一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法
2023-10-11 03:59:54 1
一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法
【專利摘要】本發明提供一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法，該方法包括採用超高壓液相色譜質譜聯用儀對參芪扶正注射液進行檢測，其中色譜條件包括：色譜柱：Agilent?Zorbax?Eclipse?Plus?C18，2.1mm×100mm，1.8μm；流動相：流動相A為0.1%甲酸水溶液，流動相B為0.1%甲酸乙腈溶液；採用梯度洗脫，洗脫程序如下：0~0.5min，流動相A為95%，流動相B為5%；0.5~10min，流動相A為95%~75%，流動相B為5%~25%；10~15min，流動相A為75%~45%，流動相B為25%~55%；15~18min，流動相A為45%~0%，流動相B為55%~100%；18~20min，流動相A為0%，流動相B為100%。
【專利說明】一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於藥物檢測【技術領域】，具體涉及一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法。
【背景技術】
[0002]中藥複方質量控制是制約中藥現代化發展的關鍵問題之一。中醫理論強調中藥的整體效應，重視在藥效上的協同作用，以中藥內一、二個有效成分作為定性、定量指標遠不能有效地控制和評價中藥的質量，更難以反映其安全性和有效性。中藥複方是兩味以上中藥組合應用於疾病治療的複方製劑，其質量控制的難度較單味中藥更甚。近年來，中藥指紋圖譜和特徵指紋圖譜已廣泛應用於質量控制，其中中藥特徵圖譜係指從中藥指紋圖譜中選取若干專屬性強的色譜峰或色譜峰組合組成特徵指紋圖譜，通過特徵指紋峰的有無及變化來監控中藥質量。在2010年版《中國藥典》中，特徵指紋圖譜已被應用於多種中藥中間體成分的質量控制中。
[0003]超高效液相色譜技術(UHPLC)是色譜技術的一大突破，以超高速度、超高靈敏度、超高分離度為優勢，利用更小的色譜柱填料技術得到了更快、更靈敏的檢測效果，在國外被廣泛利用於農殘、藥物代謝等方面，在國內的應用也越來越普遍。
[0004]色譜質譜聯用技術也是近年來發展迅速的一種高端分析技術，其中液相色譜質譜聯用技術(LC-MS)是繼氣相 色譜質譜聯用技術(GC-MS)廣泛應用後，逐漸被認識和接受的另一種聯用技術，但由於儀器價格昂貴，還未得到廣泛應用。液質聯用儀採用的離子化技術，不僅能解決一些無紫外吸收成分的檢測問題，如皂苷類成分，而且可以得到被離子化成分的精確分子量，對於成分及其結構的鑑別和確認提供了數據支撐。
[0005]參芪扶正注射液是中藥大輸液，具有益氣扶正的功效，用於肺脾氣虛引起的神疲乏力，少氣懶言，自汗眩暈以及肺癌、胃癌見上述證候者的輔助治療，為國家中藥保護品種，保護品種號:ZYB2072004073。其質量標準中，【指紋圖譜】項採用高效液相色譜-紫外檢測器檢測，有一定的局限性，如佔主要含量的皂苷類成分在紫外無吸收，通過增加高效液相色譜-蒸發光散射檢測器檢測，可以對皂苷類成分進行監控，但樣品前處理複雜，分析時間也很長，均不能全面、快捷地對其主要成分進行監控，有待改進。
【發明內容】
[0006]本發明所要解決的技術問題是彌補已有技術的不足，目的在於提供一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法。由此方法建立的指紋圖譜可以作為標準指紋圖譜，能夠應用於鑑別參芪扶正注射液。
[0007]本發明通過以下技術方案實現上述目的:
[0008]一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法，該方法包括採用超高壓液相色譜質譜聯用儀，例如超高效液相色譜-四極杆飛行時間質譜聯用儀對參芪扶正注射液進行檢測，其中色譜條件包括:[0009]色譜柱:AgilentZorbax Eclipse Plus C18, 2.1mmX 100mm, 1.8 μ m ;
[0010]流動相:流動相A為0.1%體積的甲酸水溶液，流動相B為0.1%體積的甲酸乙腈溶液；
[0011]採用梯度洗脫，洗脫程序如下，其中流動相比例均為體積百分比:
[0012](T0.5min,流動相A為95%，流動相B為5% ；
[0013]0.5?lOmin，流動相A為95%?75%，流動相B為5%?25% ；
[0014]l(Tl5min，流動相 A 為 75%?45%，流動相 B 為 25%?55% ；
[0015]15?18min，流動相A為45%?0%，流動相B為55%?100%。
[0016]18?20min，流動相A為0%，流動相B為100%。
[0017]優選地，所述色譜條件還包括:
[0018]流速為0.35ml/min ；
[0019]柱溫為40 O;
[0020]進樣量為5 μ I。
[0021]優選地,上述參苗扶正注射液指紋圖譜的建立方法中,質譜的條件包括:
[0022]離子源為ESI源，負離子方式檢測；
[0023]霧化氣壓力:35psig ；
[0024]乾燥氣溫度:350°C ；
[0025]乾燥氣流速:10L/min ;
[0026]毛細管電壓:3500V;
[0027]毛細管出口電壓:135V。
[0028]優選地，上述參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法還包括通過以下步驟製備對照品溶液:取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品、黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每ml各含毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.004mg、黃芪甲苷0.006mg的溶液，即得。
[0029]優選地，上述參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法還包括通過以下步驟製備供試品溶液:取參芪扶正注射液，用0.22um微孔濾膜濾過，即得。
[0030]優選地，上述參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法包括如下步驟:
[0031](I)製備對照品溶液:取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品、黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每ml各含毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.004mg、黃苗甲苷0.006mg的溶液，即得;
[0032](2)製備供試品溶液:取參芪扶正注射液，用0.22um微孔濾膜濾過，即得；
[0033](3)測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 μ I注入超高壓液相色譜質譜聯用儀，例如超高效液相色譜-四極杆飛行時間質譜聯用儀，根據以下條件進行測定，得到參芪扶正注射液指紋圖譜:
[0034]其中，色譜條件包括:
[0035]色譜柱:AgilentZorbax Eclipse Plus C18, 2.1mmX 100mm, 1.8 μ m ;
[0036]流動相:流動相A為0.1%體積的甲酸水溶液，流動相B為0.1%體積的甲酸乙腈溶液；
[0037]採用梯度洗脫，洗脫程序如下，其中流動相比例均為體積百分比:
[0038](T0.5min,流動相A為95%，流動相B為5% ；[0039]0.5?lOmin，流動相A為95%?75%，流動相B為5%?25% ；
[0040]l(Tl5min，流動相 A 為 75%?45%，流動相 B 為 25%?55% ；
[0041 ] 15?18min，流動相A為45%?0%，流動相B為55%?100%。
[0042]18?20min，流動相A為0%，流動相B為100%。
[0043]優選地，所述色譜條件還包括:
[0044]流速為0.35ml/min ；
[0045]柱溫為40°C ；
[0046]優選地，質譜的條件包括:
[0047]離子源為ESI源，負離子方式檢測；
[0048]霧化氣壓力:35psig ；
[0049]乾燥氣溫度:35(TC ；
[0050]乾燥氣流速:10L/min ;
[0051]毛細管電壓:3500V;
[0052]毛細管出口電壓:135V。
[0053]優選地,上述參苗扶正注射液指紋圖譜的建立方法還包括:對多個參苗扶正注射液指紋圖譜進行比較，選出共有特徵峰，得到參芪扶正注射液特徵指紋圖譜。
[0054]優選地，上述參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法中，所述參芪扶正注射液指紋圖譜或參芪扶正注射液特徵指紋圖譜中包含18個特徵峰，各特徵峰的保留時間如下:
[0055]峰I:7.lmin、峰 2:7.5min、峰 3:8.lmin、峰 4:8.6min、峰 5:9.2min、峰 6:
9.9min、峰 7:10.9min、峰 8:11.3min、峰 9:11.7min、峰 10:12.7min、峰 11: 13.4min、峰 12:
13.7min、峰 13:14.4min、峰 14: 14.8min、峰 15:15.lmin、峰 16: 15.5min、峰 17:15.9min、峰 18: 16.3min。
[0056]優選地，上述參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法中，所述參芪扶正注射液指紋圖譜或參芪扶正注射液特徵指紋圖譜中，以對照品黃芪甲苷為參照峰，計算各特徵峰的相對保留時間如下:
[0057]峰I:0.52、峰 2:0.54、峰 3:0.59、峰 4:0.62、峰 5:0.66、峰 6:0.72、峰 7:0.79、峰8:0.82、峰 9:0.85、峰 10:0.92、峰 11:0.97、峰 12:1.00、峰 13:1.04、峰 14:1.07、峰 15:1.10、峰 16:1.13、峰 17:1.16、峰 18:1.19。
[0058]優選地，在參芪扶正注射液指紋圖譜或參芪扶正注射液特徵指紋圖譜中，峰2和峰12分別為毛蕊異黃酮葡萄糖苷和黃芪甲苷；優選地，毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷峰面積與相應參照物峰面積比值在0.5?1.5之間。
[0059]本發明還提供一種參芪扶正注射液的鑑定方法，該方法包括將根據上述方法建立待測樣品指紋圖譜或特徵指紋圖譜與根據上述方法建立的標準指紋圖譜或特徵指紋圖進行比較，以鑑別真偽。
[0060]在一個優選的實施方案中，本發明提供一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法，該方法包括以下步驟:
[0061]製備毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷的混合對照品溶液，濃度分別為含毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.004mg/ml,含黃苗甲苷0.006mg/ml ；
[0062]取參芪扶正注射液濾過液作為供試品溶液；[0063]採用超高效液相色譜-四極杆飛行時間質譜聯用儀分析上述對照品溶液和供試品溶液，色譜條件為:
[0064]色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse Plus C18, 2.1mmX 100mm, 1.8 μ m ；
[0065]流動相為0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液，
[0066]梯度洗脫；
[0067]流速為0.35ml/min ；
[0068]柱溫為40°C ；
[0069]進樣5 μ I ;
[0070]得到參芪扶正注射液超高效液相色譜-四極杆飛行時間質譜指紋圖譜(總離子流圖);
[0071]所述梯度洗脫步驟為:0~0.5分鐘，流動相乙腈-水為5:95 ;0.5~10分鐘，流動相乙腈-水由5:95漸變為25:75 ; 10~15分鐘，流動相乙腈-水為25:75漸變為55:45 ；15~18分鐘，流動相乙腈-水為55:45漸變為100:0 ;18~20分鐘，流動相乙腈-水為100:0。
[0072]根據指紋圖譜(總離子流圖)及從指紋圖譜(總離子流圖)中提取得到的特徵指紋圖譜(提取離子流圖)，確定參芪扶正注射液特徵指紋圖譜，以此監控參芪扶正注射液的質量。
[0073]所述梯度洗脫的步驟也可用表1表示:
[0074]
【權利要求】
1.一種參芪扶正注射液指紋圖譜的建立方法，該方法包括採用超高壓液相色譜質譜聯用儀對參芪扶正注射液進行檢測，其中色譜條件包括:
色譜柱:Agilent Zorbax Eclipse Plus C18, 2.1mmX 100mm, 1.8 μ m ； 流動相:流動相A為0.1%體積的甲酸水溶液，流動相B為0.1%體積的甲酸乙腈溶液； 採用梯度洗脫，洗脫程序如下，其中流動相比例均為體積百分比體積: (T0.5min,流動相A為95%，流動相B為5% ； .0.5~lOmin，流動相A為95%~75%，流動相B為5%~25% ； .l(Tl5min，流動相A為75%~45%，流動相B為25%~55% ； .15~18min，流動相A為45%~0%，流動相B為55%~100% ； .18~20min，流動相A為0%，流動相B為100% ； 優選地，所述色譜條件還包括:
流速為 0.35ml/min ； 柱溫為40°C ； 進樣量為5 μ I。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，質譜的條件包括: 離子源為ESI源，負離子方式檢測； 霧化氣壓力:35psig ； 乾燥氣溫度:350°C ； 乾燥氣流速:10L/min ； 毛細管電壓:3500V ； 毛細管出口電壓:135V。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特徵在於，所述方法還包括通過以下步驟製備對照品溶液:取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品、黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每ml各含毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.004mg、黃芪甲苷0.006mg的溶液，即得。