一種褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用的製作方法
2023-04-23 04:48:26 2
一種褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種褐毛橐吾提取物的新用途，該新用途是褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用。所述褐毛橐吾提取物是按如下方法製備的：以褐毛橐吾為原料，採用超臨界二氧化碳萃取技術，大孔吸附樹脂純化技術分別得到褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C，按一定比例混合，即為褐毛橐吾提取物。本發明所提供的褐毛橐吾提取物對製備治療白血病藥物具有重要意義。
【專利說明】一種褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於醫藥領域，涉及一種中藥材提取物在製備治療白血病藥物中的應用，具體是涉及一種褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]白血病是起源造血系統的、以骨髓或其他造血組織中產生和積聚大量幼稚和異常白細胞為特點的惡性疾病。從形式看白血病細胞大多數是未成熟和形態異常的白細胞；在功能上，白血病細胞有著與腫瘤細胞相同的特點:白血病細胞呈腫瘤性增值，無法控制，常導致骨髓造血功能的抑制和衰竭，致病人出現貧血、中性粒細胞和血小板減少，白血病細胞可浸潤全身各種組織與臟器，使各個臟器的功能受損，如脾、肝、淋巴結、腦膜、皮膚等，產生肝、脾、淋巴結腫大、頭痛、頸強直等臨床症狀和體徵；也可表現為局部的腫瘤，例如浸潤骨膜下時，可聚集成淡綠色腫塊，俗稱綠色瘤，如乳突綠色瘤、硬腦膜綠色瘤、脊椎綠色瘤、骨盆綠色瘤等，並可早於白血病前出現於臨床。由於白血病細胞源於血液系統，又具有腫瘤細胞的特點，所以人們習慣上稱他為血癌。白血病的分布是世界性的，佔癌症總發病率的5%左右，發病以兒童和青年居多。我國白血病患者約為3-4人/10萬人口，男性多於女性。在我國各年齡組惡性腫瘤的死亡率中白血病佔第6位(男性)和第8位(女性)，在兒童及35歲以下的人群中則佔第I位。白血病按白細胞發育成熟的程度區分，可分為急性、慢性兩種；按白細胞的不同類型來區分，可分為淋巴細胞型、粒細胞型、單核細胞型、漿細胞型、巨核細胞型白血病，有時也可由兩種細胞混合而成，如粒一單細胞性白血病。
[0003]目前白血病的治療主要依靠化療，治療白血病的藥物也比較多，中藥西藥均有，常見的西藥有甲氨蝶呤、環磷醯胺、長春新鹼、三尖杉酯鹼、幹擾素等，中成藥有珍香膠囊、複方斑蝥膠囊等，這些藥物通過不同的機制對白血病進行治療，其中有細胞毒性藥物、誘導分化藥物等。細胞毒性藥物雖然可以殺傷大量的白血病細胞，減少體內的白血病負荷，但副作用較多，如殺傷、抑制正常造血細胞，導致貧血、出血；抑制正常免疫功能，機體免疫力下降，容易合併感染；損傷胃腸道黏膜，導致厭食噁心、嘔吐；還會影響心肝腎功能，而且還可使第二腫瘤發生率增加。此外,這些藥物劑量再大，也不可能完全殺滅體內的白血病細胞,而殘留的白血病細胞是疾病復發的根源。誘導分化治療是指應用能夠促進白血病細胞分化成熟或能夠調節白血病細胞表型以增強其對藥物敏感性的誘導分化劑。目前應用最有效的是全反式維甲酸治療急性早幼粒細胞白血病，全反式維甲酸已成為急性早幼粒細胞白血病誘導緩解的首選藥物。
[0004]幹擾素是一種單核細胞和淋巴細胞產生的細胞因子。分為a、P、Y3種。自80年代以來，許多研究顯示，幹擾素(尤其是a-幹擾素及Y-幹擾素)除具有抗病毒、免疫調節的作用外，還具有明顯的抗細胞增值作用。目前幹擾素已被用於治療多種白血病。幹擾素的治療主要顯示對慢粒(慢性期)、毛細胞白血病，慢淋等慢性白血病是有幫助的。由於幹擾素治療費用昂貴、大劑量是副作用多(如行動能力降低、治理減退等)，目前國內應用尚不普遍。[0005]上述藥物有的具有較強的毒性，在治療白血病的同時對正常細胞液有殺傷作用，有的效果不明顯，有的效果雖然好但價格昂貴。中藥在白脈病治療上已表現出一定的效果，並且由於中藥毒性低，副作用少而越來越受到關注。
[0006]褐毛橐吾為菊科植物褐毛橐吾Ligularia achyrotricha (Diels) Ling或大黃橐吾L.duciformis (C.windl.)Hand.-Mazz.的乾燥全草。6~7月採集全草,洗淨,曬乾。收載於《中華人民共和國衛生部藥品標準藏藥(第一冊)》，標準編號:WS3-BC-0122-95。性涼，味甘、苦。具有清熱解毒之功效。用於龍熱病，脾熱病，白喉，疫癘，瘡癤，皮膚病。為我國藏蒙等少數民族地區的常用藥物。但有關阿氏蒿的基礎研究尚十分有限，使該藥材的後續推廣和應用受到限制。現代研究關於阿氏蒿的化學成分及藥理作用鮮有報導。國內專利檢索結果，未見褐毛橐吾相關專利。
[0007]上述文獻及專利等，尚未見褐毛橐吾或褐毛橐吾提取物用於製備治療白血病藥物的報導。
【發明內容】
[0008]本發明的目的在於提供一種褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用。
[0009]本發明是通過如下技術方案實現的:
本發明所用褐毛橐吾為菊科植物褐毛橐吾Ligularia achyrotricha (Diels) Ling或大黃棄吾 L.duciformis (C.windl.) Hand.-Mazz.的乾燥全草。
[0010]本發明一種褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用，所述褐毛橐吾提取物的製備方法為:
(1)褐毛橐吾，粉碎，過10-50目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度400C -50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時間l_2h，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用；
(2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度70%-95%乙醇為溶劑，在50°C_80°C溫浸提取，提取次數為2-4次，每次提取時間為1-3小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的10-15倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ;
