一種提高煙苗耐澇性的方法與流程

2024-04-01 12:46:05

本發明涉及菸草技術領域，且特別涉及一種提高煙苗耐澇性的方法。

背景技術：

菸草是世界範圍內一種重要的經濟作物。菸草生產中廣泛採用的是漂浮育苗，在育苗過程中部分根系會浸泡在水中，使煙苗遭受一定程度的水澇脅迫。此外，菸草植株淹水會使菸葉中的可溶性糖、鉀含量和鉀/氮比值顯著的降低，明顯的降低了菸葉的產量與品質。通過研究淹水條件下菸草理化指標的變化，發現隨著淹水時間的延長，超氧物歧化酶(SOD)活性和過氧化氫酶(CAT)活性顯著增強，脯氨酸(Pro)迅速積累，丙二醛(MDA)含量出現先升高後降低的趨勢，菸草葉片淨光合速率、蒸騰速率及氣孔導度均隨淹水時間的延長顯著下降，而胞間CO2濃度先輕微下降、隨後顯著上升。淹水條件下煙株淨光合速率、蒸騰強度以伸根期影響最大，對根系活力和菸葉鉀含量的影響則在煙株生長中後期降低更為嚴重，煙株在各生育期淹水，其淨光合速率、蒸騰速率、根系活力和菸葉鉀含量都隨淹水時間的延長和淹水深度的增加呈顯著下降趨勢，淹水不僅威脅到煙株的生長，還可能會降低其產量和品質。因此，通過各種農藝和化學調控手段來提高菸草的耐澇性具有重要的實際意義。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種提高煙苗耐澇性的方法，其能有效提高煙苗耐澇性，可有效提高淹水脅迫過程中煙苗的乾物質積累速率、相對生長速率、根系活力、脯氨酸含量及淨光合速率、降低MDA含量和電解質滲透率，提高煙苗素質。

本發明解決其技術問題是採用以下技術方案來實現的。

本發明提出一種提高煙苗耐澇性的方法，其特徵在於，對三葉一心期至五葉一心期的煙苗的地上部分噴施2-4次化學試劑，每次噴施至煙苗全株淋溼，化學試劑選自氯化鈣、赤黴素、水楊酸和多效唑中的至少一種。

本發明實施例的提供的一種提高煙苗耐澇性的方法的有益效果是：利用該方法，可保持煙苗較高的單株乾重、相對生長速率、乾物質積累速率、根系活力、脯氨酸含量、葉綠素含量、淨光合速率、胞間CO2濃度、氣孔導度和蒸騰速率，有效緩解淹水脅迫誘導的MDA的積累和電解質滲透率，有效提高煙苗的耐澇性與綜合素質。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對範圍的限定，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗株高的影響的柱狀圖；

圖2為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗單株鮮重和單株乾重的影響的柱狀圖；

圖3為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗相對生長速率和乾物質積累速率的影響的柱狀圖；

圖4為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗脯氨酸的影響的柱狀圖；

圖5為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗電解質滲透率的影響的柱狀圖；

圖6為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗丙二醛的影響的柱狀圖；

圖7為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗根系活力的影響的柱狀圖；

圖8為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗總葉綠素的影響的柱狀圖；

圖9為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗淨光合速率的影響的柱狀圖；

圖10為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗胞間CO2濃度的影響的柱狀圖；

圖11為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗氣孔導度的影響的柱狀圖；

圖12為本發明試驗例提供的淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗蒸騰速率的影響的柱狀圖。

具體實施方式

為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未註明具體條件者，按照常規條件或製造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。

水澇脅迫不僅威脅到植物的生長，還可能會降低其產量和品質，更甚者，例如大部分維管植物在淹水環境中均表現出明顯的傷害，甚至死亡。不同植物對水澇脅迫的敏感度、應激能力、以及對水澇脅迫下代謝途徑均有所不同，本發明針對菸草植株進行研究。

本發明中煙苗採用漂浮育種方式，參閱國標《GB/T25241.1-2010》的方法對其進行培育和管理，煙苗的品種不限，本領域工作人員可根據實際情況進行不同品種的選擇。

下面對本發明實施例提供的一種提高煙苗耐澇性的方法進行具體說明。

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：對三葉一心期至五葉一心期的煙苗的地上部分噴施2-4次化學試劑，每次噴施至所述煙苗全株淋溼。

