一種提取分離高純度倒提壺酸的製備工藝的製作方法
2023-05-16 14:07:51
專利名稱：一種提取分離高純度倒提壺酸的製備工藝的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種採用大孔樹脂和高速逆流色譜法分離製備高純度倒提壺酸的工藝。
背景技術：
倒提壺ijOynoglossum amabile Stapf et Drumm)為紫草科琉璃草屬植物，多年生草本，分布於我國雲南、貴州、廣東、廣西、新疆等地。倒提壺全草入藥，其味苦，性涼，有清熱利溼、散瘀止血、止咳、鎮痛之功效，是我國布依族常用治療瘧疾、肝炎、痢疾、咳嗽、風溼性關節炎、支氣管炎、膀胱炎、尿道炎等症的藥物。現有技術對倒提壺中具體有效成分單體的研究不多，文獻報導倒提壺中倒提壺酸為五環三萜類化合物，具有較強的生物學活性，文獻 「民族藥倒提壺的抗炎活性成分研究」中根據三萜類化合物具有羧基是其具有抗癌活性的重要依據，而倒提壺酸具有三個羧基，推測應該其具有抗癌活性。因而其在製藥領域中具有廣闊的應用。倒提壺酸白色粉末(甲醇)，10%硫酸一乙醇110°C下顯藍色。分子量為532，分子
式為 C30H44O8。現有文獻採用水提、有機溶劑萃取、大孔樹脂吸附、矽膠柱柱層析分離等對倒提壺酸進行提取分離，由於生產周期長、製備量小、有機溶劑用量大，難以滿足現代生產需要，本發明克服了現有技術的不足，提供了一種提取分離高純度倒提壺酸的製備工藝。高速逆流色譜(HighSpeed Countercurrent Chromatography，簡稱 HSCCC)是國際上於上世紀80年代以來在液-液分配色譜基礎上發展起來的新型分離技術，其分離原理是利用樣品中各組分再兩相中分配係數不同，導致在螺旋柱中的移動速度不同，因而能使樣品各組分按分配係數的次序，依次得到分離。高速逆流色譜作為一種新型的分配技術，有許多優點是傳統液-固色譜無法比擬的，因而有很廣闊的應用前景。首先，它的流動相、固定相均為液體，不需要固體載體，避免了液-固色譜常會造成的固體載體對樣品的不可逆吸附，可以保證樣品再不損失任何一種組分的情況下得到分離，理論上樣品回收率相當高；其次，它的分離效率高，可以達到幾千個理論塔板數，尤其在天然產物組分分離提取中有較高的分離度，有的樣品經過一次分離就可以得到一個甚至多個單體，並且分離時間也短，一般是幾個小時即可完成一次分離；此外，它使用常規試劑，有廣泛的液-液分配體系可供選擇，體系更換方便、快捷；它的進樣量大，可以從毫克到克量級，進樣體積可達20ml以上，這對於樣品的純化製備顯示出驚人的優勢。
發明內容
本發明的目的是提供一種提取分離高純度倒提壺酸的製備工藝，所得產品倒提壺酸含量達98%以上。為實現上述目的，本發明採用以下技術方案一種提取分離高純度倒提壺酸的製備工藝，其特徵在於將倒提壺藥材粉碎過20目篩，加入5-10倍量提取溶劑，加熱至60-80°C，提取2-3次，每次1_3小時，合併提取液加入針劑類藥用活性炭除雜，濾出活性炭，減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入大孔樹脂柱吸附， 先用水洗，再用50-75%乙醇溶液洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，得到浸膏；將浸膏採用高速逆流色譜分離製備高純度倒提壺酸，所得產品倒提壺酸含量為98%以上。所述提取溶劑為0-50%的乙醇水溶液。所述活性炭用量為提取液總質量的1_5%0。所述大孔樹脂柱分離採用溼法裝柱。所述高速逆流色譜分配系統為庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水，四種組分的體積比為 (5-8):(3 10) (9-12):(1-5)。所述高速逆流色譜流動相的流速為2-5ml/min，主機轉速為750_850rpm。所述高速逆流色譜達到動態平衡後，將樣品溶液泵入色譜系統中，同時在出液端接紫外檢測器，在線檢測，與倒提壺酸標準圖譜對應，收集目標液體，蒸除溶劑，乾燥即得產
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ΡΠ O本發明採用活性炭出去脂溶性雜質；大孔樹脂吸附，處理量大；通過採用合理的溶劑體系、控制主機轉速和流動相流速，可得到高純度的倒提壺酸，整個工藝條件溫和、損失少。
具體實施例方式實施例1
