測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法
2023-05-12 18:14:06
測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法
【專利摘要】本發明提供了測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法，在該方法中，採用十八烷基矽烷鍵合矽膠柱為色譜柱；採用pH為2.8～3.5的磷酸鹽溶液為流動相A；以及採用乙腈作為流動相B，洗脫方式為等度洗脫。該方法能準確測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且該方法準確度高、分析時間短、專屬性強。
【專利說明】測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於藥物分析【技術領域】，涉及安立生坦原料藥及其製劑含量的測定方法，具體地，涉及利用高效液相色譜法測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法。
【背景技術】
[0002]肺動脈高壓是指各種原因引起的肺動脈壓力持久增高，為罕見的慢性綜合病症，表現為肺動脈縮小、破損及血壓過高。肺動脈血管壁的增厚和損傷會促使血管縮小，小的血液凝塊會在血管中形成，最終導致血管阻塞。因為右側心肌不如左側心肌強健，更容易受到損傷，因此血管阻力的增加會加重右側心臟的工作負荷，最終導致患者右心衰竭而死亡。右心衰竭是所有類型肺動脈高壓患者致殘、致死的共同唯一因素，而肺動脈高壓也是右心衰竭的最主要原因，其病因複雜，診斷、治療棘手是該治療領域長期以來發展緩慢的主要原因。
[0003]安立生坦(Ambrisentan)是一種新型的口服內皮素受體拮抗劑(ERA),該藥物於2007年6月15日獲得美國FDA批准，口服用於治療肺動脈高血壓，目前在國外已上市的為規格5mg和1mg片劑。
[0004]安立生坦及其製劑的分析方法尚未見報導。因此，對安立生坦及其製劑的含量測定方法的研究仍有待加強。
【發明內容】
[0005]本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在於提出一種利用高效液相色譜法測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法，其能夠準確測定安立生坦及其製劑含量，並且分離度高、專屬性強。
[0006]本發明提供了一種利用高效液相色譜法測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法。根據本發明的實施例，在該方法中，採用十八烷基矽烷鍵合矽膠柱為色譜柱；流動相由流動相A、流動相B組成，採用用磷酸調pH至2.8?3.5的磷酸鹽溶液為流動相A ；以及採用乙腈作為流動相B，洗脫方式為等度洗脫。發明人發現，該方法能夠有效地分離安立生坦與其合成過程以及製劑引入的雜質和降解雜質，進而準確測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且該方法準確度高、分析時間短、專屬性強。
[0007]根據本發明的實施例，通過對安立生坦原料藥的酸破壞、鹼破壞、氧化破壞等實驗，進一步說明根據本發明實施例的本方法專屬性強，能對安立生坦原料藥及其製劑準確的進行含量測定。
[0008]根據本發明的實施例，檢測波長為263nm。發明人將安立生坦供試品溶液在190nm?400nm進行掃描，發現在263nm處，安立生坦具有最大吸收波長，因此選擇263nm作為安立生坦的檢測波長。由此，檢測安立生坦及其製劑含量的檢測波長具有良好的專屬性。
[0009]根據本發明的實施例，所述色譜柱的柱溫為25?35攝氏度。由此，有利於將安立生坦和雜質分離。
[0010]根據本發明的實施例，所述磷酸鹽溶液是4.5?5.5mmol/L的磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶液、4.5?5.5mmol/L的磷酸二氫鈉(NaH2PO4)溶液的至少一種，用磷酸調節至pH為2.8?
