墊狀卷柏提取物在製備抗阿爾茨海默病藥物中的用途的製作方法

2023-12-10 07:37:27

專利名稱：：墊狀卷柏提取物在製備抗阿爾茨海默病藥物中的用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及墊狀巻柏提取物及其衍生物在製備抗阿爾茨海默病藥物中的用途，還涉及了新的墊狀巻柏提取物以及其提取方法。
背景技術：
：巻柏屬植物約有700種植物，廣泛分布於全世界，我國約產50餘種，各地均有分布。2005年版《中國藥典》收載了巻柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring禾P墊狀巻柏S.pulvinata(Hook.etGrev.)Maxim兩個品種，除藥典品種外，另約有20個品種的巻柏屬植物在民間被作為藥用。巻柏屬植物的化學成分主要是雙黃酮類化合物，其次是生物鹼、苯丙素、甾類、多糖等。江南巻柏(S.moellendrfiihieron.)具有清熱解毒，抗癌，止血之功效，用於治療癌症，肺炎，急性扁桃炎，眼結膜炎和乳腺炎。現代藥理研究表明巻柏屬植物具有免疫調節及抗腫瘤、保護皮膚、抑菌抗炎、鎮靜鎮痛等作用。墊狀巻柏(SelaginellapulvinataMaxim.)為巻柏科巻柏屬植物，墊狀巻柏具有活血通經之功效，用於經閉痛經，跌打損傷，炒碳後可化淤止血。蘭州大學Li-PingZhang等2007年報導了從中華巻柏中分離出一個新型碳骨架結構的炔酚類化合物一selaginellin，最近，林瑞超等從巻柏中分離得到了selaginellinA禾口selaginellinB。隨著社會老齡化的迅猛發展，老年性疾患已成為社會影響人類健康的突出問題，其中，阿爾茨海默病(Alzheimerdisease,AD)的患病率的快速增加。阿爾茨海默病是一種中樞神經系統的退行性疾病，其病症特點包括認知障礙，進行性記憶力喪失，日常生活能力進行性減退，並伴有各種神經精神症狀和行為障礙。眾多學者對天然藥物或中藥中治療AD的化學成分進行了大量的研究，發現了一些很有前途的活性成分，包括生物鹼類、皂苷類、酚酮類和多糖類等。中藥多糖的抗衰老和防治老年痴呆的作用，主要集中在其免疫調節、抗氧化作用和延長壽命等方面，這些結構不同的化學成分從不同的作用靶點發揮其作用。Klotho基因具有調節生物體氧化防禦功能的作用，以及與人類衰老的密切相關性，可能與其抑制體內鈣離子平衡受損、鈣離子依賴性蛋白酶過度活化、血管功能受損以及氧化應激有關，成為抗衰老性疾病包括AD治療的新靶點。世界衛生組織已將AD列入21世紀五大重點疾病之一。基於以上分析，進一步探明AD的發病機制；運用蛋白組學、生物信息科學、藥物化學和計算機合理藥物設計以及高通量藥物篩選等先進技術，設計、合成或從天然藥物中尋找、發現具有抗衰老作用的先導化合物或候選藥物，對於AD防治，提升我國創新藥物研製水平具有極其重要的戰略意義。
發明內容本發明發現墊狀巻柏提取物能顯著上調KlothomRNA表達和抑制Ah—42誘導的大鼠海馬神經元細胞衰老，可用於製備抗阿爾茨海默病的藥物。上述墊狀巻柏提取物具有以下結構式本發明提供了一種墊狀巻柏提取物墊狀巻柏三酚，結構式為HO本發明提供了上述墊狀巻柏三酚的提取方法，步驟包括1)取墊狀巻柏全草，用75%乙醇回流提取兩次，回收溶劑，得渾濁濃縮液，靜置72h，過濾；2)將步驟1)得到的濾液依次以石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取後殘留濾液進行聚醯胺柱層析，分別用30%、60%、95%乙醇_水梯度洗脫；3)取步驟2)60%醇洗部分進行聚醯胺柱層析，乙醇-水梯度洗脫，再經製備液相色譜洗脫，70%甲醇為流動相，得到墊狀巻柏三酚。本發明還提供了墊狀巻柏提取物墊狀巻柏二醇，結構式為5以及上述墊狀巻柏三酚的提取方法，步驟包括1)取墊狀巻柏全草，用75%乙醇回流提取兩次，回收溶劑，得渾濁濃縮液，靜置72h，過濾；2)將步驟1)得到的濾液依次以石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取後殘留濾液進行聚醯胺柱層析，分別用30%、60%、95%乙醇_水梯度洗脫；3)取步驟2)60%醇洗部分，濃縮至乾粉，矽膠柱色譜分離，氯仿_甲醇梯度洗脫，所得粗品再經矽膠柱層析，氯仿_甲醇洗脫得粗晶，製備液相色譜分離，醋酸_甲醇為流動相洗脫，得墊狀巻柏二醇。