處於三葉一心期至五葉一心期的煙苗苗齡較佳，對環境刺激敏感，噴施化學試劑後吸收快，便於後期再生長，苗齡過小，煙苗發育不完全，營養物質儲備不足，噴施化學試劑後吸收效果不佳，而苗齡過大，不利於後期進行煙苗移栽以及發生移栽後還苗期長等問題。

優選地，對三葉一心期至五葉一心期的煙苗的地上部分噴施4次化學試劑，煙苗對化學試劑的吸收最優，顯著提高煙苗耐澇性。

更優選地，煙苗為三葉一心期的煙苗，苗齡最佳，噴施化學試劑後吸收快，適應力強，加快煙苗耐澇性提高的效率。更優選地，對三葉一心期的煙苗的地上部分噴施4次化學試劑，進一步提高煙苗耐澇性。

具體地，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止，保證化學試劑的噴施量，防止噴施量過小，提高煙苗耐澇性效果不佳，噴施量過大，造成化學試劑的浪費以及對煙苗產生不良影響。

噴施化學試劑於常溫進行，具體地，噴施化學試劑於18-30℃的條件下進行。

優選地，相鄰的任意兩次噴施化學試劑之間間隔1.5-2.5d，給予煙苗對化學試劑的吸收後進行物質積累以及緩衝的時間。優選地，最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

其中，化學試劑選自氯化鈣、赤黴素、水楊酸和多效唑中的至少一種。

例如，當單獨使用氯化鈣作為化學試劑時，化學試劑中可以含有濃度為3.0-6.0mmol/L的氯化鈣，該濃度範圍內的氯化鈣提高煙苗耐澇性的效率最佳。在此基礎上，還可以添加適量的赤黴素、水楊酸或者多效唑等。

氯化鈣(CaCl2)中，鈣是調節植物體內代謝系統的重要因子之一，鈣能與作為胞內信使的鈣調蛋白結合，調節植物體的許多生理代謝過程，尤其在環境脅迫下，鈣和鈣調素參與脅迫信號的感受、傳遞、響應與表達，提高植物的抗逆性。氯是微量元素中僅有的陰離子，不同植物對氯營養要求差異很大。而本發明中，則發現利用氯化鈣處理過的煙苗可以有效提高其耐澇性，具體表現為在淹水脅迫過程中，與噴施蒸餾水的對照組煙苗相比，有效降低MDA含量和電解質滲透率，且其還提高了煙苗的乾物質積累速率、相對生長速率、根系活力、脯氨酸含量，總體上提高了煙苗素質。

再例如，也可以單獨使用赤黴素作為化學試劑，此時，作為優選，化學試劑中赤黴素的濃度控制為100-200mg/L。該濃度範圍內的赤黴素提高煙苗耐澇性的效率最佳，防止赤黴素在濃度過大時對煙苗的生長產生不利影響。應當理解，將適量的氯化鈣、水楊酸和多效唑中的一種或幾種添加進赤黴素中也是可行的，此時始終控制赤黴素在化學試劑中的濃度大致為100-200mg/L便能保證煙苗具有較好的耐澇性。

赤黴素(GA3)也稱吉貝素，是一種植物激素，調節生長和影響各種發育過程，包括促進莖的延長，發芽，種子休眠，開花，性別表現，葉和果實的老化抑制。而本發明中，則發現利用赤黴素處理過的煙苗可以有效提高其耐澇性，具體表現為在淹水脅迫過程中，與噴施蒸餾水的對照組煙苗相比，有效降低MDA含量和電解質滲透率，且其還提高了煙苗的乾物質積累速率、相對生長速率、根系活力、脯氨酸含量，尤其是淨光合速率和蒸騰速率，總體上提高了煙苗素質。

例如，也可以單獨使用水楊酸作為化學試劑，此時，作為優選，化學試劑中水楊酸的濃度控制在1.0-2.0mmol/L，該濃度範圍內的水楊酸提高煙苗耐澇性的效率最佳，防止水楊酸(SA)在濃度過大時對煙苗引起藥害。應當理解，將適量的氯化鈣、赤黴素和多效唑中的一種或幾種添加進赤黴素中也是可行的，此時始終控制水楊酸在化學試劑中的濃度大致為1.0-2.0mmol/L便能保證煙苗具有較好的耐澇性。

