檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒及系統的製作方法

2023-10-10 03:20:39 3

本實用新型涉及生物檢測技術領域，尤其是涉及一種檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒及系統。

背景技術：

口蹄疫(Foot and Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一種高度接觸性傳染病，對易感的偶蹄動物具有嚴重的潛在經濟危害。口蹄疫病毒能夠感染豬、牛、羊等偶蹄獸引起急性、烈性、接觸性傳染病。其特徵是在口、舌、唇、鼻、蹄、乳房發生水泡，並潰爛形成爛斑。牲畜感染口蹄疫病毒後，會造成牲畜進食量下降，機體抵抗力和免疫力降低，容易繼發其他病毒性疾病和細菌性疾病，從而造成感染動物的生產性能下降，危害畜牧業正常生產和發展。世界動物衛生組織(OIE)將口蹄疫列為必須報告的動物傳染病，我國2008年修訂的《一、二、三類動物疫病病種明錄》將其列為一類動物疫病。

目前，口蹄疫病毒檢測主要以病原學檢測和血清學檢測為主，酶聯免疫吸附試驗、螢光標記試驗、螢光RT－PCR用於檢測豬口蹄疫病毒的抗體。

(1)酶聯免疫吸附試驗

利用抗原和抗體能與固相載體表面結合併能保持其免疫性，抗原或抗體與酶結合物後的標記物既能保持抗原或抗體的免疫活性，又能保持酶的活性，受檢物中的抗原或抗體與固相表面的抗體或抗原發生免疫反應並結合在固相表面，此抗原抗體複合物又能結合相應的酶標記物，洗滌除去未結合的酶標記物，加入酶反應底物，底物被酶催化為有色產物的過程。

(2)螢光標記試驗

利用螢光色素與標記物結合後，並不影響標記物的免疫活性，可與標本中特異性抗原或抗體特異性結合且這種結合較為牢固，用緩衝液洗滌時除去游離的螢光素標記標記物後，用螢光顯微鏡觀察的免疫學示蹤技術。

(3)動物實驗或雞胚接種實驗。

應用上述方法對口蹄疫病毒進行檢測時，存在耗時長，操作步驟繁瑣，容易發生交叉汙染，設備造價較高，很難普及應用，動物實驗成本較高等缺點。

相比之下，普通螢光定量PCR方法特異性好，檢測靈敏度高，但應用螢光定量PCR的方法進行檢測時，經常出現實驗中說明書閱讀不方便或說明書丟失的問題，同時，實驗中需要用到的無核酸移液槍槍頭需要提前進行去核酸處理，費時費力。

因此，開發一種操作簡便，省時省力，成本較低，便於操作人員閱讀說明書，且易普及應用的，用於檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒也日益成為研究的重點。

有鑑於此，特提出本實用新型。

技術實現要素：

本實用新型的目的在於提供一種檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，以緩解現有技術中存在的操作繁瑣，費時費力，實驗中說明書閱讀不方便的技術問題。

本實用新型提供的一種檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，包括：

盒體和盒蓋；

所述盒體內設有固定墊，所述固定墊上設有用於放置試劑瓶和槍頭盒的凹槽；

所述盒蓋內壁設有用於固定說明書的說明書固定裝置。

進一步地，所述固定墊為彈性材料固定墊，可拆卸地固定在所述盒體內部。

進一步地，所述試劑瓶包括瓶身和瓶蓋，所述瓶身上設有用於標記內部試劑的標籤，所述瓶蓋上也設有用於標記內部試劑的標籤。

進一步地，所述試劑瓶為內置陰性對照的陰性對照試劑瓶，內置陽性對照的陽性對照試劑瓶，內置反應液的反應液試劑瓶，內置引物探針的引物探針試劑瓶，內置酶的酶試劑瓶，內置無核酸水的無核酸水試劑瓶。

