抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶單克隆抗體的用途
2023-05-18 19:31:46
抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶單克隆抗體的用途
【專利摘要】本發明提供了一種抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶（GPI或G6PI）單克隆抗體在製備促進類風溼關節炎滑膜成纖維細胞凋亡的藥物中的應用。採用鼠抗重組人GPI單克隆抗體或人源性抗GPI單克隆抗體作用於分離培養的RA-FLS和OA-FLS，作用72小時後RA-FLS、OA-FLS的增生受到明顯抑制、細胞凋亡增加，且細胞培養上清中IL-1、TNF-α含量顯著降低。本發明為RA診斷、預防和治療提供了新的疾病靶標，針對RA最主要的病理變化，即受累關節滑膜組織炎症、增生提供了一個全新、有效的防治新技術，為後續研發人源性GPI單抗治療RA奠定了必要的基礎，有廣泛的臨床應用前景。
【專利說明】抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶單克隆抗體的用途
【技術領域】
[0001]本發明屬於細胞生物學領域，尤其涉及一種關於細胞增殖、凋亡和分泌的小分子蛋白，具體來說是一種抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶單克隆抗體(抗GPI單抗)在製備促進類風溼關節炎滑膜成纖維細胞凋亡的藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]類風溼關節炎(rheumatoid arthritis, RA)是一種慢性、全身性、自身免疫性疾病，其特徵是外周關節的非特異性、對稱性慢性炎症，關節滑膜的慢性炎症、增生，形成血管翳，侵犯關節軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腱等，造成關節軟骨、骨和關節囊破壞，最終導致關節畸形和功能喪失，部分患者伴不同程度的全身表現。
[0003]類風溼關節炎(RA)在中國是一個常見的多發性自身免疫疾病，患病率約為
0.3%~0.4%，美國本病患者約佔人群的I %，女性發病率較男性高2~3倍。各年齡組人群均可發病，但25~50歲為本病的好發年齡。RA關節病變是從滑膜開始的，滑膜充血、水腫、滑膜表面有纖維蛋白滲出物覆蓋；滑膜表層細胞增生、滑膜組織內各種炎症細胞浸潤、血管新生。隨著炎症持續和反覆，在新生血管周圍的滑膜成纖維樣細胞增生明顯，形成肉芽腫，與軟骨粘連，並侵蝕軟骨。滑膜增生逐漸向軟骨中心部位蔓延，阻斷了軟骨由滑液中吸收營養，軟骨逐步被吸收。同時由於溶酶體內的蛋白降解酶、膠原酶的釋放，使軟骨基質破壞、溶解，導致關節軟骨廣泛破壞，關節間隙變窄，關節面粗糙 不平，血管翳機化後形成粘連，纖維組織增生，關節腔內形成廣泛粘連，而使關節功能明顯受限，形成纖維性強直。從RA受累關節病理變化過程可看出，關節滑膜炎症、成纖維樣細胞增生和血管新生是導致RA關節不可逆病變的根源。
[0004]本發明人近十年致力於有關RA實驗室診斷指標試劑盒研發及RA生物治療藥物的研發。在輔助診斷生物指標上，已成功獲得發明專利兩項，《變性變構型環瓜氨酸多肽及其融合蛋白、技術和試劑盒》(中國專利號200810203396.4)和《GPI抗原酶聯免疫法體外定量測定診斷試劑盒》(中國專利號CN200410016140.4)。GPI (又稱G6PI)ELISA檢測試劑已經臨床應用，檢測診斷RA敏感度為76.1%、特異性達93.5%，血清GPI含量與RA病情活動狀態相關、且在血清GPI陽性的RA患者關節液中也檢測到GPI濃度異常升高(Fan LY, et al.ClinicaChimicaActa2010, 411:2049-2053)。
[0005]本發明是在前期有關RA實驗室診斷指標專利發明基礎上向RA治療領域的拓展。GPI是一個多功能蛋白，在細胞內是糖酵解和糖異生的關鍵酶，催化葡萄糖6磷酸與6磷酸果糖間轉化；在細胞外，GPI分子與兩個細胞外因子，自分泌蠕動因子(Autocrine MotilityFactor,AMF)和神經介素(neuroleukin, NLK)高度同源，三者是同一基因的產物(Watanabe
