一種隱性白色卷羽麒麟雞的培育方法與流程
2023-10-31 14:53:37
本發明屬於動物育種技術領域，具體地，涉及一種隱性白色卷羽麒麟雞(白菊雞)的培育方法。
背景技術：
國內隱性白羽雞主要是引入品種，成本高，地方隱性白羽品種較少，多數隱性白羽雞品系存在著羽毛黑色素擴散基因、銀色羽基因、與橫斑羽基因等修飾基因，影響雜交後代白羽的隱性率，因此有必要選育出國內純種隱性白羽雞種。
麒麟雞又名捲毛雞、翻毛雞，是粵西地區的地方優質雞種，具有很好的肉用性能，有治胃病、風溼雜症及婦科病的功效，還具有觀賞價值，其全身羽毛向外翻卷，部分皮膚裸露，能很好的適應夏季持續高溫高溼的環境。卷羽雞羽毛的羽軸向身體外彎曲，羽小枝間不能閉合，有鉤羽小枝和無鉤羽小枝不能與相鄰羽小枝相勾連，不能形成閉合羽片，羽毛結構散熱性好，因此對炎熱的環境適應性強。麒麟雞主要以黃羽為主，白羽數量較少。目前純種隱性白卷羽麒麟雞還未見報導，若能成功培育出純種的隱性白色卷羽雞，將會為國內純種隱性白羽雞的選育做出巨大貢獻。
技術實現要素：
本發明所要解決的技術問題是克服現有技術中隱性白羽雞育種的缺陷和不足，提供一種隱性白色卷羽麒麟雞的培育方法。
本發明的目的是提供一種隱性白色卷羽麒麟雞的培育方法。
本發明的上述目的是通過以下技術方案給予實現的。
一種隱性白色卷羽麒麟雞的培育方法，包括如下步驟：
s1.從黃色卷羽麒麟雞群中選出白色卷羽公雞和白色卷羽母雞進行人工受精，得f1代；
s2.將f1代中白色卷羽公雞和白色卷羽母雞進行人工受精，得f2代；
s3.從f2代中選取白色卷羽母雞與f1代中白色卷羽公雞進行測交，得f3代；
s4.將f3代中白色卷羽雞自交四代後挑取若干只提取dna，用tyr基因等位基因引物進行pcr檢測，若擴增出345bp的單條帶，則成功培育得到純種隱性白色卷羽麒麟雞；
所述tyr基因等位基因引物序列如seqidno.1～seqidno.3所示。
其中，tyr基因等位基因是證明是否為隱性白性狀的重要基因。
優選地，所述人工受精、測交和自交均按公母1:6～12進行。
優選地，所述f1代出殼後戴套，進行疫苗免疫。
再優選地，所述疫苗免疫為1日齡頸部皮下注射馬立克氏疫苗，7日齡滴鼻點眼新支二聯苗，40日齡打新城疫1系疫苗。
優選地，所述各代雞在育雛階段平養，後期單體籠養。
優選地，所述pcr檢測反應體系為tyr基因等位基因引物各0.3μl，2×taq-neopcrmastermix10μl，超純水8.1μl，模板1μl，共20μl。
優選地，所述pcr檢測反應程序為94℃預變性2min，94℃變性30s，61℃退火1min，72℃延伸1min，共34個循環，72℃終延伸5min。
與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：
(1)本發明所述方法可以選育出純種隱性白色卷羽麒麟雞；
(2)本發明所述方法培育得到的純種隱性白色卷羽麒麟雞生長速度快、肉質好、抗熱應激強，為國內純種隱性白羽雞品種選育提供了很好的材料。
附圖說明
圖1為本發明親本及後代圖片；其中a為黃色卷羽麒麟雞中挑出的白色卷羽公雞，b為培育好的隱性白色卷羽麒麟育成雞，c為黃色卷羽麒麟雞中挑出的白色卷羽母雞。
圖2為本發明育成的隱性白色卷羽麒麟雞與貴妃雞雜交後代；其中a為雜交後代公雞，b為雜交後代母雞。
圖3為本發明雞血液dna提取的瓊脂糖凝膠電泳檢測圖。
圖4為本發明隱性白羽麒麟雞與貴妃雞雜交後代tyr基因等位基因pcr擴增電泳檢測圖；其中，m為2,000mark，1、2為白色卷羽麒麟雞與貴妃雞雜交f1代cc型，3為白色卷羽麒麟雞cc型，4為貴妃雞cc型。
具體實施方式
下面結合說明書附圖和具體實施例對本發明作出進一步地詳細闡述，所述實施例只用於解釋本發明，並非用於限定本發明的範圍。下述實施例中所使用的試驗方法如無特殊說明，均為常規方法；所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，為可從商業途徑得到的試劑和材料。
實施例1
一種隱性白色卷羽麒麟雞(隱性白卷羽雞)的培育技術
1、培育步驟
s1.從黃色卷羽麒麟雞群體中發現並選出羽色為白色卷羽的公雞和母雞進行人工授精(公母比例按1:6～12)，得f1代；f1代出殼後戴翅號，進行疫苗免疫：1日齡頸部皮下注射馬立克氏疫苗，7日齡滴鼻點眼新支二聯苗，40日齡打新城疫1系疫苗；
s2.選擇f1代中白色卷羽麒麟雞的公雞和母雞再進行人工授精，得到f2代；
s3.從f2代中選取白色卷羽母雞與f1代中白色卷羽公雞進行測交，得f3代；
s4.將f3代中白色卷羽雞自交四代後隨機挑取若干只公母雞，採集血液並提取dna，用tyr基因等位基因引物進行pcr擴增電泳檢測，若擴增產物為純合345bp的單條帶，證明成功選育純種隱性白色卷羽麒麟雞，如圖1所示。
同時，將步驟s4選育出的白色卷羽麒麟雞與貴妃雞測交，後代均為有色半卷羽，如圖2所示，進一步證實步驟s4選育得到了純種隱性白色卷羽麒麟雞；然後隨機挑取若干只雜交後代進行tyr基因等位基因pcr檢測。