(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為1-4次，每次提取時間為1-3小時，每次水用量為藥渣B重量的8-12倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%-70%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ；
(4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C，其中一種或兩種或三種按一定比例混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。
[0011]褐毛橐吾提取物的製備方法為:
(1)褐毛橐吾，粉碎，過10-50目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度400C -50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時間l_2h，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用；
(2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度70%-95%乙醇為溶劑，在50°C_80°C溫浸提取，提取次數為2-4次，每次提取時間為1-3小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的10-15倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ;(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為1-4次，每次提取時間為1-3小時，每次水用量為藥渣B重量的8-12倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%-70%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ；
(4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。
[0012]優選的褐毛橐吾提取物的製備方法為: (1)褐毛橐吾，粉碎，過30目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度45°C、萃取壓力25MPa、萃取時間2h，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用；
(2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度80%乙醇為溶劑，在70°C溫浸提取，提取次數為2次，每次提取時間為2小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的12倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ;
(3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為2次，每次提取時間為2小時，每次水用量為藥渣B重量的12倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過HPD600大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度50%的乙醇溶液洗脫，收集50%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ；
(4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。
[0013]本發明的的褐毛橐吾提取物的製備方法，其特徵在於:所採用的大孔吸附樹脂為HPD600大孔吸附樹脂、DlOl大孔吸附樹脂。
[0014]本發明的的褐毛橐吾提取物與化學藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
[0015]本發明的褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C，在製備治療白血病藥物中的應用。
[0016]本發明的褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C與化學藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
[0017]本發明的褐毛橐吾提取物，通過加入藥劑學允許的各種輔料，製成藥劑學上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
[0018]本發明首次對褐毛橐吾採用超臨界二氧化碳萃取技術、大孔吸附樹脂純化技術等進行治療白血病提取物製備研究，分離得到了具有治療白血病活性的提取物，包括褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B和褐毛橐吾提取物C。
[0019]本發明首次以菊科植物褐毛橐吾Ligularia achyrotricha (Diels) Ling或大黃橐吾L.duciformis (C.windl.)Hand.-Mazz.的乾燥全草為原料,製備提取物用於治療白血病。本發明首次探索研究並分離得到了褐毛橐吾具有治療白血病作用的提取物。本發明的褐毛橐吾提取物能夠抑制白血病細胞(HL-60細胞)增殖和誘導白血病細胞(HL-60細胞)凋亡，因此，可以用來對白血病進行治療。
【具體實施方式】
[0020]下面通過具體實驗例和實施例對一種褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用做進一步說明，但不限於本發明。[0021]實施例1:褐毛橐吾提取物的製備 (1)褐毛橐吾26kg，粉碎，過30目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度45°C、萃取壓力25MPa、萃取時間2h，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度80%乙醇為溶劑，在70°C溫浸提取，提取次數為2次，每次提取時間為2小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的12倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ; (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為2次，每次提取時間為2小時，每次水用量為藥渣B重量的12倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過HPD600大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度50%的乙醇溶液洗脫，收集50%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ； (4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。