一種從纖毛婆婆納中分離純化總環烯醚萜苷的方法與流程
2023-11-11 14:51:07 3
本發明屬於一種從纖毛婆婆納中分離純化有效成分的方法，具體是分離純化總環烯醚萜苷的方法。
背景技術：
纖毛婆婆納(veronicaciliatafisch.)是玄參科草本植物長果婆婆納屬一年生草本植物，藏語學名「帕夏嘎」，廣泛用於藏藥處方中，目前分布於中國、蒙古、中亞和西伯利亞等地區，其全草可入藥，具有清熱解毒、祛風利溼等功效，主治肝炎、膽囊炎、風溼痛、蕁麻疹等。
研究表明纖毛婆婆納含有大量環烯醚萜苷類化合物，環烯醚萜苷具有廣泛的生物活性，如抗菌、抗炎、抗腫瘤、保肝利膽、抗氧化、對心血管系統和神經系統都有作用，其中，梓苷、verproside和胡黃連苷等在體外抗癌實驗對hepg2肝癌細胞展現出良好的抗癌活性，總環烯醚萜苷對ccl4致小鼠急性肝損傷和醋氨酚致小鼠肝損傷具有良好的保肝活性，因此製備高純度的環烯醚萜苷類成分顯得尤為重要。
目前只有少數文獻關於纖毛婆婆納環烯醚萜苷類成分的提取分離純化研究，但是由於其提取工藝路線複雜，不適合快速分離和製備出高含量的環烯醚萜苷類成分。
技術實現要素：
為了解決前述問題，本發明提供了一種新的纖毛婆婆納中環烯醚萜苷類化合物的分離純化方法，該方法操作簡便，能耗低，產品純度高，適於工業化生產。
本發明提供了一種從纖毛婆婆納中分離純化總環烯醚萜苷的方法，包括以下步驟：
(1)取纖毛婆婆納粉末，採用水飽和正丁醇提取，得提取液；
(2)水洗，減壓回收正丁醇相，得總環烯醚萜苷粗提物，溶於水，得水溶液；
(3)採用乙酸乙酯萃取，得萃取後的水溶液，減壓回收水相，得總環烯醚萜苷。
步驟(1)中，所述纖毛婆婆納為玄參科草本植物長果婆婆納屬纖毛婆婆納(veronicaciliatafisch.)的乾燥全草。
步驟(1)中，所述纖毛婆婆納乾燥全草經粉碎過40目篩。
步驟(1)中，所述水飽和正丁醇的用量為纖毛婆婆納粉末的6～10倍v/w。
步驟(1)中，提取的次數為3次，每次12～48h。
步驟(2)中，水洗採用的水的量為步驟(1)所得提取液的1/5～5倍；水洗的次數為2-5次。
步驟(3)中，乙酸乙酯的用量為步驟(2)所得水溶液的1/5～5倍；萃取的次數為2-8次。
本發明還提供了前述方法製備得到的總環烯醚萜苷。
其中，所述總環烯醚萜苷的純度不低於95％。優選地，其純度為95.26～98.07％。
在實驗中，當採用乙酸乙酯進行環烯醚萜苷提取時，效果不佳，雜質過多，色素含量高，需要進行多次水洗和乙酸乙酯萃取以去除雜質和色素，從而降低了總環烯醚萜苷的得率。而水飽和正丁醇不但能保證提取物雜質含量較少，而且對環烯醚萜苷提取效率高。因此，為達到上述目的，本發明中採用水飽和正丁醇進行提取。
本發明方法可以製備得到高純度的總環烯醚萜苷，並且製備方法的得率高，操作簡便，能耗低，適於工業化生產，應用前景優良。
顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。
具體實施方式
本實施例所用纖毛婆婆納產地為中國西藏，由西藏藏藥廠提供。藥品與試劑均購自成都科龍化工試劑廠。
總環烯醚萜苷的純度由uplc-pda檢測，色譜條件為：
色譜分析採用watersacquityuplctm系統，配備有柱溫箱、四元溶劑管理器、自動進樣器、pda檢測器。色譜柱為hsst3column(100×2.1mm,1.7μm)，柱溫為40℃，樣品溫度為25℃，流速為0.5ml/min，進樣量設置為1μl，pda檢測器波長設置為260nm，empower軟體用於數據分析。流動相a為0.1％甲酸加0.25mmol甲酸銨水溶液，b為乙腈，梯度設置為：0-0.8min，10％–25％b；0.8-2.4min，25％–35％b；2.4-2.8min，35％–95％b；2.8-4.8min，95％b；4.81-8min10％b。
實施例1：一種從纖毛婆婆納中分離純化總環烯醚萜苷的方法
1、製備方法
(1)取乾燥粉碎的纖毛婆婆納粉末(過40目篩的粉末)，水飽和正丁醇作為提取溶劑，料液比為1:8，室溫浸提，每次24h，一共三次，合併提取液，得水飽和正丁醇提取液；
(2)進行水洗，水與步驟(1)所得提取液的體積比為1:1，水洗次數為3次，減壓回收正丁醇相，得固體殘留物(為總環烯醚萜苷粗提物)，溶於80倍水(每1g固體殘留物溶於80ml得水中)中，得水溶液；
(3)進行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯與步驟(2)所得水溶液的體積比為1:1，萃取次數為5次，減壓回收水相，得到總環烯醚萜苷。
2、檢測
經過檢測，本發明方法的總環烯醚萜苷得率為4.5％，經uplc-pda分析總環烯醚萜苷的純度達98.07％。
實施例2：一種從纖毛婆婆納中分離純化總環烯醚萜苷的方法
1、製備方法
(1)取乾燥粉碎的纖毛婆婆納粉末(過40目篩的粉末)，水飽和正丁醇作為提取溶劑，料液比為1:6，室溫浸提，每次48h，一共三次，合併提取液，得水飽和正丁醇提取液；
(2)進行水洗，水與步驟(1)所得提取液的體積比為1:5，水洗次數為5次，減壓回收正丁醇相，得固體殘留物(為總環烯醚萜苷粗提物)，溶於80倍水(每1g固體殘留物溶於80ml得水中)中，得水溶液；
(3)進行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯與步驟(2)所得水溶液的體積比為1:5，萃取次數為8次，減壓回收水相，得到總環烯醚萜苷。
2、檢測
經過檢測，本發明方法的總環烯醚萜苷得率為5.3％，經uplc-pda分析純度達95.26％。
實施例3：一種從纖毛婆婆納中分離純化總環烯醚萜苷的方法
1、製備方法
(1)取乾燥粉碎的纖毛婆婆納粉末(過40目篩的粉末)，水飽和正丁醇作為提取溶劑，料液比為1:10，室溫浸提，每次12h，一共三次，合併提取液，得水飽和正丁醇提取液；
(2)進行水洗，水與步驟(1)所得提取液的體積比為5:1，水洗次數為2次，減壓回收正丁醇相，得固體殘留物(為總環烯醚萜苷粗提物)，溶於80倍水(每1g固體殘留物溶於80ml得水中)中，得水溶液；
(3)進行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯與步驟(2)所得水溶液的體積比為5:1，萃取次數為2次，減壓回收水相，得到總環烯醚萜苷。
2、檢測
經過檢測，本發明方法的總環烯醚萜苷得率為4.9％，經uplc-pda分析純度達96.74％。
對比例：一種從纖毛婆婆納中分離純化總環烯醚萜苷的方法
1、製備方法
(1)取乾燥粉碎的纖毛婆婆納粉末(過40目篩的粉末)，乙酸乙酯作為提取溶劑，料液比為1:8，室溫浸提，每次24h，一共三次，合併提取液，得水飽和正丁醇提取液；
(2)進行水洗，水與步驟(1)所得提取液的體積比為1:1，水洗次數為6次，減壓回收正丁醇相，得固體殘留物(為總環烯醚萜苷粗提物)，溶於80倍水(每1g固體殘留物溶於80ml得水中)中，得水溶液；
(3)進行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯與步驟(2)所得水溶液的體積比為1:1，萃取次數為10次，減壓回收水相，得到總環烯醚萜苷。
2、檢測
經過檢測，本發明方法的總環烯醚萜苷得率為2.8％。
綜上，本發明方法可以製備得到高純度的總環烯醚萜苷，並且得率高，操作簡便，能耗低，適於工業化生產，應用前景優良。