氫在所述施用部位的釋放。本發明的組合物可以與至少一種合適的抗微生物或免疫刺激性組分、賦形劑或佐劑，或其中期望提供生成抗微生物活性的能力的任何其它合適的組分一起存在。例如，本發明的組合物可以與抗菌劑、咳嗽藥、祛斑護理製劑、保溼劑、瘙癢緩解製劑、清潔劑、擦洗劑、洗滌劑、阻擋製劑、剝脫製劑一起存在。然而，優選地，本發明的組合物不包括任何抗生素。本發明的組合物可呈適於控釋或緩釋遞送的形式。例如，口服施用形式可具有腸溶衣以提供控釋或持續釋放遞送。根據本發明的另一方面，本發明的組合物可呈用作化妝品組合物的形式。本發明的組合物可以與至少一種合適的化妝品賦形劑或佐劑一起存在。化妝品應用涵蓋許多不同的個人護理應用，包括頭髮病況諸如頭皮屑的治療，或身體氣味的治療。本發明的組合物可以以預防性手部防護溶液或手部消毒劑溶液的形式提供。此類手防護溶液可以以乳膏、洗劑或水凝膠的形式提供，並且用作具有預防性防止微生物感染的有利性質的洗手型產品。有利地，本發明的組合物可用於治療或預防MRSA或其它抗生素抗性微生物和細菌。本發明以非毒性方式克服了新出現的抗生素抗性微生物菌株的問題。對於本申請，本發明的組合物可以局部施用，例如作為局部軟膏、乳膏、洗劑、油劑、搽劑、液體和/或凝膠。本發明的組合物可以作為組織或皮膚擦拭物的一部分施用。微生物感染可以是口腔、眼睛、耳朵、皮膚、胸部或指甲感染。口腔感染可以是牙齦疾病、口腔潰爛和/或口腔衛生病症。口腔衛生病症可以是口臭和/或牙齦炎。或者，口腔感染可以是咽喉感染或鼻感染，包括鼻葡萄球菌感染。眼睛感染可包括結膜炎。皮膚感染可以是真菌皮膚感染。真菌皮膚感染包括人的足癬和/或皮癬。在獸醫學中，真菌皮膚病況包括腐蹄病、皮癬和人畜共患皮膚感染的控制。指甲感染可以是真菌指甲感染，諸如甲真菌病。本發明的組合物可用於治療皮膚病症，諸如痤瘡、溼疹或銀屑病。痤瘡和溼疹可具有可通過組合物治療的微生物感染組分，並且由刮擦引起的銀屑病損傷的繼發性微生物感染可通過本發明的組合物治療。本發明的組合物可用於獸醫學。重要的獸醫應用包括微生物感染的治療和傷口護理的治療或管理或燒傷治療。具體病症包括狗中的慢性皮膚感染(皮下葡萄球菌感染)、外耳炎(耳部感染)、動物口腔護理、雞彎曲桿菌感染、豬、家禽和牛的脊椎側凸、腸道微生物感染、隱孢子蟲感染、人畜共患感染、傷口敷料的清除，例如去除角和膿腫治療。本發明在獸醫用途中具有特別的優點，因為其允許治療微生物感染而不將抗生素引入食物鏈。本發明的組合物可以以具對於其期望提供生成抗微生物活性的能力的任何其它組合物或產品提供。本發明的組合物可以作為與其它組合物或產品的混合物提供，或與其分開地提供，例如將其與另外的組合物或產品一起作為試劑盒包裝。當本發明的組合物作為與另外的組合物或產品的混合物提供時，優選地該另外的組合物或產品不包括足以允許酶轉化本發明組合物的底物的游離水。可為本發明的組合物提供使用該組合物的說明書。例如，可將本發明的組合物與說明書一起作為試劑盒包裝。根據本發明，提供了用於預防、治療或緩解微生物感染或用於治療傷口的試劑盒，其包含本發明的組合物或溶液，以及用於施用所述組合物或溶液的說明書。根據本發明，還提供了用於預防或抑制微生物生長的方法，其包括將本發明的組合物或溶液施加於需要預防或抑制微生物生長的表面或區域。本發明的組合物或溶液可特別地用於預防或抑制植物或昆蟲病原體的生長。例如，本發明的組合物或溶液可以特別適合於延長可食用產品(諸如水果或蔬菜)或其它產品(諸如高價值植物材料，包括鱗莖，尤其是百合鱗莖，或花)的保質期，通過防止或抑制否則會損害產品的微生物生長。利用本發明的組合物或溶液(特別是當所述組合物或溶液僅含有天然成分時)進行的可食用產品或其它產品的處理可優選使用農藥或藥物產品。根據優選實施方案，本發明的組合物或溶液可用於預防或抑制歐文氏菌屬(Erwinia)的生長。歐文氏菌屬是主要包含植物病原性菌種的腸桿菌科(Enterobacteriaceae)的屬。這些菌種產生水解植物細胞之間的果膠，導致細胞分離(稱為「植物腐爛」的疾病)的酶。該屬的熟知成員是梨火疫歐文氏菌(E.amylovora)，其在蘋果、梨和其它紅豆杉作物上引起火疫。胡蘿蔔軟腐歐文氏菌(Erwiniacarotovora)(也稱為胡蘿蔔軟腐果膠桿菌(Pectobacteriumcarotovorum))是另一菌種，其具有廣泛的宿主範圍，包括胡蘿蔔、馬鈴薯、番茄、綠葉蔬菜、南瓜和其它葫蘆、洋蔥、青椒。該種能夠在其侵入的幾乎任何植物組織中引起疾病。其是儲存的水果和蔬菜的腐爛的常見原因，因此是非常重要的病原體。由胡蘿蔔軟腐歐文氏菌引起的腐爛通常被稱為細菌軟腐病(BSR)。歐文氏菌屬感染是馬鈴薯儲存的特殊問題。如果歐文氏菌屬萌發，並且引起馬鈴薯中心的黑腐敗，則可能發生顯著的損失。該問題目前用藥品控制。根據本發明的優選實施方案，本發明的組合物或溶液可用於預防或抑制由歐文氏菌屬感染引起的馬鈴薯的腐爛。僅含有天然成分的本發明的組合物或溶液的使用是特別優選的。根據本發明的另一方面，本發明的組合物或溶液可用於預防或抑制昆蟲病原體的生長，特別是蜂中微粒子蟲屬(Nosema)的生長。微粒子蟲屬是最普遍的成年蜜蜂疾病。其由存在於兩個階段-長壽孢子和複製營養階段中的單細胞微孢子蟲寄生蟲引起。如果成年蜜蜂攝取孢子，那麼它們會開始發育成營養階段，其滲入內襯蜜蜂腸道的細胞。存在感染蜜蜂的兩個描述的種：蜂小孢子蟲(Nosemaapis)和東方蜜蜂微孢子蟲(Nosemaceranae)。蜂小孢子蟲縮短感染的蜜蜂的壽命。東方蜜蜂微孢子蟲已從其亞洲宿主跨越物種屏障，並且已被發現比蜂小孢子蟲更具毒力。感染的覓食蜂從蜂巢中消失，該持續的蜜蜂丟失減少了帶入蜂巢的食物，直到菌落崩潰。用抗生素煙麴黴素雙環已胺鹽(從煙麴黴菌(Aspergillusfumigatus)製備的，石仔病的致病因子)處理微粒子蟲屬抑制中腸中孢子的繁殖，但不殺死孢子。該抗生素也非常昂貴，並且必須在淡季使用，以使其將汙染市售蜂蜜並進入人食物鏈的風險最小化。我們已經發現本發明的組合物能夠殺死微粒子蟲屬的孢子和營養階段。根據本發明，提供了用於預防或治療蜂中的微粒子病的方法，其包括向蜜蜂施用本發明的組合物或溶液。優選地，將呈粉末形式的本發明的儲存穩定的組合物用水稀釋並施加於蜂箱。可以例如通過在與呈粉末形式的葡萄糖氧化酶接觸之前對蜂蜜進行幹法巴氏滅菌來產生呈粉末形式的本發明的儲存穩定的組合物。現通過舉例的方式，參考附圖描述本發明的優選實施方案，其中：圖1顯示具有不同量的添加的葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜的抗微生物作用的孔擴散測定的結果；圖2顯示與不同酚標準物的作用相比較具有不同量的酶的本發明組合物的抗微生物作用的孔擴散測定的結果；圖3顯示具有添加的葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌的Tineo蜂蜜的抗微生物作用的孔擴散測定的結果的照片；圖4顯示本發明的不同組合物的抗微生物作用的孔擴散測定的結果；圖5顯示了包括不同酶製劑的本發明的組合物的抗微生物作用的孔擴散測定的結果；圖6顯示在儲存60天或90天後來自本發明的組合物的抗微生物作用的孔擴散測定的結果；圖7顯示來自本發明的組合物的粉末製劑的抗微生物作用的孔擴散測定的結果；圖8顯示在本發明的組合物存在和不存在的情況下不同產品的抗微生物作用的孔擴散測定的結果；圖9顯示在本發明的組合物存在和不存在的情況下不同產品的抗微生物作用的孔擴散測定的結果；圖10顯示與麥盧卡UMF25+蜂蜜相比，本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物的抗菌作用的孔擴散測定的結果；圖11顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物處理感染的腳趾的作用；圖12顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腳趾潰瘍的作用；圖13顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腳趾潰瘍的作用；圖14顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖15顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖16顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖17顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖18顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療創傷性腿部傷口的作用；圖19顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療感染的腿部傷口的作用；圖20顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖21顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖22顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖23顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖24顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖25顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖26顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖27顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖28顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖29顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖30顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療並發有基礎性骨髓炎的糖尿病性腿部潰瘍的作用；圖31顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療壓力性潰瘍的作用；圖32顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療感染的腋窩切口的作用；圖33顯示使用本發明的滅菌的基於蜂蜜的組合物治療導管入口點周圍的感染的作用；圖34顯示Surgihoney1(S1)、Surgihoney3(S3)和Medihoney(MH)對於不同測試生物體的時間殺滅曲線：(a)金黃色葡萄球菌；(b)甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)；(c)大腸桿菌；(d)抗萬古黴素腸球菌(VRE)；(e)銅綠假單胞菌；(f)克雷伯菌屬(Klebsiella)；(g)大腸桿菌ESBL；(h)糞腸球菌；圖35顯示測試S1和S2Surgihoney的抗病毒活性的噬斑測定的結果；圖36顯示使用S1Surgihoney治療感染的腿部潰瘍的結果的照片，其中：(a)顯示治療的第1天；(b)顯示治療的第4天；以及(c)顯示治療的第7天；圖37顯示使用S1Surgihoney治療壓瘡的結果的照片，其中：(a)顯示治療的第1天；以及(b)顯示治療的第30天；圖38顯示Surgihoney(SH)和兩種修飾的原型PT1和PT2的不同過氧化氫產生速率；以及圖39顯示了經修飾的蜂蜜、SH、PT1和PT2中的酚活性與最大過氧化氫活性之間的關係。實施例1本實施例描述了用於產生本發明的儲存穩定的組合物，以及稀釋儲存穩定的組合物以釋放過氧化氫的優選方法。「活化的」蜂蜜的製造方法使用熱交換器將蜂蜜加熱2分鐘至80℃(如果需要，可使用更低的溫度，合適地至少60℃，只要這足以滅活過氧化氫酶)。該加熱過程的目的是對蜂蜜進行巴氏滅菌，降低其粘度，以使得其可被過濾以除去可能在收穫後存在於蜂蜜中的任何蠟顆粒和蜂翼，並且使蜂蜜中的可影響過氧化氫的高效產生的任何過氧化氫酶失活。然後將巴氏滅菌的蜂蜜過濾，並使其自然冷卻至正常蜂箱溫度(35-40℃)。然後以低水平(相當於蜂蜜中通常發現的水平)添加葡萄糖氧化酶以替代在蜂蜜中天然發現的但已通過巴氏滅菌方法失活的葡萄糖氧化酶。過濾的巴氏滅菌的蜂蜜在35-40℃下具有相當大的流動性，因此可容易地將其與葡萄糖氧化酶混合。然而，不明白為什麼不能在室溫下進行混合。然後將所得的「活化的」蜂蜜在環境溫度下儲存。除了失活的葡萄糖氧化酶的替代之外，沒有對天然蜂蜜的組成進行修飾。在「活化的」蜂蜜中沒有可檢測的過氧化氫。「活化的」蜂蜜的稀釋在「活化的」蜂蜜稀釋後，過氧化氫在一段時間後釋放，因為游離水變得可用並且葡萄糖氧化酶開始轉化存在於蜂蜜中的葡萄糖。過氧化氫水平低於2mmol/升，但釋放較長時間。實施例2該實施例描述了證明活化的Ulmo蜂蜜的抗微生物作用的測試結果。如果蜂蜜含有添加的葡萄糖氧化酶，則被描述為「活化的」。孔擴散測定將金黃色葡萄球菌(NCIMB9518)在營養瓊脂或營養肉湯中生長。通過在瓊脂平板的表面上擦拭過夜培養物，用培養物接種抗生素擴散瓊脂平板。將板在室溫下靜置15分鐘。在瓊脂的表面上鑽7mm直徑的孔。將200微升樣品(酚標準物或蜂蜜)置於每個孔中。將板孵育16小時，使用指盤式卡尺(+/-0.1mm)測量抑制區。記錄區的直徑，包括孔的直徑。通過以所需濃度在純化水中稀釋酚來製備酚標準物。例如，通過將1g酚稀釋在9g純化水中製備10％的酚標準物。將標準物在30℃下儲存並在使用前搖動。蜂蜜蜂蜜：巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜。使用未活化的蜂蜜(即未添加葡萄糖氧化酶的蜂蜜)作為對照。酶的製備葡萄糖氧化酶：由BiozymeUK提供的來自GMO黑麴黴菌的醫療裝置級材料(非食品級)，活性240iu/mg。最初使用0.5％w/w的酶，但可將其降低至0.005％w/w的酶以達到20％的酚標準當量。過氧化氫的檢測來自Merckoquant的過氧化物測試：目錄號1.10011.0002，測量範圍/顏色-標度刻度mg/lH2O20.5-2-5-10–25。在水溶液中的方法測定：將蜂蜜以50/50w/w溶於水中。將測試條的反應區浸入測量樣品(15-30℃)持續1秒。允許過量的液體通過條的長邊徑流至吸收性紙巾上，並在15秒(目錄號110011)或5秒(目錄號110081)後確定反應區的顏色與標籤上的哪個顏色區域最完全一致。讀取以mg/lH2O2表示的相應結果，或者如果需要，估計中間值。為了確定蜂蜜中沒有內源性過氧化氫可用，將蜂蜜以50/50w/w溶於甲醇。在有機溶劑(易揮發醚)中的測定：將測試條的反應區浸沒在測量樣品(15-30℃)中持續1秒。在溶劑蒸發(輕輕地來回扇動條帶3-30秒)之後，將反應區域浸入蒸餾水中持續1秒，並允許過量的液體通過條帶的長邊緣徑流至吸收性紙巾上或在反應區上輕輕地吹四次，每次3-5秒。在15秒(目錄號110011)或5秒(目錄號110081)後確定反應區的顏色與標籤上的哪個顏色區域最完全一致。讀取以mg/lH2O2表示的相應結果，或者如果需要，估計中間值。結果圖1a顯示來自孔擴散測定的結果，在所述測定中將含有巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜、已添加了不同量的葡萄糖氧化酶製劑(0.1％w/w、0.01％w/w、0.01％w/w、0.0015％w/w或0.0001％w/w)的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜或麥盧卡UMF25+蜂蜜的樣品添加至接種有金黃色葡萄球菌的瓊脂平板的孔中。結果顯示對於每個樣品記錄的抑制區的直徑。含有至少0.001％w/w葡萄糖氧化酶(240iu/mg)的活化的蜂蜜對金黃色葡萄球菌的抗微生物作用等同於麥盧卡25+蜂蜜的抗微生物作用。活化的蜂蜜的作用是殺菌的。圖1b顯示了來自孔擴散測定的結果，在所述孔擴散測定中將含有添加了0.5％w/w的葡萄糖氧化酶製劑的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜的樣品與MGO麥盧卡蜂蜜、麥盧卡25+蜂蜜的樣品以及一系列不同的酚標準物(10％-40％)相比較。結果顯示每個樣品的抑制區的面積。結果表明，活化的Ulmo蜂蜜的作用相當於30％的酚標準物，並且作用為MGO麥盧卡蜂蜜的兩倍以上，以及幾乎為麥盧卡UMF25+蜂蜜的兩倍。圖2表明活化的蜂蜜的效力可通過添加適量的酶來適應要求。實施例3該實施例描述了證實活化的Tineo蜂蜜的抗微生物作用的測試結果。如果蜂蜜含有添加的葡萄糖氧化酶，則被描述為「活化的」。使用TINEO蜂蜜和不同酚標準物的樣品進行如實施例2中所述的孔擴散測定。圖3a是顯示由不同樣品引起的金黃色葡萄球菌抑制區域的一式兩份瓊脂平板的照片。該圖包括顯示瓊脂板的孔中的樣品的布局的圖示：1.10％的酚標準物2.20％的酚標準物3.30％的酚標準物4.TINEO蜂蜜(未添加葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌TINEO蜂蜜)5.TINEODeact(巴氏滅菌的TINEO蜂蜜，進一步熱滅活)6.麥盧卡UMF25+7.TINEO20+(添加有葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌的TINEO蜂蜜，0.005％Biozyme酶)圖3a顯示TINEO蜂蜜單獨或TINEO失活的蜂蜜都不會引起金黃色葡萄球菌生長的抑制。添加葡萄糖氧化酶的TINEO蜂蜜(TINEO20+)的作用大於麥盧卡UMF25+的作用，並相當於30％的酚標準物。圖3b是顯示由不同樣品引起的金黃色葡萄球菌的抑制區的瓊脂平板的照片，其排列如下6.TINEO活性蜂蜜40+(0.05％酶w/w)7.麥盧卡蜂蜜UMF25+圖3b顯示TINEO活性蜂蜜25+和40+樣品在抑制金黃色葡萄球菌的生長上比麥盧卡蜂蜜25+樣品更有效。實施例4本實施例描述了證實活化的Ulmo和Tineo蜂蜜的抗微生物作用的測試結果。圖4a顯示來自如實施例2所述進行的測量24小時孵育後金黃色葡萄球菌生長的抑制區的孔擴散測定的三個重複的結果。去離子水中酚的濃度範圍為40-10％的樣品和2種類型的麥盧卡(麥盧卡UMF25+，麥盧卡550MGO)的樣品和具有0.01％w/wBiozyme葡萄糖氧化酶的活化的Ulmo蜂蜜(如實施例2)的樣品。圖4b顯示了來自另一孔擴散測定的結果。將葡萄糖氧化酶(如實施例2中所述的Biozyme製劑)添加至巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜(0.005％酶w/w)中，並在40℃下儲存24或72小時。然後如實施例2所述，在孔擴散測定中測試來自儲存的活化的蜂蜜的樣品的抗金黃色葡萄球菌的活性，並與4％至25％的一系列酚標準物進行比較。圖4b顯示活化的蜂蜜在40℃下儲存72小時時是穩定的，並且活化的蜂蜜在其抗金黃色葡萄球菌的有效性方面相當於20％的酚標準物。圖4c顯示了來自另一孔擴散測定的結果，在所述測定中新批和舊批(舊批在新批之前約四個月被接收)的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜(如實施例2中所述的Biozyme製劑，0.5％w/w)和具有遞增量的葡萄糖氧化酶的Tineo蜂蜜(如實施例2中所述的Biozyme製劑，0.0005-0.5％w/w)與麥盧卡18+和25+UMF蜂蜜以及10-40％的一系列酚標準物進行比較。在圖4c中，「正常」是指如所接受的巴氏滅菌的蜂蜜，「Deact」是指已被進一步熱失活的巴氏滅菌的蜂蜜，「React」是指在添加葡萄糖氧化酶之前已被進一步熱失活的巴氏滅菌的蜂蜜。