一種黃蜀葵花葯材的鑑別方法
2023-06-23 02:00:46
一種黃蜀葵花葯材的鑑別方法
【專利摘要】本發明涉及一種黃蜀葵花葯材的鑑別方法，是以蘆丁、金絲桃苷、槲皮素為對照品或以蘆丁、金絲桃苷為對照品，將供試品溶液和對照藥品溶液點於同一聚醯胺薄膜上，以60～75%冰醋酸為展開劑，三氯化鋁試液顯色，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。本發明提供的黃蜀葵花葯材鑑別方法專屬性強，藥材及化學試劑使用量少，操作簡便，重現性好，適用於所有來源的黃蜀葵花葯材的鑑別以及含有黃蜀葵花葯材的製成品中是否含有黃蜀葵花葯材的鑑別。
【專利說明】一種黃蜀葵花葯材的鑑別方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥材的定性、鑑別方法，特別是涉及黃蜀葵花葯材的鑑別方法。
【背景技術】
[0002]黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵的乾燥花冠，在我國有悠久的藥用歷史，《嘉祐本草》、《本草綱目》上均有藥用記載。性甘、寒，歸腎、膀胱經，用於溼熱壅遏，淋濁水腫；外治癰疽腫毒，水火燙傷。
[0003]黃蜀葵花的主要成分包括金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素、楊梅素、蘆丁等。其中金絲桃苷含量最高，有顯著的局部鎮痛作用，對心肌、腦缺血起保護作用，對肝胃黏膜起保護作用，並有解痙鎮痛和降血脂、增強免疫功能等作用。槲皮素可作為藥品，具有較好的祛痰、止咳和平喘作用，此外還有降低血壓、增強毛細血管抵抗力、減少毛細血管脆性、降血脂等作用。蘆丁具有抗炎、抗病毒及維持血管抵抗力、降低其通透性、減少血管脆性等作用。
[0004]山東省中藥材標準(2002年版)收載了黃蜀葵花葯材，其鑑別項選用鹽酸鎂粉反應，鑑別其中的黃酮苷，以出現紅色至紫紅色反應為指標，操作相對簡單，但專屬性差，只要含有黃酮苷類成分的不同藥材均可呈現正反應。
[0005]中華人民共和國藥典(2010年版)一部中新收載黃蜀葵花，改善了黃蜀葵花葯材的鑑別方法。其操作過程為:「取本品粉末lg，加0.18%鹽酸乙醇溶液20ml，置水浴上加熱回流I小時，趁熱濾過，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液。另取槲皮素對照品，加乙醇製成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各I μ 1，分別點於同一用0.5%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸5:4:1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈365nm下檢視，在與對照品色譜相應的位置上，呈相同顏色的螢光斑點」。該方法是通過鹽酸水解反應，將黃蜀葵花中有效成分金絲桃苷、槲皮素一 3 —葡萄糖苷、異槲皮苷等去掉取代基轉換為槲皮素，然後以槲皮素對照品作為參t匕，鑑別藥材真偽。其方法專屬性相對較強，但是存在操作過程繁鎖、使用化學試劑種類多、鑑別時間長等不足，不適合生產過程中快速檢驗的要求。
[0006]另外，中藥市場上摻雜摻假、以次充好的現象數不勝數。中藥是用於治病的，如果治療使用假藥材或劣質藥材，不但不能起到治療效果，反而可能延誤病情，甚至危害生命，故加強中藥材和中成藥質量管理成為越來越重要的工作。中藥材的鑑別歷來是難點，方法專屬性直接決定鑑別方法的價值。採用單一對照品進行鑑別雖然具有一定的專屬性，但是由於中藥材成分複雜，很多中藥材都含有同一有效成分，因此常常會出現誤判現象。比如，藥典中收錄的含槲皮素的中藥材就有瓦松、地錦草、垂盆草、槓板歸、金錢草、側柏葉、銀杏葉、葶藶子、黃蜀葵花等，使用黃蜀葵花葯材的鑑別方法對這些藥材進行鑑別時，均會出現槲皮素特徵點，造成假陽性結果。
【發明內容】
[0007]本發明的目的是提供一種黃蜀葵花葯材的鑑別方法，本發明提供的方法操作簡便、專屬性更強、重現性好，能夠快速準確地對黃蜀葵花葯材進行鑑別。
[0008]本發明提供的黃蜀葵花葯材的鑑別方法是以蘆丁、金絲桃苷和槲皮素為對照品，採用薄層色譜法進行鑑別，具體方法包括:
1)、供試品溶液製備
取黃蜀葵花葯材粉末0.1?0.5g，加Ch4—元醇10ml，充分溶解後，濾過，取濾液作為供試品溶液；
2)、對照品溶液製備