水楊酸(SA)，化學名稱為鄰羥基苯甲酸，其可誘導植物產生某些病原相關蛋白，使植物產生抗病的生理效應。水楊酸還可以誘導開花、影響黃瓜的性別表達及增加植物分支數量等生理效應。而本發明中，則發現利用水楊酸處理過的煙苗可以有效提高其耐澇性，具體表現為在淹水脅迫過程中，與噴施蒸餾水的對照組煙苗相比，有效降低MDA含量和電解質滲透率，且其還提高了煙苗的乾物質積累速率、相對生長速率、根系活力、脯氨酸含量、淨光合速率和蒸騰速率，尤其是促進煙株的相對生長速率、乾物質積累速率的增加、降低電解質滲透率以及提高根系活力，總體上提高了煙苗素質。

例如，也可以單獨使用多效唑作為化學試劑，此時，作為優選，化學試劑中多效唑的濃度控制在100-200mg/L，該濃度範圍內的多效唑提高煙苗耐澇性的效率最佳，防止多效唑過度對煙苗造成不良影響。應當理解，將適量的氯化鈣、赤黴素和水楊酸中的一種或幾種添加進多效唑中也是可行的，此時始終控制多效唑在化學試劑中的濃度大致為100-200mg/L便能保證煙苗具有較好的耐澇性。

多效唑(PP333)，是三唑類植物生長調節劑，抑制莖杆伸長，縮短節間、促進植物分櫱、促進花芽分化，增加植物抗逆性能，提高產量等效果。而本發明中，則發現利用多效唑處理過的煙苗可以有效提高其耐澇性，具體表現為在淹水脅迫過程中，與噴施蒸餾水的對照組煙苗相比，有效降低MDA含量和電解質滲透率，且其還提高了煙苗的乾物質積累速率、相對生長速率、根系活力、脯氨酸含量、淨光合速率和蒸騰速率，尤其是降低煙苗的電解質滲透率，提高其根系活力、提高淨光合速率、蒸騰速率，總體上提高了煙苗素質。

以下結合實施例對本發明的特徵和性能作進一步的詳細描述。

實施例1

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度20℃的條件下，對育苗盤上生長至四葉一心期的煙苗的地上部分噴施3次3.0mmol/L的氯化鈣，每次間隔2d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止，最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例2

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度20℃的條件下，對育苗盤上生長至五葉一心期的煙苗的地上部分噴施2次4.5mmol/L的氯化鈣，每次間隔2.5d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止，最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例3

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度27℃的條件下，對育苗盤上生長至五葉一心期的煙苗的地上部分噴施4次100mg/L的赤黴素，每次間隔1.5d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止，最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例4

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度22℃的條件下，對育苗盤上生長至四葉一心期的煙苗的地上部分噴施3次200mg/L的赤黴素，每次間隔2.5d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止，最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例5

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度27℃的條件下，對育苗盤上生長至三葉一心期的煙苗的地上部分噴施4次150mg/L的赤黴素，每次間隔2d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止。最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例6

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度27℃的條件下，對育苗盤上生長至五葉一心期的煙苗的地上部分噴施3次2.0mmol/L的水楊酸，每次間隔1.5d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止。最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例7

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度18℃的條件下，對育苗盤上生長至四葉一心期的煙苗的地上部分噴施2次1.0mmol/L的水楊酸，每次間隔2.5d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止。最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例8

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度30℃的條件下，對育苗盤上生長至三葉一心期的煙苗的地上部分噴施4次1.5mmol/L的水楊酸，每次間隔2d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止。最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例9

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度30℃的條件下，對育苗盤上生長至五葉一心期的煙苗的地上部分噴施3次100mg/L的多效唑，每次間隔1.5d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止。最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

實施例10

一種提高煙苗耐澇性的方法，包括：春天於大棚內溫度18℃的條件下，對育苗盤上生長至三葉一心期的煙苗的地上部分噴施3次150mg/L的多效唑，每次間隔2.5d，每次噴施至煙苗全株淋溼，藥液欲滴下為止。最後一次噴施完成後，至少保持2天，使煙苗對最後一次噴施的化學試劑進行吸收，緩衝。

試驗例

採用由雲南省玉溪中煙種子有限責任公司提供雲煙97，將雲煙97的包衣種子在溫室大棚進行播種，採用漂浮育苗方式，按(GB/T25241.1-2010)的方法培育和管理煙苗。