本發明通過對墊狀巻柏提取物進行修飾製備成含有水溶性基團的前藥，如磷酸鹽前藥，含胺基酸或二肽的羧酸酯類前藥，氨基甲酸酯類前藥，o-烷基化化合物，聚乙二醇類前藥等，增強了化合物的水溶性，改善了藥物的吸收和代謝途徑。主要修飾有如下幾種1.磷酸鹽前藥製備tableseeoriginaldocumentpage62.含胺基酸或二肽的羧酸酯類前藥的製備R=Ac,methyl,etcOR=Ac,methyl,etc;R1=alkyl3.氨基甲酸酯類前藥的製備4.0-烷基化化合物及磷酸鹽前藥的製備7本發明還提供了墊狀巻柏提取物及其衍生物的全合成方法，其合成路線為另外，本發明還對炔鍵進行了還原，對研究該類化合物的結構活性關係具有重要辰、oformulaseeoriginaldocumentpage9本發明對墊狀巻柏提取物進行了深入的研究，可用於製備抗阿爾茨海默病的藥物。同時運用多種柱色譜分離技術和製備高效液相色譜分離方法，分離提取得到兩種新的化合物墊狀巻柏三酚及墊狀巻柏二醇。本發明對於AD的防治，拓展我國AD藥物在國際市場的佔有率，提升我國創新藥物研製水平具有極其重要的意義，同時具有巨大的經濟效益。圖1是培養的海馬神經元細胞呈MAP-2陽性，代表性的免疫螢光照片；圖2是Selaginellin抑制卜42誘導的大鼠海馬神經元端粒酶活性圖；圖3是Selaginellin上調大鼠海馬神經元KlothomRNA表達圖。具體實施方式實施例1取墊狀巻柏全草18.0kg，75X乙醇回流提取兩次，回收溶劑，得渾濁濃縮液。靜置72h，過濾，濾液依次以石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取後殘留濾液進行聚醯胺柱層析，乙醇-水梯度洗脫(30%、60%、95%)，取60%醇洗部分再進行聚醯胺柱層析，乙醇_水梯度洗脫，250ml/Fr.，Frl98-206再經Pr印-HPLC分離，70%MeOH為流動相，得到墊狀巻柏三酚(40mg)。桔紅色粉末(H20，凍幹)。易溶於MeOH，不溶於H20.NH3燻顯紫紅色，H2S04_MeOH即顯桃紅色，FeCl3試液顯紅色。UVAmaxMe0Hnm:217，280，426(較弱)。IRvmaxrar(cm-1):3420(OH)，2924，2854，1608，1593，1509，1467(苯環)，1160，835。ESI-MS:m/z483.l[M+H]+。墊狀巻柏三酚波譜數據(DMSO，400MHz)10tableseeoriginaldocumentpage11實施例2取墊狀巻柏全草18.0kg，75X乙醇回流提取兩次，回收溶劑，得渾濁濃縮液。靜置72h，過濾，濾液依次以石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取後殘留濾液進行聚醯胺柱層析，乙醇_水梯度洗脫(30%、60%、95%)，取60%醇洗部分，濃縮至乾粉20.6g，矽膠柱色譜分離，氯仿_甲醇梯度洗脫，250ml/Fr.，取Fr5680所得粗品再經矽膠柱層析，氯仿_甲醇10:1.2洗脫，Frl0-14合併得粗晶，？1~印-昍^分離，1%醋酸-甲醇(100:45)為流動相洗脫，得墊狀巻柏二醇(140mg)。棕黃色粉末。無明顯熔點，252t:以後逐漸炭化。不溶於氯仿、水，溶於甲醇、丙酮，可溶於二甲基亞碸。UVAmaxMe0Hnm:289，299nm。IRv隨版(cm—0:3417，3226(OH)，2402(~^~)，1634，1608，1510(苯環)，1401,1172，1086,929,523。UV、IR光譜數據分析可知，該化合物可能為pulvinataphentrol的同系列化合物。ESIMSm/z622.9為準分子離子峰[M+Na+K+2H]+。