體外檢測類風溼關節炎抗體的組合物及其應用的製作方法

2023-08-04 14:33:16 1

專利名稱：：體外檢測類風溼關節炎抗體的組合物及其應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及檢測自身免疫抗體的抗原，尤其涉及檢測類風溼關節炎自身免疫抗體的抗原，更具體的是涉及一種檢測類風溼關節炎自身免疫抗體的抗原組合物。
背景技術：
：臨床上自身免疫疾病主要有系統性紅斑狼瘡、類風溼關節炎、乾燥症候群、皮肌炎、多發性肌炎、系統(多發)性硬化症、硬皮病等，這些疾病曾被命名為"結締組織病"，後來國外和國內均將它們歸為風溼性疾病。類風溼關節炎(rheumatoidarthritis,RA)是一種較常見的以慢性多關節炎症為主要表現的系統性自身免疫疾病，其病程長，多反覆，且對組織損傷是不可逆的，給患者造成很大痛苦；該病的發病率在世界範圍內為0.5-1%，中國的發病率約為0.36%。患者發病年齡多在2050歲，女性多於男性，男女之比為1:3。最近流行病學統計有逐年增加趨勢，其突出的早期臨床表現為對稱性關節紅腫熱痛，常見四肢小關節，指間近端關節腫脹，掌指、腕、肘、踝等關節腫痛及活動困難，晨間關節僵硬，午後逐漸減輕，關節外症狀約有20%患者可出現皮下結節；長久不愈的晚期症狀，則有不同程度的關節畸形和強直，關節功能喪失等，可損傷臟器、多組織器官，造成骨頭缺血性壞死，對人體消耗大，致殘率高。由於類風溼關節炎病因至今尚不十分清楚，且早期臨床表現也不典型。在國內外臨床實踐中，該疾病的常用診斷工具是美國風溼學學會(AmericanCollegeofRheumatology,ACR)在1987年制定的類風溼分類標準(ArthritisRheum1988,31，315-24)，該標準更依賴於類風溼關節炎所表現出的臨床病症。在該疾病早期，這些臨床指標通常是不易操作的。因此，目前普遍認為這一標準不能較好適應於早期類風溼關節炎診斷(ArthritisRheum2001，44，2485-91;NethJMed2002，60，383-8)。而目前使用的治療類風溼關節炎的方法主要是採用消炎方法，但這種方法雖能使得關節腫脹(swelling)和侵蝕(erosive)的程度得以減慢，卻無法使疾病得到治癒。當前人們共同的觀點是，在該疾病早期採用多種方法治療能得到最佳的治療效果(AutoimmunityReviews2006，6，37-41)。由此，具有高專一性(Specificity)和高靈敏度(Sensitivity)的血清學檢測標記對於類風溼關節炎在骨關節遭受損傷之前的早期診斷就顯得尤為必要(ClinAppliedImmunolRev2004，4，239-62)。研究發現一些自身免疫抗體雖然與類風溼關節炎疾病相聯繫，如抗calpastatin抗體(ProcNatlAcadSciUSA1995，92，7267-71)，抗中性粒細胞胞質抗體(anti-neutrophilcytoplasmicantibodies,ANCA)(IntArchAllergyImmunol1996;109:201-6)，核抗原抗體(anti-nuclearantigens,ANA)(ScandJRheumatol1986,15，185-92)，抗II型膠原抗體(anti-collagentypeII)(JImmunolMethods2001,247，191-203)和抗葡萄糖6磷酸異構酶(anti-glucose-6-phosphateisomerase，anti-GPI)(NatImmuno12001，2，746-53)等也都能在患有其它自身免疫疾病的病人中，甚至於在健康個體中檢測出來(ClinAppliedImmunolRev2004，4，239-62)。其中的某些抗體雖然能應用於風溼性疾病的識別，而且篩選這些抗體也有助於疾病監測和預測，但由於其對類風溼關節炎缺乏專一性，這些抗體中的絕大多數都很少應用於類風溼關節炎早期診斷(ClinicaChimicaActa2004，350，17-34)。對於類風溼關節炎早期診斷的理想標記(Marker)應當至少滿足4個標準(1)高靈敏度，能檢測的病人達到高百分比；(2)高專一性，儘可能地限制錯誤陽性結果的發生；(3)能適用於早期診斷；(4)能預見到某些病人會發展成侵蝕性疾病(erosivedisease)(Autoi匪nityReviews2006，6，37-41;MEDICINE2006，34，441-4)。類風溼因子(rheumatoidfactor,RF)抗體是應用於ACR標準中的血清學檢測，被公認為是IgG分子上Fc結構域的直接抗體。但其對於類風溼關節炎的專一性也比較一般，為60%，靈敏度範圍可以達到60-80%。RF還可以在其它患有自身免疫疾病的病人中、患有感染性疾病的病人中以及3-5%健康人群中(其中10-30%的老年人)檢測到(AnnRheumDis2003，62，261-3)。抗BiP(p68)，抗Sa和抗環狀胍氨酸化蛋白抗體(APF，AKA，抗filaggrin，抗CCP)則對類風溼關節炎有更好的專一性。64X的類風溼關節炎病人能產生直接針對BiP的抗體，還有報導稱其對該疾病具有高度的專一性，目前沒有數據支持BiP在預測類風溼關節炎方面具有作用，而且這些報導的BiP抗體則需要等待進一步通過獨立的臨床研究來確認(ClinicaChimicaActa2004，350，17-34)。另有研究揭示Sa抗原對於類風溼關節炎的專一性可以高達92-99%，但其靈敏度則顯得一般，僅為30-40%(JRheumatol1994，21，1027-33;JRheumatol1999;26:7-13)。抗核周因子(antiperi皿clearfactor,APF)首次披露於1964年。經研究這些自身免疫抗體對類風溼關節炎具有專一性，並能通過以人頰黏膜細胞為抗原底物的免疫螢光法間接測得(AnnRheumDis1964;23，302-5)。1979年研究者描述了一種類風溼關節炎專一性角質蛋白抗體，它能直接抑制角質層上皮細胞角質化，並將這類抗體的名稱暫定為抗角質蛋白抗體(anti-keratinandtibody，AKA)(YoungBJetalBMJ1979，2，97-9)。之後的研究證實了，雖然AKA和APF的發現是互相獨立的，但是兩者所直接對應的抗原是一致的(SebbagMetalJ.Clin.Invest1995,95,2672-9)。許多研究進一步表明AKA和APF具有許多共同的特性。Filaggrin(filamentaggregatingprotein)是一種互相交聯的角蛋白絲狀體，作用是形成非常堅固的細胞骨架結構，其也是AKA和APF的常見抗原(ClinA卯liedImmunolRev2004,4,239-62)。雖然AKA和APF對於類風溼關節炎具有專一性，但其缺陷也很突出。這兩種抗體的檢測靈敏度嚴重依賴於filaggrin的純化方法。實踐中，由於難以分離得到純的且胍基含量具有可重複性的抗原，再加上其檢測手段不簡便，以及螢光免疫需要耗費較大的工作量，從而使得實驗室間難以形成標準化，導致AKA和APF沒有成為類風溼關節炎檢測的主流方法(ClinAppliedImmunolRev2004，4，239-62)。基於filaggrin和profilaggrin是AKA和APF抗體耙點的知識，人們合成了含有瓜氨酸的多肽以檢測類風溼關節炎血清中AKA和APF抗體的活性。由於瓜氨酸不是基本胺基酸而無法在蛋白質翻譯中加入，因此通常的方法是通過肽精氨酸脫亞胺酶(p印tidylargninedeiminine，PAD,EC3.5.3.15)催化精氨酸殘基脫氨基得到。根據這些事實，一些從filaggrin序列中衍生出來的精氨酸側鏈經修飾的，尤其是含有瓜氨酸的多肽被合成出來，並用於類風溼關節炎抗體的體外檢測(US6，858，438)。在用酶聯免疫吸附(Enzyme-LinkedimmunosorbentAssay,ELISA)方法檢測實驗中，這一方法合成的含有瓜氨酸直線性多肽能從類風溼關節炎患者血清中檢測出抗瓜氨酸肽抗體，在保持高專一性(大於90%)的情況下，大大提高檢測的靈敏度(達到63%)。實驗還證明，只有含有瓜氨酸的多肽才能實現該反應，若將多肽中的瓜氨酸用其它胺基酸代替則完全沒有反應發生。這些結果表明，瓜氨酸部分是決定能被AKA和APF抗體識別的抗原決定因子(JClinInvest1998，101,273-81)。其它研究者發現將含有瓜氨酸的直線性多肽通過二硫鍵(S-S鍵)形成環形結構的方式能模擬類似P-轉角結構，從而模仿最初抗原決定簇的P-轉角結構，並可增加多肽-抗體的親和力(FASEBJ1995，9，37-42;MolImmunol1985，22，1255-64)。由此，一禾中環狀肽，艮卩第一代環瓜氨酸肽(thefirstgenerationcycliccitrullinatedpeptide,CCP1)被人工合成出來(SchellekensGAetalArthritisRheum2000，43，155-63)。研究者將一條由19個胺基酸殘基組成的瓜氨酸肽中兩個絲氨酸替換為半胱氨酸形成與|3-轉角具有相似結構的二硫鍵，得到人工合成CCP，並將CCP1與直線肽的檢測結果作了比較。結果顯示，採用CCP1為抗原的多肽用ELISA法檢測RA患者的抗CCP抗體，靈敏度較用直線性瓜氨酸肽為抗原有明顯提高，分別為68%和49%，二者專一性相似。在含有不同瓜氨酸多肽的反應模式中，類風溼關節炎血清檢測表現出巨大的可變性。類風溼關節炎患者的血清/血漿中除了filaggrin精氨酸殘基被瓜氨酸化外，Sa抗原、膠原蛋白(I和II型)、組蛋白、髓磷脂鹼蛋白、纖維連接蛋白等也出現瓜氨酸化，並產生抗CCP抗體。深入研究表明，瓜氨酸化的自身抗原中並非所有精氨酸脫氨基轉化為瓜氨酸；已瓜氨酸化的瓜氨酸也不完全參與形成抗原表位，即產生抗CCP抗體。綜上，抗瓜氨酸抗體的產生與瓜氨酸密切相關，並且瓜氨酸的側翼序列對抗瓜氨酸抗體的產生起重要作用，這一事實暗示著瓜氨酸殘基的周邊胺基酸對於抗原表位(antigen印isode)具有重要作用，以及抗瓜氨酸化蛋白(如AKA和APF抗體)活性是多克隆反應(JClinInvest1998，101,273-81)。基於filaggrin的屬性，它被認為是模擬瓜氨酸抗原表位的天然庫藏(ClinAppliedImmunolRev2004，4，239-62)。第二代CCP(CCP2)檢測方法產生於2002年，通過將含有瓜氨酸的多肽庫與類風溼關節炎血清篩選得到與filaggrin無關的第二代CCP，其具有更有利於抗體檢測的表位(Reportonthe5thDresdensymposiumonautoantibodies.Lengerich，Germany:PabstSciencePublishers;2000.p.140-5)。將CCP1和CCP2經同一組病人測試後表明，CCP2不僅保持了較高專一性(96%)，而且其分析靈敏度也有顯著的提高(Ann.Rheum.Dis.2005,64，1510-2)。許多研究者在最近5年的研究證明，抗含瓜氨酸多肽的測試的靈敏度具有較高的可變性，範圍在40%-94%(Clin.ExpRheumatol.2005，23(Suppl39)，569-76;Ann.Rheum.Dis.2006,65,845-51)。CCP2在類風溼關節炎自身免疫抗體體外檢測中得到應用說明了在該領域的檢測抗原的篩選並不需要僅僅依賴filaggrin，也說明與filaggrin不同的結合表位能更有利於體外檢測。BizzaroN等人(ClinChem2007，53，1527-33)和LutteriL等人(ClinicaChimicaActa2007，386，76-81)分別針對現在市場上使用的第二代和第三代CCP試劑盒進行了比較，結果發現，伊諾瓦診斷(InovaDiagnostics)公司開發的三種檢測方法中，其CCP3試劑盒與使用CCP2為抗原的方法相比僅僅略有改善，各自的靈敏度分別為67%和64%。相反地，用於抗IgG的CCP3.0與即能檢測IgG又能檢測IgA的CCP3.1的檢測方法相比後發現，兩者竟然沒有絲毫差別。可見，同時檢測IgG和IgA抗體的方法並沒有象看上去那樣有顯著改進。他們的結論是由於測試的診斷試劑盒靈敏度可能與胍基化精氨酸殘基的位置和數量有關，而專一性則可能受到蛋白質或雜多肽序列的影響，因此，對此二者而言，抗原的種類顯得更為重要。兩者綜合考慮，實驗數據表明抗原的製備是決定測定方法優劣的最重要的可變因素。LutteriL等人(ClinicaChimicaActa2007，386，76-81)的研究還發現了抗CCP的另一個價值，他們指出，IgM-RF是最靈敏的標記，能在77.9%的類風溼關節炎患者中發現。必須注意的是ACR標準中的RF，其類風溼關節炎診斷中靈敏度不能直接與那些沒有包括在診斷標準中的其它方法相比較。IgM-RF被認為在疾病專一性方面略有欠缺。使用IgM-RF檢測類風溼關節炎患者，其中有13-19%的人為RF陰性，與之相比，當這些患者使用抗CCP方法檢測時均為陽性。類風溼關節炎的遺傳因素會影響瓜氨酸化蛋白的出現和產生，也會影響針對這些修飾蛋白的抗體產物(ClinicaChimicaActa2004，350，17-34)。一系列相關研究表明，類風溼關節炎與某些HLA-DR等位基因有密切聯繫，尤其是HLA-DRB1柳401和HLA-DRBl*0404(Celll996，85，307-10)。這不同地區的人群中，這些等位基因也略有不同。DRB1*0401主要出現在北歐和北美地區的人群中，有證據表明該基因與類風溼關節炎所導致的"特大關節"表徵(extraarticularmanifestations)有聯繫，在DRB1*0401/DRB1*0404雜合基因型中尤為突出。DRB1*0403、DRB1*0406和DRB1*0407與DRB1*0401、*0404或*0101基因組合後會增加類風溼關節炎病情的發展可能。DRB1*0404與DRB1*0408隻要存在於白色人種中。DRB1柳405很少在北歐人群中，但在亞洲和還地中海沿岸國家的人群中極其普遍。DRB1柳101主要存在於北歐和北美人群中。美洲印第安人群中則為DRB1*1402和*1406(HumImmuno2000，61，1254-1261)。雖然這些與類風溼關節炎相關的基因在各地區人群中各有不同，但研究發現在DRB1的第三高度可變區(HV3)具有共享表位(shared印itope，SE)，在70-74位胺基酸殘基都為QKRAA、QRRAA或RRRAA(ClinicaChimicaActa2004,350，17-34)。將一群有幾個共享表位基因型的類風溼關節炎患者與具有抗CCP2抗體的患者比較研究表明，一種共享表位等位基因與抗CCP2抗體的產生具有密切的內在聯繫(ArthritisRheum2000，50，2113-21;ArthritisResTher2004，6，R303-8)。經證實，這一關聯是由於MHC分子共享表位13鏈的70-74位胺基酸殘基(Q/R，K/R，R，A，A)形成第4個錨定袋(P4)，其與電中性或負電荷胺基酸具有高度親和性(JImmuno2003，171,538-541)。當帶正電荷精氨酸在PAD酶作用下轉換成電中性的瓜氨酸後，得到的翻譯後修飾蛋白/多肽親和力遠遠大於精氨酸與P4的親和力，並能夠激活CD4+T細胞，這些"瓜氨酸特異T細胞"可有助於抗瓜氨酸蛋白(多肽)抗體的產生(JImmuno2003，171，538-541;ArthritisRhe咖1987，30，1205-13;Rhe咖DisClinNorthAm1992，18，741-59;ArthritisRhe咖2005，52，1063-68)。這些結果表明具有共享表位的DBR1等位基因能激活類風溼關節炎患者自身免疫反應。8目前類風溼關節炎檢測方法通常使用單一的多肽抗原。雖然這些從filaggrin衍生出的或人工設計的環形或直線型多肽在類風溼關節炎檢測中都表現出較高的專一性090X)，但是由於類風溼關節炎患者存在眾多的HLA-DR等位基因，由此產生的抗體也相應地有所差異，這使得檢測靈敏度則始終得不到明顯提高(<70%)。本發明的一個目的在於提供一種檢測類風溼關節炎自身免疫抗體的抗原組合物。本發明的另一個目的在於提供一種類風溼關節炎自身免疫抗體檢測試劑組合物。本發明的又一個目的在於提供一種類風溼關節炎自身免疫抗體的體外檢測方法。本發明的再一個目的在於提供一種類風溼關節炎自身免疫抗體的ELISA體外檢測方法。本發明所述的抗原組合物(多肽)包含有如下胺基酸序列His_Gln_Cys_Xaal_Xaa2_Phe_Xaa3_Xaa4_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaal0_Xaall-Cys-Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為Arg;Xaa6為Gly或His;Xaa7為Arg;Xaa8為Ser或Arg;Xaa9為Arg或Leu;XaalO為Ala或lie;Xaall為Ala或Arg，其中至少有一個精氨酸被修飾。進一步地說，所述的多肽具體包含有如下胺基酸序列His_Gln_Cys_Xaal_Xaa2_Phe_Xaa3_Xaa4_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaal0_Xaall-Cys-Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為修飾或未修飾的Arg;Xaa6為Gly或His;Xaa7為修飾的Arg;Xaa8為Ser或Arg;Xaa9為Arg或Leu;XaalO為Ala或lie;Xaall為Ala或Arg。更進一步地說，所述的多肽包含如下具體胺基酸序列His_Gln_Cys_Xaal_Xaa2_Phe_Xaa3_Xaa4_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaal0_Xaall-Cys-Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為修飾或未修飾的Arg;Xaa6為Gly或His;Xaa7為修飾的Arg;Xaa8為Ser或Arg;Xaa9為Arg或Leu;XaalO為Ala或lie;Xaall為Ala或Arg。本發明所述的修飾的精氨酸為側鏈修飾的Arg，具有通式(I)所述的結構。formulaseeoriginaldocumentpage9式I其中Gl為0、NH或CH2;G2為NH2、CH3、NHCH3或N(CH3)2;G3為0、NH、NHCH3、NHCH3;n為2、3或4;其中當Gl為NH，G2為NH2時，G3不為NH
