一種納米血栓通注射製劑及其製備方法
2023-05-17 10:03:36 2
>組別5min10min20min30min60min90min120min市售血栓通注射液組本發明納米血栓通水針劑組本發明納米血栓通輸液組本發明納米血栓通粉針劑組7.330.229.830.712.942.343.043.18.437.237.837.7-31.231.431.1-23.123.723.4-14.715.114.8-8.98.78.6結論通過上述實驗表明，本發明納米血栓通注射製劑可以很好的通過血腦屏障。實驗2對家兔視網膜靜脈的影響實驗藥物本發明各組納米血栓通製劑(廣東天之驕藥物開發有限公司實驗室提供)血栓通注射液(麗珠醫藥集團股份有限公司)高分子右旋糖酐(70)(桂林市第三製藥廠生產)實驗動物家兔，雌雄兼用。實驗方法對家兔球視網膜毛細血管叉網點數影響試驗取家兔，雌雄兼用，隨機分成血栓通注射液組、本發明納米血栓通水針劑組、輸液劑組、粉針劑組。以3％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉後，自耳緣靜脈注入10％高分子右旋糖酐生理鹽水溶液15ml/kg，造成急性微循環障礙模型。在注射後20min用顯微鏡觀察兔左眼球視網膜上的微血管，通過帶有測量面積裝置(1m×1mm方格)的目鏡選擇觀察球視網膜上固定面積範圍內的毛細血管交叉網點數(藥前值)，然後再每組分別靜注2ml/kg(輸液劑與粉針劑配製成與水針劑相同密度的溶液)，給藥40min後同法觀察測量固定部位的毛細血管交叉網點數(藥後值)，以差值(藥後值-藥前值)為指標，給藥組與對照組進行組間比較(t或t′檢驗)，結果如表6。表6血栓通對家兔球視網膜毛細血管叉網點數影響結論通過上述實驗表明本發明納米血栓通注射製劑對視網膜靜脈阻塞具有更好的藥理作用。實驗3對大鼠心肌缺血再灌注損傷不同時間的保護作用實驗藥物本發明各組納米血栓通製劑(廣東天之驕藥物開發有限公司實驗室提供)血栓通注射液(麗珠醫藥集團股份有限公司)實驗動物wistar大鼠，雌雄不限，體重250±45g。實驗方法取大鼠，隨機分組，乙醚開放吸入麻醉，血液肝素化，剪開胸腔，立即向胸腔內加入少許碎冰屑進行供心表面降溫，剪開心包，近無名動脈處剪斷升主動脈，近肺動脈分叉處剪斷主肺動脈，然後提起心臟，結紮上、下腔靜脈及肺動脈，並在其遠端切斷，迅速將心臟置於冷停搏液(4℃)中，用同樣的停搏液自剪斷的升主動脈斷端恆壓灌洗(壓力3.99-5.32kpa)至心跳停止，心肌顏色變白為止，灌注停搏液後停跳的離體心臟仍保存在原停搏液中。從正中線剪開腹腔，游離出腹主動脈和下腔靜脈，在雙側腎動脈以下、髂動脈分叉以上，阻斷通向背側的中、小交通支，同時將供心套入冷循環牽引兩用袋內，在同一平面縱行剪開腹主動脈、下腔靜脈前壁約3cm，將供心升主動脈與受體鼠的腹主動脈切口做全層連續縫合，將供心主肺動脈與受體鼠的下腔靜脈切口做連續縫合，自供體心取出，灌注心臟停搏液後40min，恢復移植心臟供血，30min內移植心臟復跳，將腸管按原位送回腹腔，關腹，正常飼養，通過腹壁觸診移植心臟搏動情況，判斷移植心臟是否存活。24h實驗組和空白組分別採血1ml，離心出血清，用日立公司生產的全自動生化分析儀7150測定1天、3天、7天、15天、20天、25天CK活力。實驗結果見表7表7對大鼠心肌缺血再灌注損傷的不同時間的保護作用注與空白對照組比較**P＜0.01，#P＜0.05；與陽性對照組比較*P＜0.05結論通過上述實驗表明，市售血栓通注射液在20天左右才具有一定治療作用，而本專利納米血栓通注射製劑在3天時就具有治療作用，充分說明將三七總皂苷進行納米製備後，在治療血栓性疾病時具有起效迅速的特點；本專利納米血栓通注射製劑與市售血栓通注射液比較，具有更好的藥理作用。七.製備實施例實施例1血栓通納米技術處方為三七總皂苷60克，藥用載體300克，其中脂質體製備中乳化劑為180克、脂質120克。方法一取三七總皂苷60克、乳化劑大豆卵磷脂180克和脂質三硬脂酸甘油酯120克，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡沙姆188(二者質量比1∶1)的飽和水溶液，製成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝後，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷60克、卵磷脂、泊絡沙姆F-68、土溫80共180克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯120克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h後超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷60克，脂質三棕櫚酸甘油酯120克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑蛋黃卵磷脂180克，微熱使溶成有機相，另取助乳化劑泊絡沙姆F-68溶於水中，構成水相，將有機相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4h，使有機融媒完全蒸發並使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解於0-2℃的水相，繼續攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷60克，溶於30％乙醇中；將脂質中三月桂酸甘油酯溶於正己烷中，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉刮膜蒸發儀，控制壓力0.1個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷60克與聚氰基丙烯酸烷酯300克混合成油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過矽膠管或細針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏鬥(9-15μm)過濾，即得混懸液。製劑製備水針劑製備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑製備取上述混懸液加入藥用輔料氯化鈉，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑製備取上述混懸液加入藥用輔料蔗糖，加注射用水溶解完全，調節PH值，過濾，滅菌，冷凍乾燥，得到粉針劑1000瓶；將上述納米製劑進行檢測，其納米粒徑為40-120納米實施例2血栓通納米技術處方為三七總皂苷80克，藥用載體800克，其中脂質體製備中乳化劑為420克、脂質380克。