用於腫瘤治療的試劑、其用途及方法

2023-11-10 02:02:42 1

專利名稱：：用於腫瘤治療的試劑、其用途及方法
技術領域：
：本發明涉及生物醫學領域，特別涉及用於治療和/或預防腫瘤細胞對輻射療法(radiationtherapy,下文中簡稱為RT)的抗性的試劑、其用途及相關方法。
背景技術：
：輻射療法的原理是基於誘導對於腫瘤細胞或腫瘤相關間質而言致死性的DNA損傷。癌症患者通常在數周內每天接受低劑量(1.5-3Gy)的分次RT，常常與化學療法相結。傳統上，RT被認為是免疫抑制性的20。雖然有研究調查了局部的RT對於腫瘤潛在的免疫調節效果，關於這種應答是促進還是幹擾腫瘤的消退存在相互矛盾的報導21_24。發明人最近的研究表明，局部的灼燒性RT可以引起對於腫瘤消退的免疫應答U。但是在RT之後的腫瘤復發是起初的應答之後常見的臨床問題，即存在對於RT有抗性的腫瘤和/或腫瘤細胞。在本發明中，發明人顯示了新的、可與RT協同作用的產品，其相應的用途和方法，以引起腫瘤、特別是對RT有抗性的腫瘤的消退。輻射引起先天的和獲得性的免疫應答。暴露於輻射過程的腫瘤細胞具有分泌危險性信號(例如HMGB-1)的能力，所述危險性信號與表達在樹突細胞上的TLR4交互作用並隨後促進抗原交互呈遞3。此外，發明人之前的結果表明由輻射引起的I型幹擾素增加所述危險信號並增加CD8+T細胞的交叉啟動2。隨後，樹突細胞和吞噬凋亡腫瘤細胞的巨噬細胞遷移到淋巴結中並活化T細胞4。在這些過程中，共刺激分子增加T細胞應答並使腫瘤生長萎縮。相反地，共抑制分子抑制T細胞應答並幫助腫瘤逃脫5。然而，仍不清楚哪些共同信號傳導分子(例如，共抑制分子)在RT之後被上調並抑制T細胞免疫性。B7-H1/PD1通路對腫瘤免疫抑制起作用B7-H1是共抑制分子並且是B7家族的成員，它在腫瘤細胞、樹突細胞和巨噬細胞上被誘導性地表達6。與腫瘤相關的B7-H1涉及誘導腫瘤反應性T細胞的凋亡和損傷CTL的細胞毒性1。與此同時，表達在樹突細胞上的B7-H1被認為抑制T細胞的增殖及抑制T細胞產生細胞因子8。PD-I是可誘導地表達在活化的T細胞上的抑制因子受體，它促進T細胞的失效、凋亡和衰竭5。ro-i信號傳導被認為是慢性感染中抗原特異性T細胞衰竭(例如小鼠中的LCMV和人中的HIV和HCV)的調節因子9_12。衰竭的T細胞的標誌包括增殖功能和效應因子功能的損傷13。數篇文獻已經顯示了B7-H1/PD1通路對於癌症中的T細胞衰竭起作用14_16。已顯示抑制B7-H1/PD1信號傳導可以回復有功能的T細胞應答並延緩腫瘤的生長14』16』17。因此，這些證據表明抑制Β7-Η1/Η)-1信號傳導有可能對於設計與輻射療法的聯合用藥是有重要價值的。
發明內容發明人的研究已經顯示其最近開發的方案，即局部高劑量的輻射療法可以減少腫瘤負荷並增加抗腫瘤的免疫性，但是腫瘤的復發經常發生，即在輻射療法之後存在對RT有抗性的腫瘤細胞或組織，這些腫瘤細胞或組織能夠進一步發展為腫瘤或者具有發展為腫瘤的潛力。現在，發明人驚訝地發現了RT可以誘導B7-H1在腫瘤上的表達並且能夠誘導Η)-1在τ細胞上的表達，而所述B7-H1和ro-i的表達會抑制抵抗腫瘤的進一步的免疫性並會因此導致腫瘤的復發。然而，通過在RT之後使用阻斷B7-H1/PD1信號傳導的免疫療法和/或產品，可以減少由RT誘導的免疫抑制(即減少腫瘤細胞對RT的抗性)並增強宿主抵抗腫瘤的免疫性。因此，本發明的產品和方法呈現了一種新的策略/方案即進行輻射治療，然後及時地施用阻斷B7-H1/PD1信號傳導的免疫療法和/或產品(例如，抗B7-H1抗體)，這樣可以增強抗腫瘤的治療活性並實現對於癌症患者有益的治療效果。因此，在一個方面，本發明涉及用於治療和/或預防腫瘤細胞對輻射療法的抗性的組合物(例如藥物組合物)，其包含能夠抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑。在一個實施方式中，所述組合物中包含的抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑是·B7-H1和/或PDI活性的抑制劑，例如B7-H1或PDl的阻斷抗體；在特別的實施方式中，所述抑制劑可以是B7-H1的阻斷性單克隆抗體，例如購自Bio-Xcell(WestLebanon,NH03784,USA)的單克隆抗體IOF.9G2。在本發明的一些實施方式中，所述輻射療法是單次或多次X射線照射，例如I次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次；優選地，在每次照射中所使用的X射線劑量可以為5Gy-20Gy，例如5-8Gy、5_12Gy或5_15Gy。特別地，當施用多次X射線照射時，各次之間的間隔可以是一至數小時(例如，2、3、4、5、6、7、8、9直至24小時)，一至數天(例如，2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19天等)，甚至一至數月(例如2、3、4、5、6、7、8、9，10,11,12)等。在另外的實施方式中，所述腫瘤可以是但不限於乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、結腸癌和黑素瘤和/或其細胞，例如乳腺癌細胞(如TUBO細胞)或Myc-Cap腫瘤細胞系。在某些實施方式中，所述組合物進一步包含可用作化療劑的其它化合物，特別地，所述其它化合物包括但不限於阿黴素(Adriamycin)、環磷醯胺和紫杉烷類[紫杉醇(Taxol)和多西他賽(Taxotere)]、卡培他濱(Xeloda)、吉西他濱(Gemzar)、長春瑞濱(Navelbine)、他莫昔芬、芳香酶抑制劑(瑞寧得、弗隆、阿諾新)、5_FU加亞葉酸、伊立替康(camptosar)、奧沙利鉬、順鉬、卡鉬、雌莫司汀、米託蒽醌(Novantrone)、潑尼松、長春新鹼(Oncovin)等。在其它的實施方式中，所述藥物可以是適於直接施用在腫瘤位點的形式或者是適於全身性施用的形式。在另一個方面，本發明涉及治療和/或預防腫瘤細胞對輻射療法的抗性的方法，所述方法包括下列步驟向有需要的受試者或細胞施用包含能夠抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑的藥物組合物；其中所述受試者患有腫瘤並且經受過輻射治療，而所述細胞為經受過輻射處理的腫瘤細胞。所述方法可以在動物體(包括但不限於哺乳動物)或人體中進行，也可以在體外進行。在一個實施方式中，所施用的組合物中包含的抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑是B7-H1和/或PDI活性的抑制劑，例如B7-H1或PDl的阻斷抗體；在特別的實施方式中，所述抑制劑可以是B7-H1的阻斷性單克隆抗體，例如購自Bio-Xcell(WestLebanon，NH03784，USA)的單克隆抗體IOF.9G2。在其它的實施方式中，所述受試者或細胞所經受的輻射療法或輻射處理是X射線照射，例如單次或多次X射線照射，例如I次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次；優選地，在每次照射中所使用的X射線劑量可以為5Gy-20Gy，例如5-8Gy、5_12Gy或5_15Gy。特別地，當施用多次X射線照射時，各次之間的間隔可以是一至數小時(例如，2、3、4、5、6、7、8、9直至24小時)，一至數天(例如，2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19天等)，甚至一至數月(例如2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12)。在另外的實施方式中，所述腫瘤可以是但不限於乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、結腸癌和黑素瘤和/或其細胞，例如乳腺癌細胞(如TUBO細胞)或Myc-Cap腫瘤細胞系。