發明內容更進一步地說，所述的修飾的精氨酸為瓜氨酸(Cit)，即當Gl為NH，G2為NH2，G3為O，及n為3。具體地說，所述的多肽包含具體胺基酸序列為SEQIDNo1-261。本發明所述的多肽能與自身免疫抗體相結合，形成抗原_抗體複合物(Complex)。進一步地說，所述多肽能與HLA-DR分子具有高親和力，與HLA-DR相結合形成HLA-DR-多肽複合物。進一步地說，所述的多肽是通過序列中的不相鄰的兩個Cys之間形成二硫鍵。所形成的二硫鍵能使該多肽具有環狀結構並能模擬P-轉角結構，使得該多肽不僅具有與HLA-DR分子具有高親和力，與HLA-DR相結合形成HLA-DR-多肽複合物；還能與抗CCP抗體高效結合，形成抗原_抗體複合物。更進一步地說，所述多肽的包含胺基酸序列為His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3_Xaa4_Xaa_Xaa5_Xaa_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為Gly或His;Xaa6為Ser或Arg;Xaa7為Arg或Leu;Xaa8為Ala或lie;Xaa9為Ala或Arg，Xaa為瓜氨酸；所述的多肽在第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。具體地說，所述多肽的包含胺基酸序列為His-Gln-Cys-His-Gln-Phe-Arg-Phe-Xaa-Gly-Xaa-Ser-Arg-Ala-Ala-Cys-Gly，其中Xaa為瓜氨酸；所述多肽的第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。具體地說，所述的多肽(SEQ.IDNo2-118)在第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。更進一步地說，所述多肽包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3_Xaa4_Arg_Xaa5_Xaa_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Glu或Arg;Xaa3為Arg或Glu;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為Gly或His;Xaa6為Ser或Arg;Xaa7為Arg或Leu;Xaa8為Ala或lie;Xaa9為Ala或Arg，Xaa為瓜氨酸；所述的多肽在第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。。具體地說，所述多肽的包含胺基酸序列為His-Gln-Cys-Ala-Arg-Phe-Gln-Met-Arg-His-Xaa-Arg-Leu-Ile-Arg-Cys-Gly，其中Xaa為瓜氨酸；所述的多肽在第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。具體地說，所述的多肽(SEQ.IDNo120-261)在第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。本發明所述的多肽還包括在其胺基酸序列骨架上進行化學修飾或生物修飾後所得的產物。所述的修飾包括聚乙二醇化(PEGylation)(Adv.Drugdeliv.Rev.28,275-299;Adv.Drugdeliv.Rev.54,453-609;Adv.Drugdeliv.Rev.60，1-88)、醯基化(Acylation)(J.Pharma.Sci.86,768-773;J.Pharma.Sci.86，1365-1368)、糖基化(Glycosylation)CJ.Pharma.Sci.87,326-332;Adv.Drugdeliv.Rev.6，103-131;Adv.Drugdeliv.Rev.13，251-267)和有機小分子修飾等。所述的有機小分子指具有C、H、0或C、H、0、N、P、S等幾種元素組成的分子量小於2000Da的有機小分子。具體地指各類胺基酸、各類單糖或多糖、各類維生素(Vitamin)、生物素和分子量在20-2000Da的聚合物，如聚乙二醇、多肽、寡聚糖和多聚糖(葡聚糖、澱粉、10甲殼素等)和核苷等。本發明所述的抗原組合物包含多肽I和多肽II，多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0-1;所述的多肽I包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaa10-Xaa11_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為修飾的Arg;Xaa6為Gly或His;Xaa7為Arg;Xaa8為Ser或Arg;Xaa9為Arg或Leu;XaalO為Ala或lie;Xaall為Ala或Arg，其中至少有兩個精氨酸被修飾；所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Arg_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_XaalO_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為Gly或His;Xaa6為Arg;Xaa7為Ser或Arg;Xaa8為Arg或Leu;Xaa9為Ala或lie;XaalO為Ala或Arg，其中至少有一個精氨酸被修飾。進一步地說，所述的多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0.3-0.7;具體的，所述的摩爾比比值為0.5。所述多肽I包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-His-Gln-Phe-Arg-Xaa4-Xaa5-Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaa10-Xaa11_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為修飾的Arg;Xaa6為Gly或His;Xaa7為修飾的Arg;Xaa8為Ser或Arg;Xaa9為Arg或Leu;XaalO為Ala或lie;Xaall為Ala或Arg;所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Arg_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_XaalO_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為Gly或His;Xaa6為修飾的Arg;Xaa7為Ser或Arg;Xaa8為Arg或Leu;Xaa9為Ala或lie;XaalO為Ala或Arg。具體地說，所述多肽I包含如下胺基酸序列His_Gln_Cys_His_Gln_Phe_Arg_Phe_Xaal_Gly_Xaa2_Ser_Arg_Ala_Ala_Cys_Gly，其中，Xaal為修飾的Arg;Xaa2為修飾的Arg;所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Ala-Arg-Phe-Gln-Met-Arg-His_Xaal_Arg_Leu_Ile_Arg_Cys_Gly，其中，Xaal為修飾的Arg;具體地說，所述多肽I包含具體胺基酸序列為SEQIDNo1_118;所述多肽II包含具體胺基酸序列為SEQIDNo119-261。進一步地說，所述多肽I和多肽II能與自身免疫抗體相結合，形成抗原_抗體複合物。所述多肽能與HLA-DR分子具有高親和力，與HLA-DR相結合形成HLA-DR-多肽I或II複合物。進一步地說，所述的抗原組合物是通過序列中的不相鄰的兩個Cys之間形成二硫鍵。所形成的二硫鍵能使該多肽具有環狀結構並能模擬P-轉角結構，使得該多肽不僅具有與HLA-DR分子具有高親和力，與HLA-DR相結合形成HLA-DR-多肽I或II複合物；還能與抗CCP抗體高效結合，形成抗原_抗體複合物。進一步地說，所述的多肽I或II通過序列中兩個不相鄰的Cys之間形成二硫鍵；具體的，所述的多肽I或II通過序列中第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。更進一步地說，所述的抗原組合物(SEQ.IDNo1-261)在第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。本發明所述的多肽為通過化學方法直接合成或先通過化學合成或基因工程方法，即將從表達載體中分離純化得到的的多肽再經過修飾精氨酸側鏈的步驟得到。進一步地說，所述的多肽為通過化學方法直接合成，或為先通過化學方法合成後，在由PAD酶修飾精氨酸側鏈得到。本發明所述的抗原組合物能與類風溼關節炎自身免疫抗體相結合。進一步地說，所述的抗原組合物與類風溼關節炎自身免疫抗體相結合的專一性大於90%，具體為大於95%。進一步地說，所述的抗原組合物對類風溼關節炎自身免疫抗體的靈敏度大於70%，具體為大於75%。本發明所述的抗原組合物對HLA-DR具有高親和力。所述的多肽I或II與生物素標記相結合的方法可以通過先由固相合成或基因工程表達並純化，所得多肽再與生物素連接並純化(如申請號為200310108264.0中國發明專利所公開的技術方案)。所述的多肽I或II與生物素標記相結合的方法還可以在多肽的固相合成過程中先與生物素連接再純化的方式(P印t.Res.1989,2，189-194)。具體的，所述的結合有生物素標記的多肽I或II，其上生物素與多肽I或II的N末端相結合。本發明所述的抗原組合物能應用於類風溼關節炎疾病自身免疫抗體的體外檢測。本發明所述的類風溼關節炎疾病自身免疫抗體的體外檢測方法為將待測血清(serums)與包含有上述的多肽(即抗原)試劑混合，檢測所述多肽與血清中抗體所形成的複合物。檢測結果呈陽性表明，該血清中具有類風溼關節炎疾病自身免疫抗體。具體地說，所述的體外檢測方法為ELISA檢測。本發明所述的免疫抗體體外檢測試劑組合物，包括生物素標記的抗原組合物、疏水性器材、親和素或鏈黴親和素、酶標記抗人IgG抗體和顯色底物，所述的抗原組合物具體為多肽I和II，其中多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0-1。進一步地說，所述的多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0.3-0.7;具體的，所述的摩爾比比值為0.5。所述的多肽I包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaa10-Xaa11_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為修飾的Arg;Xaa6為Gly或His;Xaa7為Arg;Xaa8為Ser或Arg;Xaa9為Arg或Leu;XaalO為Ala或lie;Xaall為Ala或Arg，其中至少有兩個精氨酸被修飾；所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Arg_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_XaalO_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為Gly或His;Xaa6為Arg;Xaa7為Ser或Arg;Xaa8為Arg或Leu;Xaa9為Ala或lie;XaalO為Ala或Arg，其中至少有一個精氨酸被修飾。進一步地說，所述多肽I包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-His-Gln-Phe-Arg-Xaa4_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaa10-Xaa11_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為修飾的Arg;Xaa6為Gly或His;Xaa7為修飾的Arg;Xaa8為Ser或Arg;Xaa9為Arg或Leu;XaalO為Ala或lie;Xaall為Ala或Arg;所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Arg_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_XaalO_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為Gly或His;Xaa6為修飾的Arg;Xaa7為Ser或Arg;Xaa8為Arg或Leu;Xaa9為Ala或lie;XaalO為Ala或Arg。更進一步地說，所述多肽I包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-His-Gln-Phe-Arg-Phe-Xaal-Gly-Xaa2-Ser-Arg-Ala-Ala-Cys_Gly，其中，Xaal為修飾的Arg;Xaa2為修飾的Arg;所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Ala-Arg-Phe-Gln-Met-Arg-His_Xaal_Arg_Leu_Ile_Arg_Cys_Gly，其中，Xaal為修飾的Arg;具體地說，所述多肽I包含具體胺基酸序列為SEQIDNo1_118;所述多肽II包含具體胺基酸序列為SEQIDNo119-261。進一步地說，所述的疏水性器材選自於塑料或玻璃。塑料應當理解為全部或部份由碳與氧、氫、氮及其它有機及無機元素化合而成，在製造的最後階段成為固體，在製造中某些階段是液體(塑料材料在成為最終產品以前，在某些階段必需要能夠流動。)，因而可以加熱或加壓力，或二者並用的方式，使其形成各種形狀，此龐大而變化多端的材料族類中的任何一種，如樹脂、熱固性樹脂、纖維素衍生物等，在一條長鏈的分子結構中存在眾多的重複原子或分子。塑料包括人工合成或自然界有機材料。玻璃應當被理解為易碎的非晶體物質，這些物質可以是透明的也可以是半透明的，通常由熔融矽和矽碳酸鹽融合組成。玻璃還可以認為是一類不具有結晶過程，而是由熔化狀態固化而來的材料，大體上由N^0、Ca0和6Si02化學氧化物組成，具有光學屬性和各種機械屬性。具體地說，所述的疏水性器材由聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、聚碳酸酯或玻璃等製成，具有多孔構造的酶標板。進一步地說，所述的親和素(Avidin)是一種相對分子質量為68，000Da，pl為10.5的一種鹼性糖蛋白，又稱卵白素，在雞蛋清中含量比較豐富，一般從蛋白清中提取。所述的鏈黴親和素(Str印tavidin)是一種從鏈黴菌(Str印tomycesavidinii)培養物中提取的蛋白質，相對分子質量60，000Da，不具有糖鏈。其特性與親和素一樣，也具有4個生物素結合位點，與生物素具有高親和力。所述的結合有生物素的多肽，生素標記的多肽I或II能與親和素或鏈黴親和素非共價結合。具體地說，所述的酶標記抗人IgG抗體使用辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)標記，所述的顯色底物為四甲基聯苯氨(tetramethylbenzidine,TMB)。本發明所述的免疫抗體體外檢測試劑組合物在類風溼關節炎ELISA體外檢測中的應用。進一步地說，所述的ELISA檢測方法具體的實驗步驟可以參見US6，858，438中關於ELISA檢測的相應部分。其基本原理是多肽(抗原)包被在酶標板表面，將稀釋後的待檢血清/血漿和對照物加入反應板孔中，如果被檢血清/血漿中存在抗CCP抗體，經溫育後，則血清/血漿中特異性抗體與反應板孔中的CCP抗原多肽結合，形成固相抗原_抗體複合物，洗去未結合的血清/血漿中其它成分，加入酶標記的抗人IgG抗體，溫育，固相CCP抗原(多肽)結合的抗CCP抗體再與酶標記的抗人IgG抗體結合，洗去未結合的酶標記抗體成分，加入酶底物，並被催化成為有色產物，最後加入終止液終止反應。根據試劑盒內的對照物，可對抗CCP抗體進行定量或定性測定。本發明所述的檢測試劑組合物的製備方法，依次包括如下具體步驟1、配置包被液；2、將包被液加入疏水性器材表面；3、在0-4(TC條件下保存6小時以上4、洗滌疏水性器材表面2次以上；5、加入含有經生物素標記的抗原組合物的溶液於洗滌後的疏水性器材表面；6、10-3(TC條件下保存1小時以上；7、洗滌疏水性器材表面2次以上。進一步地說，所述的包被液pH為7.0-8.0的緩衝液，其中溶解有濃度為0.l-10i!g/mL的親和素，可以選擇0.5、1、2或g/mL。所述的緩衝液具體可以為磷酸緩衝液(PhosphateBuffer,PB)、磷酸緩衝鹽溶液(PhosphateBufferSaline,PBS)、檸檬酸緩衝液、碳酸鹽緩衝液、Tris-HCl、三羥甲基氨基甲烷緩衝液(TBS)和巴比妥緩衝液。