[0022]實施例2:褐毛橐吾提取物的製備 (1)褐毛橐吾22kg，粉碎，過10目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度40_°C、萃取壓力20MPa、萃取時間lh，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度70%乙醇為溶劑，在50°C溫浸提取，提取次數為2次，每次提取時間為I小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的10倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ; (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為I次，每次提取時間為3小時，每次水用量為藥渣B重量的12倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過DlOl大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%的乙醇溶液洗脫，收集30%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ； (4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。[0023]實施例3:褐毛橐吾提取物的製備 (1)褐毛橐吾18kg，粉碎，過50目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度50°C、萃取壓力30MPa、萃取時間2h，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度95%乙醇為溶劑，在80°C溫浸提取，提取次數為4次，每次提取時間為3小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的15倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ; (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為4次，每次提取時間為I小時，每次水用量為藥渣B重量的8倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過HPD600大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度70%的乙醇溶液洗脫，收集70%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ； (4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。
[0024]實施例4:褐毛橐吾提取物片劑的製備
取:實施例1褐毛橐吾提取物325g，加入澱粉55g，混勻，制粒，乾燥，過篩，加微晶纖維素25g，硬脂酸鎂3.5g，混勻，壓製成1000片，即得褐毛橐吾提取物片劑。
[0025]實施例5:褐毛橐吾提取物顆粒劑的製備
取實施例2褐毛橐吾提取物225g，加入糊精110g，混勻，制粒，乾燥，整粒，即得褐毛橐吾提取物顆粒劑。
[0026]實施例6:褐毛橐吾提取物膠囊的製備
取實施例3褐毛橐吾提取物315g，加入澱粉85g，混勻，制粒，乾燥，整粒，裝膠囊1000粒，即得褐毛橐吾提取物膠囊。
[0027]實驗例1:褐毛橐吾各提取物抑制HL-60細胞增殖和誘導HL-60細胞凋亡試驗 I材料和方法
1.1材料:RPMI1640培養基購於Gibco公司；四甲基偶氮唑鹽(MTT)、羅丹明123為Sigma公司產品；Caspase_3, 9分光光度法檢測試劑盒購自南京凱基生物有限公司；其他化學試劑均為國產分析純。褐毛橐吾提取物、褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C(實施例1方法製備得到，批號分別為:20110202、20110203、20110204、20110205)。
[0028]1.2細胞培養:人早幼粒細胞性白血病細胞株HL-60購於中科院上海細胞生物研究所，培養於含10%胎牛血清的RPMI1640培養液中，青黴素100kU/L，鏈黴素100 mg/L, 370C，5%C02，飽和溼度培養箱內培養，取對數生長期細胞進行實驗。
[0029]1.3人外周血單個核細胞(PBMC)的分離:無菌採集健康供者靜脈血，肝素抗凝(每毫升全血加0.1ml的200U/ml肝素鈉溶液)，PBS等倍稀釋血液，1:4加入人淋巴細胞分離液，2000rpm離心20min,收集乳白層後用無血清RPM1-1640培養基1500rpml0min離心洗滌2次，獲得單個核細胞，臺盼藍拒染率大於95%，重懸於10% FCS的RPM1-1640培養基中備用。
[0030]1.4褐毛橐吾各提取物對HL-60細胞和人PBMC生長的影響:接種HL-60細胞和人PBMC與96孔板，每孔2 X IO4個細胞(IOOul)。371:、5% CO2條件下培養24h後，實驗組一次加50ug/mL褐毛橐吾提取物、50ug/mL褐毛橐吾提取物A、50ug/mL褐毛橐吾提取物B、50ug/mL褐毛橐吾提取物C，繼續分別培養24、48、72h後，終止培養，設只加培養液的對照組，每個劑量組設4個復孔。實驗結束前4h，每孔加入20ul MTT溶液(5g/L)，繼續孵4h，終止培養，小心吸棄上清液，每孔加入150uL DMS0，震蕩lOmin，選擇570nm波長，在自動酶聯檢測儀上測定各孔吸光度(A)值，重複實驗3次，並計算其生長抑制率(Cl)。Cl=(陰性對照組A值-實驗組A值)/陰性對照組A值X 100%。
[0031]1.5流式細胞術測定細胞凋亡率:收集50ug/mL褐毛橐吾提取物、50ug/mL褐毛橐吾提取物A、50ug/mL褐毛橐吾提取物B、50ug/mL褐毛橐吾提取物C處理48h的各組細胞，PBS洗滌2次，加入預冷的70%乙醇於-20°C固定24h，離心洗滌後加入200uLPI染液，50ulRNA酶，4°C避光放置20min，1500rpm離心5min。調整細胞濃度為I X IO5個/ml~IXlO6個/ml，上流式細胞儀分析，激發光源為氫離子雷射，激發波長為488nm。