因此，在無(「Ulmo舊4正常」、「Ulmo新X」和「Ulmo新Y」)和具有添加的葡萄糖氧化酶的情況下測試Ulmo蜂蜜。圖4c顯示金黃色葡萄球菌的抑制區的面積。可以看出，舊批的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜(「Ulmo舊4React」)保持與新的巴氏滅菌的批次(「Ulmo新XReact」和「Ulmo新YReact」)相等的活性。所有這些批次顯示約為麥盧卡蜂蜜18+兩倍的活性，以及比麥盧卡蜂蜜25+更高的活性。向巴氏滅菌的Tineo蜂蜜中添加遞增量的葡萄糖氧化酶增加了蜂蜜的活性。在該測試中，0.005％w/w的酶大約相當於10％的酚標準物，0.05％w/w的酶大約相當於15％的酚標準物，0.5％w/w的酶大約相當於25％酚標準。麥盧卡18+蜂蜜相當於10％酚標準，麥盧卡25+蜂蜜顯示介於10％與15％酚標準之間的活性。實施例5在本實施例中，用巴氏滅菌的Tineo蜂蜜測試不同葡萄糖氧化酶製劑的作用。所用的酶製劑是如實施例2中所述的Biozyme製劑和來自ANHUIMINMETALSDEVELOPMENTI/ECO.,LTD的食品級非GMO來源的葡萄糖氧化酶(下文中稱為「Anhui」酶製劑)。圖5a顯示如實施例2中所述進行的孔擴散測定的結果，在所述測定中將不含酶或含0.005-0.05％w/w的Anhui酶的巴氏滅菌的Tineo蜂蜜的樣品與不同的酚標準物(10％、20％、30％)和麥盧卡蜂蜜UMF25+的樣品相比較。結果表明，增加酶的量增加了活化的蜂蜜抗金黃色葡萄球菌的有效性。0.0125％w/w的酶大約相當於20％的酚標準物和麥盧卡蜂蜜樣品，0.05％w/w的酶大約相當於30％的酚標準物。圖5b顯示如實施例2中所述進行的孔擴散測定的結果，在所述測定中將不同量的酶添加至商業批次的巴氏滅菌的Tineo蜂蜜的樣品中。「Tineo」樣品是沒有添加葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌的蜂蜜。「TineoDeact」樣品是已被進一步熱處理的巴氏滅菌並且不含添加的葡萄糖氧化酶的蜂蜜。「Tineo20+」樣品含有0.005％w/w的Biozyme葡萄糖氧化酶。結果表明，Tineo樣品沒有抗金黃色葡萄球菌的活性。Tineo20+樣品比麥盧卡25+更有效地抗金黃色葡萄球菌，並且介於20％的酚標準物與30％的酚標準物之間。實施例6本實施例描述了儲存60天或90天的活化的蜂蜜的穩定性的測試結果。將如實施例2所述的來自Biozyme的葡萄糖氧化酶以0.005％w/w添加至巴氏滅菌的Ulmo或Tineo蜂蜜中，將所得混合物在37℃下儲存兩個月(Ulmo蜂蜜樣品)或在室溫下儲存90天(Tineo蜂蜜樣品)。所使用的酶的量對應於將用於商業食品的量。儲存後，在如實施例2所述進行的針對金黃色葡萄球菌的孔擴散測定中測試樣品。將儲存的樣品與10％、20％和30％的酚標準物進行比較。圖6a顯示Ulmo蜂蜜樣品的結果，圖6b顯示了Tineo蜂蜜樣品的結果。對於任一類型的蜂蜜，在儲存期間沒有明顯的活性損失。實施例7本實施例描述了粉狀活化的蜂蜜的抗微生物活性的測試結果，在所述測試中將呈粉末形式的葡萄糖氧化酶添加至粉狀蜂蜜中。粉狀蜂蜜獲自ADMSpecialtyIngredients的HoniBake。將0.1％w/w的Biozyme葡萄糖氧化酶(如實施例2中所述的)添加至粉狀蜂蜜中。如實施例2所述，在針對金黃色葡萄球菌的孔擴散測定中測試混合物的抗微生物活性。將混合物添加至瓊脂平板的兩個不同孔中。對照僅與蜂蜜粉末一起使用。結果示於圖7a中。對照孔顯示無活性，但活化的蜂蜜顯示出清楚的抑制區。圖7b顯示另一個孔擴散測定的結果，在所述測定中將不同的粉狀蜂蜜與來自ANHUIMINMETALSDEVELOPMENTI/ECO.,LTD的粉狀酶混合(實施例5)。樣品孔24a僅為蜂蜜粉末，而樣品孔24b為與1％w/w的酶混合的蜂蜜粉末。再次地，可以看到清楚的抑制區。實施例8本實施例顯示各種不同產品本身以及當與活化的蜂蜜(即添加了葡萄糖氧化酶的蜂蜜)混合時的抗微生物活性的測試結果。在如實施例2所述進行的孔擴散測定中測試抗金黃色葡萄球菌的抗微生物活性。測試的不同樣品列於下表2中，結果的照片示於圖8中。表2結果清楚地顯示當與活化的蜂蜜混合時產品的增強的抗微生物效力。實施例9本實施例顯示各種不同產品本身以及當與活化的蜂蜜(即，添加了葡萄糖氧化酶的蜂蜜)混合時的抗微生物活性的進一步測試的結果。在如實施例2所述進行的孔擴散測定中測試抗金黃色葡萄球菌的抗微生物活性。測試的不同樣品列於下面，結果的照片示於圖9中。7.Ulmo活性蜂蜜20+。圖9b：6.麥盧卡蜂蜜25+7.Ulmo活性蜂蜜20+結果清楚地顯示當與活化的蜂蜜混合時產品的增強的抗微生物效力。實施例10本實施例描述了包含未巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶的本發明的組合物的滅菌。以11.6-14.2kGy的目標劑量(劑量為13.1-13.6kGy，如通過劑量計測定的)對10個各自含有50g組合物的密封小袋進行γ輻照，隨後單獨測試無菌度。對於無菌度測試，所有的工作在層流下於潔淨室中進行。將10g的所述組合物添加至100ml無菌胰蛋白腖大豆肉湯(TSB：酪蛋白的胰酶消化物，17g/L，大豆豆粕的木瓜酶消化物，3g/L，氯化鈉，5g/L，磷酸氫二鉀，2.5g/L，葡萄糖2.5g/L，pH7.3±0.2)並搖動混合，然後轉移至無菌容器中。再添加100ml的TSB以除去任何樣品殘餘物，並將其添加至同一容器中。將TSB添加至樣品中並在30℃±2℃下孵育最少14天，並檢查微生物生長的跡象。在測試開始前對所有培養基進行陽性對照。在完全孵育期後注意到一個陽性結果。35kGy作為滅菌劑量的證實被接受。使用類似於實施例2中所述的測定的孔擴散測定對通過γ輻照滅菌之前和之後的小袋的測試證實：輻照對組合物的抗微生物活性的影響可忽略。滅菌後活性水平沒有可觀察到的降低。實施例11本實施例描述了與麥盧卡UMF25+蜂蜜和熱滅活的蜂蜜(非活性蜂蜜)相比，已經使用γ輻照滅菌的本發明的組合物的抗微生物作用的測試結果，所述組合物包含未巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶(稱為「Surgihoney」)。使用麥盧卡蜂蜜UMF25+、非活性蜂蜜和Surgihoney的樣品進行如實施例2中所述的孔擴散測定。圖10(a)是顯示由不同樣品引起的金黃色葡萄球菌(ATCC9518)的抑制區的瓊脂平板的照片。麥盧卡蜂蜜UMF25+在圖中的頂行，非活性蜂蜜在中間行，而Surgihoney在底行。圖10(b)顯示用麥盧卡UMF25+蜂蜜(頂行)處理的平板和用Surgihoney(底行)處理的平板。結果清楚地表明，Surgihoney在滅菌後保留抗金黃色葡萄球菌的顯著的抗微生物活性，並且Surgihoney在抗金黃色葡萄球菌方面比麥盧卡蜂蜜UMF25+更有效。實施例12已經使用γ輻照(以最小劑量35kGy)滅菌的包含未巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶的本發明組合物的穩定性測試。加速老化技術基於以下假設：涉及材料劣化的化學反應遵循Arrhenius反應速率函數。該函數闡明均勻過程的溫度的10℃增加或降低導致化學反應速率的約兩倍或1/2時間的變化。例如，在55℃下，5.3周相當於貨架上的1年，在55℃下，兩年相當於10.6周，五年將相當於26.5周。將來自兩個不同生產批次的產品用於本研究。產品是包含10g組合物的小袋。已以最小劑量35kGy進行γ輻照對小袋滅菌。將樣品在加速老化條件下於55℃(±2℃)儲存。實時與加速老化之間的關係如下：表3測試、測試間隔和所需樣品以相同的時間間隔測試來自每批的樣品。下表總結了所進行的測試，以及每個批次每個時間點所需的樣品總數。*對於充滿的小袋重量測試使用相同的樣品**使用五個樣品進行壓力試驗表4測試方法充滿的小袋重量：空小袋的平均皮重為1.7g。將10個小袋在校準的實驗室天平上單獨稱重，扣除皮重，記錄結果。壓力測試：根據標準操作程序在壓力測試試驗臺上測試每個小袋。記錄通過次數和失敗次數。蜂蜜的pH：將五個小袋的內容物合併至玻璃燒杯中。使用三種標準溶液校準HannapH計，然後在去離子水中漂洗電極。將pH電極和溫度探針浸入蜂蜜樣品中，從數字顯示器讀取pH值和溫度，並記錄。水分含量：從每個時間點取5袋蜂蜜。從每個小袋取出約1ml的樣品並放置在折射計的樣品板上(一次一個樣品)。蓋上樣品蓋，用戶通過透鏡觀察，同時將儀器指向諸如窗戶的光源。讀取刻度的值，如陰影線所示的，並記錄結果。顏色：打開一袋蜂蜜，將一些蜂蜜組合物放在白色瓷磚上。將蜂蜜組合物的顏色與HoneyColorChartPfund標度相比較，記錄分數(30-800)。結果充滿的小袋重量-加速老化批次A：表5批次B：表6壓力測試結果-加速老化測試間隔(周)批次A批次B2.610/1010/10表7pH測試結果-加速老化表8水分含量測試結果-加速老化批次A：表9批次B：表10顏色測試結果-加速老化表11下面的實施例13-35描述了使用本發明的組合物治療傷口的結果，所述組合物包含添加了葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜(在實施例中組合物被稱為「Surgihoney」)。該Surgihoney以密封的小袋提供，每個小袋含有10g的組合物。小袋已經使用γ輻照滅菌。從治療的第0天使用小袋。每次敷料更換涉及Surgihoney的新應用。在實施例中記錄的每一天，或者有時更頻繁地更換敷料。將Surgihoney施加於敷料，或直接施加至傷口，然後用敷料覆蓋。在這兩種情況下，將Surgihoney與傷口直接接觸，並用敷料覆蓋。實施例13本實施例描述了使用Surgihoney治療感染的腳趾的結果。結果示於圖11中。患者為78歲的糖尿病男性。左腳上的傷口已在治療開始前一個月發展，並引起輕度疼痛。