將倒提壺藥材粉碎過20目篩，取1kg，加入5L的50%乙醇，加熱至60°C，提取2次，每次 3小時，合併提取液加入5g針劑類藥用活性炭除雜，濾出活性炭，減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入大孔樹脂柱吸附，先用水洗，再用50%乙醇溶液洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，得到浸膏；然後採用高速逆流色譜分離倒提壺浸膏，將庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5 7 11 4) 系統置於分液漏鬥中振搖，放置，分別取上相作為固定相，下相作為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿固定相，讓儀器以750r/min轉動，同時將流動相以aiil/min的流速泵入，待流動相從出液端流出且兩相在色譜中達到平衡後，將樣品溶液注入色譜系統中，出液端採用紫外監測進行連續檢測，與倒提壺酸的標準圖譜對應，收集倒提壺酸流出液，用旋轉蒸發儀除去溶劑，乾燥，得到0. 31g倒提壺酸，測定其含量為98. 6%。實施例2:
將倒提壺藥材粉碎過20目篩，取1kg，加入IOL的水，加熱至80 °C，提取3次，每次1 小時，合併提取液加入Ig針劑類藥用活性炭除雜，濾出活性炭，減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入大孔樹脂柱吸附，先用水洗，再用75%乙醇溶液洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，得到浸膏；然後採用高速逆流色譜分離倒提壺浸膏，將庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7:10:9:5) 系統置於分液漏鬥中振搖，放置，分別取上相作為固定相，下相作為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿固定相，讓儀器以800r/min轉動，同時將流動相以3. Oml/min的流速泵入，待流動相從出液端流出且兩相在色譜中達到平衡後，將樣品溶液注入色譜系統中，出液端採用紫外監測進行連續檢測，與倒提壺酸的標準圖譜對應，收集倒提壺酸流出液，用旋轉蒸發儀除去溶劑，乾燥，得到0. 48g倒提壺酸，經測定其含量為98. 5%。實施例3:將倒提壺藥材粉碎過20目篩，取^ig,加入12L的30%乙醇，加熱至70°C，提取2次， 每次2小時，合併提取液加入8g針劑類藥用活性炭除雜，濾出活性炭，減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入大孔樹脂柱吸附，先用水洗，再用60%乙醇溶液洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，得到浸膏；然後採用高速逆流色譜分離倒提壺浸膏，將庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (7:5:11:4)系統置於分液漏鬥中振搖，放置，分別取上相作為固定相，下相作為流動相， 將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿固定相，讓儀器以850r/min轉動，同時將流動相以 5. Oml/min的流速泵入，待流動相從出液端流出且兩相在色譜中達到平衡後，將樣品溶液注入色譜系統中，出液端採用紫外監測進行連續檢測，與倒提壺酸的標準圖譜對應，收集倒提壺酸流出液，用旋轉蒸發儀除去溶劑，乾燥，得到0. 77g倒提壺酸，經測定其含量為98. 7%。實施例4:
將倒提壺藥材粉碎過20目篩，取10kg，加入80L的40%乙醇，加熱至70°C，提取3次， 每次2小時，合併提取液加入30g針劑類藥用活性炭除雜，濾出活性炭，減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入大孔樹脂柱吸附，先用水洗，再用陽％乙醇溶液洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，得到浸膏；然後採用高速逆流色譜分離倒提壺浸膏，將庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (6:10:11:3)系統置於分液漏鬥中振搖，放置，分別取上相作為固定相，下相作為流動相， 將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿固定相，讓儀器以750r/min轉動，同時將流動相以 3. 5ml/min的流速泵入，待流動相從出液端流出且兩相在色譜中達到平衡後，將樣品溶液注入色譜系統中，出液端採用紫外監測進行連續檢測，與倒提壺酸的標準圖譜對應，收集倒提壺酸流出液，用旋轉蒸發儀除去溶劑，乾燥，得到3. 81g倒提壺酸，經測定其含量為98. 4%。實施例5