進一步地，所述引物探針試劑瓶為避光包裝。

進一步地，所述槍頭盒包括槍頭盒體和槍頭盒蓋，所述槍頭盒體內設有用於裝載移液槍槍頭的槍頭孔架。

進一步地，所述槍頭孔架上設有80－100個槍頭孔。

進一步地，所述槍頭孔內放置有10μl的無核酸移液槍槍頭。

進一步地，所述說明書固定裝置為插槽或透明插袋。

另外，本實用新型還提供了一種檢測口蹄疫病毒的系統，應用上述的螢光定量PCR試劑盒。

本實用新型提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，操作簡便，成本較低，內置用於放置移液槍槍頭的槍頭盒，可以避免實驗前對槍頭進行處理，省時省力，同時，盒蓋內壁設有的用於固定說明書的說明書固定裝置，可使說明書不易丟失，且便於操作人員閱讀說明書。

附圖說明

為了更清楚地說明本實用新型具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本實用新型的一些實施方式，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本實用新型實施例1提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒的固定墊結構示意圖；

圖2為本實用新型實施例1提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒的整體示意圖；

圖3為本實用新型實施例1提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒的內部構造示意圖；

圖4為本實用新型實施例1提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒的盒體示意圖。

圖標：1－盒體；2－盒蓋；3－固定墊；4－槍頭盒；41－槍頭盒體；42－槍頭盒蓋；43－槍頭孔架；51－陰性對照試劑瓶；52－陽性對照試劑瓶；53－反應液試劑瓶；54－引物探針試劑瓶；55－酶試劑瓶；56－無核酸水試劑瓶；6－說明書固定裝置。

具體實施方式

下面將結合附圖對本實用新型的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本實用新型一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本實用新型中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本實用新型保護的範圍。

在本實用新型的描述中，需要說明的是，術語「中心」、「上」、「下」、「左」、「右」、「豎直」、「水平」、「內」、「外」等指示的方位或位置關係為基於附圖所示的方位或位置關係，僅是為了便於描述本實用新型和簡化描述，而不是指示或暗示所指的裝置或元件必須具有特定的方位、以特定的方位構造和操作，因此不能理解為對本實用新型的限制。此外，術語「第一」、「第二」、「第三」僅用於描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性。

在本實用新型的描述中，需要說明的是，除非另有明確的規定和限定，術語「安裝」、「相連」、「連接」應做廣義理解，例如，可以是固定連接，也可以是可拆卸連接，或一體地連接；可以是機械連接，也可以是電連接；可以是直接相連，也可以通過中間媒介間接相連，可以是兩個元件內部的連通。對於本領域的普通技術人員而言，可以具體情況理解上述術語在本實用新型中的具體含義。

本實用新型提供了一種檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，包括：

盒體1和盒蓋2；

盒體1內設有固定墊3，固定墊3上設有用於放置試劑瓶和槍頭盒4的凹槽；

盒蓋2內壁設有用於固定說明書的說明書固定裝置6。

其中，盒體1與盒蓋2可以是鉸接的，也可以是相互獨立的。

在本實用新型中，固定墊3為彈性材料固定墊，可拆卸地固定在盒體1內部。

固定墊3為彈性材料，可以有效緩衝在螢光定量PCR試劑盒被移動的過程中產生的撞擊力。

在一個優選的實施方式中，固定墊3為海綿固定墊。

在另一個優選的實施方式中，固定墊3為泡沫固定墊。

在本實用新型中，試劑瓶包括瓶身和瓶蓋，瓶身上設有用於標記內部試劑的標籤，瓶蓋上也設有用於標記內部試劑的標籤。

在瓶身上設有用於標記內部試劑的標籤，便於在試劑瓶拿出試劑盒後進行不同試劑的區分，同時，在瓶蓋上也設有用於標記內部試劑的標籤，便於在試劑瓶放置在試劑盒內時，不用取出試劑瓶即可對裝有不同試劑的試劑瓶進行區分，便於操作。

在本實用新型中，試劑瓶為內置陰性對照的陰性對照試劑瓶51，內置陽性對照的陽性對照試劑瓶52，內置反應液的反應液試劑瓶53，內置引物探針的引物探針試劑瓶54，內置酶的酶試劑瓶55，內置無核酸水的無核酸水試劑瓶56。