在一些實施方式中，在輻射治療或輻射處理後的數小時(例如10-48小時)、數天(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9天)或數周內施用本發明的所述組合物，例如1_8周，1_7周，1_6周，1-5周，1-4周，1-3周，或1_2周內。需要時，可以多次施用所述組合物，例如2次,3次，4次，5次，6次或更多次，並且各次施用之間的間隔時間可以是數小時，I天，數天(例如2-30天，2-25天，2-20天，2-15天，2-14天，2-13天，2-12天，2-11天，2-10天，2-9天，2-8天,2-7天,2-6天,2-5天,2-4天,2-3天)，一至數月或更長時間。在另一些實施方式中，可以全身性地施用所述組合物，或僅在腫瘤位點處施用所述組合物。在某些實施方式中，所施用的組合物可進一步包含可用作化療劑的其它化合物，特別地，所述其它化合物包括但不限於阿黴素(Adriamycin)、環磷醯胺和紫杉烷類[紫杉醇(Taxol)和多西他賽(Taxotere)]、卡培他濱(Xeloda)、吉西他濱(Gemzar)、長春瑞濱(Navelbine)、他莫昔芬、芳香酶抑制劑(瑞寧得、弗隆、阿諾新)、5_FU加亞葉酸、伊立替康(camptosar)、奧沙利鉬、順鉬、卡鉬、雌莫司汀、米託蒽醌(Novantrone)、潑尼松、長春新鹼(Oncovin)等。備選地，本發明所述的方法可與治療和/或預防腫瘤的其它方法(例如，手術治療、化學療法或輻射療法聯合使用)。在又一個方面，本發明涉及抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑用於製備藥物的用途，所述藥物用於治療和/或預防腫瘤細胞對輻射療法的抗性。在一個實施方式中，所述抑制B7-H1/HH信號傳導的試劑是B7-H1和/或TOl活性的抑制劑，例如B7-H1或PDl的阻斷抗體；在特別的實施方式中，所述抑制劑可以是B7-H1的阻斷性單克隆抗體，例如購自Bio-Xcell(WestLebanon,NH03784，USA)的單克隆抗體10F.9G2。在本發明另外的實施方式中，所述輻射療法是單次或多次X射線照射，例如I次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次；優選地，在每次照射中所使用的X射線劑量可以為5Gy-20Gy，例如5-8Gy、5_12Gy或5_15Gy。特別地，當施用多次X射線照射時，各次之間的間隔可以是一至數小時(例如，2、3、4、5、6、7、8、9直至24小時)，一至數天(例如，2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19天等)，甚至一至數月(例如2、3、4、5、6、7、8、9，10,11,12)等。在其它的實施方式中，所述腫瘤可以是但不限於乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、結腸癌和黑素瘤和/或其細胞，例如乳腺癌細胞(如TUBO細胞)或Myc-Cap腫瘤細胞系。在某些實施方式中，所述組合物進一步包含可用作化療劑的其它化合物，特別地，所述其它化合物包括但不限於阿黴素(Adriamycin)、環磷醯胺和紫杉烷類[紫杉醇(Taxol)和多西他賽(Taxotere)]、卡培他濱(Xeloda)、吉西他濱(Gemzar)、長春瑞濱(Navelbine)、他莫昔芬、芳香酶抑制劑(瑞寧得、弗隆、阿諾新)、5_FU加亞葉酸、伊立替康(camptosar)、奧沙利鉬、順鉬、卡鉬、雌莫司汀、米託蒽醌(Novantrone)、潑尼松、長春新鹼(Oncovin)等。在其它的實施方式中，所述藥物可以是適於直接施用在腫瘤位點的形式或者是適於全身性施用的形式。圖I顯示了輻射之後，B7-H1和Η)_1在腫瘤微環境中的表達。在Balb/c小鼠的脅腹中皮下注射5xl05TUB0。在第14天，以15格雷(Gy)局部輻射小鼠。在第28天，取出腫瘤並消化以得到單細胞懸浮液用於染色。(A)B7-H1在腫瘤細胞上的表達受到輻射的影響；(B)B7-H1在DC和巨噬細胞上的表達在輻射後被改變；(C)經輻射和不經輻射的T細胞上，PD-I均高度表達。圖2:RT在Myc-Cap細胞系中引起B7-H1的上調。