墊狀巻柏二醇波譜數據(DMS0-d6,500MHz)position(5H(/inHz)COSY(HMBC)1190.02125.77.50d(8.0)C-3，C-63118.67.75d(8.0)C-2，C-4,C-7，4129.8H-2,H-35114.76.73d(8.0，2)6120.77.65d(8.0)C-27151.4H-2,H-38129.76.56d.C-9，C-IO，C-139114.36.98d(9.0)C-8,C-IO10155.8H-8，H-9，H-1211114.36.98d(9.0)12129.76.56d.C-8，C-9，C-1013132.7H-8,H陽1214118.0H-35，15139.2H-35,16157.8H-1717112.06.64d(2.0)C-16，C-24，18141.819141.8H-320129.76.56dC9.0)C-21，C-22，C-2421114.36.98d(9.0)C-21，C-22，C-2522155.8H-20,H-2323114.36.98d(9.0)24129.76.56d(9.0;>C-20，C-21，25132.9H-21，H-232684.127100.8H-28，H-2928115.76.71d(8.5)C-27，C-30,C-3329132.26.89d(8.5)C-27，C-28，C-3030158.0H-28，H-2931132.26.89d(8.5)C-27，C-30，C-3232115.76.71d(8.5)33113.0H-28，H-323464.33.56s3561.44.63sC-14,C-15，C-19實施例3selaginellin顯著清除DPPH自由基和抑制Cu2+誘導的LDL氧化(表1);selaginellin顯著上調KlothomRNA表達和抑制卜42誘導的大鼠海馬神經元細胞衰老(圖2圖4)。表1.Selaginellin清除DPffl自由基和抑制Cu2+誘導的LDL氧化的半數有效濃度(EC50)13tableseeoriginaldocumentpage14權利要求墊狀卷柏提取物在抗阿爾茨海默病藥物製備中的用途。2.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述的墊狀巻柏提取物具有以下結構式其中，&為氫或羥基，R2為氫、^^c^或羥甲基。3.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述的墊狀巻柏提取物具有以下結構式4.一種根據權利要求3所述墊狀巻柏三酚的提取方法，步驟包括1)取墊狀巻柏全草，用75%乙醇回流提取兩次，回收溶劑，得渾濁濃縮液，靜置72h，過濾；2)將步驟1)得到的濾液依次以石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取後殘留濾液進行聚醯胺柱層析，分別用30%、60%、95%乙醇-水梯度洗脫；3)取步驟2)60%醇洗部分進行聚醯胺柱層析，乙醇-水梯度洗脫，再經製備液相色譜洗脫，70%甲醇為流動相，得到墊狀巻柏三酚。5.—種墊狀巻柏提取物墊狀巻柏二醇，結構式為6.—種根據權利要求5所述墊狀巻柏三酚的提取方法，步驟包括1)取墊狀巻柏全草，用75%乙醇回流提取兩次，回收溶劑，得渾濁濃縮液，靜置72h，過濾；2)將步驟1)得到的濾液依次以石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取後殘留濾液進行聚醯胺柱層析，分別用30%、60%、95%乙醇-水梯度洗脫；3)取步驟2)60%醇洗部分，濃縮至乾粉，矽膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，所得粗品再經矽膠柱層析，氯仿-甲醇洗脫得粗晶，製備液相色譜分離，醋酸-甲醇為流動相洗脫，得墊狀巻柏二醇。全文摘要本發明對墊狀卷柏提取物進行了深入的研究，發現墊狀卷柏提取物能顯著上調KlothomRNA表達和抑制Aβ1-42誘導的大鼠海馬神經元細胞衰老，可用於製備抗阿爾茨海默病的藥物。同時運用多種柱色譜分離技術和製備高效液相色譜分離方法，分離提取得到兩種新的化合物墊狀卷柏三酚及墊狀卷柏二醇，同樣可用於抗阿爾茨海默病藥物的製備。本發明對於AD的防治，拓展我國AD藥物在國際市場的佔有率，提升我國創新藥物研製水平具有極其重要的意義，同時具有巨大的經濟效益。文檔編號A61P25/28GK101711779SQ20081014305公開日2010年5月26日申請日期2008年10月8日優先權日2008年10月8日發明者周應軍,姜德建,徐康平,李元建,李福雙,譚桂山申請人:中南大學