a)第0天-傷口特徵：傷口：3×2×1cm；99％健康肉芽形成但1％綠色菌落；周圍皮膚脫落；少量黃膿液滲出物產生臭味；b)第5天-傷口特徵：傷口改善；每次施加1小袋蜂蜜進行第二次敷料更換；甲硝唑和阿莫西林；還使用茶樹油；c)第10天-傷口特徵：傷口改善；綠色菌落消失；傷口被清潔，乾燥皮膚被除去，以及再施加一小袋蜂蜜。實施例14本實施例描述了使用Surgihoney治療腳趾潰瘍的結果。結果示於圖12中。患者為在右腳上具有在治療前的一個月長的時期內發展的感染性足趾潰瘍並引起輕度疼痛的61歲糖尿病女性。a)第0天-傷口特徵：傷口：2×2×0.2cm；1％黃褐色脫落物，其餘為肉芽形成的組織；少量黃色滲出物；b)第7天-傷口特徵：傷口改善；對於敷料更換每日施加0.5袋Surgihoney；Flucox；c)第10天-傷口特徵：傷口進一步改善；停用Flucox。實施例15本實施例描述使用Surgihoney治療腳趾潰瘍的結果。結果示於圖13中。患者為在左腳第一和第二腳趾上具有腳趾潰瘍的61歲糖尿病女性。輕度疼痛。a)第0天-傷口特徵：傷口：0.8×0.8×0.2cm；100％肉芽形成的組織；少量漿液性滲出物；b)第7天-傷口特徵：傷口癒合至不再張開的程度；每天半袋蜂蜜；Flucox；c)第10天-傷口特徵：傷口改善；現在乾燥，無脫落物或滲出；停用Flucox。實施例16本實施例描述使用Surgihoney治療足部潰瘍的結果。結果示於圖14中。患者為具有已在治療前一個月發展的足部潰瘍的50歲女性糖尿病患者。報告了脆性皮膚但沒有疼痛。a)第0天-傷口特徵：傷口：1×0.5×0.5cm；1％黃褐色脫落物，其餘為肉芽形成的組織；極低量的黃色滲出物；b)第7天-傷口特徵：傷口改善；乾燥；脫落物由健康肉芽形成的組織代替；尺寸和深度減小；傷口用鹽水清洗，然後施加蜂蜜敷料(0.5小袋)；無抗生素；c)第9天-傷口特徵：傷口大大改善；幾乎封閉，無滲出物；繼續施加敷料，每次0.5小袋。實施例17本實施例描述了使用Surgihoney治療足部潰瘍的結果。結果示於圖15中。該患者為具有已發展一年以上的糖尿病性足部潰瘍的87歲糖尿病男性。周圍皮膚脆弱，但疼痛不明顯。a)第0天-傷口特徵：傷口：1×1.8cm；1％黃褐色脫落物，其餘為肉芽形成的組織；少量黃色漿液性滲出物；b)第3天-傷口特徵：傷口改善；敷料更換施加1個蜂蜜小袋；沒有疼痛的報告；無抗生素；c)第6天-傷口特徵：傷口改善；傷口床現在為100％肉芽形成的組織；進一步施加蜂蜜小袋；在周圍潰瘍的乾性皮膚上使用Diprosalic。實施例18本實施例描述使用Surgihoney治療糖尿病性足部潰瘍的結果。結果示於圖16中。患者是患有由質量差的鞋的刺激引起的糖尿病性足部潰瘍的男性。患者在治療前不到1個月患有潰瘍。a)第0天-傷口特徵：具有輕微疼痛的周圍紅色的皮膚；1％脫落物，99％肉芽形成的組織；感染和糖尿病；小體積的黃色漿液性滲出物；傷口尺寸：2cm×2cm×0.2cm；b)第7天-傷口特徵：在醫院進行評估，但從第1天至現在每天更換敷料。由為訓練有素的護士的兒媳婦按照方案更換敷料。傷口改善；100％健康肉芽形成；健康的周圍皮膚，輕微的疼痛；所用抗生素，氟卡西林500mg，每6小時一次，持續7天；傷口尺寸：1.5cm×1.3cm×0.1。實施例19本實施例描述了使用Surgihoney治療足部潰瘍的結果。結果示於圖17中。患者為患有嚴重且控制不良的糖尿病的55歲男性。患者在截肢後的第三個腳趾部位有一個深部潰瘍。a)第0天-傷口特徵：傷口：3×3×3cm；1％黃褐色脫落物；1％綠色菌落；其餘為肉芽組織；中等體積的黃膿滲出物；b)第1天-傷口特徵：傷口改善；在施加蜂蜜(1小袋)之前，除去所有脫落物；甲硝唑；c)第3天-傷口特徵：傷口改善；進一步施加小袋；患者出院；拭子：+++皮膚菌群；無抗生素。實施例20本實施例描述了使用Surgihoney治療創傷性腿部傷口的結果。結果示於圖18中。患者是在下腿部具有引起中度疼痛的創傷性創傷的95歲女性。a)第0天-傷口特徵：傷口：15×12×1cm；主要是肉芽組織但具有1％的傷口床壞死和黑色；中量的血紅蛋白滲出物(haemoserousexudate)；b)第3天-傷口特徵：傷口是靜態的；無進一步壞死，但傷口幾乎相同；施加1小袋蜂蜜；拭子：腸球菌屬；無抗生素；c)第8天-傷口特徵：傷口改善；滲出物體積減少和壞死組織減少。實施例21本實施例描述了使用Surgihoney治療感染的腿部傷口的結果。結果示於圖19中。患者為具有小腿感染傷口的91歲女性。周圍皮膚脆弱，存在輕度疼痛。a)第0天-傷口特徵：傷口尺寸：4.5×2.5cm；大部分紅色肉芽組織，具有1％黃/褐色脫落物；中等體積黃色漿液性滲出物。b)第15天-傷口特徵：傷口改善；尺寸：4×2cm；存在較少的脫落物和漿液性滲出物；c)第19天-傷口特徵：傷口改善；每個敷料施加Surgihoney。實施例22本實施例描述了使用Surgihoney治療足部潰瘍的結果。結果示於圖20中。患者為在第一、第二、第三和第四腳趾截肢後維持慢性糖尿病性足部潰瘍的53歲女性糖尿病患者。a)第0天-傷口特徵：傷口：6.5×3×0.2cm；肉芽組織，具有少量黃色漿液性滲出物；b)第5天-傷口特徵：傷口尺寸略微改善，但床狀況幾乎保護不變；去除鬆散的肉芽組織；可吸收的敷料施加小袋的蜂蜜；無抗生素；c)第7天-傷口特徵：傷口被健康肉芽組織清潔；每2天更換一次敷料，每次施加蜂蜜的小袋；d)第9天-傷口特徵：傷口改善；尺寸減小，滲出物減少；患者出院。實施例23本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖21中。患者為患有已在治療開始之前一年內發展的並引起輕度疼痛的腿部潰瘍的女性。a)第0天-傷口特徵：健康的周圍皮膚；1％脫落物，99％肉芽形成；中等體積的黃色漿液性滲出物；傷口尺寸：7cm×3cm；b)第7天-傷口特徵：傷口改善和處於社區護理中的患者；施加1小袋Surgihoney；存在減小的尺寸和較少的滲出物；疼痛更可忍受。實施例24本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖22中。患者為具有不良營養狀況和脫水的77歲男性。近平臥式貧血(Anaemia.caprostrate)。患者有已在治療前6-12個月內發展的腿部潰瘍。輕度疼痛。a)第0天-傷口特徵：傷口：20×10×0.5cm；1％黃褐色脫落物，其餘為肉芽組織但有中度滲出物，膿綠色；拭子：+++混合的大腸菌群及假單胞菌屬；抗生素：BenPen,Clinda；b)第4天-傷口特徵：傷口是靜態的；單獨的蜂蜜敷料；BenPen&Clinda；c)第8天-傷口特徵：傷口改善；所有綠色脫落物消失；無抗生素；撲熱息痛。實施例25本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖23中。患者為患有已在6至12個月的時期內發展的腿部潰瘍的91歲女性，她住院了並且具有很多痛苦。a)第0天-傷口特徵：疼痛嚴重，有傷口臭味；感染；10％脫落物，50％定殖綠色，20％蜂窩織炎，20％健康肉芽形成；傷口：15cm×5cm×0.3cm；滲出物：小體積，漿液性和黃色的；b)第11天-傷口特徵：輕度疼痛和傷口大大改善；100％健康肉芽形成；無感染；傷口：10cm×5cm×0.2cm；滲出物：低，血紅蛋白性的，紅色cm；50％傷口尺寸減小。實施例26本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖24中。患者為78歲男性，UTI患者。患者有感染性腿部潰瘍。周圍皮膚被浸軟。傷口引起輕度疼痛。a)第0天-傷口特徵：傷口尺寸：5cm×6cm×0.5cm；98％紅色肉芽，1％黃/褐色脫落物，1％壞死組織；小體積的血紅蛋白滲出物；b)第8天-傷口特徵：傷口改善；每次敷料更換施加1小袋蜂蜜；拭子顯示少量皮膚菌群；無抗生素。實施例27本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖25中。患者為具有不良營養狀況和脫水的82歲女性。患者具有已在治療前3個月內發展的腿部潰瘍。a)第0天-傷口特徵：傷口：3×3×0.5cm；傷口床由健康肉芽組織組成；少量黃色血紅蛋白滲出物；b)第3天-傷口特徵：傷口改善；拭子顯示+++皮膚菌群；敷料施加1小袋蜂蜜；無抗生素；c)第8天-傷口特徵：傷口改善；傷口尺寸減小和滲出物體積減少。實施例28本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖26中。患者為具有低血清白蛋白的83歲的不能行動的男性。患者具有在治療前3個月的時期內發展的，導致中度水平的疼痛的腿部潰瘍。a)第0天-傷口特徵：傷口：20×18×0.5cm；1％黃/褐色脫落物，1％綠色菌落，其餘為肉芽形成的組織；中等體積的綠色漿液性滲出物；輕微的傷口臭味；b)第4天-傷口特徵：傷口改善；已施加2小袋Surgihoney；++拭子上的假單胞菌屬；沒有給予抗生素；c)第8天-傷口特徵：2次單獨的蜂蜜敷料更換後傷口改善；+++假單胞菌屬；大大改善，停用蜂蜜。實施例29本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖27中。患者為具有2型呼吸衰竭和行動性差的74歲男性吸菸者。患者具有已在治療前一周內發展的，引起中度疼痛的膿毒性皮膚撕裂。a)第0天-傷口特徵：傷口：15×20×0.3cm；99％健康肉芽形成，但1％嚴重感染；中等體積的黃色著色的滲出物；拭子顯露出稀少的大腸菌群；抗生素：克林黴素；b)第6天-傷口特徵：2次敷料更換後傷口改善；單獨的蜂蜜敷料；潰瘍現是乾燥的；無來自拭子的生長；克林黴素；c)第9天-傷口特徵：傷口改善；仍然殘留的蜂窩織炎，但潰瘍癒合；在拭子上再一次無生長；Clinda。實施例30本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖28中。患者為在腿和手臂上有嚴重的廣泛潰瘍的81歲男性。