k.RT後B7-H1的表達。用0、4和8Gy輻射腫瘤細胞(Myc-Cap腫瘤細胞系)。然後培養經輻射的腫瘤細胞24或48小時。24小時或48小時後，收穫細胞，然後用抗B7-H1單克隆抗體染色。未經輻射的Myc-Cap細胞用作對照。圖3:阻斷B7-H1改善了輻射療法。在Balb/c小鼠的脅腹中皮下注射5xl05TUB0。在第14天，用I劑量12Gy的輻射局部處理小鼠。在第15、18和21天，用50yg的B7-H1阻斷單克隆抗體(克隆10F.9G2)腹膜內注射小鼠。監測腫瘤的生長。具體實施例方式在本申請中，術語「抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑」在其最廣泛的範圍內包括任何能夠降低或阻止B7-H1/PD1信號傳導的試劑，包括但不限於抑制編碼B7-H1或PDl的基因的轉錄、翻譯、修飾的試劑、影響B7-H1或PDl蛋白的活性的試劑、或者以其它方式影響B7-H1與PDl的直接或間接相互作用的試劑。在本發明的某些實施方式中，所述試劑可以是抑制B7-H1或PDl蛋白活性的試劑，例如B7-H1或HH的阻斷抗體，在特別的實施方式中，所述阻斷抗體可以是特異性的單克隆抗體、多克隆抗體、人源化抗體、嵌合抗體、或其抗原特異性片段(例如Fab、Fv,ScFv抗體片段等)。本領域技術人員將明了，任何能夠特異性結合B7-H1或PDl蛋白，並且影響其功能和/或結構的試劑都將潛在地作為本發明的「抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑」。在本申請中，術語「輻射療法」或「輻射處理」包括例如，分次輻射治療、非分次輻射治療和超分次輻射治療，以及輻射與化學治療的組合。輻射的類型還包括電離(Y)輻射、粒子輻射、低能量傳遞(LET)、高能量傳遞(HET)、X射線輻射、紫外輻射、紅外輻射、可見光、和光敏化輻射等。在本發明的一種實施方式中，所述輻射療法或輻射處理是單次或多次X射線照射，例如I次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次；優選地，在每次照射中所使用的X射線劑量可以為5Gy-20Gy，例如5-8Gy、5_12Gy或5_15Gy。特別地，當施用多次X射線照射時，各次之間的間隔可以是一至數小時(例如，2、3、4、5、6、7、8、9直至24小時)，一至數天(例如，2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19天等)，甚至一至數月(例如2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12)。在本申請中，「化療劑」與「化學治療劑」、「用於化學治療的試劑」可互換地使用。其包括單一活性成分的組合物或者多種化學治療劑的組合。在需要治療的受試者中，化學治療可以與手術治療或者輻射治療組合，或者與其他抗腫瘤治療形式組合，例如，可與本發明的「抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑」組合使用。特別地，所述化療劑包括但不限於阿黴素(Adriamycin)、環磷醯胺和紫杉燒類[紫杉醇(Taxol)和多西他賽(Taxotere)]、卡培他濱(Xeloda)、吉西他濱(Gemzar)、長春瑞濱(Navelbine)、他莫昔芬、芳香酶抑制劑(瑞寧得、弗隆、阿諾新)、5-FU加亞葉酸、伊立替康(camptosar)、奧沙利鉬、順鉬、卡鉬、雌莫司汀、米託蒽醌(Novantrone)、潑尼松、長春新鹼(Oncovin)等,或它們的組合。在本發明的情境中，「對輻射療法的抗性」指細胞(例如腫瘤細胞)在經受輻射治療或處理後沒有喪失繼續繁殖和/或生長的能力。這種抗性通常可導致輻射療法對於腫瘤治療的效力降低或效力喪失，進而引起腫瘤的復發。在本發明的情境中，「腫瘤」、「癌」或者「過度增殖性疾病」是指所有惡性或良性的瘤性細胞生長和增殖，包括所有轉化的細胞和組織和所有癌性細胞和組織。