所述的親和素具體為鏈黴親和素。具體地說，所述的緩衝液pH選擇7.4，所述的緩衝液選擇磷酸緩衝鹽溶液。進一步地說，所述的疏水性器材為具有一定體積的容器或直板，可以為酶標板，具體為96或48孔酶標板。進一步地說，所述的0-4(TC溫度範圍選擇0-l(TC。更進一步地說，所述的0-l(TC溫度範圍選擇2-8t:，具體為4°C。進一步地說，所述的6小時以上的孵育時間，可以選擇12小時以上，具體為12-18小時。進一步地說，所述的洗滌液pH為7.4的緩衝液。所述的緩衝液具體可以為磷酸緩衝液、磷酸緩衝鹽溶液、檸檬酸緩衝液、碳酸鹽緩衝液、Tris-HCl、三羥甲基氨基甲烷緩衝液(TBS)和巴比妥緩衝液。具體地選擇磷酸緩衝鹽溶液。進一步地說，所述的抗原組合物選自於蛋白質、多肽、核酸或有機小分子。具體地選自於多肽I和多肽II，多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0-1。14所述的蛋白質和核酸還包括在其胺基酸或核苷序列骨架上進行化學修飾或生物修飾後所得的產物。所述的修飾包括聚乙二醇化(PEGylation)(Adv.Drugdeliv.Rev.28，275-299;Adv.Drugdeliv.Rev.54，453-609;Adv.Drugdeliv.Rev.60，1-88)、醯基化(Acylation)(J.Pharma.Sci.86,768-773;J.Pharma.Sci.86，1365-1368)、糖基化(Glycosylation)(J.Pharma.Sci.87,326-332;Adv.Drugdeliv.Rev.6，103-131;Adv.Drugdeliv.Rev.13,251-267)和有機小分子修飾等。進一步地說，所述的10-30。C溫度範圍選擇15-25。C，優選20_25°C。本發明所述的檢測試劑組合物的製備方法，還包括的後續步驟有乾燥，真空封存等。本發明所述的檢測試劑組合物的製備方法在ELISA檢測中的應用。本發明所述的檢測試劑組合物的製備方法在類風溼關節炎免疫抗體體外檢測中的應用。本發明所述的多肽組合物，包含多肽I和多肽II，多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0-1。通過序列上兩個不相鄰的半胱氨酸側鏈巰基形成二硫鍵的方式，產生環狀的多肽。這類多肽組合物不僅能與類風溼關節炎自身免疫抗體相結合，同時還能對HLA-DR具有高親和力。經過實驗驗證，該類多肽與類風溼關節炎自身免疫抗體相結合的專一性大於95%，對類風溼關節炎自身免疫抗體的檢測靈敏度大於75%。與市場上銷售的同類產品相比，其靈敏度得到顯著提高，更有利於類風溼關節炎自身免疫抗體的體外檢測。圖1:RP-HPLC檢測的多肽1純度色譜圖，橫軸表示時間，單位分鐘(min)，縱軸表示電壓，單位毫伏(mv);圖2:RP-HPLC檢測的多肽2純度色譜圖；圖3:ESI檢測的多肽1質譜圖，橫軸表示質/核比(m/z);圖4:ESI檢測的多肽2質譜圖。圖5:RP-HPLC檢測的生物素_多肽1純度色譜圖；圖6:RP-HPLC檢測的生物素_多肽2純度色譜圖；圖7:ESI檢測的生物素_多肽1質譜圖；圖8:ESI檢測的生物素_多肽2質譜圖。具體實施例方式以下結合附圖詳細描述本發明的技術方案。本發明實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制，儘管參照較佳實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的精神和範圍，其均應涵蓋在本發明的權利要求範圍中。本發明所用的試劑若未明確指明，則均購自於西格瑪_奧德裡奇(Sigma-Aldrich)。實施例l多肽的合成多肽採用Fmoc化學方法，通過固相合成技術合成。該方法的具體步驟參見Eur.15J.Immunol.1994，24，3188-3193;J.Org.Chem.1972，37，3404-3409;黃惟德，陳常慶多月太合成，北京科學出版社，1985。二硫鍵的形成方法及其步驟可以參見文獻黃惟德，陳常慶多肽合成，北京科學出片反社，1985，p85;MichaelW.PenningtonPeptideSynthesisProtocols(MethodsinMolecularBiology)，HumanaPress,1994，p91_169通過上述步驟，合成多肽的具體序列為多肽1:His-Glu-Cys-His-Glu-Phe-Arg-Phe-Cit-Gly-Cit-Ser-Arg-Ala-Ala-Cys-Glu(SEQIDNo1)，其上第三位和第十六位Cys通過巰基形成二硫鍵，並使多肽具有環狀結構，並能模擬P-轉角結構。多肽2:His_Glu_Cys_Ala_Arg_Phe_Glu_Met_Arg_His_Cit_Arg_Leu_Ile_Arg_Cys-Glu(SEQIDNo119)，其上第三位和第十六位Cys通過巰基形成二硫鍵，並使多肽具有環狀結構，並能模擬P-轉角結構。實施例2多肽的純化先將蛋白質或多肽末端的保護基在二甲基醯胺(DMF)溶劑中脫保護，中和。再用氟化氫將多肽從合成樹脂上切下，得到的粗產物經過反相色譜C18或C8柱(如5ym，250X4.6mm)，以流動相A(0.1%(v/v)三氟乙酸乙腈溶液)和流動相B(0.1%(v/v)三氟乙酸水溶液)為梯度洗脫溶劑。在45分鐘內，流動相A佔A、B兩相總體積0X(v/v)變化到100%(v/v)收集得到目標多肽，通過脫鹽色譜柱(GEHealthcare)或旋轉蒸發去除有機溶劑，目標多肽可以通過LC-MS連用或將收集得到的多肽直接進樣的方式通過ESI質譜得到的分子量來確定。(參見中國分析化學2002,30，1126-9)實施例3多肽的純度與分子量檢測上述合成出的多肽1和多肽2分別通過反相色譜(RP-HPLC)測定，其具體方法為4.6X250mm5iimC18分禾斤柱(Kromasil);流動相A為三氣乙酸(trifluoroacetic，TFA)力口入100%乙月青(acetonitrile，ACN)中，使得TFA濃度為0.1%(v/v);流動相B為TFA加入100%水中，使得TFA濃度為0.1%(v/v);流速為1.0ml/min;檢測波長為220nm;洗脫梯度以流動相A佔A、B兩項總體積15%(v/v)的比例平衡，進樣後，採用線性梯度洗脫(GradientElution)，在25分鐘內流動相A佔A、B兩項總體積從15%(v/v)改變至50%(v/v)的比例，之後以100%(v/v)流動相A平衡5分鐘。多肽l的保留時間(RetentionTime)為12.5(圖1)，其純度大於95%。多肽2的保留時間(RetentionTime)為13.2(圖2)，其純度大於95%。通過ESI質譜分別測定多肽1(圖3)和多肽2的分子量(圖4)，其具體條件為質譜(Probe)ESI質譜電壓(Probebias)+4.5kv噴霧器流速(NebulizerGasFlow)1.5L/min檢領[J器(Detector)1.5kv樣品電離化裝置(CDL)-20.0v0.2ml/min250°C50%H20，50%ACN200°C為2167.59Da。多肽2(SEQIDNo119)均採用在固相合成過程中先與生物素連接再純化的方式分別進行，其具體方式參見Deibel，M.R.，Jr.，Lobl，T.J.andYem，A.W.，Atechniqueforrapidpurificationoflowyieldproducts:Biotinylationofchemicallysynthesizedproteinson_resin.P印t.Res.1989，2，189-194。當生物素通過縮合劑在多肽合成時直接縮合後，使用Kaisertest檢測縮合反應是否完全。該反應的詳細說明請參見Sigma-Aldrich60017產品說明(60017DataSheet)，該方法可不僅應用於定性(AnalyticalBiochemistry1970，34，595)，還能進行定量(AnalyticalBiochemistry1981,117,147)檢測。實施例5多肽與生物素結合後的分離和純化在樹脂上進行生物素標記。首先，蛋白質或多肽末端在二甲基醯胺(DMF)溶劑中脫保護，中和；然後與N-羥基琥珀醯亞胺生物素反應(即生物素化)，反應條件為45°C24小時；再用氟化氫將標記有生物素的多肽切下，得到的粗產物經過親和素偶聯瓊脂的親和層析柱(GEHealthcare)，用磷酸鹽緩衝液洗滌，去除未結合的成分，最後用0.1M的甘氨酸溶液(PH2.0)洗脫，得到生物素化的蛋白質或多肽。實施例6多月太(SEQ.IDNo2-118，SEQ.IDNo120-261)的合成與生物素標記如實施例1的同樣方法可以得到環形多肽(SEQ.IDNo2-118，SEQ.IDNo120-261)。如實施例4的同樣方法可以得到經生物素標記的環形多肽(SEQ.IDNo2_118，SEQ.IDNo120-261)。實施例7生物素-多肽的純度與分子量檢測上述合成出的生物素_多肽1和生物素_多肽2分別通過反相色譜(RP-HPLC)測定，其具體方法為4.6X250mm5iimC18分析柱(Kromasil);流動相A為三氣乙酸(trifluoroacetic，TFA)力口入100%乙月青(acetonitrile，ACN)中，使得TFA濃度為0.1%(v/v);流動相B為TFA加入100%水中，使得TFA濃度為0.1%(v/v);流速為1.0ml/min;檢測波長為220nm;洗脫梯度以流動相A佔A、B兩項總體積15%(v/v)的比例平衡，進樣後，採用線性梯度洗脫(GradientElution)，在25分鐘內流動相A佔A、B兩項總體積從15%(v/v)改變至50%(v/v)的比例，之後以100%(v/v)流動相A平衡5分鐘。生物素-多肽1的保留時間(RetentionTime)為8.4(圖1)，其純度大於95%。流動相流速(T.Flow)CDL溫度(CDLTemp)緩衝液濃度(B.cone)加熱塊溫度(BlockTemp)多肽1分子量為2017.26Da;多肽2分子量實施例4多肽的生物素標記生物素-多肽1(SEQIDNo1)和生物素_生物素-多肽2的保留時間(RetentionTime)為13.5(圖2)，其純度大於95%。通過ESI質譜分別測定多肽1和多肽2的分子Jt，其具體條件為質譜(Probe)ESI質譜電壓(Probebias)+4.5kv噴霧器流速(NebulizerGasFlow)1.5!Vmin檢領lj器(Detector)1.5kv樣品電離化裝置(CDL)-20.0v流動相流速(T.Flow)0.2ml/minCDL溫度(CDLTemp)250°C緩衝液濃度(B.cone)50%H20，50%ACN加熱塊溫度(BlockTemp)200°C根據峰值和其所帶的電荷來計算，生物素_多肽1實測分子量為，748.80峰值的[M+3H+]3+，計算為748.80X3-3=2243.40Da;生物素-多肽2中實測分子量為，599.20峰值的[M+4H+]4+，計算為599.20X4-4=2392.80Da。該數值與生物素_多肽1(Mw=2243.56Da)和生物素-多肽2(Mw=2393.86Da)的理論分子量一致。實施例8檢測載體的製備濃縮洗滌液的配製先根據下表配製10倍濃度的pH7.4磷酸鹽緩衝液(簡稱10XPBS)，tableseeoriginaldocumentpage18之後加入Tween⑧-20使其終濃度為0.5%(v/v)，最終配製成加有Tween⑧的10XPBST。樣品稀釋液用於稀釋待檢樣品，其配比如下tableseeoriginaldocumentpage18包被液的配製1倍濃度的Tween磷酸鹽緩衝液(1XPBST，pH7.4，0.05%(v/v)Tween-20)用於稀釋和包被親和素到酶標板表面；lXPBST(pH7.4，0.05%(v/v)Tween_20)用於稀釋生物素標記的親水性分子(蛋白質、多肽或核酸)。親水性分子具體包被方法如下用磷酸鹽緩衝液(IXPBS，pH7.4)稀釋鏈黴親和素(5yg/ml)，然後加入到酶標板各孔中(140iil/孔)，4t:過夜(12-18小時)，取出酶標板，去除包被液，用洗滌液1XPBST(pH7.4,0.05%(v/v)Tween-20)洗2次，然後加入1XPBST(pH7.4,0.05%(v/v)Tween-20)稀釋生物素標記的多肽，在脫色搖床上混勻，室溫孵育1小時，棄去未結合的生物素標記的多肽，350iU1XPBST(pH7.4,0.05%(v/v)Tween-20)洗板2次，乾燥。真空箱內保存待用。生產時，將酶標板條裝入袋中，真空封口。實施例9對照物的製備①、校正品的製備本試劑盒採用6個不同相對濃度的校正品，濃度單位為相對單位(RU/ml)，其設定方法如下0D45,9'2.0時，設定濃度單位為100RU/ml，作為上限0D45,3=0.9'1.0時，設定濃度單位為50RU/ml0D45,3=0.4'0.5時，設定濃度單位為25RU/ml0D45,3=0.2'0.3時，設定濃度單位為12RU/ml0D45,3=0.1'0.15時，設定濃度單位為6RU/ml0D45,3=0.05'0.08時，設定濃度單位為3RU/ml0D45,3=0.02'0.04時，設定濃度單位為ORU/ml，作為下限繪製標準曲線，設定6個測定點，分別製備校正品16號(0、6、12、25、50、100RU/ml)。6號校正品的製備取抗CCP抗體陽性且0D45。=1.92.0的RA患者血清/血漿lml，用100ml樣品稀釋液稀釋，充分混勻；取其中的50ml，分裝標準小瓶中，每瓶lml，註明為"校正品_6"，28t:下保存。5號校正品的製備取上述餘下的50ml，加入樣品稀釋液50ml，充分混勻，取其中的50ml，分裝標準小瓶中，每瓶lml，註明為"校正品-5"，28t:下保存。4號校正品的製備取上述餘下的50ml，加入樣品稀釋液50ml，充分混勻，取其中的50ml，分裝標準小瓶中，每瓶lml，註明為"校正品-4"，28t:下保存。3號校正品的製備取上述餘下的50ml，加入樣品稀釋液50ml，充分混勻，取其中的50ml，分裝標準小瓶中，每瓶lml，註明為"校正品-3"，28t:下保存。2號校正品的製備取上述餘下的50ml，加入樣品稀釋液50ml，充分混勻，取其中的50ml，分裝標準小瓶中，每瓶lml，註明為"校正品-2"，28t:下保存。1號校正品的製備取樣品稀釋液，分裝標準小瓶中，每瓶lml，註明為"校正品-1"，28"下保存。②、弱陽性對照品的製備取抗CCP抗體陽性且0D45。=0.10.15的RA患者血清/血漿lml，離心取上清，用0.22m生物膜過濾除菌，用100ml樣品稀釋液稀釋，充分混勻，分裝標準小瓶中，每瓶lml，註明為"弱陽性對照品"，2『C下保存。③、陰性對照品的製備取正常人血清多份，等比例混合，取lml，離心取上清，用0.22iim生物膜過濾除菌，用100ml樣品稀釋液稀釋，充分混勻，分裝標準小瓶中，每瓶lml，註明為"陰性對照品"，28"下保存。實施例10二抗試劑配置①、HRP標記的抗人IgG抗體配製本試劑盒採用HRP標記的兔抗人IgG抗體，採購於武漢博士德生物工程有限公司(貨號BA1070)。取20iiL儲存液，加800ml抗體稀釋液作1:40000稀釋，混勻，分裝標準小瓶，每瓶15ml，28t:下保存。抗體稀釋液是購自Pierce公司(貨號37552)。②、HRP標記的抗人IgG抗體底物A配製稱取檸檬酸17.9g和Na2HP0412204.67g溶解於400ml去離子水中，然後緩慢加入30%(w/w)H202330iiL，攪拌均勻後，加水至500ml。分裝成10ml/瓶，28。C下保存。③、HRP標記的抗人IgG抗體底物B配製稱取TMB0.lg於100ml去離子水中，加入DMSO2.5ml，在攪拌的同時，緩慢加入0.5ml6MHC1，直至完全溶解，最後加水至500ml。分裝成10ml棕色小瓶，28t:下保存。、HRP標記的抗人IgG抗體底物反應終止液的配製分別量取98%H2S0455ml和去離子水445ml，然後將濃硫酸緩慢加入到去離子水中，混勻，分裝成10ml/瓶，28t:下保存。實施例ll生物素標記多肽用於類風溼關節炎抗體的體外檢測收集得到類風溼性關節炎患者血清183個樣品，非RA自身免疫疾病患者血清104個樣品，正常人血清181個樣品。使用上述實施例所合成的第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵，並經生物素標記的環形多肽I(SEQIDNo1)和多肽II(SEQIDNoll9)。將多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0.5的多肽混合物經實施例8所述方法包被於96孔酶標板。根據實施例9方式配製二抗相關試劑，所測定的結果如下tableseeoriginaldocumentpage20注括號中的的數字表示實測樣本數。靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)=144/183=78.7%專一性=真陰性/(真陰性+假陽性)=271/285=95.1%實施例12類風溼關節炎免疫抗體體外檢測試劑組合物標準操作規程(1)、準備工作①、實驗前30分鐘將實驗用試劑從冰箱中取出，待溫度與室溫平衡後使用。各試劑在使用前應充分混勻。②、配製應用洗滌液根據每次試驗所需要的測試樣本孔數，取試劑盒中相應量的濃縮洗滌液(10X)，按1:10的比例稀釋(如100ml—900ml)。③、稀釋待檢血清/血槳將待檢血清/血槳用樣品稀釋液，按1:101的比例稀釋(即5L—500L)，充分混勻，每份標本須做復孔檢測，同時要加陰性對照品和陽性對照品，若定量檢測，須同時做一系列的校正品檢測。(2)、操作步驟①、將試驗所需的微孔板條放置在酶標板架上，需要的板條應立即放回有乾燥劑的小袋中，並將其密封好，儘量減少與水蒸氣的接觸。②、洗板每孔加入300L的應用洗滌液，甩幹。