患者具有外周血管疾病和不良營養狀況。傷口已在治療前一個月發展。周圍皮膚脫落並引起嚴重疼痛。a)第0天-傷口特徵：傷口：30×28×1cm；1％黃/褐色脫落物，其餘為肉芽形成的組織；大量紅色的血紅蛋白滲出物；拭子顯示+++混合的大腸菌群及假單胞菌屬；b)第6天-傷口特徵：傷口改善；極少的假單胞菌屬；無抗生素，但無痛性疼痛；c)第10天-傷口特徵：傷口改善；+假單胞菌屬仍存在；疼痛不太嚴重。實施例31本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖29中。患者為具有外周血管疾病的67歲男性。腿部潰瘍發展於治療前一周。周圍皮膚脆弱，疼痛適度。a)第0天-傷口特徵：傷口：1×1×0.2cm；1％黃/褐色脫落物，其餘為肉芽形成的組織；傷口中存在少量黃色漿液性滲出物；b)第11天-傷口特徵：在一系列敷料更換後，其中傷口是靜態的，現在顯示改善的跡象；體積較小的滲出物，傷口較小；每次更換施加1×蜂蜜小袋；拭子顯示金黃色葡萄球菌++；c)第18天-傷口特徵：傷口是靜態的；傷口尺寸：3×3×0.2cm；金黃色葡萄球菌++存在。實施例32本實施例描述了使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結果。結果示於圖30中。患者為患有一個月的重度糖尿病性潰瘍的43歲女性。潰瘍並發有基礎性骨髓炎，骨去除(bonedebriefed)和來自跟骨的金屬加工。患者摔破了她的腳，隨後的治療導致骨感染。主治臨床醫生的意見是，很可能對患者的腳進行截肢。a)第0天-傷口特徵：具有40％脫落物，10％定殖的綠色，50％健康肉芽形成的傷口；周圍皮膚健康；中度疼痛；黃色膿液性滲出物介質；傷口9cm×8cm×2com；無抗生素；b)第1天-傷口特徵：傷口是靜態的；拭子：大腸菌群及假單胞菌屬；無抗生素；無鎮痛藥；c)第14天-傷口特徵：傷口改善；使用1小袋Surgihoney；創傷緩慢肉芽形成，大大改善；拭子：少量皮膚菌群。實施例33本實施例描述使用Surgihoney治療壓力性潰瘍的結果。結果示於圖31中。患者為具有不良營養狀況的88歲女性糖尿病患者。患者具有已在治療之前6個月內發展的，引起中度水平的疼痛的具有脆弱周圍皮膚的壓力性潰瘍(3級)。a)第0天-傷口特徵：傷口尺寸：0.7×0.7×0.2cm；1％黃/褐色脫落物，1％；其餘部分為肉芽的脂肪組織；小體積的黃色膿存在；b)第3天-傷口特徵：傷口癒合(閉合)；施加1小袋Surgihoney。實施例34本實施例描述使用Surgihoney治療感染的腋窩切口的結果。結果示於圖32中。患者為在臂下有感染的傷口的21歲女性。周圍皮膚紅色，輕度疼痛。a)第0天-傷口特徵：1％蜂窩織炎，99％肉芽形成；小體積的具有黃色膿的滲出物；傷口尺寸：5cm×5cm；b)第24天-傷口特徵：傷口改善；在度假期間使用蜂蜜超過2周；無抗生素。實施例35本實施例描述了使用Surgihoney治療導管的入口點周圍的感染的結果。結果示於圖33中。患者是41歲女性癌症患者。患者在導管進入點周圍的乳房區域具有感染。在治療前不到1周出現傷口，其引起輕度疼痛。a)第0天-傷口特徵：傷口：2cm×2cm；1％蜂窩織炎，其餘為肉芽形成的組織；小體積的紅色漿液性滲出物；b)第6天-傷口特徵：傷口大大改善；無滲出物；施加1小袋surgihoney；獲取拭子，但無生長；無抗生素；c)第14天-傷口特徵：傷口改善至不再是問題的程度。實施例36SurgihoneySurgihoney是添加了純化的葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜。製備具有不同的抗微生物能力的3種不同的Surgihoney製劑：S1Surgihoney：具有0.1％(w/w)添加的葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜。所用的酶是來自BIO-CAT,INC的活性為15,000個單位/g的來自黑麴黴菌的食品級葡萄糖氧化酶。以11/6-14.2kGy的目標劑量對含有50g的S1Surgihoney的密封小袋進行γ輻照。S2Surgihoney：具有0.1％(w/w)添加的葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜。所用的酶是來自BBIEnzymesLimited的活性為274個單位/mg的來自黑麴黴菌的葡萄糖氧化酶(GO3B2)。單位定義：在25℃，pH7.0下每分鐘引起1微摩爾葡萄糖氧化的酶量。汙染物：α-澱粉酶不超過0.05％，蔗糖酶不超過0.05％，麥芽糖酶不超過0.05％，以及GO/Cat不超過2000。S3Surgihoney：具有0.25％(w/w)添加的葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜。所用的酶是來自BBIEnzymesLimited的活性為274個單位/mg的葡萄糖氧化酶(GO3B2)。因此，S1Surgihoney含有每克組合物15個單位的葡萄糖氧化酶，S2Surgihoney含有每克組合物274個單位的葡萄糖氧化酶，S3Surgihoney含有每克組合物685個單位的葡萄糖氧化酶。實施例37Surgihoney的體外抗微生物活性本實施例描述了通過盤擴散法、最小抑制濃度(MIC)以及最小殺滅濃度(MBC)測定和時間殺菌測量進行的一系列傷口和潰瘍細菌分離株對Surgihoney的敏感性測試。概述結果：Surgihoney顯示高效的抗廣泛的革蘭陽性和革蘭陰性細菌和真菌的抑制性和殺菌活性。MIC/MBC顯著低於局部臨床使用中可能達到的濃度。傷口中的Surgihoney的局部濃度估計為約500gms/L。用於金黃色葡萄球菌的Surgihoney1的MIC/MBC為31和125gms/L，Surgihoney3的MIC/MBC為0.12和0.24gms/L。殺滅速度取決於效力。在Surgihoney1中，對於在48小時內測試的所有生物體發生最有效的完全殺滅活性。對於Surgihoney3，最有效的殺滅活性在30分鐘內發生。維持Surgihoney接種物製劑長達一周表現出完全的殺滅活性並且沒有細菌持久性。結論：Surgihoney具有作為具有高度活性的局部治療的廣泛潛力，所述局部治療將蜂蜜的癒合性質的作用與用於皮膚損傷、傷口，潰瘍和腔的生物工程化產品的強效抗微生物活性組合。其具有抗多藥耐藥菌的高度活性。其比其它測試的蜂蜜更具活性，並且在抗菌活性方面可與化學抗菌劑相當。表面傷口和皮膚潰瘍在許多國家隨著人口年齡的不斷增加以及肥胖和2型糖尿病的全球流行而變得越來越普遍。在英國，社區護士花費大量時間敷裹腿部潰瘍，並且如果要在社區腿部潰瘍服務中保持標準，由腿部潰瘍護士進行的監護是必需的。皮膚中的大多數慢性中斷逐漸被細菌定殖。很難知道這些細菌何時是致病性的以及是否是致病性的，但很可能即使不存在明顯的感染，細菌定殖在減緩組織癒合，建立生物膜和導致傷口蛻裂和令人討厭的臭味中起作用。組織存活力是具有挑戰性的，特別是當並發並存病時。慢性傷口總是逐漸被細菌定殖，這可能破壞癒合過程的穩定性。當樣品被報告為正在生長的細菌時，存在發送微生物樣品並提供全身性抗生素的誘惑。所有這些服務將選擇更耐藥的微生物，這是為什麼慢性下肢潰瘍常常被多藥耐藥性生物諸如甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌定殖的原因。Surgihoney已被開發作為用於傷口的預防敷料。本研究檢查了Surgihoney的體外性質。Surgihoney保留天然蜂蜜的所有建立的癒合性質，但其抗微生物活性可被設定在任何需要的效力。本研究確定了Surgihoney1、2和3的最小抑制濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)以及時間殺滅曲線。方法提供了效力等級1、2和3的Surgihoney。將其作為無菌藥物級產品呈現在呈半固體形式的小袋中。從軟組織微生物學樣品收集臨床分離物。針對Surgihoney測試金黃色葡萄球菌的18個分離株(12個甲氧西林敏感(MSSA)和6個抗甲氧西林(MRSA))、β溶血性鏈球菌的6個分離株(Lancefield組A(2)、B(2)、C(1)、G(1))、腸球菌屬的某些種的5個分離株(包括抗萬古黴素屎腸球菌)、大腸桿菌的6個分離株(包括擴展譜β內醯胺酶生產菌)、克雷伯菌屬的2個分離株，粘質沙雷氏菌(SerratiaMarcescens)AmpC生產菌的1個分離株、銅綠假單胞菌的4個分離株、魯氏不動桿菌(Acinetobacterlwoffii)的1個分離株、痤瘡丙酸桿菌(Propionibacteriumacnes)的1個分離株、脆弱擬桿菌(Bacteroidesfragilis)的1個分離株以及白色念珠菌的2個分離株、光滑念珠菌的1個分離株、Aspergillusfumigates的1個分離株。瓊脂擴散法在已用測試生物體以一定濃度接種以獲得半融合生長的isosenitest瓊脂中切割6mm的孔。將試驗性研究中的測試Surgihoney和其它蜂蜜添加至孔中。最初進行了試驗性研究，以將Surgihoney效力S1、S2、S3與來自世界各地：歐洲、南美洲、紐西蘭，Yemani、蘇丹的各種蜂蜜以及與醫用蜂蜜、Medihoney和含有銀(SilverAquacell)和碘(Iodoflex)的抗微生物敷料相比較。在接種有金黃色葡萄球菌並用測試蜂蜜填充的板中切割孔，或在敷料的情況下，將這些敷料切成2×2cm並放置在接種板的表面上。在試驗性研究之後，針對一系列來自皮膚損傷的細菌分離株單獨測試了Surgihoney效力S1、S2、S3。將孔用約2gms純的所述3種效力的Surgihoney製劑填充至表面，稀釋並在等體積的無菌水中乳化。在18-24小時需氧培養(對於念珠菌屬和麴黴菌屬的某些種更長，對於丙酸桿菌屬的一個種和類桿菌屬的一個種進行厭氧培養)之後測量區域大小。最小抑制濃度和最小殺菌濃度將Surgihoney產品溫熱至37℃以液化其，並將5gms與10mL無菌去離子水混合。