癌症的實例包括，但不限於，癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤和白血病或者淋巴惡性腫瘤。此類癌症的更具體的實例包括鱗狀細胞癌(例如，上皮鱗狀細胞癌)、肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺的腺癌和肺的鱗狀細胞癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌，包括胃腸癌、胰腺癌、成膠質細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳腺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌或者子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌，以及頭頸癌。癌症的其他實例在下面的「過度增殖性疾病」中列出。特別地，所述腫瘤選自乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、結腸癌和黑素瘤和/或其細胞，例如乳腺癌細胞(如TUBO細胞)或Myc-Cap腫瘤細胞系。在本發明的一些實施方式中，在輻射治療或輻射處理後的數小時(例如10-48小時)、數天(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9天)或數周內施用本發明的抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑或包含此試劑的組合物，例如在1-8周，1-7周，1-6周，1-5周，1-4周，1-3周，或1_2周內。需要時，可以多次施用所述試劑或組合物，例如2次，3次，4次，5次，6次或更多次，並且各次施用之間的間隔時間可以是數小時，I天，數天(例如2-30天，2-25天，2-20天，2-15天，2-14天，2-13天，2-12天，2-11天，2-10天，2-9天，2-8天，2-7天，2-6天，2-5天，2-4天，2-3天)，一至數月或更長時間。對於預防或治療所述對輻射治療的抗性，施用本發明的試劑或組合物的劑量和方式可以由臨床醫師根據已知的標準選擇。所施用的抑制B7-H1/PD1信號傳導的試劑的濃度、劑量可以取決於待治療的癌症類型、疾病的嚴重性和病程、腫瘤大小、轉移程度、施用的目的是預防性的還是治療性的、先前的治療、患者的臨床病史及對抗體的應答、以及主治醫師的判斷。對於持續幾天或更長時間的重複施用，根據情況，可以維持該治療直到疾病症狀獲得期望的抑制，例如腫瘤大小/體積的減小和轉移的減小。可以通過常規方法和分析試驗，基於醫師或本領域其它技術人員已知的標準，監測該治療的過程。特別地,對於抗體而言,施用的劑量可以是O.Iμg/kg到100mg/kg患者體重。例如O.lmg/kg到20mg/kg患者體重，lmg/kg到10mg/kg患者體重。通常，由於對外來多肽的免疫反應，人抗體在人體中比來自其他物種的抗體有更長的半壽期。從而，較低劑量的人抗體和較低頻率的施用通常是可能的。此外，通過修飾，如脂化，增強抗體的攝入和組織穿透(例如，進入腦)可以減少抗體的劑量和施用頻率。根據本發明的藥物組合物可以包含藥學上可接受的賦形劑、載體、緩衝質、穩定劑或本領域技術人員公知的其他材料。此類材料應當是非毒性的並且不應幹擾活性成分的功效。此類材料可以包括，例如任何一種和所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑以及生理學相容的物質等。藥學上可接受的載體可以是例如水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等，以及其組合。在許多情況下，所述藥物組合物中可以包括等滲劑，例如糖，多元醇如甘露醇、山梨糖醇，或氯化鈉將是優選的。藥學上可接受的物質的還可以是溼潤劑或少量輔助物質例如溼潤劑或乳化劑、防腐劑或緩衝質，其增強抗體的保存期或效用。載體或其他材料的精確性質將取決於施用途徑，所述施用途徑可以是口服、局部、通過吸入或通過注射，例如靜脈內。