分別取蘆丁、金絲桃苷、槲皮素對照品，以(:卜4一元醇製成每Iml含蘆丁0.05?0.lmg、金絲桃苷0.1?0.3mg、槲皮素0.05?0.1mg的溶液,作為蘆丁對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液和槲皮素對照品溶液；
或者，
將蘆丁、金絲桃苷和槲皮素對照品同時溶於(:卜4 一元醇中，製成每Iml含蘆丁 0.05?0.lmg、金絲桃苷0.1?0.3mg、槲皮素0.05?0.1mg的溶液,作為對照品溶液；
3)、薄層色譜法鑑別
分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2?10 μ L，點於同一聚醯胺薄膜上，以60?75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，熱風吹乾，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與各對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
[0009]本發明提供的黃蜀葵花葯材的鑑別方法還可以是以蘆丁和金絲桃苷為對照品，採用薄層色譜法進行鑑別，具體方法包括:
1)、供試品溶液製備
取黃蜀葵花葯材粉末0.1?0.5g，或相當於0.1?0.5g黃蜀葵花葯材的含黃蜀葵花葯材製成品粉末，加(:卜4 一元醇10ml，充分溶解後，濾過，取濾液作為供試品溶液；
2)、對照品溶液製備
分別取蘆丁、金絲桃苷對照品，以(:卜4 一元醇製成每Iml含蘆丁 0.05?0.lmg、金絲桃苷0.1?0.3mg的溶液，作為蘆丁對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液；
或者，
將蘆丁、金絲桃苷對照品同時溶於(:卜4 一元醇中，製成每Iml含蘆丁 0.05?0.lmg、金絲桃苷0.1?0.3mg的溶液，作為對照品溶液；
3)、薄層色譜法鑑別
分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2?10 μ L，點於同一聚醯胺薄膜上，以60?75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，熱風吹乾，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與各對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
[0010]本發明上述方法中，步驟I)中所述的充分溶解是採取各種常規的溶解手段，如攪拌、振蕩、加熱等，用C1M—元醇將黃蜀葵花葯材中的有效成分儘可能多地溶解出來。其中最簡單有效的溶解方法是將溶液置於超聲波中處理20min。
[0011]本發明提供的上述黃蜀葵花葯材的鑑別方法是一個典型的定性分析方法。在不同的實驗環境和試驗條件下，得到的實驗結果可能會有略微的區別。在實際操作中，允許對上述鑑別方法中的實驗條件進行適當的調整，以其獲得最佳的試驗結果，以方便鑑別。
[0012]一般地，優選以70%冰醋酸為展開劑。可以根據實際情況，對展開劑的濃度進行適當調整。
[0013]如果由於上述實驗條件改變，或者受實驗環境的影響，使得樣品斑點顯色不好，還可以對薄層板進行適當加熱，以利於顯色。
[0014]本發明所述百分濃度均為體積百分濃度。
[0015]本發明的黃蜀葵花鑑別方法不僅適用於所有來源的、單一的(包括幹品、鮮品、不同產地)黃蜀葵花葯材，同樣也適用於以所有來源黃蜀葵花葯材製備的人用藥品、食品、保健品、化妝品、獸藥等各種製成品(包括單方、複方製成品)中是否含有黃蜀葵花葯材的鑑別。
[0016]本發明所使用的蘆丁、金絲桃苷、槲皮素標準品由中國藥品生物製品檢定所製備。以薄層色譜法鑑別黃蜀葵花依據中華人民共和國藥典(2010年版)的相應規定進行。
[0017]本發明鑑別方法成熟，經過不同實驗條件鑑別以及對多批不同產地、不同來源的黃蜀葵花葯材進行鑑別對比，均能準確鑑別藥材，專屬性強、重現性好。進而將本發明鑑別方法應用於含有黃蜀葵花的製成品如複方黃葵顆粒中黃蜀葵花的鑑別，陰性無幹擾，專屬性好，同樣具有很好的鑑別效果。
[0018]與現有藥典中黃蜀葵花葯材的鑑別方法比較，本發明的鑑別方法具有以下優點。
[0019]1.專屬性更強。本發明方法同時採用蘆丁、金絲桃苷兩種對照品或蘆丁、金絲桃苷、槲皮素三種對照品作為參比物質，來鑑別黃蜀葵花葯材及含黃蜀葵花葯材製成品，能夠更為全面地反映藥材質量信息，更有效地避免假陽性結果，提高了鑑別專屬性。能夠在生產過程中更為全面、快速地檢驗判定產品質量，更好地控制黃蜀葵花葯材及其製劑的臨床安全性，保證產品質量穩定可靠。