方法一取三七總皂苷80克、乳化劑蛋黃卵磷脂420克和脂質三肉豆蔻酸甘油酯380克，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡沙姆188(二者質量比1∶1)的飽和水溶液，製成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝後，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷80克、卵磷脂、泊絡沙姆F-68、土溫80共420克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯380克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h後超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷80克，脂質三月桂酸甘油酯380克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑磷脂醯膽鹼420克，微熱使溶成有機相，另取助乳化劑泊絡沙姆F-68溶於水中，構成水相，將有機相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4h，使有機融媒完全蒸發並使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解於0-2℃的10ml水相，繼續攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷80克，溶於70％乙醇中；將脂質WitepsolW35380克溶於液體烷烴中，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉刮膜蒸發儀，控制壓力0.2個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷80克和聚乳酸800克形成油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過矽膠管或細針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏鬥(9-15μm)過濾，即得混懸液。製劑製備水針劑製備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑製備取上述混懸液加入藥用輔料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑製備取上述混懸液加入藥用輔料乳糖，加注射用水溶解完全，調節PH值，過濾，滅菌，冷凍乾燥，得到粉針劑1000瓶；將上述納米製劑進行檢測，其納米粒徑為40-120納米實施例3血栓通納米技術處方為三七總皂苷65克，藥用載體443克，其中脂質體製備中乳化劑為301克、脂質142克。方法一取三七總皂苷65克、乳化劑泊洛沙姆301克和脂質單硬脂酸甘油酯142克，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡沙姆188(二者質量比1∶1)的飽和水溶液，製成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝後，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷65克、卵磷脂、泊絡沙姆F-68、土溫80共301克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯142克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h後超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷65克，脂質硬脂酸、棕櫚酸142克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑聚山梨醇301克，微熱使溶成有機相，另取助乳化劑泊絡沙姆F-68溶於水中，構成水相，將有機相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4h，使有機融媒完全蒸發並使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解於0-2℃的水相，繼續攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷65克，溶於35％乙醇中；將脂質三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯溶於正己烷中，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉刮膜蒸發儀，控制壓力0.12個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷65克和聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖共443克形成油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過矽膠管或細針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏鬥(9-15μm)過濾，即得混懸液。製劑製備水針劑製備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑製備取上述混懸液加入藥用輔料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑製備取上述混懸液加入藥用輔料蔗糖，加注射用水溶解完全，調節PH值，過濾，滅菌，冷凍乾燥，得到粉針劑；將上述納米製劑進行檢測，其納米粒徑為40-120納米實施例4血栓通納米技術處方為三七總皂苷70克，藥用載體503克，其中脂質體製備中乳化劑為287克、脂質216克。方法一取三七總皂苷70克、乳化劑膽酸鹽、四丁酚醛287克和脂質WitepsolH35、WitepsolH42、單硬脂酸甘油酯216克，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡沙姆188(二者質量比1∶1)的飽和水溶液，製成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝後，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷70克、卵磷脂、泊絡沙姆F-68、土溫80共287克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯216克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h後超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷70克，脂質單硬脂酸甘油酯、棕櫚酸216克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑膽酸鹽287克，微熱使溶成有機相，另取助乳化劑泊絡沙姆F-68溶於水中，構成水相，將有機相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4h，使有機融媒完全蒸發並使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解於0-2℃的水相，繼續攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷70克，溶於50％乙醇中；將脂質三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、WitepsolW35液體烷烴中，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉刮膜蒸發儀，控制壓力0.16個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷70克和聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠油503克形成溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過矽膠管或細針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏鬥(9-15μm)過濾，即得混懸液。