[0032]1.6統計學分析本實驗結果應用統計分析:軟體SPSS13.0處理，組間比較採用單因素方差分析。[0033]2 結果
2.1褐毛橐吾各提取物對HL-60細胞及PBMC生長的影響
對照組HL-60細胞生長活躍，經50ug/mL的褐毛橐吾提取物、50ug/mL的褐毛橐吾提取物A、50ug/mL的褐毛橐吾提取物B、50ug/mL的褐毛橐吾提取物C處理24、48、72h後，HL-60細胞生長均不同程度的減慢，並呈時間、濃度依賴性。在相同濃度下，培養72h褐毛橐吾各提取物對人PBMC幾乎無抑制作用，與HL-60細胞比較有顯著性差異(P〈0.05)(見表1)。
[0034]表1褐毛橐吾各提取物對HL-60細胞增殖的影響(n=4)
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[0035]2.2流式細胞術檢測HL-60細胞凋亡
HL-60細胞與褐毛橐吾各提取物作用48h後，經流式細胞儀分析，結果顯示G1期峰前均出現了代表細胞凋亡的亞二倍體峰，其中50.0ug/mL褐毛橐吾提取物作用48h凋亡率達到(40.38 ±3.78) %(表 2)。
[0036]表2褐毛橐吾各提取物作用48h後對HL-60細胞凋亡率的影響(n=3)
【權利要求】
1.一種褐毛橐吾提取物在製備治療白血病藥物中的應用，所述褐毛橐吾提取物的製備方法為: (1)褐毛橐吾，粉碎，過10-50目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度400C -50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時間l_2h，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度70%-95%乙醇為溶劑，在50°C_80°C溫浸提取，提取次數為2-4次，每次提取時間為1-3小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的10-15倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ; (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為1-4次，每次提取時間為1-3小時，每次水用量為藥渣B重量的8-12倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%-70%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ； (4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C，其中一種或兩種或三種按一定比例混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。
2.根據權利要求1所述的褐毛橐吾提取物的製備方法為: (1)褐毛橐吾，粉碎，過10-50目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度400C -50°C、萃取壓力20-30MPa、萃取時間l_2h，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度70%-95%乙醇為溶劑，在50°C_80°C溫浸提取，提取次數為2-4次，每次提取時間為1-3小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的10-15倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ; (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為1-4次，每次提取時間為1-3小時，每次水用量為藥渣B重量的8-12倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度30%-70%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ； (4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。
3.根據權利要求1所述的褐毛橐吾提取物的製備方法為: (1)褐毛橐吾，粉碎，過30目篩，採用超臨界二氧化碳萃取技術，萃取溫度45°C、萃取壓力25MPa、萃取時間2h，萃取揮髮油，收集揮髮油，即得褐毛橐吾提取物A，超臨界二氧化碳萃取後的褐毛橐吾藥渣A備用； (2)將步驟(1)得到的褐毛橐吾藥渣A用濃度80%乙醇為溶劑，在70°C溫浸提取，提取次數為2次，每次提取時間為2小時，每次溶劑用量為褐毛橐吾重量的12倍，濾過，得藥渣B和提取液，提取液回收乙醇，濃縮，乾燥，即得褐毛橐吾提取物B ; (3)將步驟(2)得到的藥渣B，加水回流提取，提取次數為2次，每次提取時間為2小時，每次水用量為藥渣B重量的12倍，濾過，提取液濃縮至相對密度d=l.12，通過HPD600大孔吸附樹脂，先用水洗脫，再用濃度50%的乙醇溶液洗脫，收集50%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得褐毛橐吾提取物C ； (4)上述褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C混勻，即得本發明的褐毛橐吾提取物。
4.根據權利要求1、權利要求2所述的褐毛橐吾提取物的製備方法，其特徵在於:所採用的大孔吸附樹脂為HPD600大孔吸附樹脂、DlOl大孔吸附樹脂。
5.根據權利要求1所述的褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C在製備治療白血病藥物中的應用。
6.根據權利要求1所述的褐毛橐吾提取物A、褐毛橐吾提取物B、褐毛橐吾提取物C與化學藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
7.根據權利要求1所述的褐毛橐吾提取物與化學藥或中藥或天然藥物組成治療白血病藥物。
8.根據權利要求1、權利要求2、權利要求3所述的褐毛橐吾提取物，通過加入藥劑學允許的各種輔料，製成藥劑學上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
【文檔編號】A61P35/02GK103585227SQ201310526719
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】孔倩倩 申請人:濟南星懿醫藥技術有限公司