如此重複三次，最後把板條倒扣拍幹。③、加樣品分別向孔中加入校正品、對照品和稀釋後的待檢血清/血漿，每孔lOOiiL，用封板紙把板條封好，室溫(20°C25°C)孵育一個小時(加完最後一個樣品後開始計時)。、洗板把放應孔內的溶液傾出，每孔加入300L的應用洗滌液，甩幹。如此重複三次，最後把板條倒扣拍幹。⑤、加酶標二抗每孔100L，用封板紙把板條封好，室溫(20°C25°C)孵育半個小時。、洗板把放應孔內的溶液傾出，每孔加入300iiL的應用洗滌液，甩幹。如此重複三次，最後把板條倒扣拍幹。⑦、顯色每孔加入顯色A、B液各50yL，混勻，在室溫避光反應30分鐘。⑧、終止反應每孔加入50iiL終止液，輕輕震蕩混勻，終止反應。⑨、酶標儀測定波長設定在450nm，30分鐘內測定各孔0D45。值。⑩、繪製標準曲線，分析結果。(3)、結果計算與判定樣本0D45。/弱陽性對照0D4①、定性分析結果計算比值結果判定比值<0.950.951.0②、定量分析繪製標準曲線以6個校正出標準曲線。結果計算計算樣本測定的0D4ml)。結果判定>25RU/ml陽性<25RU/ml陰性陰性臨界值，建議重新測定陽性的0D45。值為縱坐標，各自對應的濃度為橫坐標，繪製平均值，然後在標準曲線上讀出相應濃度(RU/21序列表上海榮盛生物藥業有限公司〈120〉體外檢測類風溼關節炎抗體的組合物及其應用〈130>0811485〈160>261〈170>PatentInversion3.3〈210>SEQIDNo1〈211>17〈212>PRT人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>1HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo2〈211>17PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>2HisGinCysAlaGinPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo317〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>3HisGinCysHisArgPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo4〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>4HisGinCysHisGinPheGinPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo5〈211>17PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>5HisGinCysHisGinPheArgMetXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo617〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>6HisGinCysHisGinPheArgPheXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo7〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>7HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo8〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成Xaa為瓜氨酸〈400>8HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210〉SEQIDNo9〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>9HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaSerArglieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo10〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成Xaa為瓜氨酸〈400>10HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo11〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>11HisGinCysAlaArgPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210〉SEQIDNo12〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>12HisGinCysHisGinPheGinMetXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo13〈211>17〈212>PRT24〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>13HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaArgLeuAlaAlaCys151015GlySEQIDNo14〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400〉14HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaSerArglieArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo15〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉15HisGinCysHisGinPheArgPheXaaHisXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo16〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉16HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaSerLeulieAlaCys151015GlySEQIDNo17〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>17HisGinCysAlaGinPheGinPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo18〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400〉18HisGinCysAlaGinPheArgMetXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo19〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成Xaa為瓜氨酸〈400〉19HisGinCysAlaGinPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo20〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>20HisGinCysAlaGinPheArgPheXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo21〈211〉17〈212>PRT人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>21HisGinCysAlaGinPheArgPheXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly26〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>22HisGinCysAlaGinPheArgPheXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo23〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成Xaa為瓜氨酸〈400>23HisGinCysAlaGinPheArgPheXaaGlyXaaSerArglieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo24〈211〉17〈212〉PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>24HisGinCysAlaGinPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo25〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>25HisGinCysHisArgPheGluPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo26〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>26HisGinCysHisArgPheArgMetXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo27PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>27HisGinCysHisArgPheArgPheXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo28〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400〉28HisGinCysHisArgPheArgPheXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo29〈211〉17PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>29HisGinCysHisArgPheArgPheXaaGlyXaaSerArgLeuAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo30〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>3028HisGinCysHisArgPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlalieCys151015Gly〈210〉SEQIDNo31〈211〉17〈212〉PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>31HisGinCysHisGinPheGinPheXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210〉SEQIDNo32〈211〉17〈212〉PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉32HisGinCysHisGinPheGinPheXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys151015GlyXaa為瓜氨酸〈400〉33HisGinCysHisGinPheGinPheXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210〉SEQIDNo34〈211>17〈212〉PRTSEQIDNo35〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>35HisGinCysHisGinPheGinPheXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo36〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>36HisGinCysHisGinPheArgMetXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo37〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>37HisGinCysHisGinPheArgMetXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo38〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>38HisGinCysHisGinPheArgMetXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo39〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>39HisGinCysHisGinPheArgMetXaaGlyXaaSerArglieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo40〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸40HisGinCysHisGinPheArgMetXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo41〈211〉17PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>41HisGinCysAlaArgPheGinPheXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo42〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸42HisGinCysAlaArgPheArgMetXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo43〈211>17PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>43HisGinCysAlaArgPheArgPheXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo4417〈212〉PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>44HisGinCysAlaArgPheArgPheX朋GlyXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo45〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>45HisGinCysAlaArgPheArgPheXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210〉SEQIDNo46〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉46HisGinCysAlaArgPheArgPheXaaGlyXaaSerArglieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo47〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>47HisGinCysAlaArgPheArgPheXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly32〈210>SEQIDNo48〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸48HisGinCysAlaGinPheGinMetXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo49〈211>17PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>49HisGinCysHisArgPheGinMetXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo50〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸50HisGinCysHisGinPheGinMetXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo51〈211>17PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>51HisGinCysHisGinPheGinMetXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo52〈211>17〈212>PRT〈400〉52HisGinCysHisGinPheGinMetXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo53〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成Xaa為瓜氨酸〈400>53HisGinCysHisGinPheGinMetXaaGlyXaaSerArglieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo5417〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>54HisGinCysHisGinPheGinMetXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo55〈211>17〈212>PRT人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>55HisGinCysAlaGinPheArgPheXaaGlyXaaArgLeuAlaAlaCys151015GlySEQIDNo56〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>56HisGinCysHisArgPheArgPheXaaGlyXaaArgLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo57〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>57HisGinCysHisGinPheGinPheXaaGlyXaaArgLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo58〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>58HisGinCysHisGinPheArgMetXaaGlyXaaArgLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo59〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸SEQIDNo60〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>60HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaArgLeulieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo61〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>61HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaArgLeuAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo6217〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>62HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaGlyXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo63〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉63HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo64〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>64HisGinCysHisGinPheGinMetXaaHisXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo65〈211>17〈212〉PRT36〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>65HisGinCysHisGinPheArgMetXaaHisXaaArgLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo66〈211>17〈212>PRT人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>66HisGinCysHisGinPheArgPheXaaHisXaaArgLeulieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo67〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>67HisGinCysHisGinPheArgPheXaaGlyXaaArgLeulieArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo68〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>68HisGinCysAlaArgPheGinPheXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo69〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>69HisGinCysAlaArgPheGinPheXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo70〈211>17PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>70HisGinCysAlaArgPheGinPheXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo71〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸71HisGinCysAlaArgPheGinPheXaaGlyXaaSerArglieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo72〈211>17PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>72HisGinCysAlaArgPheGinPheXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo73〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸73HisGinCysHisArgPheGinMetXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys151015Gly38SEQIDNo74〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>74HisGinCysHisArgPheGinMetXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo75〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>75HisGinCysHisArgPheGinMetXaaGlyXaaSerArglieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo76〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>76HisGinCysHisArgPheGinMetXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo77〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400〉77HisGinCysHisGinPheGinMetXaaHisXaaSerLeuAlaAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo78〈211>17〈212>PRT39人工合成Xaa為瓜氨酸78HiSGinCysHiSGinPheGinMetXaaHiSXaaSetArg工leAlaCysl5lo15GlySEQ工DNo7917PRT人工合成Xaa為瓜氨酸79HiSGinCysHiSGinPheGinMetXaaHiSXaaSetArgAlaArgCysl5lo15GlySEQ工DNo8017PRT人工合成Xaa為瓜氨酸80HiSGlnCysHiSGlnPheArgMetXaaHiSXaaArgArg工leAlaCys[1000]l5lo15[1001]Gly[1002]SEQ工DNo8l[1003]17[1004]PRT[1005]人工合成[1006]Xaa為瓜氨酸[1007]8l[1008]HiSGlnCysHiSGlnPheArgMetXaaHiSXaaArgArgAlaArgCys[1009]l5lo15[1010]Gly[10]]]SEQ工DNo82[10]2]17[1013]PRT[10、4]人工合成[1015]Xaa為瓜氨酸[1016]82[1017]HisGinCysHisGinPheArgPheXaaHisXaaArgLeuAlaArgCys[1018]151015Gly〈210>SEQIDNo83〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成83HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaSerArgAlaAlaCys[1027]151015Gly〈210>SEQIDNo84〈211>17[訓]〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>84HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaGlyXaaArgArgAlaAlaCys[1036]151015Gly〈210>SEQIDNo85〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸85HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaGlyXaaSerLeuAlaAlaCys[1045]151015Gly〈210>SEQIDNo86〈211>17[翻]〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>86HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaGlyXaaSerArglieAlaCys[1054]151015Gly[1056]〈210>SEQIDNo87〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸[訓]〈400>87HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaGlyXaaSerArgAlaArgCys[1063]151015GlySEQIDNo88〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>88HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaArgArgAlaAlaCys[1072]151015Gly〈210>SEQIDNo89〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>89HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaSerLeuAlaAlaCys[翻]151015Gly〈210>SEQIDNo90〈211>17〈212>PRT人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉90HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaSerArglieAlaCys[1090]151015Gly〈210>SEQIDNo91〈211>17〈212>PRT42[1095]〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>91HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaSerArgAlaArgCys[1099]151015Gly〈210>SEQIDNo92〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>92HisGinCysAlaGinPheGinMetXaaHisXaaArgArgAlaAlaCys[1108]151015Gly〈210>SEQIDNo93〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸93HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaArgArgAlaAlaCys[1117]151015Gly〈210>SEQIDNo94〈211>17〈212>PRT人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>94HisGinCysHisGinPheGinMetXaaHisXaaArgLeuAlaAlaCys[1126]151015Gly〈210>SEQIDNo95〈211>17〈212〉PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>95[1134]HisGinCysHisGinPheGinMetXaaHisXaaArgArglieAlaCys[1135]151015Gly〈210>SEQIDNo96〈211>17PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>96HisGinCysHisGinPheGinMetXaaHisXaaArgArgAlaArgCys[1144]151015Gly〈210>SEQIDNo9717〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>97HisGinCysHisGinPheArgMetXaaHisXaaArgLeulieAlaCys[1153]151015Gly〈210>SEQIDNo98〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>98HisGinCysHisGinPheArgMetXaaHisXaaArgLeuAlaArgCys[1162]151015Gly〈210>SEQIDNo99〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>99HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaArgArgAlaAlaCys[1171]151015Gly[1173]〈210>SEQIDNo100〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸100HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaSerLeuAlaAlaCys[1180]151015Gly〈210>SEQIDNo101〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>101HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaSerArglieAlaCys[1189]151015Gly〈210>SEQIDNo102〈211>17PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>102HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaSerArgAlaArgCys[1198]151015Gly〈210>SEQIDNo103〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>103HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaArgLeuAlaAlaCys[1207]151015Gly〈210>SEQIDNo104〈211