上述分子檢測的具體步驟為：隨機挑選白羽麒麟雞公母各30隻、貴妃雞各10隻、白色卷羽麒麟雞與貴妃雞正反交f1代100隻，翅靜脈採血，acd抗凝(檸檬酸鈉1.32g，檸檬酸0.48g，葡萄糖1.47g，加水100ml高壓備用)，用成都福際試劑盒提取dna，dna提取結果如圖2所示，說明dna質量良好可以進行後續試驗，將提取的dna進行pcr擴增或-20℃保存備用。
pcr檢測所需引物由上海生工合成，所述引物序列如下所示：
引物a：5'-cctctggctctatttgactacacagt-3'；
引物b：5'-caaaaccataaatagcactggaaatag-3'；
引物c：5'-ttgagatactggaggtctttagaaatg-3'。
pcr擴增體系為各引物0.3μl，2×taq-neopcrmastermix10μl，超純水8.1μl，模板1μl，共20μl。
pcr擴增程序為94℃預變性2min，94℃變性30s，61℃退火1min，72℃延伸1min，共34個循環，再72℃終延伸5min；pcr擴增產物經1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測或4℃保存備用。
pcr產物電泳結果如圖4所示：白色卷羽麒麟雞僅有一條345bp的條帶，為隱性純合子，用cc表示，其羽色均表現為白色；白色卷羽麒麟雞和貴妃雞雜交後代有345bp和481bp兩條帶，為隱性白雜合子，用cc表示，其羽毛表現為有色羽；貴妃雞電泳擴增結果為僅有一條481bp的單一條帶，為野生型純合子，用cc表示，羽毛表現為有色羽。
從上述結果可以看出，通過本發明方法得到的白色卷羽麒麟雞為隱性白。
2、隱性白色卷羽麒麟雞性能測定
將培育得到的純種隱性白色卷羽麒麟雞的生長性狀及血液生理生化指標和屠宰性能進行測定，結果如表1～4所示。
表116周齡(112日齡)隱性白色卷羽麒麟雞體尺測定結果
註：同行數據上標※※表示公母之間差異極顯著(p<0.01)，同行數據上標※間表示公母間差異顯著(p<0.05)。
從表1的16周齡(112日齡)隱性白色卷羽麒麟雞體尺的測定結果可以看出，隱性白色卷羽麒麟雞公母間在各項指標中的差異都表現出公雞顯著大於母雞。
表216周齡隱性白色卷羽麒麟雞的血液生理指標測定結果
註：同行數據上標※※表示公母之間差異極顯著(p<0.01)，同行數據上標※間表示公母間差異顯著(p<0.05)。
從表2所示的16周齡樣品的血液中所測定的生理指標可以看出，平均紅細胞血紅蛋白含量和血小板含量兩個指標差異極顯著和顯著。公雞的平均紅細胞血紅蛋白(mch)極顯著高於母雞(p<0.01)，公雞血小板含量顯著高於母雞(p0.05)。這兩組數據所測的指標值變異範圍比較小，即變異係數均小於30％。
表316周齡隱性白色卷羽麒麟雞血液生化指標測定結果
註：同行數據中上標※※表示公母之間差異極顯著(p<0.01)，同行數據上標※表示公母間差異顯著(p<0.05)。
從表3所示的16周齡白羽麒麟雞血液所測定的血液生化指標可以看出，公、母雞的總膽固醇(chol)、肌酸激酶(ck)兩個指標的差異都極顯著(p<0.01)，且母雞高於公雞。公、母雞的γ-穀氨酸醯基轉移酶(γ-gt)、甘油三酯(tg)、肌酸激酶同工酶(ck-mb)、a-羥丁酸脫氫酶(a-hbdh)等四個指標的差異都顯著(p<0.05)，且母雞高於公雞(p<0.05)。公、母雞的鹼性磷酸酶(alp)的指標值分別為298.03u/l、244.06u/l，且公雞顯著高於母雞。這兩組數據所測的指標的變異係數只有白麒麟母雞的甘油三脂(tg)大於30％，其他變異的指標值均小於30％，其所測的指標值變異範圍比較小。表3和表4的這些血液生理生化指標可以作為隱性白色卷羽雞的生理指標特性。
就屠宰性能而言，本實施例中隱性白色卷羽麒麟雞150日齡公雞平均體重達1913.33g，母雞平均體重達1745.67g，各項指標：屠體重、半淨膛重、全淨膛重、腹脂重、胸肌重、腿肌重、雞胃重、心重、肝重、翅膀重、肌間脂肪寬和皮下脂肪厚如表4所示，表現出很好的屠宰性。
表4150日齡隱性白色卷羽麒麟雞的屠宰性能測定
另外，本發明培育得到的隱性白色卷羽麒麟雞在廣東炎熱夏季飼養過程中，和同等飼養條件下其他片羽雞品種相比，耐熱能力強，表現為隱性白色卷羽麒麟雞極少張口呼吸，且沒有出現病症，可見該品種雞的抗熱應激性能好。
而且，本發明的雞品種因其獨特的外貌特徵，具有很好的觀賞價值。
本發明培育技術得到的隱性白色卷羽麒麟雞受到當地養殖戶的歡迎，群體已經逐漸擴大，具有良好的經濟效益。
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廣東海洋大學
一種隱性白色卷羽麒麟雞的培育方法
2017
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patentinversion3.3
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dna
人工序列
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