該稀釋液被認為是用於連續稀釋的「純淨」物質。使用用於進行最小抑制濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的英國抗微生物化學治療學會(BSAC)方法(AndrewsJM.Determinationofminimuminhibitoryconcentrations.JAntimicrob372Chemother2001；48(增刊1):5-16)。將Surgihoney產品在微量滴定板孔中從純淨至1/1024連續稀釋。將75μL的每種蜂蜜稀釋液添加至微量滴定板的條中的每個孔中。淨濃度表示250gm/L的濃度，1/2048的稀釋度表示約0.12gm/L。通過對來自純培養物的每種生物體取四個形態相同的菌落以產生0.5McFarland密度來製備測試生物體。將其以1:10進一步稀釋。用75μL的測試分離株製劑接種包括對照的所有孔。將孔板在37℃下孵育18小時。MIC被認為是顯示無可檢測的濁度的最稀的孔。將MIC孔和MIC孔周圍的孔在血瓊脂上繼代培養，並在37℃下孵育18小時以測定MBC。MBC是在培養後沒有生長的最稀的濃度。時間殺滅曲線通過取0.1mL的0.5MacFarlane密度的測試生物體並將其接種在3mL營養肉湯中來製備測試生物體接種物。將測試接種物分成3個單獨的小塊對照和向其中添加了0.5gSurgihoney1(S1)、Surgihoney3(S3)或Medihoney(MH)的3個測試製劑。接種物的菌落計數通過1:10的系列稀釋並在血瓊脂平板上塗鋪0.1mL(重複3次)來測定。將測試和對照接種物保持在30℃以模擬表麵皮膚損傷的溫度。如上在0.5小時、2小時、4小時、24小時、48小時、72小時和168小時的時間以一式三份進行菌落計數。通過將0.1ml原始接種物接種到營養肉湯中以中和Surgihoney的任何殘留效應並在37℃孵育72小時，然後鋪板在血液瓊脂上以測定測試生物體存活，來進行終末培養。結果抑制區尺寸。試驗性比較研究表明，所有Surgihoney效力具有比任何其它測試的蜂蜜(包括醫療級蜂蜜Medihoney)更大的抗微生物活性。S1的抑制區大於由任何其它蜂蜜產生的那些抑制區。銀敷料在敷料下面產生一定抑制作用，但沒有如對於Surgihoney存在的抑制區。碘敷料對金黃色葡萄球菌產生大的抑制區域(約70mm)，大於S1(36mm)並相當於S3(67mm)。在定量區域尺寸測試中，所有效力上的Surgihoney在針對所有測試的細菌(革蘭陽性和革蘭陰性細菌，包括多重抗生素抗性細菌)和真菌菌種的瓊脂擴散中產生抑制區。每種菌種的區域尺寸隨著Surgihoney效力製劑的增加而增加。表12.Surgihoney的抑制作用不僅僅取決於與活性劑的直接接觸(如與銀敷料一樣)，而是遠遠擴散至孔之外，產生表12中列出的廣泛區域。MIC及MBCSurgihoney顯示了顯著的抗所有測試的分離株的抗微生物活性。MIC和MBC在相同菌種的分離株中非常一致，無論該分離株是多藥耐藥性的還是高度敏感的。表13列出了通過稀釋比測試的分離株種的MIC和MBC值，表14顯示了以克/升計的MIC和MBC。效力程度隨著Surgihoney的等級升高而上升。在大多數情況下，每個分離株的MBC在單一稀釋度內接近MIC。傷口中的Surgihoney的局部濃度估計為約500gms/L。Surgihoney1對於金黃色葡萄球菌的MIC/MBC分別為31和125gms/L，Surgihoney3的MI/MBC分別為0.12和0.24gms/L。時間殺滅曲線。Surgihoney快速殺死細菌。從每毫升(cfu/mL)約105的集落形成單位開始，對照中的cfu/mL數穩定上升，而在Surgihoney接種物中，cfu/mL在與兩種Surgihoney效力接觸後快速下降。在大多數情況下，對於S1和S3，30分鐘的cfu數量下降了1000倍(圖34)。對於S1，在大多數情況下到2小時時和對於S3到30分鐘時檢測不到細菌生長。腸球菌屬似乎更有彈性，持續48小時。對於所有生物體，殺滅活性是完全的，因為隨後在血瓊脂上鋪板的營養肉湯中的終末培養物未能檢測S1或S3接種體中的任何生物體。討論Surgihoney是天然蜂蜜，在目前的詞義上也是有機的，因為其與供人類消費的許多商業蜂蜜不同，不具有農業添加劑或抗微生物殘留物。其不依賴於特定的花蜜來源，與其增強的活性取決於特定植物花蜜來源的蜂蜜諸如麥盧卡不同。可通過製備方法在Surgihoney中控制抗微生物活性，從而允許生產具有一致的測量效力的不同等級。該研究已清楚地證明了Surgihoney作為抗所測試的細菌和真菌的所有種類的高效抗微生物活性劑的功效。在比較Surgihoney與各種來源於世界各地的多種蜂蜜和醫療級蜂蜜Medihoney的初步試驗和性究中，Surgihoney顯示顯著更大的抗微生物功效。通過與常用的局部防抗菌劑銀和碘比較，Surgihoney3產生了與碘敷料一樣大的抗菌作用，並且大於銀敷料(AquacelAg)，所述銀敷料僅有效地抑制與敷料直接接觸的細菌。MIC和MBC測試顯示，Surgihoney在低至可能在局部治療中獲得的那些濃度的1/1000至1/10的濃度(估計為500gms/L)上不僅抑制而且殺死微生物。Surgihoney的殺滅活性在接近其抑制活性的濃度上發生。因此，當在任何定殖或表面感染的傷口或軟組織腔中局部施加時，Surgihoney在多微生物抑制和根除中具有高度活性的潛力。由於許多慢性傷口定殖有抗性細菌，並且生物膜產生中的細菌持久性延遲傷口癒合，所以Surgihoney的使用可有助於適當減少抗生素的使用以及促進傷口癒合。在臨床使用中，傷口部位的局部Surgihoney濃度將顯著高於血清或深部組織中全身性抗生素的濃度。這反映在用於Surgihoney的MIC和MBC的值中，所述MIC和MBC的值相應地高於對於全身性抗生素一般表達的值。時間殺滅曲線顯示了殺滅活性的速度極快，對於Surgihoney3，在30分鐘內以及對於Surgihoney1，在2小時內。儘管腸球菌屬顯示略微更具彈性，但對於革蘭陽性和革蘭陰性生物情況均如此。真菌、念珠菌屬的某些種、麴黴菌屬的一個種也需要較高的濃度和更長時間的暴露以抑制生長並殺死生物體。Surgihoney被配製為無菌產品，以作為局部傷口敷料施加於皮膚損傷和腔，目的是提供潮溼的傷口癒合環境，同時還減少微生物定殖，幫助除去脫落並促進肉芽和上皮形成。其它抗微生物製劑可用作旨在治療或預防傷口感染的局部製劑。銀浸漬的敷料似乎具有良好的抗微生物活性，但是它們與蜂蜜製劑相比也顯示出細胞毒性。碘類似物也具有良好的抗微生物活性，但它們也被報導在某些情況下是有毒的。由於抗微生物抗性和毒性的發展，對氯己定製劑在傷口敷料中的使用也越來越關注。Surgihoney的臨床應用可能是在局部應用中、皮膚上、傷口和腔中。傷口可能逐漸被細菌定殖，其可形成生物膜並延遲癒合。隨著對抗微生物抗性日益關注和缺乏新型抗微生物劑，具有廣泛的抗微生物活性的局部試劑可在於軟組織損傷中減少全身性抗生素的使用方面發揮作用。這些體外研究已證明了Surgihoney作為具有高抗微生物活性的傷口敷料的潛力，其效力可被控制，並且還在傷口癒合中提供其它重要功能：潮溼屏障、脫落、局部營養供應、局部免疫調節並且無細胞毒性。結論這些體外結果支持Surgihoney作為傷口敷料的臨床用途，並且這可以是能夠在傷口癒合過程中遞送所有所需作用以及作為強效和無毒的抗微生物劑的第一種產品。表12具有不同效力的Surgihoney(S1、S2、S3)的抑制區尺寸表13.顯示最小抑制濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的稀釋的來自純淨Surgihoney(S1、S2、S3)的系列二倍稀釋表14.以克/升表示的Surgihoney的MIC和MBC值實施例38Surgihoney的抗病毒活性將S1或S2Surgihoney與單純皰疹病毒在細胞培養基(細胞培養基中的蜂蜜和病毒的50％混合物)中混合，然後在37℃孵育1小時。然後將混合物鋪在細胞上，記錄針對每種混合物形成的病毒噬斑的數量。也進行了沒有蜂蜜或利用對照蜂蜜的對照。在孵育1小時後記錄的病毒(單純皰疹病毒)噬菌斑的數量顯示在圖35中。與沒有蜂蜜的混合物的160個噬菌斑相比，對於S1或S2Surgihoney混合物沒有形成噬菌斑，對於具有對照蜂蜜的混合物形成150個噬菌斑。結果表明，S1和S2Surgihoney製劑都具有強效的抗病毒活性。實施例39利用管線部位敷料的Surgihoney的使用為了評估Surgihoney在防止外周插入式中央導管(PICC管線)的感染中的有效性，將S1Surgihoney局部施加於30名患者的手臂中的管線進入部位。將約3g-8gS1Surgihoney施加於敷料，然後將所述敷料與傷口接觸，並通過第二敷料保持就位。評估了管線部位定殖和管線相關菌血症，並與30名未接受Surgihoney敷料的患者進行比較。結果示於下表15中。表15.S1Surgihoney在預防和清除管線部位定殖中的作用Surgihoney(30)非Surgihoney(30)初始時定殖的24評價過程中的定殖06評價過程中清除的定殖20得出Surgihoney是與管線部位敷料一起使用的有效的抗微生物劑。實施例40使用Surgihoney預防剖腹產傷口的感染手術傷口的感染是剖腹產的特殊問題，其具有約10％的相當高的感染率。在英國，每年有與147,726例CS相關的剖腹產傷口感染的國家增加(8-24.6％)和NHS醫院間的廣泛變化(13.6-31.9％)(Bragg等，2010.VariationinratesofcaesareansectionamongEnglishNHStrustsafteraccountingformaternalandclinicalrisk:crosssectionalstudy.BMJ2010；341)。剖腹產傷口感染是延長住院時間、資源消耗以及其它發病率和死亡率的主要原因。從剖腹產術恢復對於發展術後傷口感染的婦女更加困難。