前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法和相關檢測探針及試劑盒的製作方法
2023-04-30 16:50:56
專利名稱:前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法和相關檢測探針及試劑盒的製作方法
技術領域:
本發明涉及疾病相關基因檢測技術領域,更具體地,涉及前列腺癌相關融合基因檢測技術領域,特別是指一種前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法和相關檢測探針及試劑盒。
背景技術:
Ilr歹(prostatic carcinoma, prostatic cancer, Pea) ^^ ^ ' '] 的惡性腫瘤。在北美地區,前列腺癌的發病率僅次於皮膚癌,每6個美國男性中就有1人會患前列腺癌。前列腺癌的死亡率僅次於肺癌,每36個美國男性中就有1人會死於前列腺癌。 在2010年,已報導了 217,730例前列腺癌病例,32,050例死亡病例。前列腺癌發病率隨年齡增高,在50歲人群中,發病率約為2. 14%,在70歲人群中,發病率上升到8. 02%。我國近年來由於人口老齡化,發病率也開始增加。目前前列腺癌的診斷主要依靠三種手段PSA篩查,直腸指檢及經直腸B超引導下前列腺穿刺活檢。PSA篩查目前應用最廣泛,但特異性較低。PSA> lOng/mL時,漏診率在 50%以上;PSA為4 lOng/mL,結合穿刺活檢僅能發現20% 40%的前列腺癌患者;PSA < 4ng/mL仍有20% 30%患者漏診。PSA篩查不能有效區分早期前列腺癌和良性前列腺增生,尤其當PSA為2 lOng/mL時,更加無法判斷。經直腸超聲引導下前列腺穿刺活檢, 是診斷前列腺癌的主要方法。而早期前列腺癌表現主要為組織結構的改變,細胞病理學改變不典型,其診斷易受病理檢查者主觀經驗的影響。2005年發現在大多數前列腺癌組織中,TMPRSS2與ETS相關基因(ERG,ETVl及 ETV4)之間可以發生融合,表明非隨機的基因重排可以發生在上皮來源的癌症中,被認為是人類惡性腫瘤中最多見的基因變異形式。目前,檢測融合基因主要有RT-PCR和FISH兩種方法。RT-PCR對樣本和技術要求較高,部分甲醛固定、石蠟包埋標本因RNA降解影響結果的可靠性,不能直接顯示標本組織形態學的關係。研究表明,在前列腺癌患者直腸指檢後尿標本中,採取RT-PCR檢測 TMPRSS2-ERG融合基因,雖然特異性可達93%,但敏感性僅為32% 42%。FISH為分子生物學(探針)與細胞遺傳學(染色體)相結合,檢測染色體異常的新技術,開闢了間期細胞遺傳學研究的新領域。FISH作為一種快速、準確、直觀的分子遺傳學技術廣泛應用於膀胱癌、乳腺癌、血液系統疾病診斷及預後判斷中,但對於應用FISH技術進行前列腺癌相關融合基因的檢測,國內外尚不多見。
發明內容
本發明的主要目的就是針對以上存在的問題與不足,提供一種前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法和相關檢測探針及試劑盒,該檢測方法設計巧妙,操作簡單,特異性和敏感性均能大幅提高,可以快速、準確、直觀檢測出前列腺癌相關融合基因,檢測結果準確CN 102533945 A
可靠,從而可作為醫師診斷前列腺癌的參考依據,適於大規模推廣應用。為了實現上述目的,在本發明的第一方面,提供了一種前列腺癌相關融合基因 Fish檢測方法,其特點是,對前列腺癌組織石蠟切片進行常規預處理,然後採用雙色融合探針進行原位雜交,根據檢測到的螢光信號判斷是否存在所述前列腺癌相關融合基因。較佳地,所述雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針,其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列, ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列,ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列,ETV4為 SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。更佳地,所述TMPRSS2採用Cy3標記,所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均採用Cy2 標記。在本發明的第二方面,提供了一種用於上述的前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法的雙色融合探針,其特點是,所述雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、 TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針,其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1 所示的核苷酸序列,ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列,ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列,ETV4為SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。較佳地,所述TMPRSS2採用Cy3標記,所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均採用Cy2 標記。在本發明的第三方面,提供了一種前列腺癌相關融合基因Fish檢測試劑盒,其特點是,包括雙色融合探針容器,所述雙色融合探針容器內具有TMPRSS2/ERG雙色融合探針、 TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針,其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1 所示的核苷酸序列,ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列,ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列,ETV4為SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。較佳地,所述I1PRSS2採用Cy3標記,所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均採用Cy2標記。本發明的有益效果在於本發明的前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法通過對前列腺癌組織石蠟切片進行常規預處理,然後採用雙色融合探針進行原位雜交,根據檢測到的螢光信號判斷是否存在所述前列腺癌相關融合基因,設計巧妙,操作簡單,特異性和敏感性均能大幅提高,可以快速、準確、直觀檢測出前列腺癌相關融合基因,檢測結果準確可靠,從而可作為醫師診斷前列腺癌的參考依據,適於大規模推廣應用。
具體實施例方式為更好的理解本發明的內容,下面結合具體實施例作進一步說明。下列具體實施例採用的試劑、儀器、耗材和步驟具體如下1 試劑1.1DNA 探針TMPRSS2/ERG, TMPRSS2/ETV1, TMPRSS2/ETV4 雙色融合探針。TMRPSS2 (Homo sapiens transmembrane protease, serine 2)用 Cy3 標記,產生紅色信號。ERG(Homo sapiens v_ets erythroblastosis virus E26 oncogene homolog(avian) (ERG), transcript variant 2),ETVl (Homo sapiens ets variant 1 (ETVl)),ETV4(Homo sapiens ets variant gene 4 (EIAenhancer binding protein, ElAF) (ETV4))用 Cy2 標記,產生綠色信號。在_20°C下避光保存。溶解在含有硫酸葡聚糖,去離子甲醯胺和SSC的緩衝液中。
權利要求
1.一種前列腺癌相關融合基因FiSh檢測方法,其特徵在於,對前列腺癌組織石蠟切片進行常規預處理,然後採用雙色融合探針進行原位雜交,根據檢測到的螢光信號判斷是否存在所述前列腺癌相關融合基因。
2.根據權利要求1所述的前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法,其特徵在於,所述雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針,其中TMPRSS2為SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列,ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列,ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列,ETV4為SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。
3.根據權利要求2所述的前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法,其特徵在於,所述 TMPRSS2採用Cy3標記,所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均採用Cy2標記。
4.一種用於根據權利要求1所述的前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法的雙色融合探針,其特徵在於,所述雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針,其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列, ERG為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列,ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列,ETV4為 SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。
5.根據權利要求4所述的雙色融合探針,其特徵在於,所述TMPRSS2採用Cy3標記,所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均採用Cy2標記。
6.一種前列腺癌相關融合基因Fish檢測試劑盒,其特徵在於,包括雙色融合探針容器,所述雙色融合探針容器內具有TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針,其中TMPRSS2為SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列,ERG 為SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列,ETVl為SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列,ETV4為SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。
7.根據權利要求6所述的雙色融合探針,其特徵在於,所述TMPRSS2採用Cy3標記,所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均採用Cy2標記。
全文摘要
本發明涉及一種前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法,對前列腺癌組織石蠟切片進行常規預處理,然後採用雙色融合探針進行原位雜交,根據檢測到的螢光信號判斷是否存在前列腺癌相關融合基因。較佳地,雙色融合探針是TMPRSS2/ERG雙色融合探針、TMPRSS2/ETV1雙色融合探針或TMPRSS2/ETV4雙色融合探針,其中TMPRSS2、ERG、ETV1和ETV4分別為為SEQ ID NO1-4所示的核苷酸序列。還涉及相關的雙色融合探針及試劑盒。本發明的前列腺癌相關融合基因Fish檢測方法設計巧妙,操作簡單,特異性和敏感性均能大幅提高,可以快速、準確、直觀檢測出前列腺癌相關融合基因,檢測結果準確可靠,從而可作為醫師診斷前列腺癌的參考依據,適於大規模推廣應用。
文檔編號C12Q1/68GK102533945SQ20101058605
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月13日 優先權日2010年12月13日
發明者白小萍, 譚睿, 趙翊均 申請人:江蘇百帝生物科技有限公司