具體實驗操作步驟：待煙苗長到三葉一心期，將其平均分為四大組，每個大組平均分為三個小組，每種化學試劑設兩個濃度，其中每個大組中的任意兩個小組分別噴施不同濃度的同一化學試劑作為處理組，餘下的一組同時以噴施蒸餾水作為對照組；每隔2天噴施一次，每次噴施時以全株淋溼，藥液欲滴下為度，共噴施4次。本試驗例中採用的具體濃度如下：3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333。本試驗例中每個處理組的煙苗數為324株。於最後一次化學試劑噴施完成後，讓各處理組煙苗繼續置於育苗池內生長2天，然後進行淹水脅迫，此處所述的淹水脅迫為使用空心磚將育苗盤完全壓進水中，以水漫過育苗盤為準。在淹水脅迫0天(當天)、3天、6天，取樣測定相應指標。

每組試驗重複3次，每次試驗重複測定2次。試驗原始數據計算用Excel 2003，統計分析用SPSS 11.5，作圖用Sigma Plot 12.0。數據分析時採用單因素方差分析比較不同化學試劑處理組與對照組之間的差異顯著性，圖中小寫字母表示差異顯著(P＜0.05)。

①淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗農藝生長指標的影響

進行淹水脅迫0天、3天、6天，每個處理組隨機選取60株長勢均勻的煙苗，平均分為兩組，每組分三個重複，洗淨自然晾乾，其中一組用來測量單株鮮重，具體操作如下：取樣時，用吸水紙輕輕將葉片上殘留的水分吸乾，隨機挑選出五株葉片比例較為適中的煙苗，用精確度為1％的天平直接稱整株鮮重，再分別稱其地上部分和地下部分鮮重；然後，將其置於烘箱內105℃殺青15min，再在烘箱70℃下烘至恆重。另一組用直尺測量其株高。

根據以上數據計算出相對生長速率。

式中：W1、W2分別表示在時間t1和t2時的乾重。

1.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗株高的影響

從圖1可以看出，進入淹水脅迫0天時，各處理組的株高與對照組(CK)相比，100和200mg/L GA3處理組的株高同比增加了74.3％、63.5％，差異顯著。經過6天的淹水脅迫，煙苗株高呈明顯的上升趨勢。進入淹水脅迫3天時，與對照組相比，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA處理組的株高同比增加了16.6％、18.1％、89.3％、84.9％、22.4％，其中100和200mg/LGA3處理組的作用效果最好。進入淹水脅迫6天時，與對照組相比，3.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA處理組的煙苗株高同比增加了30.6％、98.3％、68.1％、34.1％，其中100mg/L GA3處理組的作用效果較好。結果表明，由於GA3有促進莖伸長的作用，經過GA3處理後，煙苗的株高明顯增加，其中100mg/L GA3處理組的作用效果最好。

2.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗單株鮮重和單株乾重的影響

從圖2可看出，進入淹水脅迫0天時，與對照組相比，各處理組的煙苗的單株鮮重均有一定的增長，不同處理組的增長幅度不同，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、100和200mg/L PP333處理組的單株鮮重同比增加了27.9％、45.5％、26％、38.5％、45.5％，且差異顯著。進入淹水脅迫6天時，各處理組煙苗的單株鮮重較之淹水脅迫0天時有所下降，但各處理組的單株鮮重幾乎均高於對照組，與對照組相比，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100mg/L GA3、1.0mmol/L SA、200mg/LPP333處理組的單株鮮重同比增加了27％、25.9％、60.9％、29.8％、38％，其中100mg/L GA3處理組的作用效果最好。結果表明，在淹水脅迫條件下，各處理組煙苗的單株鮮重均提高，其中100mg/L GA3處理組的作用效果最顯著。

如圖2所示，進入淹水脅迫0天時，與對照組相比，各處理組煙苗的單株乾重都呈增加趨勢，不同處理組的增加幅度不同，100mg/L GA3、100和200mg/L PP333分別使單株乾重同比增加了46.2％、38.3％、46.2％，且差異顯著；進入淹水脅迫6天時，全部處理組與進入淹水脅迫0天時相比，單株乾重有所降低，但均高於對照組，與對照組相比，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的單株乾重同比增加了36.7％、71.1％、38.4％、34.2％、62.5％、71.7％，其中100mg/L GA3、100和200mg/L PP333處理組的煙苗單株乾重的作用效果均較好。結果表明，四種化學試劑都能促進煙苗單株乾重的積累，提高煙苗的耐澇性，其中100mg/L GA3、100和200mg/L PP333處理組的作用效果最好。