[0020]2.供試品溶液製備方法簡便。直接加入(:卜4 一元醇的一種，採用超聲或回流等方法提取即可得到，相對於藥典方法需要配製鹽酸乙醇溶液，以鹽酸乙醇溶液加熱回流以使水解反應完全簡便了很多。
[0021]3.鑑別時間縮短。整個操作過程在I小時內即可完成，而藥典方法則至少需要2小時以上。
[0022]4.藥材、試劑使用量少。本發明鑑別方法僅需藥材0.1?0.5g，整個檢測僅需要Ch4—元醇、冰醋酸、三氯化鋁少數幾種試劑即可完成，而藥典方法則需要至少Ig藥材，整個檢測涉及鹽酸、乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯化鋁多種試劑，且試劑使用量大，有機溶劑毒性大。
[0023]5.方法靈敏度高。僅需極少量對照品即可以顯色明顯，靈敏度高。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0024]圖1為實施例1的薄層色譜展開效果圖。
[0025]圖2為實施例2的薄層色譜展開效果圖。
[0026]圖3為實施例3的薄層色譜展開效果圖。
[0027]圖4為實施例4的薄層色譜展開效果圖。
【具體實施方式】
[0028]實施例1 本實施例黃蜀葵花葯材來源於安徽亳州。
[0029]取黃蜀葵花葯材粉末0.lg，加甲醇10ml，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；分別取蘆丁、金絲桃苷、槲皮素對照品，加甲醇分別製成每Iml含蘆丁 0.05mg、金絲桃苷0.lmg、槲皮素0.05mg的溶液,作為對照品溶液。
[0030]吸取上述四種溶液各10 μ L，分別點於同一聚醯胺薄膜上，以60%冰醋酸為展開齊U，展距6cm，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，熱風吹乾，置365nm紫外光燈下檢視。色譜圖如圖1，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點，由此可判定所鑑別藥材為黃蜀葵花。
[0031]實施例2
本實施例黃蜀葵花葯材來源於江蘇興化。
[0032]取黃蜀葵花葯材粉末0.5g，加乙醇10ml，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；取蘆丁、金絲桃苷和槲皮素對照品同時加入乙醇中，製成每Iml含蘆丁 0.05mg、金絲桃苷0.lmg、槲皮素0.05mg的溶液，作為對照品溶液；另取實施例1來源於安徽亳州的黃蜀葵花葯材同法製成對照藥材溶液。
[0033]吸取上述三種溶液各5 μ L，分別點於同一聚醯胺薄膜上，以75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，熱風吹乾，置紫外光燈(365nm)下檢視。色譜圖如圖2，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點，且與對照藥材色譜圖無明顯區別，由此可判定所鑑別藥材為黃蜀葵花。
[0034]實施例3
本實施例黃蜀葵花葯材來源於河北刑臺。
[0035]取黃蜀葵花葯材粉末0.5g，加正丁醇10ml，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；分別取蘆丁、金絲桃苷對照品，分別加正丁醇製成每Iml含蘆丁 0.lmg、金絲桃苷0.3mg的溶液，作為對照品溶液。
[0036]吸取上述三種溶液各2 μ L，分別點於同一聚醯胺薄膜上，以75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，熱風吹乾，置紫外光燈(365nm)下檢視。色譜圖如圖3，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點，由此可判定所鑑別藥材為黃蜀葵花。
[0037]實施例4
本實施例對複方黃葵顆粒中的黃蜀葵花葯材進行鑑別，所用黃蜀葵花葯材來源於江蘇興化。
[0038]處方:黃蜀葵花1000g、敗醬草500g、粉萆蘚240g、虎杖400g、劉寄奴350g、薑黃250g、柴胡250g、酒大黃250g、白朮250g、制何首烏200g。
