一種沙棗組織培養方法
2023-07-11 17:09:26
一種沙棗組織培養方法
【專利摘要】一種沙棗組織培養方法，它涉及一種沙棗培養方法。它解決了目前沙棗組織培養擴培數量少、倍數低，或者利用愈傷組織進行繁殖生根率低，成活率低的缺陷。組織培養方法：一、枝條水培，嫩芽剪下處理，而後將帶有節間的莖段進行除培養初始培養；二、選初始培養長出的無菌苗葉的葉柄進行培養；三、將步驟二長出的幼芽移植培養，得到沙棗試管苗，然後經過煉苗，即完成沙棗的組織培養。本發明可用於沙棗的種植領域。
【專利說明】一種沙専組織培養方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種沙棗培養方法。
【背景技術】
[0002] 沙率(Elaeagnus angustifolia L.)屬胡頹子科胡頹子屬，為落葉或常綠灌木或小喬木。別名:銀柳胡頹子(東北木本植物圖志)、桂香柳(河南)、銀柳(遼寧)等。該樹種在我國的西北荒漠、半荒漠地區、華北、山東及東北地區均有分布，沙棗也是極少能在戈壁灘上生存下來的樹種之一，被譽為沙漠和鹽鹼地的「寶樹」。
[0003]沙棗全身是寶:葉含蛋白質4%、粗脂肪2.4%、糖15.7%，是優質的飼料。沙棗果肉粉含粗蛋白7.94%、粗脂肪1.34%、糖51.15%，可用於副食品加工，也可以代替糧食。沙棗花馥鬱清香，可提取芳香油，又是很好的蜜源。沙棗根有根瘤菌，可固氮改善土壤。沙棗種子中子仁含油量20.69%，可用於生產清潔燃料(生物柴油)在未來能源逐漸短缺的背景下，開發利用生物質能源已成為一種必然的發展趨勢。沙棗樹可營造沙棗經濟林、防護林，並能育成風景林，綠化美化城市。
[0004]因此，擴大沙棗的栽種面積和數量有助於環境改善和農民增收，沙棗產量的提高更有利於提高國民身體素質。
[0005]依靠沙棗種子進行種植，不但生長周期長，而且成功率低。目前廣泛採用組織培養的方法栽種沙棗，但是，採用沙棗腋芽或頂芽進行組織培養存在擴培數量少、倍數低的問題；而採用組織培養出的葉片或葉柄進行誘導獲得愈傷組織，或者採用長出腋芽的莖段誘導獲得愈傷組織進行繁殖，又存在生根率低，成活率低的缺陷。
【發明內容】
[0006]本發明是為了解決目前沙棗組織培養擴培數量少、倍數低，或者利用愈傷組織進行繁殖生根率低，成活率低的缺陷，而提供的一種沙棗組織培養方法。
[0007]沙棗組織培養按以下步驟進行:
[0008]一、採集沙棗當年生枝條，反覆衝洗後進行水培,嫩芽長到2~3cm長用剪刀剪下放在燒杯中，燒杯口用紗布蓋住，清水滴澆2h±0.lh，然後取出嫩芽浸入濃度為75%的酒精中45s，再用無菌水衝洗3次，之後放入濃度為6%的NaClO溶液中處理6min，再用無菌水清洗3~5次，吸乾水分後無菌操作將嫩芽上的葉片剪除，並將嫩芽的莖剪切成長度為1±0.2cm、帶有節間的莖段，再將莖段接種於不含任何植物激素的MS培養基中，在25°C、每日光照16h、光照強度為20001ux的環境中初始培養10天；
[0009]二、選初始培養長出的無菌苗葉的葉柄部分切成0.5cmX 0.5cm大小，然後轉移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培養基中25°C培養60天；然後將愈傷塊在無菌條件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小轉移至每升含1.0mg萘乙酸和
0.5mg6-苄氨基嘌呤的MS培養基中25°C培養30天，長出幼芽；
[0010]三、將步驟二長出的幼芽移植於每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培養基中培養20天，得到沙棗試管苗，然後經過煉苗，即完成沙棗的組織培養；
[0011]其中步驟一 MS培養基中蔗糖濃度為30g/L、瓊脂濃度為5.5g/L，MS培養基的pH值為 5.8。
[0012]本發明將步驟一嫩芽上的葉片剪除，然後利用嫩芽的莖段長出的再生葉片的葉柄培養獲得沙棗愈傷組織，該愈傷組織能夠提高沙棗的生根率；本發明利用愈傷塊進行繁殖，將擴培倍數提高到125倍以上，而且試管苗的生根率可達到了 92%，生根數可達到4~6根，根平均長度為1.7cm，保證了沙棗的存活率，為加快沙棗的推廣種植奠定了技術和物質基礎。
[0013]本發明方法對來自新疆的阿勒泰、呼圖壁，甘肅的張掖、武威，寧夏的中衛，哈薩克斯坦的那烏爾祖母國家自然保護區等不同種源的沙棗都適用，組織培養的效果和數據基本相同。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014]圖1是【具體實施方式】一中步驟二長出的幼芽圖片。圖2是【具體實施方式】一步驟三得到的沙棗試管苗圖片。
【具體實施方式】