3.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗相對生長速率和乾物質積累速率的影響

從圖3可以看出，在淹水脅迫條件下，與對照組相比，各處理組煙苗的相對生長速率都有增大的趨勢，且各個處理組與對照組相比差異顯著，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的相對生長速率同比增加了27.6％、30％、39.5％、27.8％、43.6％、22.1％、40％、40％。說明在淹水脅迫條件下，上述不同濃度的化學試劑都能促進煙苗的生長發育，增強其抵抗淹水逆境的能力，其中3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的處理作用效果均較好。

如圖3所示，對8個處理組以及對照組的測定表明，在淹水脅迫中，各個濃度的化學試劑均對煙苗的乾物質積累速率都有一定的促進作用，具體促進程度不同，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組煙苗的乾物質積累速率同比增加了14.8％、10.8％、4.6％、6.8％、31.3％、7.4％、10.8％、5.7％，其中1.0mmol/L SA處理組的作用效果最佳，能有效提高煙苗在淹水脅迫下的乾物質積累速率，說明噴施1.0mmol/L SA對淹水脅迫下煙苗的耐澇性有一定的提高。

②淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗的生理生化指標的影響

1.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗脯氨酸的影響

採用酸性茚三酮比色法測定：準確稱取待測葉片0.5g，置於研缽中，用5ml濃度為3％的磺基水楊酸溶液研磨成勻漿，即脯氨酸提取液。所得勻漿在5000r/min下離心10min。吸取2ml提取液於另一乾淨的具塞玻璃試管中，加入2ml冰醋酸及3ml濃度為2.5％酸性茚三酮試劑(用冰乙酸和6mol/L磷酸以3:2的比例混合配置而成)，混合均勻後於沸水浴中加熱30min。冷卻後加入4ml甲苯，用磁力震蕩器震蕩10s。在4℃冰箱儲存2h後，室溫平衡30min，用吸管輕輕吸取上層脯氨酸紅色甲苯溶液於比色杯中，以甲苯為空白對照組，在分光光度計上520nm波長處比色，根據標準曲線計算脯氨酸含量。脯氨酸含量的計算公式如下：

脯氨酸含量(mg.g-1DW)＝C×V/(W×v×1000×地上部乾物質含量)；

式中C為脯氨酸含量，V為提取液總體積，W為樣品質量，v為測定液體積。

由圖4可以看出，進入淹水脅迫0天時，與對照組相比，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333的處理組煙苗的脯氨酸含量同比增加了155.5％、245.1％、448.3％、165.6％、196.7％、215.6％、316.8％，其中200mg/L GA3處理作用效果最好。經過6天的淹水脅迫，脯氨酸含量呈明顯上升的趨勢。進入淹水脅迫3天時，各處理組與對照組相比，均差異顯著，且3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的脯氨酸含量同比增加了32.3％、72.6％、198.3％、106.2％、39.6％、23.3％、45.2％、106.5％，其中100mg/L GA3處理組的作用效果最好；進入淹水脅迫6天時，各處理與對照組相比，均差異顯著，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的脯氨酸含量同比增加了112.3％、206.8％、310.6％、101.6％、121.6％、23.2％、64.9％、106.3％，其中100mg/L GA3處理組的作用效果最好。結果表明，各處理組均能通過提高脯氨酸的含量來抵抗外界的淹水，不同化學試劑對提高煙苗脯氨酸含量的效果不同，其中100mg/L GA3處理組的作用效果最好。

2.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗電解質滲透率的影響

葉片電解質滲漏率測定採用電導法：選取完整的菸葉，將菸葉用蒸餾水衝洗乾淨，濾紙吸乾葉片表面水分，避開主脈和側脈，用打孔器打取小圓片。將小圓片充分混勻後取30片，每10片做一個重複，置於盛有25ml蒸餾水的具塞試管中。用去離子水輕輕搖晃清洗幾次，定容到25ml於真空泵中抽氣1h，然後用25℃震蕩水浴鍋溫浴2h後，用DDS-11A電導儀測定滲出液電導值E1。再將試管置於水浴鍋沸水浴30min，殺死葉片組織，待冷卻後用25℃震蕩水浴鍋震蕩1h，測定滲出液電導值E2，以相對電導率表示葉片電解質滲漏率，計算方法為：