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特徵在於，所述方法還包括通過以下步驟製備供試品溶液:取參芪扶正注射液，用0.22um微孔濾膜濾過，即得。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其特徵在於，所述方法包括如下步驟: (1)製備對照品溶液:取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品、黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每ml各含毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.004mg、黃芪甲苷0.006mg的溶液，即得； (2)製備供試品溶液:取參芪扶正注射液，用0.22um微孔濾膜濾過，即得； (3)測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μI注入超高壓液相色譜質譜聯用儀，根據以下條件進行測定，得到參芪扶正注射液指紋圖譜: 其中，色譜條件包括:
色譜柱:Agilent Zorbax Eclipse Plus C18, 2.1mmX 100mm, 1.8 μ m ； 流動相:流動相A為0.1%體積甲酸水溶液，流動相B為0.1%體積的甲酸乙腈溶液； 採用梯度洗脫，洗脫程序如下，其中流動相比例均為體積百分比: (T0.5min,流動相A為95%，流動相B為5% ； .0.5~lOmin，流動相A為95%~75%，流動相B為5%~25% ； .l(Tl5min，流動相A為75%~45%，流動相B為25%~55% ；15~18min，流動相A為45%~0%，流動相B為55%~100% ； 18~20min，流動相A為0%，流動相B為100% ； 優選地，所述色譜條件還包括:
流速為 0.35ml/min ； 柱溫為40°C ； 優選地，質譜的條件包括: 離子源為ESI源，負離子方式檢測； 霧化氣壓力:35psig ； 乾燥氣溫度:350°C ； 乾燥氣流速:10L/min ； 毛細管電壓:3500V ； 毛細管出口電壓:135V。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其特徵在於，所述方法還包括:對多個參芪扶正注射液指紋圖譜進行比較，選出共有特徵峰，得到參芪扶正注射液特徵指紋圖譜。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其特徵在於，所述參芪扶正注射液指紋圖譜或參芪扶正注射液特徵指紋圖譜中包含18個特徵峰，各特徵峰的保留時間如下:
峰 1:7.lmin、峰 2:7.5min、峰 3:8.lmin、峰 4:8.6min、峰 5:9.2min、峰 6:9.9min、峰7:10.9min、峰 8:11.3min、峰 9:11.7min、峰 10: 12.7min、峰 11: 13.4min、峰 12: 13.7min、峰 13: 14.4min、峰 14: 14.8min、峰 15:15.lmin、峰 16: 15.5min、峰 17: 15.9min、峰 18:16.3min。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其特徵在於，所述參芪扶正注射液指紋圖譜或參芪扶正注射液特徵指紋圖譜中，以對照品黃芪甲苷為參照峰，計算各特徵峰的相對保留時間如下:
峰 1:0.52、峰 2:0.54、峰 3:0.59、峰 4:0.62、峰 5:0.66、峰 6:0.72、峰 7:0.79、峰8:0.82、峰 9:0.85、峰 10:0.92、峰 11:0.97、峰 12:1.00、峰 13:1.04、峰 14:1.07、峰 15:1.10、峰 16:1.13、峰 17:1.16、峰 18:1.19。
9.根據權利要求1至8中任一項所述的方法，其特徵在於，在參芪扶正注射液指紋圖譜或參芪扶正注射液特徵指紋圖譜中，峰2和峰12分別為毛蕊異黃酮葡萄糖苷和黃芪甲苷；優選地，毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷峰面積與相應參照物峰面積比值在0.5~1.5之間。
10.一種參芪扶正注射液的鑑定方法，該方法包括將根據權利要求1至9中任一項所述方法建立待測樣品指紋圖譜或特徵指紋圖譜與根據上述方法建立的標準指紋圖譜或特徵指紋圖進行比較。
【文檔編號】G01N30/88GK103808840SQ201210436493
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月2日 優先權日:2012年11月2日
【發明者】宋豔剛, 劉學華, 黃文華, 劉東來 申請人:麗珠集團利民製藥廠