[0015]本發明技術方案不局限於以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的任意組合。
[0016]【具體實施方式】一:本實施方式沙棗組織培養按以下步驟進行:
[0017]一、採集沙棗當年生枝條，反覆衝洗後進行水培，嫩芽長到2~3cm長用剪刀剪下放在燒杯中，燒杯口用紗布蓋住，清水滴澆2h±0.lh，然後取出嫩芽浸入濃度為75%的酒精中45s，再用無菌水衝洗3次，之後放入濃度為6%的NaClO溶液中處理6min，再用無菌水清洗3~5次，吸乾水分後無菌操作將嫩芽上的葉片剪除，並將嫩芽的莖剪切成長度為1±0.2cm、帶有節間的莖段，再將莖段接種於不含任何植物激素的MS培養基中，在25°C、每日光照16h、光照強度為20001ux的環境中初始培養10天；
[0018]二、選初始培養長出的無菌苗葉的葉柄部分切成0.5cmX 0.5cm大小，然後轉移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培養基中25°C培養60天；然後將愈傷塊在無菌條件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小轉移至每升含1.0mg萘乙酸和
0.5mg6-苄氨基嘌呤的MS培養基中25°C培養30天，長出幼芽；
[0019]三、將步驟二長出的幼芽移植於每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培養基中培養20天，得到沙棗試管苗，然後經過煉苗，即完成沙棗的組織培養；
[0020]其中步驟一 MS培養基中蔗糖濃度為30g/L、瓊脂濃度為5.5g/L，MS培養基的pH值為 5.8。
[0021]本實施方式選用分化能力強的葉柄部分進行誘導。
[0022]本實施方式選用的是錦繡I號沙棗進行試驗和數據統計。
[0023]本實施方式採集沙棗優良單株的當年生枝條；嫩芽長到2~3cm長一般需要水培12~15天。
[0024]本實施方式步驟二 培養過程中每日光照均為16h、光照強度均為2000 Iux0[0025]將本實施方式獲得的試管苗經過煉苗轉移到以蛭石和珍珠巖為基質的營養土中進行移栽，其中蛭石與珍珠巖的體積比為2:1。
[0026]本實施方式在室內進行催芽，可減少嫩芽表面灰塵和細菌的數量，從而降低NaClO溶液的使用濃度，縮短處理時間，減少褐化比例的同時減少汙染比例，提高外植體的存活率。
[0027]
【權利要求】
1.一種沙棗組織培養方法，其特徵在於沙棗組織培養按以下步驟進行:一、採集沙棗當年生枝條，反覆衝洗後進行水培，嫩芽長到2~3cm長用剪刀剪下放在燒杯中，燒杯口用紗布蓋住，清水滴澆2h±0.lh，然後取出嫩芽浸入濃度為75%的酒精中45s，再用無菌水衝洗3次，之後放入濃度為6%的NaClO溶液中處理6min，再用無菌水清洗3~5次，吸乾水分後無菌操作將嫩芽上的葉片剪除，並將嫩芽的莖剪切成長度為1±0.2cm、帶有節間的莖段，再將莖段接種於不含任何植物激素的MS培養基中，在25°C、每日光照16h、光照強度為20001ux的環境中初始培養10天；二、選初始培養長出的無菌苗葉的葉柄部分切成0.5cmX0.5cm大小，然後轉移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培養基中25°C培養60天；然後將愈傷塊在無菌條件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小轉移至每升含1.0mg萘乙酸和0.5mg6_節氨基嘌呤的MS培養基中25°C培養30天，長出幼芽；三、將步驟二長出的幼芽移植於每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培養基中培養20天，得到沙棗試管苗，然後經過煉苗，即完成沙棗的組織培養；其中步驟一 MS培養基中蔗糖濃度為30g/L、瓊脂濃度為5.5g/L，MS培養基的pH值為5.8。
2.根據權利要求1所述的一種沙棗組織培養方法，其特徵在於步驟一反覆衝洗後將枝條剪成30±0.5cm長，枝條放入透明玻璃瓶中基部浸入清水中2~4cm進行水培，每天更換I次清水，並且每天用無菌純淨水噴灑枝條表面3~20次。
3.根據權利要求2所述的一種沙棗組織培養方法，其特徵在於步驟一水培在朝陽的室內進行，室溫保持在24 ± 0.5 °C。
【文檔編號】A01H4/00GK103583361SQ201310547387
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月7日 優先權日:2013年11月7日
【發明者】劉力強, 宋福強 申請人:黑龍江錦繡大地生物工程有限公司