為了評估Surgihoney在預防剖腹產傷口感染中的有效性，將S1Surgihoney在手術後局部施加於傷口一次。將約25g-35gS1Surgihoney施加於敷料，然後將所述敷料與傷口接觸，並通過第二敷料保持就位。在3個月內評估了近200名患者。臨床評價當在手術結束時對傷口敷料時，將Surgihoney作為傷口敷料提供給在2012年10月與2013年1月期間進行剖腹產術(CS)的婦女。將每小袋10g的Surgihoney用於單個患者使用。通過使用無菌技術，『非無菌』手術助手打開Surgihoney小袋，並小心地將無菌內容物施加於無菌敷料。然後由產科醫生或助產士將敷料施加於外科傷口。在手術後，主治助產士完成評價記錄。收集的數據是MRSA狀態，糖尿病史，藥物和體重指數。手術後14天，主治助產士也記錄任何傷口癒合問題，特別是滲出、疼痛、炎症的存在。如果有任何炎症，要求傷口培養拭子，並記錄微生物學結果。基於由感染控制團隊收集的數據，將在評價的三個月期間使用Surgihoney敷料的手術部位感染(SSI)率與評估前9個月的感染率進行比較。傷口感染在臨床上被定義為需要抗生素治療的發炎傷口(紅斑、腫脹、排出)。SSI的比率計算為佔所有進行的CS術的百分比。結果結果示於下表16中。在3個月期間(2012年10月-2013年1月)，有186例CS，其中102例(55％)是緊急的。沒有婦女被MRSA定殖。4例(2.23％)具有糖尿病。42例(27.3％)具有>25的體重指數。在評價期間186例中有4例被確認為CSSSI。這代表了2.15％的感染率。單個患者報告了以傷口刺激的形式存在的與Surgihoney治療相關的不良事件，所述不利事件在3天內消退而無需進一步幹預。在前9個月中有590例CS手術(234例是選擇的和356例是緊急的)，感染控制監督記錄了32例CSSSI，感染率為5.42％。感染率的降低是顯著的：p＝0.042(χ2檢驗)。表16.S1Surgihoney在預防剖腹產傷口感染中的作用*來自在信託上可能少報了歷史感染率的微生物學樣品數據。英國全國平均水平接近10％結果顯示，與歷史數據相比，用S1Surgihoney治療的組中手術部位感染的發生率較低(減少60％)。Surgihoney敷料被良好地耐受，幾乎沒有報導的不良反應。當使用Surgihoney時，傷口感染率下降了60.33％。通過使用來自研究的兩個臂的SSI數據，CSSSI率(預期的)在Surgihoney之前為5.42％，之後為(觀察到的)2.15％。在這些水平(其低於以前報導的9.6％的感染率)上，UK的外推CSSSI感染率將是(預期的)每年8007例和每年(觀察到的)3176例。差為4831例，這可能因使用Surgihoney而減少。得出S1Surgihoney有效地降低手術後的剖腹產傷口的感染率。使用對癒合組織無毒並且還促進癒合過程的藥劑Surgihoney預防傷口的定殖是新型的潛在重要的發現，所述發現可改變治療手術傷口的方式。Surgihoney提供臨床上有效的和具有成本效益的幹預，以顯著降低經歷剖腹產的婦女的SSI。討論該評價表明，Surgihoney(一種高效的抗微生物傷口敷料)可以用作初期CS傷口的傷口敷料，以防止感染。作為具有建立的傷口癒合性質的「天然」產品，Surgihoney除了提供有效的抗微生物活性以防止傷口定殖和感染之外，還可能促進傷口癒合。一些基於滷素的化學防抗菌劑可提供相同程度的抗微生物活性，但可延遲傷口癒合(JanWA.Comparisonofconventionalpyodinedressingwithhoneydressingforthetreatmentofdiabeticfootulcers.JPMI-JournalofPostgraduateMedicalInstitute2012；26(4):402-7)。碘傷口敷料在CS中是禁忌的(JointFormularyCommittee.TheBritishNationalFormulary.London:ThePharmaceuticalPress；2013)，並且一系列毒性與其使用相關(Pietsch和Meakins:Complicationsofpovidone-iodineabsorptionintopicallytreatedburnpatients.TheLancet1976；307(7954):280-2；Scoggin等：andacidosisinassociationwithtopicaltreatmentofburns.TheLancet1977；309(8018):959；Donovan等：SeizuresinaPatientTreatedwithContinuousPovidone–IodineMediastinalIrrigation.NewEnglandJournalofMedicine1992；326(26):1784；Colpaert:Iodinetoxicityasacauseoftotalatrioventricularblockinburnpatients.Burns2009；35:S45-S6；Ramaswamykanive:Cardiovascularcollapsefollowingpovidone-iodinewash.AnaesthesiaandIntensiveCare2011；39(1):127-30；Lakhal:Povidoneiodine:Featuresofcriticalsystemicabsorption.AnnalesFrancaisesd'AnesthesieetdeReanimation2011；30(7-8):e1-8):e1-e3.)。類似地，Cochrane系統評價顯示沒有足夠的證據來確定含銀敷料或局部閉幕式劑是否促進傷口癒合，防止傷口感染(Storm-Versloot等：Topicalsilverforpreventingwoundinfection.CochraneDatabaseofSystematicReviews2010)或是對感染或汙染的慢性傷口的有效治療(Vermeulen等：Topicalsilverfortreatinginfectedwounds(綜述).Cochranereview2010；(10):42)。儘管先前關於蜂蜜作為傷口敷料的臨床有效性的系統評價已顯示有益的不明確的證據，但該新製劑似乎在CS患者中提供顯著的臨床益處(Jull等：Honeyasatopicaltreatmentforwounds:TheCochraneCollaboration,2009；Jull等：Honeyasatopicaltreatmentforwounds.Cochranedatabaseofsystematicreviews(在線)2013；2)。在傷口感染率的時間比較中，評價已顯示感染率從幹預前的5.42％至使用Surgihoney的2.15％的60.33％的降低。醫療相關感染是顯著且昂貴的醫療保健併發症，約8％的住院和SSI患者佔這些感染的14％，並且發現近5％的已經歷了外科手術的患者已發展了SSI。SSI與相當大的發病率相關，超過三分之一的術後死亡與SSI至少部分相關。抗微生物預防常規地用於許多外科手術中以減少手術傷口感染。雖然外科醫生通常也使用皮膚消毒來在皮膚切口之前減少皮膚細菌負荷，但是使用抗微生物敷料並不是常規的做法。其原因可能是大多數局部抗菌劑對組織癒合具有有害作用。Surgihoney是具有有效的抗微生物活性的產品，其是無毒的並且促進組織癒合。將該產品局部應用於『清潔』手術傷口實際上可以替代某些類型的手術中的全身性抗生素預防。此類進展將有助於減少抗生素體積使用和對定殖細菌的選擇壓力。在本評價中選擇剖腹產傷口，因為患者大體上健康，沒有或很少有併發症，並且CS感染率據報告不斷增加。這種增加的可能原因是年齡較大的母親，具有合併症特別是糖尿病的母親，以及身體質量指數較高的母親的普遍增加。儘管以前沒有常規地在初期傷口敷料中使用抗微生物劑，但該評價顯示了Surgihoney在預防CS傷口感染中的有趣和有效的作用。實施例41使用S1Surgihoney治療感染的腿部潰瘍患者為患有糖尿病和慢性腎臟疾病的52歲男性。潰瘍是廣泛的，疼痛的，有臭味，並生成大量漿液性滲出物。將S1Surgihoney與抗生素一起用作局部敷料。到第7天，傷口臭味減少，疼痛消除，並且大量的嚴重滲出物和假單胞菌屬感染被消除。患者在第7天出院。結果的照片示於圖36中，其中：(a)顯示治療的第1天；(b)顯示治療的第4天；和(c)顯示治療的第7天。實施例42使用S1Surgihoney治療壓瘡患者是50歲的女性脊柱裂患者，她是殘疾的和不能動的。患者在下背部至骶骨有持續了1年以上的褥瘡。該腔被化膿性鏈球菌(Streptococcuspyogenes)感染。S1Surgihoney用作局部敷料。從第2天報告了傷口改善。到第30天，軟組織腔幾乎完全癒合。在這一點上沒有檢測到鏈球菌屬。結果的照片示於圖37中，其中：(a)顯示治療的第1天；和(b)顯示治療的第30天。實施例43Surgihoney的抗微生物活性測試了通過西方蜜蜂(蜜蜂)製備的Surgihoney(SH)和兩種原型修飾的蜂蜜抗金黃色葡萄球菌(NCIMB9518)的抗微生物活性。我們還檢查了許多經修飾的類型的Surgihoney的改變樣品的過氧化氫的產生水平的能力。方法：使用針對金黃色葡萄球菌的標準菌株的生物測定方法將Surgihoney(SH)與兩種經修飾的蜂蜜原型1(PT1)和原型2(PT2)進行比較。進一步的工作研究了從這些製劑生成過氧化氫的速率。結果：Surgihoney抗微生物活性經顯示主要歸因於過氧化氫產生。通過修飾Surgihoney，顯示兩種更強效的蜂蜜原型生成大至2至3倍的抗菌活性和高達十倍的過氧化物活性。結論：Surgihoney是臨床可用的傷口抗菌敷料，其顯示良好的抗菌活性。已顯示兩種另外的蜂蜜原型具有抗微生物活性，所述抗微生物活性可能因所證實的過氧化物活性的增加而增強。方法1.通過生物測定法測定蜂蜜活性使用金黃色葡萄球菌(NCIMB9518)測量Surgihoney(SH)和兩種經修飾的蜂蜜原型1(PT1)和原型2(PT2)的抗菌活性，並將其表示為當量％酚。