3.5而獲得的。由此，有利於將安立生坦和存在的雜質分離。
[0011]根據本發明的實施例，在所述流動相中，所述磷酸鹽溶液和乙腈的體積比例為(35?55): (65?45)，洗脫方式為等度洗脫。由此，能夠有效分離安立生坦和雜質，且能夠準確測定安立生坦原料藥及其製劑的含量。
[0012]根據本發明的實施例，包括以下步驟:
[0013](I)取安立生坦原料藥或製劑粉末，用乙腈超聲溶解，離心，配製成安立生坦濃度為0.5mg/ml的供試品溶液；
[0014](2)色譜條件:採用高效液相色譜法，採用十八烷基鍵合矽膠柱作為色譜柱，流動相由流動相A、流動相B組成，採用用磷酸調pH至2.8?3.5的磷酸鹽溶液為流動相A，採用乙腈作為流動相B，柱溫為25?35°C、流速為0.8?1.2ml/min、檢測波長為263nm，進行等度洗脫，其中，在所述流動相中，所述磷酸鹽溶液和乙腈的體積比例為(35?55): (65?45)；
[0015](3)取所述供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000，按外標法以峰面積計算，得到樣品中安立生坦原料藥及其製劑的含量。由此，能夠有效測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且準確度高、專屬性強。
[0016]根據本發明的具體示例,採用150X4.6mm,5μηι的Agilent Zobox 313-(:18柱,採用用磷酸調PH至3.0、濃度為5mmol/L KH2PO4溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為45: 55,柱溫為30攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1.0毫升/分鐘，進樣體積為20 μ L，照上述的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000。由此，能夠有效測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且準確度高、專屬性強。
[0017]根據本發明的具體示例,採用150X4.6mm,5μηι的Agilent Zobox 313-(:18柱,採用用磷酸調PH至2.8、濃度為4.5mmol/L KH2PO4溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為35: 65,柱溫為28攝氏度，檢測波長為263nm，流速為0.8毫升/分鐘，進樣體積為20 μ L，照上述的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000。由此，能夠有效測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且準確度高、專屬性強。
[0018]根據本發明的具體示例,採用150X4.6mm,5μηι的Agilent Zobox 313-(:18柱,採用用磷酸調PH至3.5、濃度為5.5mmol/L KH2PO4溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為55: 45,柱溫為35攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1.2毫升/分鐘，進樣體積為20 μ L，照上述的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000。由此，能夠有效測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且準確度高、專屬性強。
[0019]根據本發明的具體示例,採用150X4.6mm,5μηι的Agilent Zobox 313-(:18柱,採用用磷酸調PH至3.0、濃度為5mmol/L的NaH2PO4溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為45: 55,柱溫為30攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1.0毫升/分鐘，進樣體積為20 μ L，照上述的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000。由此，能夠有效測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且準確度高、專屬性強。
[0020]根據本發明的具體示例,採用150X4.6mm,5ym的AgilentZobox 313-(:18柱,採用用磷酸調PH至2.8、濃度為4.5mmol/L的NaH2PO4溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為35: 65，柱溫為28攝氏度，檢測波長為263nm，流速為0.8毫升/分鐘，進樣體積為20 μ L，照上述的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000。由此，能夠有效測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且準確度高、專屬性強。
[0021]根據本發明的具體示例,採用150X4.6mm,5μηι的Agilent Zobox 313-(:18柱,採用用磷酸調PH至3.5、濃度為5.5mmol/L的NaH2PO4溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為55: 45，柱溫為35攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1.2毫升/分鐘，進樣體積為20 μ L，照上述的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000。由此，能夠有效測定安立生坦原料藥及其製劑的含量，且準確度高、專屬性強。