>17〈212>PRT[1212:[1213:HisGinCysHisGinPheGinMetXaaHisXaaArgLeuAlaArgCys[1252]151015Gly〈210>SEQIDNo109〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>109HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaArgLeuAlaAlaCys[1261]151015Gly〈210>SEQIDNo110〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>110HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaArgArglieAlaCys[1270]151015Gly〈210>SEQIDNo111〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸SEQIDNo112〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>112HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaArgLeulieAlaCys[1288]151015Gly[1290]〈210>SEQIDNo113〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>113HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaArgLeuAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo114〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>114HisGinCysAlaGinPheGinMetXaaHisXaaArgLeulieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo115〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>115HisGinCysHisGinPheGinMetXaaHisXaaArgLeulieArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo116〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>116HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaArgLeulieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo117〈211>17〈212>PRT481329]〈213>人工合成1330]〈223〉Xaa為瓜氨酸1331]〈400>1171332]HisGinCysHisArgPheGinMetXaaHisXaaArgLeulieArgCys1333]1510151334]Gly:1335]〈210>SEQIDNo118:1336]〈211>17:1337]〈212>PRT:1338]〈213>人工合成:1339]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1340]118:1341]HisGinCysAlaArgPheGinMetXaaHisXaaArgLeulieArgCys:1342]151015:1343]Gly:1344]〈210>SEQIDNo119:1345]〈211>17:1346]PRT:1347]〈213>人工合成:1348]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1349]〈400>119:1350]HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaArgLeulieArgCys:1351]151015:1352]Gly:1353]〈210>SEQIDNo120:1354]〈211>17:1355]〈212>PRT:1356]〈213>人工合成:1357]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1358]120:1359]HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaArgLeulieArgCys:1360]151015:1361]Gly:1362]〈210>SEQIDNo121:1363]〈211>17:1364]PRT:1365]〈213>人工合成:1366]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1367]〈400>12149[1368]HisGinCysAlaGinPheGinMetArgHisXaaArgLeulieArgCys[1369]151015Gly〈210>SEQIDNo122〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>122HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaArgLeulieArgCys[1378]151015Gly〈210>SEQIDNo123〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>35HisGinCysAlaArgPheGinPheArgHisXaaArgLeulieArgCys[1387]151015Gly〈210>SEQIDNo124〈211>17PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>36HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaArgLeulieArgCys[1396]151015Gly〈210〉SEQIDNo125〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉125HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaSerLeulieArgCys[1405]151015Gly[1407:〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉131HisGinCysAlaArgPheArgPheArgGlyXaaArgLeulieArgCys[1450]151015GlySEQIDNo132〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>132HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaSerLeulieArgCys[1459]151015Gly〈210>SEQIDNo133〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>133HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaArgArglieArgCys[1468]151015Gly〈210>SEQIDNo134〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸134HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaArgLeuAlaArgCys[1477]151015Gly〈210>SEQIDNo135〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>135[1485:〈210〉SEQIDNo140〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>140HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaArgLeuAlaAlaCys[1531]151015Gly〈210>SEQIDNo141〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>141HisGinCysHisArgPheArgMetArgHisXaaArgLeulieArgCys[1540]151015Gly〈210>SEQIDNo142〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>142HisGinCysHisArgPheGinPheArgHisXaaArgLeulieArgCys[1549]151015Gly〈210〉SEQIDNo143〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>143HisGinCysHisArgPheGinMetArgGlyXaaArgLeulieArgCys[1558]151015Gly〈210>SEQIDNo144〈211>17〈212>PRT541563]〈213>人工合成:1564]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1565]〈400>144:1566]HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaSerLeulieArgCys:1567]151015:1568]Gly:1569]〈210>SEQIDNo145:1570]PRT:1572]〈213>人工合成:1573]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1574]〈400>145:1575]HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaArgArglieArgCys:1576]151015:1577]Gly:1578]〈210>SEQIDNo146:1579]〈211>17:1580]〈212>PRT:1581]〈213>人工合成:1582]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1583]〈400〉146:1584]HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaArgLeuAlaArgCys:1585]151015:1586]Gly:1587]〈210>SEQIDNo147:1588]〈211>17:1589]人工合成:巧91]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1592]〈400>147:1593]HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaArgLeulieAlaCys:1594]151015:1595]Gly:1596]〈210>SEQIDNo148:1597]〈211>17:1598]〈212>PRT:1599]〈213>人工合成:1600]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1601]〈400>148[1602.[1603[1604[1605[1606[1607[1608[1609:[1610:[1611:〈210>SEQIDNo153〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>153HisGinCysAlaGinPheGinMetArgHisXaaArgLeuAlaArgCys[1648]151015Gly〈210>SEQIDNo15417〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>154HisGinCysAlaGinPheGinMetArgHisXaaArgLeulieAlaCys[1657]151015Gly〈210>SEQIDNo155〈211>17[訓]〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉155HisGinCysAlaArgPheArgMetArgGlyXaaArgLeulieArgCys[1666]151015Gly〈210>SEQIDNo156〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>156HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaSerLeulieArgCys[1675]151015Gly〈210>SEQIDNo157〈211>17〈212〉PRT57[1680]〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉157HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaArgArglieArgCys[1684]151015Gly〈210>SEQIDNo158〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>158HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaArgLeuAlaArgCys[1693]151015Gly〈210>SEQIDNo15917〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉159HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaArgLeulieAlaCys[1702]151015Gly〈210>SEQIDNo160〈211>17〈212>PRT人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>160HisGinCysAlaArgPheGinPheArgHisXaaSerLeulieArgCys[1711]151015GlySEQIDNo161〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>161[1719]HisGinCysAlaArgPheGinPheArgHisXaaArgArglieArgCys151015Gly〈210〉SEQIDNo162〈211>17〈212>PRT人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉162HisGinCysAlaArgPheGinPheArgHisXaaArgLeuAlaArgCys151015Gly〈210〉SEQIDNo163〈211〉17PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉163HisGinCysAlaArgPheGinPheArgHisXaaArgLeulieAlaCys151015Gly〈210〉SEQIDNo164〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉164HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaArgArglieArgCys151015GlySEQIDNo165〈211〉17〈212〉PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>165HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaArgLeuAlaArgCys[1756]151015Gly[1758]PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉166HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaArgLeulieAlaCys[1765]151015Gly〈210〉SEQIDNo167〈211〉17〈212〉PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉167HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaSerLeuAlaArgCys[1774]151015Gly〈210〉SEQIDNo168〈211〉17〈212〉PRT17〈212〉PRT60[1797:[1798:[1799:[1800:HisGinCysHisGinPheGinMetArgHisXaaArgLeuAlaArgCys[1837]151015Gly〈210>SEQIDNo175〈211>17[訓]〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>175HisGinCysHisGinPheGinMetArgHisXaaArgLeulieAlaCys[1846]151015Gly〈210>SEQIDNo176〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>176HisGinCysAlaGinPheArgPheArgHisXaaArgLeulieArgCys[1855]151015Gly〈210>SEQIDNo177〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>177HisGinCysAlaGinPheArgMetArgGlyXaaArgLeulieArgCys[1864]151015Gly〈210>SEQIDNo178〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>178HisGinCysAlaGinPheArgMetArgHisXaaSerLeulieArgCys[1873]151015Gly621875]〈210〉SEQIDNo179:1876]〈211>17:1877]〈212>PRT:1878]〈213>人工合成:1879]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1880]〈400>179:翻]HisGinCysAlaGinPheArgMetArgHisXaaArgArglieArgCys1882]151015:1883]Gly:1884]〈210>SEQIDNo180:1885]〈211>17:1886]〈212>PRT:1887]〈213>人工合成:1888]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1889]〈400>180:1890]HisGinCysAlaGinPheArgMetArgHisXaaArgLeuAlaArgCys:1891]151015:1892]Gly:1893]〈210>SEQIDNo181:1894]〈211>17:1895]〈212>PRT:1896]〈213>人工合成:1897]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1898]〈400>181:1899]HisGinCysAlaGinPheArgMetArgHisXaaArgLeulieAlaCys:1900]151015:1901]Gly:1902]〈210>SEQIDNo182:1903]〈211>17:1904]〈212>PRT:1905]〈213>人工合成:1906]〈223〉Xaa為瓜氨酸:1907]〈400>182:1908]HisGinCysHisArgPheArgPheArgHisXaaArgLeulieArgCys:1909]151015:1910]Gly:1911]〈210>SEQIDNo183:1912]〈211>17:1913]〈212>PRT[1914HisGinCysAlaArgPheArgPheArgHisXaaArgLeulieAlaCys[1954]151015Gly〈210>SEQIDNo188〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>188HisGinCysHisArgPheGinPheArgGlyXaaArgLeulieArgCys[1963]151015Gly〈210>SEQIDNo189〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>189HisGinCysAlaGinPheGinPheArgGlyXaaArgLeulieArgCys[1972]151015Gly〈210>SEQIDNo190〈211>17[懸]〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>190HisGinCysAlaArgPheGinPheArgGlyXaaSerLeulieArgCys[1981]151015Gly〈210>SEQIDNo191[腦]〈211>17〈212>PRT人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>191HisGinCysAlaArgPheGinPheArgGlyXaaArgArglieArgCys[1990]151015Gly65〈210>SEQIDNo192〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>192HisGinCysAlaArgPheGinPheArgGlyXaaArgLeuAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo193〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>193HisGinCysAlaArgPheGinPheArgGlyXaaArgLeulieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo194〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>1HisGinCysHisArgPheGinMetArgGlyXaaSerLeulieArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo195〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>195HisGinCysAlaGinPheGinMetArgGlyXaaSerLeulieArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo196〈211>17〈212>PRT66[2031]〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>196HisGinCysAlaArgPheArgMetArgGlyXaaSerLeulieArgCys[2035]151015Gly〈210>SEQIDNo197〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>197HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaSerArglieArgCys[2044]151015Gly〈210>SEQIDNo198〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>198HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaSerLeuAlaArgCys[2053]151015Gly〈210>SEQIDNo199〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>199HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaSerLeulieAlaCys[2062]151015GlySEQIDNo200〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>200[2070]HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaSerArglieArgCys[2071]151015Gly〈210>SEQIDNo201〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成201HisGinCysAlaGinPheGinMetArgHisXaaSerArglieArgCys[2080]151015Gly〈210>SEQIDNo202〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>202HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaSerArglieArgCys[2089]151015Gly〈210>SEQIDNo203〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸SEQIDNo204〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>204HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaSerArgAlaArgCys[2107]151015Gly[2109]〈210>SEQIDNo205〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>205HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaSerArglieAlaCys[2116]151015Gly〈210>SEQIDNo206〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>206HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaArgArgAlaAlaCys[2125]151015Gly〈210>SEQIDNo207〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>207HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaArgArgAlaArgCys[2134]151015Gly〈210>SEQIDNo208〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>208HisGinCysAlaGinPheGinMetArgHisXaaArgArgAlaArgCys[2143]151015Gly〈210>SEQIDNo209〈211>17〈212>PRT:2148]〈213〉人工合成:2149]〈223〉Xaa為瓜氨酸:2150]〈400>209:2151]HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaArgArgAlaArgCys:2152]151015:2153]Gly:2154]SEQIDNo210:2155]〈211>17:2156]〈212>PRT:2157]〈213>人工合成:2158]〈223〉Xaa為瓜氨酸:2159]〈400>210:2160]HisGinCysAlaArgPheGinPheArgHisXaaArgArgAlaArgCys:2161]151015:2162]Gly:2163]〈210>SEQIDNo211:2164]〈211>17:2165]〈212>PRT:2166]〈213>人工合成:2167]〈223〉Xaa為瓜氨酸:2168]〈400>211:2169]HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisSerArgArgAlaArgCys:2170]151015:2171]Gly:2172]〈210>SEQIDNo212:2173]〈211>17:2174]〈212>PRT:2175]〈213〉人工合成:2176]〈223〉Xaa為瓜氨酸:2177]〈400>212:2178]HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaArgLeuAlaAlaCys:2179]151015:2180]Gly:2181]SEQIDNo213:2182]〈211〉17:2183]〈212>PRT:2184]〈213>人工合成:2185]〈223〉Xaa為瓜氨酸:2186]〈400>213[2187]HisGinCysAlaGinPheGinMetArgHisXaaArgLeuAlaAlaCys[2188]151015Gly〈210>SEQIDNo214〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉214HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaArgLeuAlaAlaCys[2197]151015Gly〈210>SEQIDNo215〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>215HisGinCysAlaArgPheGinPheArgHisXaaArgLeuAlaAlaCys[2206]151015Gly〈210>SEQIDNo216〈211>17〈212〉PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>216HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaArgLeuAlaAlaCys[2215]151015Gly〈210>SEQIDNo217〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>217HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaSerLeuAlaAlaCys[2224]151015Gly[2226]〈210>SEQIDNo218〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>218HisGinCysHisGinPheArgPheArgHisXaaArgLeulieArgCys[2233]151015Gly〈210>SEQIDNo219〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>219HisGinCysHisGinPheArgMetArgGlyXaaArgLeulieArgCys[2242]151015Gly〈210>SEQIDNo220〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>220HisGinCysHisGinPheArgMetArgHisXaaSerLeulieArgCys[2251]151015Gly〈210>SEQIDNo221〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>221HisGinCysHisGinPheArgMetArgHisXaaArgArglieArgCys[2260]151015Gly〈210>SEQIDNo222〈211>17〈212>PRT72[2265]〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>222HisGinCysHisGinPheArgMetArgHisXaaArgLeuAlaArgCys[2269]151015Gly〈210>SEQIDNo223〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>223HisGinCysHisGinPheArgMetArgHisXaaArgLeulieAlaCys[2278]151015Gly〈210>SEQIDNo224〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>224HisGinCysAlaGinPheArgPheArgGlyXaaArgLeulieArgCys[2287]151015Gly〈210>SEQIDNo225〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>225HisGinCysAlaGinPheArgPheArgHisXaaSerLeulieArgCys[2296]151015Gly〈210>SEQIDNo226〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>22673HisGinCysAlaGinPheArgPheArgHisXaaArgArglieArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo227〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400〉227HisGinCysAlaGinPheArgPheArgHisXaaArgLeuAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo228〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸228HisGinCysAlaGinPheArgPheArgHisXaaArgLeulieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo229〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成Xaa為瓜氨酸〈400>229HisGinCysAlaArgPheArgPheArgGlyXaaSerLeulieArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo230〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>230HisGinCysAlaArgPheArgPheArgGlyXaaArgArglieArgCys151015Gly74[2343]〈210〉SEQIDNo231〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>231HisGinCysAlaArgPheArgPheArgGlyXaaArgLeuAlaArgCys[2350]151015Gly〈210>SEQIDNo232〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>232HisGinCysAlaArgPheArgPheArgGlyXaaArgLeulieAlaCys[2359]151015Gly〈210>SEQIDNo233〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>233HisGinCysHisArgPheArgPheArgGlyXaaArgLeulieArgCys[2368]151015Gly〈210>SEQIDNo234〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>234HisGinCysAlaArgPheGinPheArgGlyXaaSerArglieArgCys[2377]151015Gly〈210>SEQIDNo235〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>235HisGinCysAlaArgPheGinPheArgGlyXaaSerLeuAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo236〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>236HisGinCysAlaArgPheGinPheArgGlyXaaSerLeulieAlaCys151015Gly〈210>SEQIDNo237〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>237HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaSerArgAlaArgCys151015Gly〈210>SEQIDNo238〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>238HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaSerArglieAlaCys151015GlySEQIDNo239〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>239[2421]HisGinCysAlaArgPheArgMetArgGlyXaaSerArglieArgCys[2422]151015Gly〈210>SEQIDNo240〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成240HisGinCysAlaGinPheGinMetArgGlyXaaSerArglieArgCys[2431]151015Gly〈210>SEQIDNo241〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>241HisGinCysHisArgPheGinMetArgGlyXaaSerArglieArgCys[2440]151015Gly〈210>SEQIDNo242〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸242HisGinCysAlaArgPheGinMetArgHisXaaSerArgAlaAlaCys[2449]151015Gly〈210>SEQIDNo243〈211〉17〈212>PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>243HisGinCysAlaArgPheGinPheArgHisXaaSerArgAlaArgCys[2458]151015Gly[2460]SEQIDNo244〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>244HisGinCysAlaArgPheArgMetArgHisXaaSerArgAlaArgCys[2467]151015Gly〈210>SEQIDNo245〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>245HisGinCysAlaGinPheGinMetArgHisXaaSerArgAlaArgCys[2476]151015Gly〈210>SEQIDNo246〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>246HisGinCysHisArgPheGinMetArgHisXaaSerArgAlaArgCys[2485]151015Gly〈210>SEQIDNo247〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉247HisGinCysAlaArgPheGinMetArgGlyXaaArgArgAlaAlaCys[2494]151015Gly〈210>SEQIDNo248〈211>17〈212>PRT78[2499]〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>248HisGinCysAlaAr1Gly〈210>SEQIDNo249〈211>17〈212〉PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>249HisGinCysAlaAr1Gly〈210>SEQIDNo250〈211〉17PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>250HisGinCysAlaGl1Gly〈210>SEQIDNo25117〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>251HisGinCysHisAr1Gly〈210>SEQIDNo252〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>2521015101510151015[2538]HisGinCysHisGinPheArgPheArgHisXaaArgLeulieArgCys[2539]151015Gly〈210>SEQIDNo253〈211〉17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>253HisGinCysHisGinPheArgPheArgGlyXaaArgLeulieArgCys[2548]151015Gly〈210>SEQIDNo254〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>47HisGinCysHisGinPheArgPheArgGlyXaaSerLeulieArgCys[2557]151015Gly〈210>SEQIDNo255〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>255HisGinCysHisGinPheArgPheArgGlyXaaArgArglieArgCys[2566]151015Gly〈210>SEQIDNo256〈211>17〈212>PRT〈213>人工合成〈223>Xaa為瓜氨酸〈400>256HisGinCysHisGinPheArgPheArgGlyXaaSerArgAlaArgCys[2575]151015Gly80[2577]〈210>SEQIDNo257〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>257HisGinCysHisGinPheArgPheArgGlyXaaSerArgAlaAlaCys[2584]151015Gly〈210>SEQIDNo258〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>258HisGinCysHisGinPheGinMetArgGlyXaaSerLeulieAlaCys[2593]151015Gly〈210>SEQIDNo259〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>259HisGinCysHisGinPheGinPheArgGlyXaaSerLeuAlaAlaCys[2602]151015Gly〈210>SEQIDNo260〈211>17〈212>PRT〈213〉人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400>260HisGinCysHisGinPheArgMetArgHisXaaSerArgAlaAlaCys[2611]151015Gly〈210>SEQIDNo261〈211>17〈212>PRT[2616]〈213>人工合成〈223〉Xaa為瓜氨酸〈400〉261HisGinCysHisGinPheArgMetArgGlyXaaSerLeuAlaAlaCys[2620]151015Gly權利要求一種抗原組合物，包含多肽I和多肽II，其特徵在於所述的多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0-1；所述的多肽I包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaa1-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Cys-Gly，其中，Xaa1為His或Ala；Xaa2為Gln或Arg；Xaa3為Arg或Gln；Xaa4為Phe或Met；Xaa5為修飾的Arg；Xaa6為Gly或His；Xaa7為Arg；Xaa8為Ser或Arg；Xaa9為Arg或Leu；Xaa10為Ala或Ile；Xaa11為Ala或Arg，其中至少有兩個精氨酸被修飾；所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaa1-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Arg-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Cys-Gly，其中，Xaa1為His或Ala；Xaa2為Gln或Arg；Xaa3為Arg或Gln；Xaa4為Phe或Met；Xaa5為Gly或His；Xaa6為Arg；Xaa7為Ser或Arg；Xaa8為Arg或Leu；Xaa9為Ala或Ile；Xaa10為Ala或Arg，其中至少有一個精氨酸被修飾。2.如權利要求1所述的抗原組合物，其特徵在於所述的多肽I包含如下胺基酸序列His_Gln_Cys_His_Gln_Phe_Arg_Xaa4_Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaal0_Xaall-Cys-Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為修飾的Arg;Xaa6為Gly或His;Xaa7為修飾的Arg;Xaa8為Ser或Arg;Xaa9為Arg或Leu;XaalO為Ala或lie;Xaall為Ala或Arg;所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Arg-Xaa5_Xaa6_Xaa7_Xaa8_Xaa9_Xaa10_Cys_Gly，其中，Xaal為His或Ala;Xaa2為Gin或Arg;Xaa3為Arg或Gin;Xaa4為Phe或Met;Xaa5為Gly或His;Xaa6為修飾的Arg;Xaa7為Ser或Arg;Xaa8為Arg或Leu;Xaa9為Ala或lie;XaalO為Ala或Arg。3.如權利要求1所述的抗原組合物，其特徵在於所述多肽I包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-His-Gln-Phe-Arg-Phe-Xaal-Gly-Xaa2-Ser-Arg-Ala-Ala-Cys-Gly，其中，Xaal為修飾的Arg;Xaa2為修飾的Arg;所述的多肽II包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Ala-Arg-Phe-Gln-Met-Arg-His-Xaal_Arg_Leu_Ile_Arg_Cys_Gly，其中，Xaal為修飾的Arg。4.如權利要求l所述的抗原組合物，其特徵在於所述的修飾的精氨酸具有通式(I)所述的結構formulaseeoriginaldocumentpage2，式IHC其中Gl為0、NH或CH2;G2為NH2、CH3、NHCH3或N(CH3)2;G3為0、NH、NHCH3、NHCH3;n為2、3或4。其中當Gl為NH，G2為NH2時，G3不為NH。5.如權利要求4所述的抗原組合物，其特徵在於能所述的修飾的精氨酸為瓜氨酸。6.如權利要求2所述的抗原組合物，其特徵在於所述多肽I包含具體胺基酸序列為SEQIDNo1;所述多肽II包含具體胺基酸序列為SEQIDNo119。7.如權利要求2所述的抗原組合物，其特徵在於所述多肽I包含具體胺基酸序列為SEQIDNo2-118;所述多肽II包含具體胺基酸序列為SEQIDNo120-261。8.如權利要求1-7所述的抗原組合物，其特徵在於多肽在第三位Cys與第十六位Cys之間形成二硫鍵。9.如權利要求8所述的抗原組合物，其特徵在於多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0.5。10.如權利要求8所述的抗原組合物，其特徵在於所述多肽I或II能與HLA-DR結合，形成HLA-DR-多肽I或II複合物。11.如權利要求8所述的抗原組合物，其特徵在於所述多肽I或II能與類風溼關節炎免疫抗體結合，形成抗原_抗體複合物。12.如權利要求8所述的抗原組合物，其特徵在於該多肽在類風溼關節炎自身免疫抗體體外檢測中的應用。13.—種包含權利要求8所述抗原的免疫抗體體外檢測試劑組合物，其特徵在於還包括親和素或鏈黴親和素、酶標記抗人IgG抗體和顯色底物。14.如權利要求13所述的體外檢測試劑組合物，其特徵在於所述的抗人IgG抗體經辣根過氧化物酶標記。15.如權利要求13所述的體外檢測試劑組合物，其特徵在於所述的顯色底物為四甲基聯苯氨。16.如權利要求14或15所述的體外檢測試劑組合物，其特徵在於所述的多肽結合有生物素。17.如權利要求16所述的體外檢測方法，其特徵在於所述的多肽N末端結合有生物素標記。18.如權利要求17所述的體外檢測試劑組合物在類風溼關節炎免疫抗體體外檢測中的應用。19.如權利要求14所述的體外檢測試劑組合物，其特徵在於所述的親和素或鏈黴親和素直接結合於疏水性器材表面，所述多肽I或II通過其上標記的生物素與所述親和素或鏈黴親和素非共價親和。20.如權利要求19所述的體外檢測試劑組合物，其特徵在於通過如下具體步驟製備a)配置包被液；b)將包被液加入疏水性器材表面；c)在0-4(TC條件下保存6小時以上；d)洗滌疏水性器材表面2次以上；e)加入含有經生物素標記的抗原組合物的溶液於洗滌後的疏水性器材表面；f)10-3(TC條件下保存1小時以上；g)洗滌疏水性器材表面2次以上；所述的包被液pH為7.0-8.0的緩衝液，其中溶解有濃度為0.1-10iig/mL的親和素或鏈黴親和素；所述的疏水性器材為容器或直板。21.如權利要求20所述的製備方法，其特徵在於所述的包被液為pH7.4的磷酸緩衝液或磷酸緩衝鹽溶液，所述的鏈黴親和素濃度為2i!g/mL。22.如權利要求20所述的製備方法，其特徵在於所述的疏水性器材為酶標板。23.如權利要求20所述的製備方法，其特徵在於所述的疏水性器材由聚苯乙烯、聚乙烯或聚氯乙烯製成。24.如權利要求20所述的製備方法，其特徵在於在所述的0-4(TC溫度範圍選擇0-10。C。25.如權利要求20所述的製備方法，其特徵在於在所述的10-3(TC溫度範圍選擇20-25°C。26.如權利要求20-25之一所述的製備方法在類風溼關節炎免疫抗體體外檢測中的應用。全文摘要本發明公開了一種抗原組合物，所述的組合物包含多肽I和多肽II，多肽I與多肽I和多肽II之和的摩爾比比值為0-1。通過序列上兩個不相鄰的半胱氨酸側鏈巰基形成二硫鍵的方式，產生環狀的多肽。這類多肽不僅能與類風溼關節炎自身免疫抗體相結合，同時還能對HLA-DR具有高親和力。經過實驗驗證，該類多肽與類風溼關節炎自身免疫抗體相結合的專一性大於95％，對類風溼關節炎自身免疫抗體的檢測靈敏度大於75％。與市場上銷售的同類產品相比，其靈敏度得到顯著提高，更有利於類風溼關節炎自身免疫抗體的體外檢測。文檔編號G01N33/53GK101726588SQ20081020122公開日2010年6月9日申請日期2008年10月15日優先權日2008年10月15日發明者朱紹榮,王紹成申請人:上海榮盛生物藥業有限公司