一種貓棒束孢菌絲體的用途的製作方法

2023-06-10 13:14:56

專利名稱：一種貓棒束孢菌絲體的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及貓棒束孢真菌菌絲體的用途，具體是在製備治療順鉬引起的急性腎損傷藥物中的應用。
背景技術：
貓棒束孢(Isaria felina)是從天然冬蟲夏草子實體中經菌種分離培養獲得的一種可工業化生產的菌株，在分類上屬於半知菌綱、叢梗孢目、棒束孢屬。經中國科學院微生物研究所郭英蘭教授鑑定為Isaria felina (DC. :Fr) Fr，該菌種已被中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏(保藏號CGMCC NO. 0706)，並取得國家發明專利。Deffieux Gerard 等人(J Antibiot(Tokyo) · 1981，34(10) :1261-1265.)從 Isaria felina中提取分離得到環羧酚酸肽結構的殺蟲劑Isariins B，C和D，並對 Isariins B, C 和 D 的結構進行了鑑定(J Antibiot (Tokyo). 1981，34 (10) 1266-1270.)。 郭永霞從貓棒束孢菌絲體中分離純化得到具有抗真菌作用的環縮肽isarfelin，並對 isarfelin進行了理化性質的分析、結構鑑定，並發現isarfelin具有抑制細菌、抵抗真菌的活性(郭永霞.貓棒束孢菌抗真菌多肽和巨大口蘑抗真菌蛋白的分離純化及特性的研究[博士論文].北京中國農業大學，2005)。Ikumoto等研究發現冬蟲夏草、蛹蟲草及貓棒束孢的浸出液對離體心房有負收縮效應，同時對電刺激迴腸的收縮反應及人血小板的凝結有抑制作用(Journal of the Pharmaceutical Society of Japan，1991，111 (9) 504-509)。目前尚未見到關於貓棒束孢在治療腎功能損傷方面的研究報導。

發明內容
本發明的目的是提供一種貓棒束孢菌絲體在製備治療順鉬引起的急性腎損傷藥物中的應用。本發明所涉及的貓棒束孢菌是從天然冬蟲夏草子實體中經分離培養獲得，該菌株保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號為CGMCC N0. 0706。本發明使用的貓棒束孢菌絲體可按專利號ZL02103669. 1的方法培養得到。本發明貓棒束孢菌絲體在製備治療順鉬引起的急性腎功能損傷藥物中的應用將貓棒束孢菌絲體乾燥粉碎後用於動物實驗和臨床觀察，實驗結果顯示，小鼠注射順鉬、患者使用順鉬化療後其血清中CRE和BUN水平明顯升高，說明順鉬對小鼠及化療患者均可引起急性腎損傷，小鼠在灌胃貓棒束孢菌絲體乾粉、順鉬化療患者服用貓棒束孢菌絲體乾粉後其血清中CRE和BUN水平均明顯下降，表明貓棒束孢菌絲體對順鉬引起的急性腎損傷有顯著的治療作用。實驗研究結果表明，貓棒束孢菌絲體對順鉬引起的小鼠急性腎衰有很好的治療作用，對臨床化療中因順鉬引起的急性腎損傷有很好的治療效果，表明貓棒束孢菌絲體是一種具有良好開發前景的抗腎損傷的藥物，該藥物可作為順鉬化療治療中的輔助藥物。