製劑製備水針劑製備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑製備取上述混懸液加入藥用輔料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑製備取上述混懸液加入藥用輔料蔗糖，加注射用水溶解完全，調節PH值，過濾，滅菌，冷凍乾燥，得到粉針劑1000瓶；將上述納米製劑進行檢測，其納米粒徑為40-120納米實施例5血栓通納米技術處方為三七總皂苷75克，藥用載體682克，其中脂質體製備中乳化劑為412克、脂質270克。方法一取三七總皂苷75克、乳化劑山梨醇412克和脂質硬脂酸、棕櫚酸270克，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡沙姆188(二者質量比1∶1)的飽和水溶液，製成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝後，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷75克、卵磷脂、泊絡沙姆F-68、土溫80共412克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯270克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h後超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷75克，脂質WitepsolW35、WitepsolH35、三硬脂酸甘油酯共270克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑大豆卵磷脂412克，微熱使溶成有機相，另取助乳化劑泊絡沙姆F-68溶於水中，構成水相，將有機相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4h，使有機融媒完全蒸發並使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解於0-2℃的水相，繼續攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷75克，溶於65％乙醇中；將脂質三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、WitepsolW35溶於液體烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉刮膜蒸發儀，控制壓力0.18個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷75克和聚丙交酯-乙交酯682克形成油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過矽膠管或細針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏鬥(9-15μm)過濾，即得混懸液。製劑製備水針劑製備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑製備取上述混懸液加入藥用輔料氯化鈉，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑製備取上述混懸液加入藥用輔料甘露醇，加注射用水溶解完全，調節PH值，過濾，滅菌，冷凍乾燥，得到粉針劑1000瓶；將上述納米製劑進行檢測，其納米粒徑為40-120納米。權利要求1.一種納米血栓通注射製劑，其特徵在於其組成包括三七總皂苷6-8重量份，藥用載體30-80重量份；其特徵還在於納米血栓通注射製劑中納米粒徑為40-120納米。2.根據權利要求1所述的一種納米血栓通注射製劑的製備方法，其特徵包括以下步驟血栓通納米技術方法一取三七總皂苷6-8重量份、乳化劑18-42重量份和脂質12-38重量份，在通氮氣條件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡沙姆188(二者質量比1∶1)的飽和水溶液，製成粗乳，在80±5℃通氮氣條件下用高壓乳勻機載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝後，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷6-8重量份、卵磷脂、泊絡沙姆F-68、土溫8018-42重量份，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯12-38重量份加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續攪拌1h後超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷6-8重量份，脂質12-38重量份和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑18-42重量份，微熱使溶成有機相，另取助乳化劑泊絡沙姆F-68溶於水中，構成水相，將有機相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續加熱攪拌4h，使有機融媒完全蒸發並使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解於0-2℃的水相，繼續攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷6-8重量份，溶於30％-70％乙醇中；將脂質中一種或多種共12-38重量份溶於烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉刮膜蒸發儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷6-8重量份與油30-80重量份混勻成溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種)，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過矽膠管或細針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發至原體積的1/5左右，用玻砂漏鬥(9-15μm)過濾，即得混懸液。製劑製備水針劑製備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑；輸液劑製備取上述混懸液加入藥用輔料，加注射用水溶解完全，加入穩定劑PVP，調節PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑；粉針劑製備取上述混懸液加入藥用輔料，加注射用水溶解完全，調節PH值，過濾，滅菌，冷凍乾燥，得到粉針劑。3.根據權利要求1和2所述的納米血栓通注射製劑具有活血化瘀、擴張血管、改善血液循環的功用，在治療視網膜中央靜脈阻塞、心腦血管病及後遺症、內眼病、眼前房出血等症的應用。全文摘要本發明公開了一種納米血栓通注射製劑及其製備方法，其特徵在於從中藥三七主根提取純化的有效部位三七總皂苷與藥用載體組合，製備成納米血栓通水針劑、輸液劑、粉針劑；其特徵還在於本發明注射製劑中三七總皂苷6－8重量份、藥用載體30－80重量份，其中納米粒徑為40－120納米；藥理實驗結果表明，本發明納米注射製劑應用安全，與市售血栓通注射液比較具有更好的藥理作用。文檔編號A61P7/02GK1879639SQ20051007750公開日2006年12月20日申請日期2005年6月17日優先權日2005年6月17日發明者張晴龍申請人:張晴龍