新型麥芽寡糖基海藻糖合成酶和麥芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生產中的應用的製作方法

2023-10-19 09:41:52 1

專利名稱：新型麥芽寡糖基海藻糖合成酶和麥芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生產中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於基因工程和酶工程領域，具體涉及具有較高最適反應溫度和熱穩定性、較低最適PH的麥芽寡糖基海藻糖合成酶和麥芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生產中的應用。
背景技術：
海藻糖(Trehalose)是一種由兩個葡萄糖分子通過半縮醛羥基以α _1，1糖苷鍵結合的非還原性糖，分子式為C12H22O11,相對分子量為378.33。其結構式如式I所示:
權利要求
1.麥芽寡糖基海藻糖合成酶和麥芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生產中的應用，其特徵是:所述麥芽寡糖基海藻糖合成酶具有如SEQ ID NO:1所示的胺基酸序列；所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶具有如SEQ ID N0:3所示的胺基酸序列。
2.一種海藻糖的生產方法，其特徵是:以澱粉為底物，通過雙酶轉化法製備海藻糖，所用酶包括麥芽寡糖基海藻糖合成酶和麥芽寡糖基海藻糖水解酶； 所述麥芽寡糖基海藻糖合成酶具有如SEQ ID NO:1所示的胺基酸序列； 所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶具有如SEQ ID N0:3所示的胺基酸序列。
3.根據權利要求1或2所述的生產方法，其特徵是:麥芽寡糖基海藻糖合成酶具有以下特性: (1)最適作用溫度 當pH 5.5溫育60 min，最適作用溫度60°C ； (2)最適作用pH 當60°C溫育60 min,最適pH為5.5 ; (3)熱穩定性 當於pH 5.5溫浴60 min,在高達65°C下穩定； (4)pH穩定性當於60°C溫浴60 min,在pH 4.8-6.3下穩定。
4.根據權利要求1或2所述的生產方法，其特徵是:麥芽寡糖基海藻糖水解酶具有以下特性: (1)最適作用溫度 當pH 5.3溫育60 min，最適作用溫度60°C ； (2)最適作用pH 當60°C溫育60 min,最適pH為5.3 ; (3)熱穩定性 當於pH 5.3溫浴60 min,在高達70°C下穩定； (4)pH穩定性當於60°C溫浴60 min,在pH 4.5-6.5下穩定。
5.根據權利要求1或2所述的生產方法，其特徵是:麥芽寡糖基海藻糖合成酶由基因表達而得，所述基因含有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列或其互補核苷酸序列，或者含有由SEQ ID NO:2因遺傳密碼子的兼併性而取代一個或多個鹼基所形成的核苷酸序列或其互補核苷酸序列；麥芽寡糖基海藻糖水解酶由基因表達而得，所述基因含有SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列或其互補核苷酸序列，或者含有由SEQ ID N0:4因遺傳密碼子的兼併性而取代一個或多個鹼基所形成的核苷酸序列或其互補核苷酸序列。
6.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵是包括以下步驟:配製澱粉乳，調節pH為5.3-5.8，向其中加入高溫澱粉酶進行反應，得到DE值為6-10的澱粉水解物後，高溫滅酶；向澱粉水解物中加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶、麥芽寡糖基海藻糖水解酶和普魯蘭酶，在50-65°C、pH5.3-5.5的條件下反應25-35 h，製得海藻糖。
7.根據權利要求6所述的製備方法，其特徵是:澱粉乳的質量濃度為20-35%。
8.根據權利要求6所述的製備方法，其特徵是:每升澱粉乳中加入0.2-0.5 ml的高溫澱粉酶；每升澱粉水解物中加入100-300 U麥芽寡糖基海藻糖合成酶、300-900 U水解酶，·0.2-1.0 mL普魯蘭酶。
9.根據權利要求6或8所述的製備方法，其特徵是:高溫澱粉酶在90-10(TC下對澱粉進行酶解；高溫澱粉酶的酶解時間為20-30 min ;酶解後在132°C下滅酶1_10 min。
10.根據權利要求6、7或8所述的製備方法，其特徵是:海藻糖的轉化率為·76.5-85.4%ο
全文摘要
本發明公開了新型麥芽寡糖基海藻糖合成酶和麥芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生產中的應用，所述麥芽寡糖基海藻糖合成酶具有如SEQIDNO:1所示的胺基酸序列；所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶具有如SEQIDNO:3所示的胺基酸序列。本發明中麥芽寡糖基海藻糖合成酶和麥芽寡糖基海藻糖水解酶具有較高的最適反應溫度和熱穩定性，具有較低的最適pH，降低了染菌風險，提高了生產的穩定性，顯著提高了其和普魯蘭酶聯合作用還原性澱粉水解物生產海藻糖的效率，降低了海藻糖成本，為海藻糖在醫藥、食品和化妝領域的廣泛應用奠定堅實的基礎。
文檔編號C12P19/24GK103205475SQ201310128939
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月15日 優先權日2013年4月15日
發明者張全景, 付吉明, 劉敏, 陳平平, 莊禕, 鄭秀寧, 王喬隆, 李慧君 申請人:山東天力藥業有限公司