式中E0為去離子水電導值。

由圖5可以看出，進入淹水脅迫0天時，與對照組相比，各處理組煙苗的葉片電解質滲漏率均有所下降，但各處理組的葉片電解質滲漏率的下降幅度不同，其中，3.0和6.0mmol/L CaCl2、1.0mmol/L SA、100mg/L PP333處理組的煙苗的葉片電解質滲透率同比降低了44.5％、14.5％、12.2％、20.7％，其中6.0mmol/L CaCl2處理組作用效果均最好。經過6天的淹水脅迫，電解質滲透率呈先上升後下降的過程。進入淹水脅迫3天時，與對照組相比，各處理組煙苗的葉片電解質滲漏率均低於對照組，其中，1.0mmol/L SA、200mg/L PP333處理組的電解質滲透率同比降低了15.9％、16.1％，且差異顯著。進入淹水脅迫6天時，各處理煙苗的葉片電解質滲透率均低於對照組，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的電解質滲透率同比降低了22.5％、17.5％、36.2％、21.7％、39.4％、36.1％、23.5％、43.8％，其中100mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、200mg/L PP333處理組的作用效果最好。結果表明，各處理組均能降低淹水逆境對細胞膜的損傷，其中1.0mmol/L SA、200mg/L PP333處理組的作用效果最好，最大程度提高了煙苗的耐澇性。

3.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗丙二醛(MDA)的影響

採用硫代巴比妥酸(TCA)法測定：稱取0.5g待測煙苗的菸葉於預冷的研缽中，加入4ml濃度為10％的三氯乙酸(TCA)，研磨後所得勻漿在離心機4000r/min下離心L 0min。取上清液2ml，加入0.6％硫代巴比妥酸(TBA)2ml，混勻後沸水浴15min，冷卻後再離心一次。取上清液，用紫外/可見分光光度計測定450nm，532nm和600nm下的吸光值，對照組以2m1蒸餾水代替提取液。按以下公式計算出MDA濃度，再算出MDA含量(μmol.g-1DW)。

MDA濃度C(μmol/L)＝6.45×(A532-A600)-0.56×A450；

MDA含量(μmol.g-1DW)＝C×V1×V2×10-3/(m×V3×地上部乾物質含量)；

式中V1為提取液總體積，V2為反應液總體積，V3為參加反應的提取液體積，m為樣品質量。

由圖6可以看出，進入淹水脅迫0天時，與對照組相比，各處理組煙苗的MDA的含量均有所降低，3.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、100和200mg/L PP333處理組煙苗的MDA的含量分別同比降低了11.4％、18.5％、23.9％、21％、20％，其中100和200mg/L GA3、100和200mg/L PP333處理組的作用效果較好。經淹水脅迫6天中MDA含量呈先上升後下降。進入淹水脅迫3天時，不同處理組與0天時的含量相比，增加幅度不同；與對照組相比，MDA的含量均有所降低，且差異顯著，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的MDA的含量分別同比降低了33.8％、20.1％、26.9％、26.3％、29.4％、13.5％、38.4％、9.4％，其中3.0mmol/L CaCl2和100mg/L PP333處理組作用效果較好。進入淹水脅迫6天時，所有處理組的MDA含量比進入淹水脅迫3天時有所下降，但高於進入淹水脅迫0天時各處理組的MDA含量；各處理MDA含量下降程度不同，與對照組相比，3.0mmol/L CaCl2、100mg/L GA3、100mg/L PP333的對照組的MDA含量同比降低了16.9％、26.7％、18.9％，且差異顯著。結果表明，各處理組均能緩解淹水脅迫對膜脂系統的破壞，其中3.0mmol/L CaCl2、100mg/L PP333的處理組的作用效果最好，極大降低了淹水脅迫對細胞的損害。

4.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗根系活力的影響

根系活力測定用TTC法：稱取根尖樣品0.5g，放入錐形瓶中，加入濃度為0.4％TTC溶液和磷酸緩衝液各5ml，將根充分浸沒在溶液內，在37℃水浴鍋中暗保溫1.5h。保溫完後加入1mol·L-1硫酸2ml，以停止反應。把根取出，吸乾水分後用1ml乙酸乙酯在研缽內磨碎，以提出甲腙。將紅色提取液移入試管，並用少量乙酸乙酯洗滌殘渣到無紅色為止，將溶液全部倒入試管，最後定容到5ml，於485nm波長下測定吸光度，以乙酸乙酯作空白對照組，查標準曲線，得到四氮唑還原量，根據公式計算根系活力。