[0022]根據本發明的實施例，本發明具有如下有益效果:
[0023]1、根據本發明的實施例，通過等度洗脫的方式，確保了安立生坦的質量可控。採用此方法可以很好地分離安立生坦與其合成過程以及製劑引入的雜質和降解雜質，能準確測定安立生坦原料藥及其製劑的含量。
[0024]2、根據本發明的實施例，本發明所建立的高效液相色譜法準確度高，分析時間短，所得的含量測定色譜圖基線平穩、峰型對稱。而且通過本發明所述對安立生坦原料藥酸破壞、鹼破壞、氧化破壞等實驗證明本發明所述的利用高效液相色譜法測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法專屬性強，能對安立生坦原料藥及其製劑準確的進行含量測定。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0025]圖1顯示了根據本發明的一個實施例，安立生坦的紫外掃描圖；
[0026]圖2顯示了根據本發明的一個實施例，安立生坦原料藥含量測定典型色譜圖；
[0027]圖3顯示了根據本發明的一個實施例，安立生坦原料藥中的雜質與安立生坦在同一色譜條件下的分離色譜圖；
[0028]圖4顯示了根據本發明的一個實施例，安立生坦原料藥酸破壞色譜圖；
[0029]圖5顯示了根據本發明的一個實施例，安立生坦原料藥鹼破壞色譜圖；以及
[0030]圖6顯示了根據本發明的一個實施例，安立生坦原料藥氧化破壞色譜圖。
【具體實施方式】
[0031]下面詳細描述本發明的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用於解釋本發明，而不能理解為對本發明的限制。實施例中未註明具體技術或條件的，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。
[0032]實施例1:檢測波長的確定
[0033]取用無水乙醇製成的25 μ g/ml的安立生坦溶液，在紫外-可見分光光度計在190nm?400nm進行全掃描，安立生坦的紫外掃描圖見圖1。由圖1可知，安立生坦的最大吸收波長為263nm,故選擇263nm作為檢測波長。
[0034]實施例2:對安立生坦的含量測定
[0035]儀器:高效液相色譜儀配備紫外檢測器
[0036]色譜柱:AgilentZobox SB-C18 柱(150 X 4.6mm, 5 μ m)
[0037]流動相:5mmol/L KH2PO4溶液(用磷酸調節pH至3.0)-乙腈(體積比為45: 55)
[0038]檢測波長:263nm
[0039]流速:1.0ml/min
[0040]進樣量:20μ I
[0041]柱溫:30。。
[0042]實驗步驟:
[0043](I)取安立生坦適量，用乙腈溶解並用乙腈-水(體積比為30: 70)定量稀釋製成Iml含安立生坦0.5mg的供試品溶液。空白溶劑為乙腈-水(體積比為30: 70)。
[0044](2)取⑴供試品溶液及空白溶劑照上述色譜條件，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000。安立生坦原料藥含量測定典型色譜圖見圖2。
[0045]實施例3:對安立生坦的含量測定
[0046]色譜條件如下:
[0047]儀器:高效液相色譜儀配備紫外檢測器
[0048]色譜柱:AgilentZobox SB-C18 柱(150 X 4.6mm, 5 μ m)
[0049]流動相:4.5mmol/L KH2PO4溶液用磷酸調節pH至2.8_乙腈(35: 65)
[0050]檢測波長:263nm
[0051]流速:0.8ml/min
[0052]進樣量:20μ I
[0053]柱溫:25°C
[0054]實驗步驟:同實施例2。
[0055]實施例4:對安立生坦的含量測定
[0056]色譜條件如下:
[0057]儀器:高效液相色譜儀配備紫外檢測器
[0058]色譜柱:AgilentZobox SB-C18 柱(150 X 4.6mm, 5 μ m)
[0059]流動相:5.5mmol/L KH2PO4溶液用磷酸調節pH至3.5_乙腈(55: 45)
[0060]檢測波長:263nm
[0061]流速:1.2ml/min
[0062]進樣量:20μ I
[0063]柱溫:35°C
[0064]實驗步驟:同實施例2。
[0065]實施例5:安立生坦及其製劑的分析方法研究
[0066]1、色譜條件選擇
[0067]通過實驗分別比較:
[0068]本發明實施例2:以乙腈-5mmol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調pH至3.0) (55: 45)作為流動相，等度洗脫；
[0069]對比實施例:以甲醇-lOmmol/L磷酸氫二鉀溶液(磷酸調pH至6.5)(體積比為50: 50)作為流動相，等度洗脫；
[0070]結果表明:在本發明實施例2所述的等度洗脫條件下，分析時間為10分鐘，基線平穩，峰型對稱。而對比實施例所述的等度洗脫條件下，分析時間太長，另外，主峰與雜質分離度達不到要求。
[0071]故優選本發明流動相為乙腈和磷酸鹽溶液。
[0072]2、檢測條件的驗證
[0073](I)專屬性
[0074]分別取安立生坦對照品和各雜質(雜質為合成路線中引入的雜質、以及降解產物雜質共6種，分別標記為雜質1、雜質2、雜質3、雜質4、雜質5、雜質6)對照品適量，加乙腈-水(體積比為30: 70)製成每Iml含安立生坦500 μ g，各雜質約含0.5 μ g的混合溶液。結果表明主峰與各雜質分離度均大於1.5，專屬性強。
[0075](2)檢測限
[0076]精密稱取安立生坦對照品適量，加乙腈-水(體積比為30: 70)逐步稀釋後的溶液，取20 μ I注入色譜儀，記錄色譜圖，當信噪比為3時，安立生坦的最小檢出濃度為
0.01 μ g/mlο
[0077](3)線性
[0078]精密稱取安立生坦對照品適量，加乙腈-水(體積比為30: 70)分別定量稀釋成 0.3571mg/ml,0.4081mg/ml, 0.4591mg/ml, 0.5101mg/ml,0.5611mg/ml,0.6121mg/ml,