在一個實施方案中，所述藥物組合物通過靜脈內輸注或注射進行施用。在另一優選實施方案中，所述藥物組合物通過肌內或皮下注射進行施用。用於口服施用的藥物組合物可以是片劑、膠囊、粉劑或液體形式，例如含有惰性稀釋劑或可同化的可食用載體。片劑可以包含固體載體例如明膠或佐劑。液體藥物組合物一般包含液體載體例如水、石油、動物或植物油、礦物油或合成油。可以包括生理鹽水溶液、葡萄糖或其他糖類溶液或者二醇例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。特異性結合成員(需要時，以及其他成分)還可包封在硬或軟殼明膠膠囊內，壓縮成片劑，或直接摻入受試者飲食中。對於口服治療施用，活性成分可以與賦形劑相摻合，並以可吸收的片劑、頰含片劑、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿劑、糯米紙囊劑等的形式進行使用。為了通過除腸胃外施用以外的其他方式施用本發明的化合物，可能必需用防止其失活的材料包被所述化合物或將所述化合物與所述材料共施用。對於靜脈內注射，或在痛苦部位(例如腫瘤部位)注射，活性成分將是腸胃外可接受的水溶液的形式，其是無熱原的並且具有合適的PK、等滲性和穩定性。本領域相關技術人員將能夠容易地例如使用等滲媒介物例如氯化鈉注射液、林格注射液、乳酸鹽林格注射液來製備合適的溶液。需要時，可以包括防腐劑、穩定劑、緩衝質、抗氧化劑和/或其他添加劑。本發明的試劑或組合物可以單獨地或與其他治療相組合地同時或順次施用，這取決於被治療的病狀。下面的實施例僅用於進一步闡釋本發明的內容，而不意欲在任何方面限制本發明。本領域技術人員將領會，可對下述具體實施方式進行修飾而仍不偏離所附的權利要求所要求保護的本發明的範圍、精神和主旨。在下面的所有實施例中，如無特別聲明，均採用本領域技術人員慣常所用的方法、儀器、試劑和實驗方案等。實施例I輻射後B7-H1和PD-I在腫瘤微環境中高度表達RT之後的復發是一個普遍的問題，這至少一部分是由於受試者中存在對RT有抗性的腫瘤細胞和/或組織。發明人提出所述復發過程，即這些對RT有抗性的腫瘤的發展可能涉及抑制T細胞應答的抑制性分子。為了研究RT是否誘導Β7-Η1/Η)-1的表達，發明人對腫瘤細胞、樹突細胞和巨噬細胞上的B7-H1進行了染色，並對CD4+T細胞和CD8+T細胞上的PD-I進行了染色。實驗過程簡述如下在Balb/c小鼠的脅腹中皮下注射5xlOsTUBO腫瘤細胞(源自Balb/cHer2/neU轉基因小鼠的乳腺癌細胞)18。在第14天，利用X-射線發生器(PCM1000,Pantak)以15格雷(Gy)局部輻射小鼠。在第28天，取出腫瘤，並用O.2mg/ml的膠原酶消化30分鐘，以得到單細胞懸浮液用於通過標準染色方法對B7-H1進行染色，染色使用的是O.5μg/ml的單克隆抗體10F.9G2,所述抗體購自Bio-Xcell,WestLebanon,NH03784，USA。發明人發現，輻射之後B7-H1不僅在腫瘤細胞上表達，也在樹突細胞和巨噬細胞上表達(圖IA和圖1B)。發明人還發現ro-Ι也在浸潤的⑶8+T細胞和⑶4+T細胞上高度表達(圖1C)。實施例2RT引起B7-H1的h調為了研究RT是否能夠誘導B7-H1在腫瘤細胞(Myc-Cap前列腺癌細胞系19)上的表達，用0、4和SGy輻射腫瘤細胞(Myc-Cap腫瘤細胞系)。然後培養經輻射的腫瘤細胞24或48小時。24小時或48小時後，收穫細胞，隨後用抗B7-H1的單克隆抗體(O.5μg/ml的抗體10F.9G2，購自Bio-Xcell,WestLebanon,NH03784,USA)對所收穫的細胞(IO6個細胞)進行標準染色。將未經輻射的Myc-Cap細胞用作對照。結果表明，RT顯著地上調了B7-H1在Myc-Cap細胞中的表達。實施例3抗B7-H1的阻斷促講了局部的RT作用並減少腫瘤負荷為了測試RT介導的B7-H1是否損傷獲得性免疫應答，在進行RT的同時，阻斷B7-H1/PD1信號傳導通路。在Balb/c小鼠的脅腹中皮下注射5xlOsTUBO。