H,et al.Cancer Resl996, 56:2960-2963.)。AMF是腫瘤細胞分泌的自分泌細胞因子，能夠通過受體(AMFR)介導的信號途徑刺激腫瘤細胞，在多種腫瘤研究中顯示(包括胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌和肝癌等)與腫瘤細胞生長、進展和轉移相關(Tsutsumi S, et al.ClinCancer Res2004，10:7775-7784.Jiang WGj et al.J Histochem Cytochem2006, 54:231 -241.)。本發明人發現在人RA關節滑膜中也存在類似腫瘤中的現象，即重組人源性GPI能夠促進分離培養的RA、骨關節炎(OA)關節滑膜成纖維樣細胞(RA-FLS、OA-FLS)生長，而抗人源性GPI單抗則能有效地抑制RA-FLS、0A-FLS增生、促進細胞凋亡，同時還抑制FLS分泌炎症細胞因子IL-1、TNF-α。
[0006]本發明針對RA最主要的病理變化提供了一個全新、有效的防治新技術，不僅為GPI參與RA發病機制提供了實驗依據，而且為RA診斷、預防和治療提供了新的疾病靶標，為後續建立人源性GPI單抗治療RA生物療法奠定了必要的基礎，有廣泛的臨床應用前景。
【發明內容】
[0007]為了解決現有技術中的上述技術問題，本發明提供了一種抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶單克隆抗體(抗GPI單抗)在製備促進類風溼關節炎滑膜成纖維細胞凋亡的藥物中的應用。所述的這種抗GPI單抗能明顯抑制RA-FLS、0A-FLS的增生，顯著降低I L_l、TNF_a的含量。
[0008]本發明的目的在於提供一種抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶單克隆抗體在製備促進類風溼關節炎滑膜成纖維細胞凋亡的藥物中的應用。
[0009]具體的，所述的抗體為鼠抗重組人GPI單克隆抗體或者人源性抗GPI單克隆抗體。
[0010]從RA、OA患者關節手術切除的關節滑膜組織中分離培養關節滑膜成纖維樣細胞(RA-FLS, OA-FLS)ο採用重組人GPI作用於分離培養的RA-FLS和OA-FLS (均為第四代細胞)，結果GPI促進兩種FLS增生，促進FLS分泌炎症因子IL-1、TNF- a。
[0011]在此基礎上分別採用鼠源性抗重組人GPI單抗和人源性抗GPI單克隆抗體作用於上述細胞，作用72小時後RA-FLS、0A-FLS的增生受到明顯抑制、細胞凋亡增加，且細胞培養上清中IL-UTNF-a含量顯著降低。
[0012]本發明和已有技術相比，其技術效果是顯著的。本發明為RA診斷、預防和治療提供了新的疾病靶標，針對RA最主要的病理變化，即受累關節滑膜組織炎症、增生提供了一個全新、有效的防治新技術，為後續研發人源性GPI單抗治療RA奠定了必要的基礎，有廣泛的臨床應用前景。
[0013]如圖說明
[0014]圖1顯示了培養的關節滑膜成纖維樣細胞(X400)。
[0015]圖2顯示了培養的FLSs (第三代)流式細胞儀檢測結果。
[0016]圖3顯示了 FLSs培養上清液中GPI含量。
[0017]圖4 顯示了 GPI 促進 RA-FLS、OA-FLS 增殖。
[0018]圖5顯示了 GPI抑制ADR誘導FLSs凋亡。
[0019]圖6顯示了鼠源性GPI單抗能顯著抑制RA-FLS和0A-FLS增生。
[0020]圖7顯示了鼠源性抗GPI單克隆抗體促進RA-FLS、OA-FLS凋亡。
[0021]圖8顯示了人源性GPI單抗對RA-FLS、0A-FLS凋亡的影響。(A:RA1 (GPI high inserm), B:RA3 (GPI low in serm), C:0A1)
[0022]圖9 顯示了 GP1、GPI 單抗對 RA-FLS、OA-FLS 分泌 IL-1、TNF- a 影響。
【具體實施方式】[0023]實施例1
[0024]1.臨床資料:
[0025]8例患者均來自上海市東方醫院風溼科和骨科2011年住院病人，診斷均符合1987年美國風溼病學會修訂的RA診斷標準。其中女性6例，男性2例，年齡46~74歲，病程6月~4年。另取年齡與性別相匹配的6例骨關節炎(osteoarthritis,0A)患者為對照組,其中女性4例，男性2例，年齡48-75，均為上海市東方醫院運動醫學科2011年住院病人。關節置換術或關節鏡下滑膜清除術後病理檢查的剩餘滑膜組織，放入1640培養基中4~10°C保存。
[0026]附表1.RA、OA患者臨床資料
[0027]
【權利要求】
1.一種抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶單克隆抗體在製備促進類風溼關節炎滑膜成纖維細胞凋亡的藥物中的應用。
2.如權利要求1所述的應用，所述的抗人葡萄糖-6-磷酸異構酶單克隆抗體為鼠抗重組人GPI單克隆抗體或者人源性抗GPI單`克隆抗體。
【文檔編號】A61K39/395GK103656637SQ201310542549
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月5日 優先權日:2013年11月5日
【發明者】範列英, 劉穎冰 申請人:範列英, 劉穎冰