油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP²³²及其獲得方法

2023-05-28 18:36:56

專利名稱：油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232及其獲得方法
技術領域：
本發明涉及生物工程技術領域中的基因突變體，尤其涉及一種油桐油酸脫氫酶基 因突變體SNP232及其獲得方法。
背景技術：
脂肪酸脫氫酶基因(fad2)是控制油酸向亞油酸轉化的關鍵基因，且關係到多不 飽和脂肪酸的合成；而亞油酸是桐酸合成的底物。因而fad2基因的功能突變不僅會改變桐 油中脂肪酸組分含量，而且會影響桐油的品質。目前通過人工誘發fad2基因的突變，抑制 fad2基因的表達，獲得了高油酸含量的葵花籽油、大豆油等，而且在油菜中，不僅獲得了高 油酸突變體品種，且利用轉基因獲得了特高油酸轉基因油菜株系。但是對於油桐中fad2基 因的突變，目前國內外尚未見報導。油桐是我國原產的多年生木本油料樹種，其種子榨出的桐油不僅是重要的工業原 料也是重要的生物柴油原料。因而利用遺傳資源多樣性結合生物技術途徑，對於油桐進行 脂肪酸組成的全方位改良和培育含特種脂肪酸的油桐品種，提升桐油品質及經濟價值具有 重要科學與現實意義。

發明內容
本發明的目的是提供一種油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232及其獲得方法。本發明的目的是這樣實現的1、油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232是SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列中第232位 鹼基發生C — A突變，導致SEQ ID NO 2所示的胺基酸序列中第78位胺基酸由脯氨酸⑵ 轉變為蘇氨酸(T)。2、油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232的獲得方法(1)來源於油桐種質材料PT45或PT60，見表1。表1突變體材料具體地理位置
權利要求
1.一種油桐油酸脫氫酶基因fad2突變體SNP232，其特徵在於油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232是SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列中第232位鹼基 發生C —A突變，導致SEQ ID NO :2所示的胺基酸序列中第78位胺基酸由脯氨酸P轉變為 蘇氨酸T。
2.按權利要求1所述突變體SNP232的獲得方法，其特徵在於(1)來源於油桐種質材料PT45或PT60；PT45，來源地是中國四川渠縣渠南鄉和平村，緯度、經度、海拔分別為 30° 48. 9，N、106° 55. 8，E、266m ；PT60，來源地是中國四川寶興縣五龍鄉旁山上，緯度、經度、海拔分別為 30° 24. 5，N、102° 45. 8，E、1092m ；(2)檢測步驟①提取突變體材料葉片DNA；②fad2基因編碼區的PCR擴增；③DNA測序分析。
3.按權利要求2所述的獲得方法，其特徵在於檢測步驟①採用改良的CTAB法。
4.按權利要求2所述的獲得方法，其特徵在於檢測步驟②模板 DNA，20ng/y L，5y L ；弓 | 物，10 μ M，各 1 μ L ； 10 X buffer, Mg2+Plus, 2. 5 μ L ；Taq 酶，5U/y L，0. 2μ L ； dNTP, 10mM,0. 5μ L ； ddH20 15. 3μ L ；總體積 25 μ L ；PCR 反應程序為 94°C預變性5min ；94°C變性45s ；67°C退火45s ；72°C延伸Imin ；30個循環；最後72°C延伸 5min ；擴增產物在1. 5%的瓊脂糖凝膠電泳中檢測。
5.按權利要求2所述的檢測方法，其特徵在於檢測步驟③利用軟體Bioedit和clustalx對測序結果進行校正與比對，通過軟體Sequencher識 別 SNP。
全文摘要
本發明公開了一種油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232及其獲得方法，涉及生物工程技術領域中的基因突變體。油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232是SEQ ID NO1所示的核苷酸序列中第232位鹼基發生C→A突變，導致SEQ ID NO2所示的胺基酸序列中第78位胺基酸由脯氨酸(P)轉變為蘇氨酸(T)。其獲得方法是(1)來源於油桐種質材料PT45或PT60；(2)檢測步驟①提取突變體材料葉片DNA；②fad2基因編碼區的PCR擴增；③DNA測序分析。該基因突變體及相應的種質材料，對於提高桐酸的含量、調整桐油脂肪酸組分、改良桐油的品質等具有重要作用。
文檔編號C12N9/04GK102093986SQ20101057908
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月8日 優先權日2010年12月8日
發明者任景, 彭俊華 申請人:中國科學院武漢植物園