將倒提壺藥材粉碎過20目篩，取10kg，加入70L的20%乙醇，加熱至65°C，提取2次， 每次1. 5小時，合併提取液加入45g針劑類藥用活性炭除雜，濾出活性炭，減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入大孔樹脂柱吸附，先用水洗，再用58%乙醇溶液洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，得到浸膏；然後採用高速逆流色譜分離倒提壺浸膏，將庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (7:6:9:1)系統置於分液漏鬥中振搖，放置，分別取上相作為固定相，下相作為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿固定相，讓儀器以800r/min轉動，同時將流動相以2. 5ml/ min的流速泵入，待流動相從出液端流出且兩相在色譜中達到平衡後，將樣品溶液注入色譜系統中，出液端採用紫外監測進行連續檢測，與倒提壺酸的標準圖譜對應，收集倒提壺酸流出液，用旋轉蒸發儀除去溶劑，乾燥，得到4. 14g倒提壺酸，經測定其含量為98. 9%。實施例6:
將倒提壺藥材粉碎過20目篩，取20kg，加入150L的25%乙醇，加熱至60°C，提取3次， 每次2. 5小時，合併提取液加入60g針劑類藥用活性炭除雜，濾出活性炭，減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入大孔樹脂柱吸附，先用水洗，再用65%乙醇溶液洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，得到浸膏；然後採用高速逆流色譜分離倒提壺浸膏，將庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (9:4:10:3)系統置於分液漏鬥中振搖，放置，分別取上相作為固定相，下相作為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿固定相，讓儀器以850r/min轉動，同時將流動相以5ml/ min的流速泵入，待流動相從出液端流出且兩相在色譜中達到平衡後，將樣品溶液注入色譜系統中，出液端採用紫外監測進行連續檢測，與倒提壺酸的標準圖譜對應，收集倒提壺酸流出液，用旋轉蒸發儀除去溶劑，乾燥，得到7. 80g倒提壺酸，經測定其含量為98.
權利要求
1.一種提取分離高純度倒提壺酸的製備工藝，其特徵在於將倒提壺藥材粉碎過20目篩，加入5-10倍量提取溶劑，加熱至60-80°C，提取2-3次，每次1_3小時，合併提取液加入針劑類藥用活性炭除雜，濾除活性炭，減壓濃縮，濃縮液以熱水分散，加入大孔樹脂柱吸附， 先用水洗，再用50-75%乙醇溶液洗脫，收集醇洗液，回收乙醇，得到浸膏；將浸膏採用高速逆流色譜分離製備高純度倒提壺酸，所得產品倒提壺酸含量為98%以上。
2.根據權利要求1所述的製備工藝，其特徵在於所述提取溶劑為0-50%的乙醇水溶液。
3.根據權利要求1所述的製備工藝，其特徵在於所述活性炭用量為提取液總質量的 1-5%0。
4.根據權利要求1所述的製備工藝，其特徵在於所述大孔樹脂柱分離採用溼法裝柱。
5.根據權利要求1所述的製備工藝，其特徵在於所述高速逆流色譜分配系統為庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水，四種組分的體積比為(5-8) (3 10) (9-12) :(1-5)。
全文摘要
本發明涉及一種提取分離高純度倒提壺酸的製備工藝，其特徵在於將倒提壺藥材粉碎，加入適量溶劑提取，濾過，提取液加活性炭除雜，濃縮，濃縮液先後採用大孔吸附樹脂柱層析及高速逆流色譜技術進行分離製備高純度的倒提壺酸。本發明分離效果好、樣品損失少、無汙染、高效快速，工藝穩定，可大量分離倒提壺酸，製得的倒提壺酸純度可達98%以上。
文檔編號C07J63/00GK102276681SQ20111026427
公開日2011年12月14日 申請日期2011年9月8日 優先權日2011年9月8日
發明者劉東鋒, 吳豔波 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司