在第14天，用I劑量12Gy的輻射局部處理小鼠(使用X-射線發生器，PCM1000,Pantak)。在第15、18和21天，分別用50μg的B7-H1阻斷性單克隆抗體(克隆10F.9G2，購自Bio-Xcell,WestLebanon,NH03784，USA)腹膜內注射小鼠，並監測腫瘤的生長。結果顯示，雖然單獨的RT或單獨的B7-H1阻斷性單克隆抗體對於腫瘤的生長沒有很大的影響，但是RT與所述抗體的組合產生了協同作用的效果，有效地引起了腫瘤的顯著消退(圖3)。參考文獻I.Lee,Y.,等人TherapeuticeffectsofablativeradiationonlocaltumorrequireCD8+Tcells!changingstrategiesforcancertreatment.Blood114，589-595(2009)。2.Burnette，B.，等TheEfficacyofRadiotherapyReliesUponInductionofTypeIInterferon-DependentInnateandAdaptiveImmunity.CancerRes。3.Apetoh,L.,等Toll-likereceptor4-dependentcontributionoftheimmunesystemtoanticancerchemotherapyandradiotherapy.NatMed13，1050-1059(2007)。4.Asano，K.，等人CD169-PositiveMacrophagesDominateAntitumorImmunitybyCrosspresentingDeadCell-AssociatedAntigens.Immunity34，85_95。5.Zou,W.&Chen,L.InhibitoryB7-familymoleculesinthetumourmicroenvironment.NatRevImmunol8，467-477(2008)。6.Chen,L.Co-inhibitorymoleculesoftheB7-CD28familyinthecontrolofT-cellimmunity.NatRevImmunol4，336-347(2004)。7.Dong,H.，等人Tumor-associatedB7-H1promotesT-cellapoptosisapotentialmechanismofimmuneevasion.NatMed8，793-800(2002)。8.Curiel，T.J.，等人.BlockadeofB7-H1improvesmyeloiddendriticcell-mediatedantitumorimmunity.NatMed9，562-567(2003)。9.Barber，D.L，等人RestoringfunctioninexhaustedCD8Tcellsduringchronicviralinfection.Nature439，682-687(2006)。10.Day，C.L，等人PD-1expressiononHIV-specificTcellsisassociatedwithT-cellexhaustionanddiseaseprogression.Nature443，350-354(2006)。11.Trautmann，L，等人UpregulationofPD-IexpressiononHIV-specificCD8+Tcellsleadstoreversibleimmunedysfunction.NatMed12，1198-1202(2006)。12.Nakamoto，N.，等人SynergisticreversalofintrahepaticHCV-specificCD8TcellexhaustionbycombinedPD-l/CTLA-4blockade.PLoSPathog5，el000313(2009)。13.Freeman，G.J.，Wherry,E.J.，Ahmed,R.&Sha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