圖1注射順鉬後小鼠體重變化情況；圖2A為正常組腎臟病理圖；圖2B為模型組腎臟病理圖腎小管變性壞死，上皮細胞渾濁腫脹，輕度纖維增生；圖2C為模型組腎臟病理圖腎小管變性壞死，出現炎性細胞浸潤灶；圖2D為IF給藥組腎臟病理圖腎小管基本正常，少量炎性細胞浸潤。
具體實施例方式實施例1動物實驗1.材料和方法1.1動物、藥品與試劑昆明小鼠，雄性，體重23_26g，由山西省腫瘤研究所實驗動物中心繁殖，實驗動物生產許可證號SCXK (晉)2007-0001，實驗動物使用許可證號SYXK (晉)2007-0002。貓棒束孢菌絲體(IF)可由專利號ZL02103669. 1的方法培養。培養基蛋白腖 0.6%,酵母膏 1.2%，蔗糖 2.4%，MgSO4O. 05 %，KH2PO4O. 1 %，飽和 NaHCO3 溶液；培養方法 3隻西林瓶菌種(0. 5g/瓶)接種於6隻3000mL三角瓶，裝量500mL/瓶，牛皮紙封口，於 180r/min、26. 5°C條件下培養2_3d，收穫，發酵液於2000r/min離心5min，得菌絲體，於80°C 烘Mh，測乾重，菌絲體得率為4. 8g/500mL。所得菌絲體乾燥粉碎後用於實驗研究。順鉬，南京製藥廠有限公司生產，批號20100702。1.2動物分組及給藥雄性昆明小鼠74隻，隨機分為5組，分別為正常對照組，模型對照組，IF給藥高、 中、低劑量組，正常對照組為10隻小鼠，其餘各組為16隻小鼠。模型對照組及各IF給藥組動物一次性腹腔注射順鉬10mg/kg(lmL/100g)以造成小鼠急性腎損傷模型，正常對照組腹腔注射等量生理鹽水；IF給藥高、中、低劑量組動物在注射順鉬之後連續每日灌胃給予IF 7d，灌胃量分別為1000mg/kg、500mg/kg，250mg/kg,正常對照組及模型對照組灌胃給予等量蒸餾水(lmL/100g)。1. 3 一般情況觀察實驗過程中觀察小鼠皮毛色澤、精神狀態、進食進水情況、存活率及體重變化等一般情況。1. 4血清生化指標測定給藥結束後Mh，稱重小鼠，腹腔注射戊巴比妥鈉(60mg/kg)麻醉小鼠，摘眼球取血，3000r/min離心，分離血清，使用全自動生化分析儀(荷蘭威圖，儀器型號SELECTRA-E ； 儀器編號GLP-ZB-001)測定血清BUN和CRE含量。1. 5臟器指數與腎臟病理學檢查取血後剖取小鼠左腎、右腎、肝臟、脾臟及胸腺，計算各臟器指數；觀察比較兩組動物腎臟外觀；取左腎，剝除外膜，以10%甲醛固定過夜，常規脫水、透明、石蠟包埋、切片、HE 染色，鏡下觀察腎臟病理改變。
1. 6統計學分析實驗數據以表示，採用SPSS17. 0軟體進行數據統計分析，組間均數比較採用單因素方差分析，兩組間比較採用最小顯著差異法(LSD)，取α =0.05為檢驗水準。2.結果2. 1動物的一般情況各造模組小鼠在注射順鉬後體重明顯下降，到第5天體重下降至最低點，之後體重開始恢復(見圖1)。與正常對照組相比，造模組小鼠進食量和飲水量均明顯減少，5d後進食量和飲水量開始增加，皮毛鬆散、無光澤，體重下降明顯(見表1)。各IF給藥組較模型對照組小鼠狀態明顯好轉，活動增加，皮毛略有光澤。正常對照組動物無死亡現象發生，各造模組動物有一定量的死亡，且模型對照組動物死亡數最多，表明順鉬對小鼠造成了一定的傷害，各IF給藥組動物死亡數量有所減少，說明IF對由順鉬致小鼠傷害有一定的保護作用。表1.小鼠存活率及體重變化情況([士 S )
權利要求
1.貓棒束孢菌絲體在製備治療順鉬引起的急性腎功能損傷的藥物中的應用。
2.如權利要求1所述的貓棒束孢菌絲體在製備治療順鉬引起的急性腎功能損傷的藥物中的應用，所述的貓棒束孢其保藏號為CGMCC NO. 0706。
全文摘要
本發明公開了貓棒束孢真菌絲體在製備治療順鉑引起的急性腎損傷藥物中的應用。實驗結果顯示，小鼠注射順鉑、患者使用順鉑化療後其血清中CRE和BUN水平明顯升高，說明順鉑對小鼠及化療患者均可引起急性腎損傷，注射順鉑小鼠在灌胃貓棒束孢菌絲體乾粉、順鉑化療患者服用貓棒束孢菌絲體乾粉後其血清中CRE和BUN水平均明顯下降，表明貓棒束孢菌絲體對順鉑引起的急性腎損傷有顯著的治療作用。本發明提供了貓棒束孢真菌絲體在製備治療順鉑引起的急性腎損傷藥物中的應用，貓棒束孢菌絲體可進一步開發成為順鉑化療治療中的輔助藥物。
文檔編號A61K35/06GK102228471SQ20111017542
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月27日 優先權日2011年6月27日
發明者任連生, 張生萬, 楊喜花 申請人:山西大學