其中，反應液試劑瓶53內的反應液為螢光定量PCR反應液。

引物探針試劑瓶54內的引物的核苷酸序列為：

上遊引物：5』－ACTGGGTTTTACAAACCTGTGA－3』；

下遊引物：5』－GCGAGTCCTGCCACGGA－3』。

引物探針試劑瓶54內的探針的核苷酸序列為：

探針：5』－TCCTTTGCAGCCGTGGGAC－3』。

探針的5』端螢光報告基團是FAM，3』端螢光淬滅基團是BHQ。

在本實用新型中，引物探針試劑瓶54為避光包裝。

在一個優選的實施方式中，引物探針試劑瓶54為棕色瓶。

在另一個優選的實施方式中，引物探針試劑瓶54外部設有錫紙包裹。

在本實用新型中，槍頭盒4包括槍頭盒體41和槍頭盒蓋42，槍頭盒體41內設有用於裝載移液槍槍頭的槍頭孔架43。

其中，槍頭盒體41與槍頭盒蓋42可以是鉸接的，也可以是相互獨立的。槍頭盒體41單獨配有槍頭盒蓋42，在盒蓋2打開的情況下，槍頭盒蓋42依然可以保證槍頭盒4內部不被核酸汙染，保證了本實用新型提供的螢光定量PCR試劑盒檢測結果的準確性。

在本實用新型中，槍頭孔架43上設有80－100個槍頭孔。

在一個優選的實施方式中，槍頭孔架43上設有90個槍頭孔。

在本實用新型中，槍頭孔內放置有10μl的無核酸移液槍槍頭。

在本實用新型中，說明書固定裝置6為插槽或透明插袋。

在實驗操作人員使用本實用新型提供的螢光定量PCR試劑盒時，將說明書放入盒蓋2內壁上的說明書固定裝置6內，在操作過程中方便閱讀，同時，可以避免說明書易丟失的問題。

本實用新型還提供了一種檢測口蹄疫病毒的系統，應用了上述的螢光定量PCR試劑盒。

本實用新型提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，操作簡便，成本較低，內置用於放置移液槍槍頭的槍頭盒4，可以避免實驗前對槍頭進行處理，省時省力，同時，盒蓋2內壁設有的用於固定說明書的說明書固定裝置6，可使說明書不易丟失，且便於操作人員閱讀說明書。

為了更清楚的理解本實用新型提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，現結合具體實施例，對本實用新型進行詳細介紹。

實施例1

如圖1和圖2所示，本實施例提供的一種檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，包括：

盒體1和盒蓋2；

盒體1內設有固定墊3，固定墊3上設有用於放置試劑瓶和槍頭盒4的凹槽；

盒蓋2內壁設有用於固定說明書的說明書固定裝置6。

在本實施例中，盒體1與盒蓋2為鉸接。

在本實施例中，說明書固定裝置6為插槽。

固定墊3為彈性材料固定墊，可拆卸地固定在盒體1內部。

在本實施例中，固定墊3為海綿固定墊。

在本實施例中，上述試劑瓶包括瓶身和瓶蓋，瓶身上設有用於標記內部試劑的標籤，瓶蓋上也設有用於標記內部試劑的標籤。

如圖3所示，試劑瓶為內置陰性對照的陰性對照試劑瓶51，內置陽性對照的陽性對照試劑瓶52，內置反應液的反應液試劑瓶53，內置引物探針的引物探針試劑瓶54，內置酶的酶試劑瓶55，內置無核酸水的無核酸水試劑瓶56。

