一種陳皮提取物及其製備方法和應用與流程
2023-06-12 18:35:36
本發明涉及生物醫藥技術領域，特別是涉及一種陳皮提取物及其製備方法和應用。
背景技術：
陳皮為芸香科植物橘及其栽培變種的果皮，是傳統的中草藥之一，具有行氣健脾、和胃止嘔、燥溼化痰的功效，含有豐富的營養元素。研究表明，陳皮中的物質具有抗氧化作用，能夠清除自由基，避免人體被自由基損傷。
自由基又稱游離基，是具有非偶電子的基團或原子，自由基可通過電子轉移、加成、脫氫等多種方式與生物體內的多糖、胺基酸、蛋白質、核酸、脂類等物質相互作用，造成這些物質氧化性損傷，進一步使細胞壞死或突變。如：自由基削弱細胞的抵抗力，使人體易受細菌或病毒的感染；自由基阻礙細胞的正常發展，幹擾其復原功能，使細胞更新率低於枯萎率；自由基破壞遺傳基因組織，造成基因突變，易導致癌症的發生。
如何提供一種可清除自由基的純天然物質，是自由基清除領域亟待解決的問題之一。
技術實現要素：
本發明主要解決的技術問題是提供一種陳皮提取物及其製備方法和應用，可製備出純天然的陳皮提取物，該提取物具有自由基清除功能。
為解決上述技術問題，本發明提供一種陳皮提取物的製備方法，包括以下步驟：取陳皮乾粉，加入包括纖維素酶和果膠酶的混和酶，再加入蒸餾水，55-60℃水浴中攪拌1-2h，其中，陳皮乾粉與混和酶的質量比為1g:4-6mg，陳皮乾粉與蒸餾水的料液比為1g:10-20ml；在水浴後的液體中加入3-4倍體積的無水乙醇，提取3-4h，而後離心，獲取上清液，對該上清液進行減壓濃縮；調節減壓濃縮後的液體的pH值至4-5，並以2-3ml/min的速率上大孔吸附樹脂柱，利用pH為4-5、8-12倍於幹樹脂質量的蒸餾水進行淋洗，再用10-15倍於幹樹脂質量的60-70%乙醇進行洗脫，蒸餾水和乙醇的流速均為1.5-2ml/min，收集洗脫液，對洗脫液進行乾燥，獲得陳皮提取物。
其中，大孔吸附樹脂為HPD-600或NKA-9。
其中，混和酶按質量百分比計，包括組分：75-85%纖維素酶、20-30%果膠酶。
其中，陳皮乾粉與混和酶的質量比為1g:5mg，陳皮乾粉與蒸餾水的料液比為1g:15ml。
其中，水浴後的液體與無水乙醇的體積比為1:3.5。
其中，減壓濃縮後的液體的pH值調節至4.5，其上柱速率為2.5ml/min；蒸餾水的pH為4.5，其與幹樹脂的質量比為1:10；乙醇的濃度為65%，其與幹樹脂的質量比為1:13；蒸餾水和乙醇的流速均為1.8ml/min。
為解決上述技術問題，本發明提供一種上述製備方法製備得到的陳皮提取物。
為解決上述技術問題，本發明提供一種陳皮提取物作為清除自由基藥物或保健品的應用。具體地，陳皮提取物作為清除自由基藥物或保健品的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑或散劑。
本發明的有益效果是：區別於現有技術的情況，本發明的陳皮提取物的製備方法包括以下步驟：取陳皮乾粉，加入包括纖維素酶和果膠酶的混和酶，再加入蒸餾水，55-60℃水浴中攪拌1-2h，其中，陳皮乾粉與混和酶的質量比為1g:4-6mg，陳皮乾粉與蒸餾水的料液比為1g:10-20ml；在水浴後的液體中加入3-4倍體積的無水乙醇，提取3-4h，而後離心，獲取上清液，對該上清液進行減壓濃縮；調節減壓濃縮後的液體的pH值至4-5，並以2-3ml/min的速率上大孔吸附樹脂柱，利用pH為4-5、8-12倍於幹樹脂質量的蒸餾水進行淋洗，再用10-15倍於幹樹脂質量的60-70%乙醇進行洗脫，蒸餾水和乙醇的流速均為1.5-2ml/min，收集洗脫液，對洗脫液進行乾燥，獲得陳皮提取物。通過上述方法，可製備出純天然的陳皮提取物，陳皮提取物可對自由基進行清除。上述製備方法具有以下特點：簡單、易操作；對陳皮細胞進行充分破碎，可更好地進行提取；利用大孔吸附樹脂柱，可提高提取物的純度；製備出的陳皮提取物具有較高的提取率，且無毒、無害。
具體實施方式
實施例1