由圖7可以看出，不同濃度的化學試劑對淹水脅迫條件下煙苗根系活力的影響不同。進入淹水脅迫0天時，與對照組相比，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333的處理組的根系活力同比增加了83.9％、7％、24.6％、40.8％、60.2％、35.9％、84.8％，其中3.0mmol/L CaCl2、200mg/L PP333的處理組作用效果顯著。經過淹水脅迫6天，根系活力持續呈下降的趨勢。進入淹水脅迫3天時，與對照組相比，各處理組的煙苗根系活力均高於對照組，且差異顯著，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333的處理組的根系活力同比增加了100.4％、40.4％、67.2％、74.6％、119.4％、51.7％、119.3％、150.1％，其中200mg/L PP333處理組的根系活力最大。進入淹水脅迫6天時，與對照組相比，各處理的煙苗根系活力均高於對照組，且差異顯著，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的根系活力同比增加了121.3％、46.5％、89.3％、50.1％、262％、219.4％、173％、108.9％，其中1.0mmol/L SA處理組的作用效果較好。結果表明，1.0mmol/L SA和200mg/L PP333處理組的作用效果最好，增強了淹水脅迫下煙苗的根系活力，使煙苗能更好的適應了逆境環境。

③淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗光合特性的影響

不同化學試劑處理條件下，對淹水下煙苗淨光合速率、胞間CO2濃度、氣孔導度、蒸騰速率參數的測定採用LI-6400XT光合儀(LI-COR，美國)於人工氣候室活體測定，具體操作方式參照柯學等人所著文章《不同光質對菸草葉片生長及光合作用的影響》中對淨光合速率測定的方法。

1.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗總葉綠素的影響

稱取0.2g樣品放入研缽中，加少量石英砂、碳酸鈣和2ml濃度為95％乙醇，研磨成勻漿，再加少量95％乙醇，繼續研磨至組織變白，靜置3～5min。取濾紙1張，置漏鬥中，用乙醇溼潤，沿玻璃棒把提取液倒入漏鬥中，過濾到25ml棕色容量瓶中，用少量95％乙醇衝洗研缽、研棒及殘渣數次，最後連同殘渣一起倒入漏鬥中。衝洗濾紙，直至濾紙和殘渣中無綠色為止，最後定容至25ml，搖勻。用紫外/可見分光光度計測定665nm、649nm和470nm波長下的吸光度，以95％乙醇為空白對照組。根據公式算出總葉綠素含量(mg.g-1DW)。

式中v為提取液體積(ml)，n為稀釋倍數，w為樣品質量。

由圖8可以看出，進入淹水脅迫0天時，不同處理組的作用效果不同，與對照組相比，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的總葉綠素含量同比增加了29.7％、15.2％、9.6％、30.7％、42.7％、23.2％，其中100mg/L PP333處理組的總葉綠素含量最高。經過淹水脅迫6天，總葉綠素呈緩慢下降。進入淹水脅迫3天時，與對照組相比，6.0mmol/L CaCl2、100mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的總葉綠素含量同比增加了39.9％、23.8％、37.2％、9.9％、32.1％、28.5％，其中6.0mmol/L CaCl2和1.0mmol/L SA處理組的作用效果最好。進入淹水脅迫6天時，與對照組相比，各處理均高於對照組，且差異顯著，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的總葉綠素含量同比增加了5.7％、43.5％、27.9％、7％、44.3％、11.8％、33.7％、33.1％，其中6.0mmol/L CaCl2和1.0mmol/L SA處理組的效果較好。結果表明，6.0mmol/L CaCl2、1.0mmol/L SA、100mg/L PP333處理組作用效果最好，顯著提高了總葉綠素含量。

2.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗淨光合速率的影響

由圖9可看出，進入淹水脅迫0天時，各處理的淨光合速率均大於對照組，且差異顯著，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的淨光合速率同比增加了110.8％、146.7％、183.8％、116.5％、82.4％、21.7％、142.9％、163.7％，其中100mg/L GA3處理組的作用效果較好。經過淹水脅迫6天，淨光合速率呈持續下降。進入淹水脅迫3天時，與對照組相比，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的淨光合速率同比增加了21.4％、121.9％、175.7％、111.2％、81.2％、128.7％、168.1％，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333處理組的作用效果較好。進入淹水脅迫6天時，各處理組的淨光合速率均大於對照組，且差異顯著，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的淨光合速率同比增加了55％、103％、50.7％、126.7％、137.6％、56％、134.8％、59.8％31.2％、141.9％、209.5％、137.5％、121.9％、26.7％、147.1％、180.1％，其中100mg/L GA3處理組的作用效果最好。結果表明，各處理組均能提高煙苗淨光合速率，不同處理組的作用效果不同，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333處理組的作用效果最好，促進煙苗能更好的適應逆境環境。

3.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗胞間CO2濃度的影響

從圖10可以看出，進入淹水脅迫0天時，各處理組的胞間CO2濃度均顯著高於對照組，且差異顯著，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的胞間CO2濃度同比增加了35.1％、115.6％、86.4％、36.4％、85.2％、66％、60.9％、90.1％，其中6.0mmol/L CaCl2、100mg/L GA3、1.0mmol/L SA、200mg/L PP333處理組的作用效果均較好。經過淹水脅迫下6天，煙苗胞間CO2濃度呈持續上升。進入淹水脅迫3天時，與對照組相比，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的胞間CO2濃度同比增加了39.3％、28％、30％、17％、15.2％、17.4％、24.1％，其中6.0mmol/L CaCl2處理組的作用效果較好；進入淹水脅迫6天時，與對照組相比，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的胞間CO2濃度同比增加了41.5％、22.9％、29.2％、13.4％、19.2％、18.9％、26.3％，其中6.0mmol/L CaCl2處理組的效果較好。結果表明，在淹水逆境下各處理均能提高胞間CO2濃度，其中6.0mmol/L CaCl2處理作用效果最好。

4.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗氣孔導度的影響

從圖11可以看出，進入淹水脅迫0天時，各處理組的作用效果不同，與對照組相比，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的氣孔導度同比增加了92.1％、420.5％、411.5％、287.8％、133％、140.1％、289.5％，其中6.0mmol/L CaCl2處理組和100mg/L GA3處理組作用效果較好。經過6天的淹水脅迫後，氣孔導度呈下降。進入淹水脅迫3天時，與對照組相比，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333分別使氣孔導度同比增加了531.5％、352％、253.2％、193.2％、116.9％、367.3％，其中6.0mmol/L CaCl2處理組效果較好；進入淹水脅迫6天時，與對照組相比，6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的氣孔導度同比增加了470.2％、287.5％、87.2％、187.8％、101.5％、332.3％，其中6.0mmol/L CaCl2處理組的效果較好。結果表明，各處理組均能提高煙苗氣孔導度，其中6.0mmol/L CaCl2處理組的作用效果最好。

5.淹水脅迫過程中不同化學試劑對煙苗蒸騰速率的影響

從圖12可以看出，進入淹水脅迫0天時，與對照組相比，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的蒸騰速率同比增加了147％、347.2％、343.8％、290.2％、195.5％、176.4％、315.8％，其中6.0mmol/L CaCl2、100mg/L GA3、200mg/L PP333處理組的作用效果均較好。經過6天的淹水脅迫後，蒸騰速率呈下降趨勢。進入淹水脅迫3天時，各處理的蒸騰速率均高於對照組，且差異顯著，與對照比相比，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333處理組的蒸騰速率同比增加了102.4％、406.1％、590.7％、288.7％、360.9％、87.7％、229.7％、587.3％，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333處理組的作用效果較好。進入淹水脅迫6天時，與對照組相比，3.0和6.0mmol/L CaCl2、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333的處理組的蒸騰速率同比增加了92.8％、423.8％、473.7％、236％、307.8％、223.6％、534.1％，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333處理組的作用效果較好。結果表明，各處理組均能提高煙苗的蒸騰速率，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333處理組的作用效果最好，蒸騰速率最大。

基於上述結果可得，四種化學試劑總體上提高了菸草幼苗的素質，在淹水條件下，經四種化學試劑處理的煙苗與對照組相比，可保持較高的單株乾重、相對生長速率、乾物質積累速率、根系活力、脯氨酸含量、葉綠素含量、淨光合速率、胞間CO2濃度、氣孔導度和蒸騰速率，緩解逆境誘導的MDA積累和電解質滲透率，最終提高煙苗的耐澇性。其中，1.0mmol/L SA可以顯著促進煙苗的相對生長速率、乾物質積累速率的增加。1.0mmol/L SA和100mg/L PP333可以顯著降低煙苗的電解質滲透率，提高根系活力。100mg/L GA3和200mg/L PP333可以顯著提高煙苗的淨光合速率、蒸騰速率。

綜上所述，本發明實施例提供的一種提高煙苗耐澇性的方法，可有效提高煙苗的耐澇性，並且提高煙苗的素質，提高其產量和菸葉的品質，具有優異的農業推廣價值。

以上所描述的實施例是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。本發明的實施例的詳細描述並非旨在限制要求保護的本發明的範圍，而是僅僅表示本發明的選定實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。