在本實施例中，引物探針試劑瓶54為避光包裝。

在本實施例中，引物探針試劑瓶54為棕色瓶。

槍頭盒4包括槍頭盒體41和槍頭盒蓋42，槍頭盒體41內設有用於裝載移液槍槍頭的槍頭孔架43。

在本實施例中，槍頭孔架43上設有90個槍頭孔。

槍頭孔內放置有10μl的無核酸移液槍槍頭。

實施例2

本實施例提供的一種檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，包括：

盒體1和盒蓋2；

盒體1內設有固定墊3，固定墊3上設有用於放置試劑瓶和槍頭盒4的凹槽；

盒蓋2內壁設有用於固定說明書的說明書固定裝置6。

在本實施例中，盒體1與盒蓋2為相互獨立的。

在本實施例中，說明書固定裝置6為透明插袋。

固定墊3為彈性材料固定墊，可拆卸地固定在盒體1內部。

在本實施例中，固定墊3為泡沫固定墊。

在本實施例中，上述試劑瓶包括瓶身和瓶蓋，瓶身上設有用於標記內部試劑的標籤，瓶蓋上也設有用於標記內部試劑的標籤。

試劑瓶為內置陰性對照的陰性對照試劑瓶51，內置陽性對照的陽性對照試劑瓶52，內置反應液的反應液試劑瓶53，內置引物探針的引物探針試劑瓶54，內置酶的酶試劑瓶55，內置無核酸水的無核酸水試劑瓶56。

其中，引物探針試劑瓶54為避光包裝。

在本實施例中，引物探針試劑瓶54外部設有錫紙包裹。

槍頭盒4包括槍頭盒體41和槍頭盒蓋42，槍頭盒體41內設有用於裝載移液槍槍頭的槍頭孔架43。

在本實施例中，槍頭孔架43上設有80個槍頭孔。

槍頭孔內放置有10μl的無核酸移液槍槍頭。

在使用上述實施例1或實施例2提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒時，實驗操作人員首先打開盒蓋2，將試劑盒說明書固定於盒蓋2內壁的說明書固定裝置6上，分別從相應的試劑瓶中取2μl陰性對照，0.5μl酶，1.8μl引物探針，10μl反應液，以及應用試劑盒內無核酸槍頭吸取5.7μl無核酸水加入螢光定量PCR反應板中，作為陰性對照組；分別取2μl陽性對照，0.5μl酶，1.8μl引物探針，10μl反應液，以及應用試劑盒內無核酸槍頭吸取5.7μl無核酸水加入螢光定量PCR反應板中，作為陽性對照組；分別取2μl待測樣本，0.5μl酶，1.8μl引物探針，10μl反應液，以及應用試劑盒內無核酸槍頭吸取5.7μl無核酸水加入螢光定量PCR反應板中，作為實驗組。每個組設6個重複。之後，將螢光定量PCR反應板放於螢光定量PCR儀器中，設置反應條件為：45℃15min；95℃2min；95℃15s，60℃1min，40個循環；60℃設置採集螢光信號。待反應結束後，觀察實驗結果並依據以下判定規則進行判定：

1、陽性對照孔：CT值＜30並有明顯的擴增曲線；陰性對照孔：無CT值或者CT值＞37，線性為直線或者輕微斜線，無明顯擴增曲線。以上要求需同時滿足，否則本次實驗無效，需要重新進行。

2、CT值＜30並有明顯的擴增曲線，則判定為口蹄疫陽性。

3、CT值＞37並無擴增曲線，則判定為口蹄疫陰性。

4、30＜CT值＜37可疑，需重複檢測。若第二次檢測CT值仍為30－37並有明顯擴增曲線則判定為陽性，否則為陰性。

試驗結束後，將盒蓋2蓋合於盒體1上，如圖4所示，並將本實施例提供的螢光定量PCR試劑盒於－20℃保存。

實施例1或實施例2提供的檢測口蹄疫病毒的螢光定量PCR試劑盒，操作簡便，成本較低，內置用於放置移液槍槍頭的槍頭盒4，可以避免實驗前對槍頭進行處理，省時省力，同時，盒蓋2內壁設有的用於固定說明書的說明書固定裝置6，可使說明書不易丟失，且便於操作人員閱讀說明書。

實施例3

本實施例提供了一種檢測口蹄疫病毒的系統，包括螢光定量PCR儀，計算機，移液槍，以及本實用新型提供的螢光定量PCR試劑盒。

使用本實施例提供的檢測口蹄疫病毒的系統檢測口蹄疫病毒，在同一實驗地點即可完成口蹄疫病毒的檢測，操作方便，同時可以避免試劑及待測樣本在移動過程中被汙染，減少誤差，提高檢測的準確性。

最後應說明的是：以上各實施例僅用以說明本實用新型的技術方案，而非對其限制；儘管參照前述各實施例對本實用新型進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術特徵進行等同替換；而這些修改或者替換，並不使相應技術方案的本質脫離本實用新型各實施例技術方案的範圍。