陳皮提取物的製備方法：取陳皮乾粉，加入包括纖維素酶和果膠酶的混和酶，再加入蒸餾水，60℃水浴中攪拌1.5h，其中，陳皮乾粉與混和酶的質量比為1g:5mg，陳皮乾粉與蒸餾水的料液比為1g:15ml；在水浴後的液體中加入3.5倍體積的無水乙醇，提取3.5h，而後離心，獲取上清液，對該上清液進行減壓濃縮；調節減壓濃縮後的液體的pH值至4.5，並以2.5ml/min的速率上大孔吸附樹脂柱，利用pH為4.5、10倍於幹樹脂質量的蒸餾水進行淋洗，再用13倍於幹樹脂質量的65%乙醇進行洗脫，蒸餾水和乙醇的流速均為1.8ml/min，收集洗脫液，對洗脫液進行乾燥，獲得陳皮提取物。
在本實施例中，大孔吸附樹脂為NKA-9，在其他實施例中，大孔吸附樹脂還可為HPD-600等其他大孔樹脂。
在本實施例中，混和酶按質量百分比計，包括組分：80%纖維素酶、20%果膠酶。
本實施例的陳皮提取物可作為清除自由基藥物或保健品的應用，劑型主要有片劑、膠囊劑、顆粒劑或散劑等。
實施例2
陳皮提取物的製備方法：取陳皮乾粉，加入包括纖維素酶和果膠酶的混和酶，再加入蒸餾水，60℃水浴中攪拌1.5h，其中，陳皮乾粉與混和酶的質量比為1g:4.5mg，陳皮乾粉與蒸餾水的料液比為1g:12ml；在水浴後的液體中加入3倍體積的無水乙醇，提取3.5h，而後離心，獲取上清液，對該上清液進行減壓濃縮；調節減壓濃縮後的液體的pH值至4，並以2ml/min的速率上大孔吸附樹脂柱，利用pH為4、9倍於幹樹脂質量的蒸餾水進行淋洗，再用11倍於幹樹脂質量的65%乙醇進行洗脫，蒸餾水和乙醇的流速均為1.8ml/min，收集洗脫液，對洗脫液進行乾燥，獲得陳皮提取物。
在本實施例中，大孔吸附樹脂為NKA-9，在其他實施例中，大孔吸附樹脂還可為HPD-600等其他大孔樹脂。
在本實施例中，混和酶按質量百分比計，包括組分：75%纖維素酶、25%果膠酶。
本實施例的陳皮提取物可作為清除自由基藥物或保健品的應用，劑型主要有片劑、膠囊劑、顆粒劑或散劑等。
下面通過實驗來說明本發明陳皮提取物的自由基清除效果。
用Fenton反應（H2O2/Fe2+反應體系）產生·OH。在比色管中加入0.2mmol/L磷酸緩衝液（pH=7.0）3ml、10mmol/L Fe2+-EDTA（1:1）溶液2ml、30mmol/L苯甲酸9ml、20mmol/L H2O20.5ml，最後加入實施例1製備的陳皮提取物8ml，於30℃水浴1h後加入稀鹽酸終止反應，於300nm（Ex）/408nm（Em）條件測量螢光強度Fs。清除率=（F-Fs）/F×100%，其中，F為空白螢光強度值。在實驗中，陳皮提取物利用無水乙醇配製10個濃度，分別為0.02g/L、0.04g/L、0.06g/L、0.08g/L、0.10g/L、0.12g/L、0.14g/L、0.16g/L、0.18g/L、0.20g/L。
用Fenton反應（H2O2/Fe2+反應體系）產生·OH。在比色管中加入0.2mmol/L磷酸緩衝液（pH=7.0）3ml、10mmol/L Fe2+-EDTA（1:1）溶液2ml、30mmol/L苯甲酸9ml、20mmol/L H2O20.5ml，最後加入實施例2製備的陳皮提取物8ml，於30℃水浴1h後加入稀鹽酸終止反應，於300nm（Ex）/408nm（Em）條件測量螢光強度Fs。清除率=（F-Fs）/F×100%，其中，F為空白螢光強度值。在實驗中，陳皮提取物利用無水乙醇配製10個濃度，分別為0.02g/L、0.04g/L、0.06g/L、0.08g/L、0.10g/L、0.12g/L、0.14g/L、0.16g/L、0.18g/L、0.20g/L。
以陳皮提取物濃度為橫坐標、清除率為縱坐標繪製曲線，根據曲線，實施例1製備的陳皮提取物對·OH的半清除率為0.10g/L，實施例2製備的陳皮提取物對·OH的半清除率為0.11g/L。根據實驗結果可以看出，實施例1和實施例2製備的陳皮提取物表現出強的自由基清除能力，具有較強的抗氧化活性。
利用上述實驗方法計算陳皮黃酮對·OH的半清除率，陳皮黃酮的半清除率為0.32g/L。根據計算結果可以看出，實施例1或實施例2製備的陳皮提取物較陳皮黃酮具有更好的自由基清除能力。
以上所述僅為本發明的實施例，並非因此限制本發明的專利範圍，凡是利用本發明說明書內容所作的等效變換，或直接或間接運用在其他相關的技術領域，均同理包括在本發明的專利保護範圍內。