計算來自測試的三個樣品重複(在3天重複的)的平均值的值。測定方法。所使用的瓊脂孔擴散法改造自MicrobiologyStandardMethodsManualfortheNewZealandDairyIndustry(1982)[蜂產品標準委員會：提出的用於測量蜂蜜的非過氧化物活性的標準。於紐西蘭：蜂產品標準委員會；1982.]中描述的用於抑制性物質的穿孔板測定。接種物製備。使用無菌營養肉湯(作為空白)、稀釋劑和具有1cm路徑的比色杯，將過夜培養物調整至在540nm測量的0.5的吸光度。測定板製備。將100μl體積的調節至0.5的吸光度的培養物用於接種150ml營養瓊脂以製備測定板。將瓊脂渦旋以充分混合併倒入已放置在水平表面上的大皮氏培養皿中。一旦瓊脂凝固，將板倒置過夜，然後第二天使用。為了測定，將這些接種的板從4℃取出，並在室溫下靜置15分鐘，然後將7.0mm直徑的孔切入瓊脂表面。將250μl測試材料(樣品或標準物)置於每個孔中。過氧化氫酶溶液。每天新鮮製備200mg/ml的來自牛肝臟的過氧化氫酶(SigmaC9322,2900個單位/mg)在蒸餾水中的溶液。樣品製備。通過將4g樣品添加至4ml普通蒸餾水中並在37℃下放置30分鐘以幫助混合來製備初級樣品溶液。為了製備二次溶液，將2ml初級樣品溶液添加至2ml蒸餾水中並混合用於總活性測試，並將2ml初級樣品溶液添加至2ml過氧化氫酶溶液中，並混合用於非過氧化物活性。酚標準物的製備。通過將酚溶解在水中製備標準物(w/v)10％、30％、50％的酚。在使用前將酚標準物在黑暗中達到室溫，並在添加至測試孔之前充分混合。將每種標準物以一式三份放置在3個孔中進行測試。將標準物保持在4℃，有效期為一個月。樣品和標準物應用。通過向3個孔中的每一個孔添加250μl，以一式三份地測試所有樣品和標準物。平板孵育。在施加樣品後，將板在37℃下孵育約18小時。記錄抑制區的直徑，包括孔的直徑(7.0mm)。樣品抗菌活性的計算。計算每個酚標準物周圍的透明區的平均直徑並取平方。將％酚相對於透明區的平均直徑的平方繪製標準圖。使用線性回歸獲得最佳擬合直線，並且將該線的方程用於從透明區的直徑的平均測量值的平方計算每個稀釋的蜂蜜樣品的活性。為了允許進行稀釋(假設Surgihoney的密度為1.35g/ml)，將該數值乘以為4.69的係數，然後將樣品的活性表示為當量酚濃度(％w/v)。總活性：所有活性，包括歸因於過氧化氫(H2O2)的活性。非過氧化物活性：通過用過氧化氫酶處理樣品除去H2O2。2.通過H2O2方法測定蜂蜜活性使用1.10011及1.10081測量活性。過氧化物測試試劑盒。濃度表示為當量mg/LH2O2。樣品用純化水以1:10稀釋。在5分鐘孵育後，測量所有樣品在12小時內每小時的H2O2產生，隨後在24和48小時時間點進行該測量。測定方法。過氧化物酶將氧從過氧化物轉移至有機氧化還原指示劑，然後將其轉化為藍色氧化產物。通過目測比較測試條的反應區與顏色標度的區域來半定量地測量過氧化物濃度。將測試條的反應區浸入Surgihoney樣品，持續1秒，允許過量的液體從條上徑流至吸收性紙巾上，並在15秒(目錄號110011)、5秒(目錄號110081)後，之後確定與顏色區域標度更精確一致的在反應區中形成的顏色。結果1.活性評級通過修飾蜂蜜樣品產生的抗微生物活性導致與單獨的Surgihoney相比，對於PT1和PT2的酚活性的分別兩倍和幾乎三倍的增加。Surgihoney(SH)和兩個經修飾的原型PT1和PT2的3個樣品的結果顯示在表17中。2.通過H2O2方法測定蜂蜜活性觀察到原型修飾生成高達7倍和10倍的Surgihoney的過氧化氫活性。3個樣品的結果示於圖38中。通過取三種蜂蜜原型中的每一種的過氧化氫輸出的最高水平，並將其相對於總酚活性作圖，觀察到線性關係(圖39)。討論該工作的結果表明，Surgihoney(SH)以及兩個經修飾的原型PT1和PT2的主要抗微生物活性歸因於過氧化氫。這對於來自各種花卉來源的某些其它蜜蜂是類似的發現。然而，與先前的工作不同，來自樣品的過氧化氫的可用性能夠被增強，並且在12小時時分別是單獨的Surgihoney(SH)的值的7倍和10倍。在3種蜂蜜原型的抗微生物活性與過氧化氫的最大輸出之間存在顯著的線性關係。該過氧化物活性提供了有效的抗微生物活性，其理想地適用於施用於急性或慢性傷口以治療或預防傷口感染的傷口敷料。儘管少量的過氧化氫酶存在於傷口中，並且男性的過氧化氫酶的血清水平已報導為50kU/l，但已顯示在創傷後的第一周期間，在癒合傷口中過氧化氫酶活性實際上降低，並且過氧化氫酶的活性水平在創傷後兩周恢復至原始水平。因此，過氧化氫酶的此類濃度極不可能影響利用外源施用的Surgihoney或兩種經修飾的原型PT1和PT2觀察到的抗微生物活性。抗微生物傷口敷料的理想特徵是：有效性、無毒性、使用的容易性、患者和臨床醫生的可接受性和性價比。過氧化氫是有效的抗微生物劑，並且因為其抗營養細菌、酵母和孢子的強有力的活性面已用作殺生物劑。其通過細胞組分的化學氧化產生其抗微生物作用。過氧化氫的人毒性是濃度依賴性的，一項研究聲稱，對於抗微生物和人毒性的差異濃度可能重疊。相比之下，某些蜂蜜製劑經顯示是有效的抗微生物劑，通過隨時間連續地向傷口提供低濃度的過氧化氫，而不是在敷料時大量地提供過氧化氫，從而不存此類毒性。實際上，有令人信服的證據表明，當將生理水平的過氧化氫施用於哺乳動物細胞時，這些細胞中存在生物反應的刺激和特定生化途徑的活化。很明確地，Surgihoney和兩個經修飾的原型PT1和PT2是抗微生物敷料，其提供有效的過氧化氫釋放超過至少24小時。結論已顯示Surgihoney和兩個經修飾的原型PT1和PT2對於金黃色葡萄球菌的標準菌株具有強效的抗微生物活性。已顯示這些抗微生物活性由過氧化氫產生。活性是可縮放的，並且可用過氧化氫活性來描述。這些經修飾的蜂蜜提供有效的，無毒的且易於施用的敷料。表17顯示Surgihoney(SH)和兩種經修飾的原型PT1和PT2抗金黃色葡萄球菌(NCIMB9518)的過氧化物和非過氧化物抗菌活性實施例44本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。醇凝膠水適量用途：用於治療痤瘡。不要在破損的皮膚上使用。「活性蜂蜜(5+)」用於表示應當使用比在不具有(5+)名稱的其它製劑中更多的葡萄糖氧化酶。實施例45該實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。水性噴霧25ml塑料瓶，其包含：活性蜂蜜10gTritonCF0.1g麥芽糖糊精或玉米澱粉1g用途：一般傷口，和應用於燒傷TritonCF在該組合物中充當表面活性劑。麥芽糖糊精和玉米澱粉用作成膜劑。實施例46本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。非水性噴霧活性蜂蜜70％丙二醇30％用法：一般傷口實施例47該實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。敷料-塑膠袋海藻酸鈣敷料的範圍10cm×10cm，20cm×20cm活性蜂蜜10％w/w用途：傷口清創，用於相對較大的滲出性傷口。該組合物提供相對潮溼的環境。實施例48本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。蜂蜜和鎮痛藥活性蜂蜜99％布洛芬1％用途：用於傷口處理的所有階段，以提供傷口癒合中的疼痛治療。實施例49本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。粉末活性蜂蜜麥芽糖糊精布洛芬微晶纖維素(CMC)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)優選地，將布洛芬以1-2％w/w包括在組合物中。其它組分可以變化，例如以實現不同水平的吸溼。用途：包裝在箔中，以防止吸水。PVP-提供粒化。CMC-提供水分乾燥劑。實施例50本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。傷口清創重建水溶液，包含活性蜂蜜(諸如，5-50％活性蜂蜜)，任選還包括止痛劑，優選布洛芬，合適地為1-2％w/w。用途：例如在分配器(諸如泵分配器)中，作為清創後的傷口漂洗，以提供早期開始傷口癒合和疼痛緩解。實施例51本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。泡沫敷料用以吸收滲出物的聚氨酯背襯浸泡在活性蜂蜜中的藻酸鈣的島狀物用以終止粘附傷口的矽膠用途：泡沫基敷料，以幫助擦拭傷口滲出物。實施例52本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。真菌指甲治療泡沫井中的石膏與活性蜂蜜(5+)羥基丙基纖維素甘油異丙醇檸檬酸一水合物用途：用於治療真菌性指甲感染實施例53本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。喉噴霧蜂蜜和甘油，優選包含5-20％的蜂蜜用途：喉嚨痛。製劑可在用於噴霧的雙重分配器中，或在使用前用水重構，然後噴霧。實施例54本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。軟膏劑(Pommade)活性蜂蜜25％白凡士林輕液體石蠟滑石高嶺土氧化鋅用途：用於治療感染性溼疹實施例55本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。唇膏用途：用於破裂的嘴唇實施例56本實施例列出了本發明的優選的基於蜂蜜的組合物(稱為「活性蜂蜜」)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。面霜用途：用於治療痤瘡。已知蜂蜜具有抗痤瘡丙酸桿菌的活性。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp