一種氟比洛芬酯脂質體及其製備和應用
2024-04-15 09:20:08
1.本發明屬於醫藥技術領域，涉及一種氟比洛芬酯脂質體及其製備和作為抗炎製劑的應用。
背景技術：
2.關節炎是一種複雜的疾病，分為骨關節炎和類風溼性關節炎兩大類，其特點是關節炎症和不可逆的損傷。如果不進行治療，疾病進展會導致日常生活活動完全喪失。據報導，世界上近1％的人口受到關節炎的影響。目前，關節內注射是治療關節炎最快速、最有效的方法，可以將不良反應降到最低。然而，關節內注射容易產生疼痛、身體損傷、局部感染、患者適應能力差以及產生大量醫用銳器廢物。因此，口服和透皮給藥已成為早期關節炎最廣泛使用的治療方法。但關節炎是局部而非全身性疾病，口服給藥也面臨生物利用度低、胃腸道損傷，甚至肝腎損傷。
3.透皮給藥系統(transdermal drug delivery system，tdds)是指以皮膚為給藥途徑，將藥物轉運至局部組織或全身血液循環而發生局部或全身作用的製劑。與常用的普通劑型相比，透皮給藥製劑可避免口服給藥時肝臟的首過效應及胃腸道對藥物的破壞。透皮給藥應用安全和方便、延長有效作用時間、能維持恆定的血藥濃度等，但角質層的屏障作用嚴重影響藥物的透皮吸收。隨著納米載體技術的發展，有多種納米載體用於遞送藥物分子並增加藥物的經皮滲透，如脂質納米粒、聚合物膠束和囊泡載體等，其中囊泡載體包括經典脂質體、傳遞體、醇質體、醇傳遞體、類脂囊泡和前體囊泡。在這些載體中，脂質體具有更多優勢，脂質體由磷脂、膽固醇、水合介質和抗氧化劑組成，具有親脂和親水兩個區域，能容納具有廣泛溶解度的藥物分子，其良好的變形性可使其輕易地滲透進入皮膚，在透皮領域具有廣闊的應用前景。然而，藥物的透皮給藥受限於角質層，難以通過皮膚達到治療目的。此外，化學促滲劑只能增加小分子藥物的透皮滲透性，大分子藥物和藥物載體難以通過皮膚進行治療。作為一種新的透皮劑型，微針可以刺穿皮膚從而越過皮膚屏障。
4.氟比洛芬酯是非甾體類抗炎藥，具有極強的抗炎鎮痛效果。因其目前劑型只有注射製劑，且多用於臨床鎮痛抗炎。多次給藥易產生毒副反應，且患者順應性差，因此被製成外用製劑產品用以治療關節炎。氟比洛芬酯目前市售製劑為氟比洛芬酯注射液，是以脂質微球作為載體進行藥物的遞送，該微球是水包油的一層膜結構，注射會引起很多毒副作用和不良反應，且會產生大量醫療尖銳廢物，患者順應性差，存在很大的缺陷。本發明為了解決上述問題，基於脂質體載體技術，分別製備了氟比洛芬酯脂質體懸浮液和氟比洛芬酯脂質體微針，從而提供透皮能力強且生物相容性好的氟比洛芬酯經皮製劑。
技術實現要素：
5.本發明的目的在於提供一種氟比洛芬酯脂質體及其製備和作為抗炎製劑的應用。
6.為實現上述目的，本發明採用技術方案為：
7.一種氟比洛芬酯脂質體，按重量份數計，氟比洛芬酯10-50份、磷脂300-600份、膽
固醇5-60份、抗氧化劑2-20份、水合介質500-1500份、無水乙醇500-1500份和二氯甲烷250-1000份。
8.優選，所述氟比洛芬酯脂質體，按重量份數計，氟比洛芬酯20-40份、磷脂300-400份、膽固醇10-20份、抗氧化劑5-10份、水合介質500-1000份、乙醇500-1000份和二氯甲烷250-500份。
9.所述的磷脂為大豆磷脂、大豆卵磷脂、卵磷脂、蛋黃卵磷脂、磷脂醯膽鹼、二油醯基卵磷脂、以及二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺中一種或幾種；
10.所述的抗氧化劑包括維生素e，α-生育酚、脫氧膽酸、脫氧膽酸鈉中的一種或幾種；優選為維生素e，當抗氧化劑為維生素e時，製劑更穩定，具有更小的刺激性；
11.所述水合介質包括pbs(磷酸二氫鉀與氫氧化鈉)、pbs(磷酸二氫鈉與氫氧化鈉)、pbs(磷酸二氫鈉與磷酸氫二鈉)、0.9％生理鹽水、去離子水中一種或幾種。優選為0.9％生理鹽水，這是由於實驗表明：當水合介質選用0.9％生理鹽水時製得的氟比洛芬酯脂質體較穩定、包封率較高、且藥物不會發生降解。
12.一種氟比洛芬酯脂質體的製備方法，採用被動載藥方式製備，脂質體的形成和藥物的裝載是同步完成的，包括如下步驟：
13.(1)採用被動載藥中的薄膜水合-超聲法製備脂質體製劑，按上述比例，將氟比洛芬酯、磷脂、膽固醇和抗氧化劑溶於無水乙醇和二氯甲烷中，35～45℃(旋蒸溫度優選為40℃，此時效率最快)減壓旋轉蒸發得到均勻薄膜，該溶劑體系較為安全，且對膜材的溶解性能更好，溶劑蒸發完全，安全性良好；加入水合介質溶液，經過旋轉水化和超聲後得到氟比洛芬酯脂質體初母液；
14.(2)將所得母液濾膜擠壓過濾，即得氟比洛芬酯脂質體。
15.所述步驟(1)中加入水合介質溶液，經過旋轉水化，水化的條件為室溫下30-60min，水化後於冰浴條件下超聲10-15min(功率設為300～750w)。
16.一種所述的氟比洛芬酯脂質體的應用，所述氟比洛芬酯脂質體在製備抗炎製劑中的應用。
17.所述氟比洛芬酯脂質體在製備抗炎微針製劑中的應用。將脂質體微針作為氟比洛芬酯的經皮給藥載體，與水溶液相比，本發明的脂質體微針可提高體外經皮滲透釋放量，較好的提高了藥物的包封率和穩定性。
18.一種氟比洛芬酯脂質體微針，包括微針形狀的基質和包埋於基質中母液，所述母液按重量份數計，權利要求1所述的氟比洛芬酯脂質體0.1-30份、透明質酸鈉10-50份、羥丙基-β-環糊精50-100份、pvp k90 100-300份和純淨水水100-1000份。
19.所述微針的製備方法，按上述比例將所述的氟比洛芬酯脂質體凍幹處理後和透明質酸、羥丙基-β-環糊精混合溶解後得到氟比洛芬酯脂質體微針基質母液，置於微針模具，離心後取出模具，將底層基質刮掉，再加入pvp k90作為基底，再經過乾燥、脫模即得所述氟比洛芬酯脂質體微針。
20.所述離心轉速為2500～3500rpm/min，離心時間為5～15min所述乾燥時間為12～24h，乾燥後自動脫模後得到氟比洛芬酯脂質體微針。
21.與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：
22.1.本發明針對脂質體中的包封率降低或藥物洩漏的問題，利用藥物氟比洛芬酯的
自身結構特點，將脂質體與被動載藥法相結合。脂質體的製備根據藥物性質和被裝載的機理不同，可分為被動載藥法與主動載藥法兩大類。傳統上，人們採用較多的是被動載藥法。該方法是將藥物溶於水相或有機相中，然後按適宜的方法製備含藥脂質體，該法適於脂溶性強的或水溶性強的藥物，所得脂質體具有較高包封率和穩定性，而主動載藥法則適合兩親性藥物的脂質體製備。
23.2.通過篩選處方，較好的提高了藥物的包封率和穩定性。且上述氟比洛芬酯脂質體的製備工藝簡單、條件溫和，得到的氟比洛芬酯脂質體平均粒徑為100-200nm，分布窄，在水介質中的分散穩定性好。通過該處方製備的氟比洛芬酯脂質體，可提高藥物的溶解度、體外經皮滲透的滯留量、較高的包封效率和穩定性。
24.3.本發明將微針與脂質體技術相結合製得的氟比洛芬酯微針平均長度為1000μm左右，微針間距為350μm左右，形狀規整，外觀整齊，可直接將氟比洛芬酯脂質體扎入皮內發揮作用，進一步發揮了脂質體的皮膚內貯留和緩釋作用，更好地發揮氟比洛芬酯的抗炎功效。另外，微針中含有的透明質酸是一類廣泛應用的抗炎材料，其生物相容性較好，也進一步提高了微針的生物相容性。
附圖說明
25.圖1a為實施例4製得的氟比洛芬酯脂質體的粒徑圖，圖1b為掃描電子顯微鏡(sem)圖；
26.圖2為實施例4製得的氟比洛芬酯脂質體與游離藥物體外釋放曲線與時間的關係圖；
27.圖3a為實施例6製得的氟比洛芬酯脂質體微針的光學顯微圖，圖3b為實施例6製得的氟比洛芬酯脂質體微針的掃描電鏡圖
28.圖4為實施例6製得的氟比洛芬酯脂質體微針體外累積經皮滲透量與時間的關係圖；
29.圖5為實施例6製得的氟比洛芬酯脂質體微針與氟比洛芬酯脂質體溶液在大鼠模型上的抗炎功效照片；
30.圖6a-b為實施例6製得的氟比洛芬酯脂質體微針與氟比洛芬酯脂質體溶液在大鼠模型上的足蹠厚度和踝關節腫脹變化曲線圖；
31.圖7為實施例6製得的氟比洛芬酯脂質體微針與氟比洛芬酯脂質體溶液組皮膚he染色圖片；
32.圖8a為實施例6製得的氟比洛芬酯脂質體微針的血液相容性數據，圖8b為實施例6製得的氟比洛芬酯脂質體微針的血液相容性的各組圖片。
具體實施方式
33.本發明結合附圖和實施例做進一步的說明。這些實施例的目的只是為了解釋而不是以任何方式限制本發明。
34.本發明利用被動載藥法製備氟比洛芬酯脂質體，同時搭配特定體系，進而提高了藥物的包封率和穩定性，本發明脂質體為雙層膜結構，具有更好的穩定性，且通過體外釋放和透皮遞送研究表明，該製劑具有ph響應性；進一步利用製備所得脂質體與微針結合，減小
了對皮膚的刺激性，提高了生物相容性，還能更好的發揮脂質體在皮膚內的貯留和緩釋作用，進一步提高了抗炎功效。
35.實施例1：
36.稱取磷脂300mg、氟比洛芬酯30mg、膽固醇10mg和維生素e5mg於茄形瓶中，加入10ml無水乙醇與5ml二氯甲烷使其溶解，40℃減壓旋轉蒸發得到均勻薄膜；再加入10ml0.9％生理鹽水旋轉水化1h，冰浴條件下探頭超聲10min(功率450w，工作3s，間歇2s)，間歇式可以避免因局部溫度過高，而對製劑產生影響。得到的載氟比洛芬酯脂質體再經過0.22μm的濾膜擠壓過濾，即得氟比洛芬酯脂質體，置於4℃條件下保存。經測定氟比洛芬酯脂質體的粒徑為145nm，包封率為75％。粒徑體如圖1a所示，氟比洛芬酯脂質體的形態圖如圖1b所示。該製劑4℃條件下放置30天，粒徑和pdi均穩定。
37.實施例2：
38.稱取磷脂400mg、氟比洛芬酯30mg、膽固醇10mg和維生素e5mg於茄形瓶中，加入10ml無水乙醇與5ml二氯甲烷使其溶解，40℃減壓旋轉蒸發得到均勻薄膜；再加入10ml0.9％生理鹽水旋轉水化1h，冰浴條件下探頭超聲10min(功率450w，工作3s，間歇2s)，得到載氟比洛芬酯脂質體再經過0.22μm的濾膜擠壓過濾，即得氟比洛芬酯脂質體，置於4℃條件下保存。經測定氟比洛芬酯脂質體的粒徑為165nm，包封率為75％。過多的膜材也沒有使包封效率增加，還會造成浪費。
39.實施例3：
40.(1)稱取磷脂300mg、氟比洛芬酯30mg、膽固醇10mg和維生素e5mg於茄形瓶中，加入10ml無水乙醇與5ml二氯甲烷使其溶解，40℃減壓旋轉蒸發得到均勻薄膜；再加入10ml0.9％生理鹽水旋轉水化1h，冰浴條件下探頭超聲10min(功率450w，工作3s，間歇2s)，得到載氟比洛芬酯脂質體再經過0.22μm的濾膜擠壓過濾，即得氟比洛芬酯脂質體，置於4℃條件下保存。經測定氟比洛芬酯脂質體的粒徑為145nm，包封率為75％。
41.(2)稱取透明質酸鈉35mg、羥丙基-β-環糊精70mg和氟比洛芬酯凍幹脂質體(採用冷凍乾燥箱製得)30mg於5ml燒杯中，加入1ml超純水使其溶解，再將得到的溶液混合均勻。
42.(3)移取適量步驟(2)製得的溶液於pdms微針模具中，使液體均勻鋪滿模具，再將模具置於50ml離心管(離心管中需放置一平面)中，於離心機中以3000rpm/min的轉速離心10min，取出模具，刮去多餘的液體。
43.(4)取0.3g pvp k90，加入1.0ml超純水使其溶解並混合均勻，將其填滿pdms微針模具中作為基底，待微針乾燥，自動脫模後取下，即得所述氟比洛芬酯脂質體微針。將得到的氟比洛芬酯脂質體微針通過光學顯微鏡觀察，得到的顯微圖和掃描電鏡圖如圖3所示，上述方法製得的氟比洛芬酯脂質體微針平均長度在1000μm左右，形狀規整，為四稜錐型，外觀整齊。將得到的氟比洛芬酯脂質體微針通過萬能試驗機測定機械性能，當移動距離為1.6mm時，每根針的機械強度為4.5n。
44.實施例4
45.(1)稱取磷脂300mg，氟比洛芬酯30mg和膽固醇10mg於茄形瓶中，加入10ml無水乙醇與5ml二氯甲烷使其溶解，40℃減壓旋轉蒸發得到均勻薄膜；再加入10ml0.9％生理鹽水旋轉水化1h，冰浴條件下探頭超聲10min(功率500w，工作3s，間歇2s)，得到載氟比洛芬酯脂質體再經過0.22μm的濾膜擠壓過濾，即得氟比洛芬酯脂質體，置於4℃條件下保存。經測定
氟比洛芬酯脂質體的粒徑為140nm，包封率為75％。
46.(2)稱取透明質酸鈉50mg、羥丙基-β-環糊精50mg和氟比洛芬酯凍幹脂質體30mg於5ml燒杯中，加入1ml超純水使其溶解，再將得到的溶液混合均勻。
47.(3)移取適量步驟(2)製得的溶液於pdms微針模具中，使液體均勻鋪滿模具，再將模具置於50ml離心管(離心管中需放置一平面)中，於離心機中以4000rpm/min的轉速離心5min，取出模具，刮去多餘的液體。
48.(4)取0.3gpvp k90，加入1.0ml超純水使其溶解並混合均勻，將其填滿pdms微針模具中作為基底，待微針乾燥，自動脫模後取下，即得所述氟比洛芬酯脂質體微針。將得到的氟比洛芬酯脂質體微針通過萬能試驗機測定機械性能，當移動距離為1.6mm時，每根針的機械強度為3.0n。
49.對比例1：
50.稱取磷脂200mg、氟比洛芬酯20mg、膽固醇20mg和維生素e5mg於茄形瓶中，加入10ml無水乙醇與5ml二氯甲烷使其溶解，40℃減壓旋轉蒸發得到均勻薄膜；再加入10ml0.9％生理鹽水旋轉水化1h，冰浴條件下探頭超聲20min(300w)，得到的載氟比洛芬酯脂質體再經過0.22μm的濾膜擠壓過濾，即得氟比洛芬酯脂質體，置於4℃條件下保存。經測定氟比洛芬酯脂質體的粒徑為105nm，包封率為50％。該製劑4℃條件下放置30天，粒徑和pdi均穩定。膜材的量較低且超聲時間較長，脂質體包封率處於較低水平，說明膜材的量及工藝參數在特定範圍內才能達到較高的包封率。
51.對比例2：
52.稱取磷脂200mg、氟比洛芬酯20mg、膽固醇10mg和維生素e5mg於茄形瓶中，加入10ml無水乙醇與5ml二氯甲烷使其溶解，40℃減壓旋轉蒸發得到均勻薄膜；再加入10ml0.9％生理鹽水旋轉水化1h，冰浴條件下探頭超聲10min(300w)，得到的載氟比洛芬酯脂質體再經過0.22μm的濾膜擠壓過濾，即得氟比洛芬酯脂質體，置於4℃條件下保存。經測定氟比洛芬酯脂質體的粒徑為165nm，包封率為55％。該製劑4℃條件下放置30天，粒徑和pdi均穩定。通過降低超聲時間，包封率有一定的上升，但由於膜材成分的量未在特定添加量下進行，因此包封率依舊處於較低水平。
53.對比例3：
54.稱取磷脂200mg、氟比洛芬酯20mg、膽固醇10mg和維生素e5mg於茄形瓶中，加入10ml無水乙醇與5ml二氯甲烷使其溶解，40℃減壓旋轉蒸發得到均勻薄膜；再加入10ml0.9％生理鹽水旋轉水化1h，冰浴條件下探頭超聲10min(450w)，得到的載氟比洛芬酯脂質體再經過0.22μm的濾膜擠壓過濾，即得氟比洛芬酯脂質體，置於4℃條件下保存。經測定氟比洛芬酯脂質體的粒徑為135nm，包封率為55％。該製劑4℃條件下放置30天，粒徑和pdi均穩定。增加了超聲功率，粒徑稍有降低，這對於製劑的穩定更為有利，但由於膜材的量未在特定添加量下進行，因此包封率依舊處於較低水平。
55.試驗例1：
56.將預先處理好的離體鼠皮置於franz擴散池上(角質層朝上，真皮層朝下)，實驗分為2組，分別為實施例1製備的氟比洛芬酯脂質體和實施例3製備的氟比洛芬酯脂質體微針組，接收介質為ph＝5.0和7.0的1％吐溫80-pbs溶液，轉速100rpm/min，接收液溫度為(37
±
0.5)℃。在2、4、6、8、10、12、24和48h取1ml接收液，將取得的液體利用13000rpm/min的轉速
dmns作為供試品，考察不同劑量的fa@lipo-dmns的血液相容性。當fa的劑量為100、200和300μg時，均沒有產生任何明顯的溶血(《5％)，這可能是由於微針矩陣會逐漸形成凝膠，與血細胞共沉澱到底部，表明微針矩陣可以保持血液細胞的結構完整性，顯示溶血毒性較小，材料安全性良好。結果表明，fa@lipo-dmns在正常或更高劑量下均具有良好的生物相容性，可以安全地用於進一步的研究。