[0039]製法:黃蜀葵花、薑黃，乙醇加熱回流提取I小時,濾過,濾液回收乙醇,濃縮成稠膏；敗醬草、粉萆蘚、虎杖、劉寄奴、柴胡、酒大黃、白朮、制何首烏八味，加水煎煮二次，每次I小時，合併煎液，加乙醇冷沉24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮；合併上述二種浸膏，加乳糖100g、糊精400g，混勻，乾燥，製成1000g，即得。
[0040]取複方黃葵顆粒5g，加甲醇10ml，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；取蘆丁、金絲桃苷對照品同時加入甲醇中，製成每Iml含蘆丁 0.lmg、金絲桃苷0.3mg的溶液，作為對照品溶液；另取除黃蜀葵花葯材的複方黃葵顆粒陰性樣品5g，力口甲醇10mL，置超聲波中處理20min充分溶解，濾過，取濾液作為陰性對照溶液。
[0041]吸取上述三種溶液各5 μ L，分別點於同一聚醯胺薄膜上，以70%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，熱風吹乾，置紫外光燈(365nm)下檢視。色譜圖如圖4，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點，陰性對照樣品無相應斑點，由此可判定所鑑別藥物製成品中含有黃蜀葵花葯材。
【權利要求】
1.一種黃蜀葵花葯材的鑑別方法，是以蘆丁、金絲桃苷和槲皮素為對照品，採用薄層色譜法進行鑑別，具體方法包括: 取黃蜀葵花葯材粉末0.1~0.5g，加Ch4—元醇10ml，充分溶解後，濾過，取濾液作為供試品溶液； 分別取蘆丁、金絲桃苷、槲皮素對照品，以Ch4—元醇製成每Iml含蘆丁0.05~0.1mg,金絲桃苷0.1~0.3mg、槲皮素0.05~0.1mg的溶液,作為蘆丁對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液和槲皮素對照品 溶液；或將蘆丁、金絲桃苷和槲皮素對照品同時溶於(:卜4一元醇中，製成每Iml含蘆丁 0.05~0.lmg、金絲桃苷0.1~0.3mg、槲皮素0.05~0.1mg的溶液,作為對照品溶液； 分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2~10 μ L，點於同一聚醯胺薄膜上，以60~75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，熱風吹乾，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與各對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
2.—種黃蜀葵花葯材的鑑別方法，是以蘆丁、金絲桃苷為對照品，採用薄層色譜法進行鑑別，具體方法包括: 取黃蜀葵花葯材粉末0.1~0.5g，或相當於0.1~0.5g黃蜀葵花葯材的含黃蜀葵花葯材製成品粉末，加C1~4 一元醇IOml，充分溶解後，濾過，取濾液作為供試品溶液； 分別取蘆丁、金絲桃苷對照品，以(:卜4 一元醇製成每Iml含蘆丁 0.05~0.lmg、金絲桃苷0.1~0.3mg的溶液，作為蘆丁對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液；或將蘆丁、金絲桃苷對照品同時溶於C1^4 一元醇中，製成每Iml含蘆丁 0.05~0.lmg、金絲桃苷0.1~0.3mg的溶液，作為對照品溶液； 分別吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2~10 μ L，點於同一聚醯胺薄膜上，以60~75%冰醋酸為展開劑，展距6cm，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，熱風吹乾，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與各對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
3.根據權利要求1或2所述的黃蜀葵花葯材的鑑別方法，其特徵是所述的充分溶解是將溶液置於超聲波中處理20min。
4.根據權利要求1或2所述的黃蜀葵花葯材的鑑別方法，其特徵是所述展開劑為70%冰醋酸。
【文檔編號】G01N30/90GK103487546SQ201310394319
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月3日 優先權日:2013年9月3日
【發明者】張愛榮, 王志敏, 賀婕, 金旭宇 申請人:王志敏