0.6631mg/ml的溶液。各取20 μ I注入色譜儀，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，該條曲線的線性回歸方程為y = 17565.0852χ+194.2179，r = 0.9999，線性範圍為
0.3571 ?0.6613mg/ml。
[0079](4)回收率
[0080]對照品溶液配製:取安立生坦對照品約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加15ml乙腈溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。
[0081]分別稱取安立生坦原料藥約0.240g、0.300g、0.360g，分別置於1、2、3號研缽中，再分別加入空白輔料8.00g，混勻；從I號研缽中精密稱取細粉三份(約相當於安立生坦40mg);從2號研缽中精密稱取細粉三份(約相當於安立生坦50mg);從3號研缽中精密稱取細粉三份(約相當於安立生坦60mg)。將上述細粉分別置於10ml量瓶中，加入乙腈30ml，超聲使安立生坦溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，離心至上清液完全澄清，取上清液，分別作為安立生坦片的回收率80%、100%, 120%的供試品溶液。分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各20 μ 1，注入色譜儀，計算回收率。該方法的平均回收率為100.5%，RSD為1.1 %。
[0082]實施例6:安立生坦與雜質在同一色譜條件下的分離實驗
[0083]色譜條件同實施例2。
[0084]實驗步驟:
[0085]分別取安立生坦對照品和各雜質對照品適量，加乙腈-水(體積比為30: 70)製成每Iml含安立生坦500 μ g,其他各已知雜質約含0.5 μ g的混合溶液。
[0086]安立生坦原料藥中的雜質與安立生坦在同一色譜條件下的分離色譜圖見圖3。由圖3的結果可以看出，該色譜圖中主峰與各雜質分離度均大於1.5，表明本發明的方法能夠有效將安立生坦和雜質分離。
[0087]實施例7:對安立生坦原料藥酸破壞的實驗
[0088]色譜條件同實施例2。
[0089]實驗步驟:
[0090](I)取安立生坦約0.25g，精密稱定，置10ml量瓶中，加乙腈-水(體積比為30: 70)溶解並稀釋至刻度，作為溶液降解用母液。
[0091](2)取母液5.01111，置25-1^量瓶中，加入51111 2mol/L HCl溶液，搖勻。將此溶液置於60°C水浴中加熱I小時取樣，加入2mol/L氫氧化鈉溶液中和，用乙腈-水(體積比為30: 70)稀釋至刻度，搖勻。
[0092]安立生坦原料藥酸破壞色譜圖見圖4，由圖4的結果可以看出，該色譜圖破壞產生的雜質與主峰分離度良好。
[0093]實施例8:對安立生坦原料藥鹼破壞的實驗
[0094]色譜條件同實施例2。
[0095]實驗步驟:
[0096](I)取安立生坦約0.25g，精密稱定，置10ml量瓶中，加稀釋液溶解並稀釋至刻度，作為溶液降解用母液。
[0097](2)取母液5.01111，置25-1^量瓶中，加入51111211101/1氫氧化鈉溶液，搖勻。將此溶液置於60°C水浴中加熱15min取樣，加入2mol/L HCl溶液中和，用乙腈-水(體積比為30: 70)稀釋至刻度，搖勻。
[0098]安立生坦原料藥鹼破壞色譜圖見圖5，由圖5的結果可以看出，該色譜圖破壞產生的雜質與主峰分離度良好。
[0099]實施例9:對安立生坦原料藥氧化破壞的實驗
[0100]色譜條件同實施例2。
[0101]實驗步驟:
[0102](I)取安立生坦約0.25g，精密稱定，置10ml量瓶中，加乙腈-水(體積比為30: 70)溶解並稀釋至刻度，作為溶液降解用母液。
[0103](2)取母液5.0ml，置25-mL量瓶中，加入5ml30%H202溶液，將此溶液置於60°C水浴中加熱I小時後取樣，用乙腈-水(體積比為30: 70)稀釋至刻度，搖勻。
[0104]安立生坦原料藥氧化破壞色譜圖見圖6，由圖6的結果可以看出，該色譜圖破壞產生的雜質與主峰分離度良好。
[0105]實施例10:對安立生坦的含量測定
[0106]儀器:高效液相色譜儀配備紫外檢測器
[0107]色譜柱:AgilentZobox SB-C18 柱(150 X 4.6mm, 5 μ m)
[0108]流動相:5mmol/L NaH2PO4溶液(用磷酸調節pH至3.0)-乙腈(體積比為45: 55)
[0109]檢測波長:263nm
[0110]流速:1.0ml/min
[0111]進樣量:20μ I
[0112]柱溫:30O
[0113]實驗步驟:
[0114](I)取安立生坦適量，用乙腈溶解並用乙腈-水(體積比為30: 70)定量稀釋製成Iml含安立生坦0.5mg的供試品溶液。空白溶劑為乙腈-水(體積比為30: 70)。
[0115](2)取(I)供試品溶液及空白溶劑照上述色譜條件，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
[0116]實施例11:對安立生坦的含量測定
[0117]色譜條件如下:
[0118]儀器:高效液相色譜儀配備紫外檢測器
[0119]色譜柱:AgilentZobox SB-C18 柱(150 X 4.6mm, 5 μ m)
[0120]流動相:4.5mmol/L NaH2PO4溶液用磷酸調節pH至2.8_乙腈(35: 65)
[0121]檢測波長:263nm
[0122]流速:0.8ml/min
[0123]進樣量:20μ I
[0124]柱溫:25°C
[0125]實驗步驟:同實施例10。
[0126]實施例12:對安立生坦的含量測定
[0127]色譜條件如下:
[0128]儀器:高效液相色譜儀配備紫外檢測器
[0129]色譜柱:AgilentZobox SB-C18 柱(150 X 4.6mm, 5 μ m)
[0130]流動相:5.5mmol/L NaH2PO4溶液用磷酸調節pH至3.5_乙腈(55: 45)
[0131]檢測波長:263nm
[0132]流速:1.2ml/min
[0133]進樣量:20μ I
[0134]柱溫:35°C
[0135]實驗步驟:同實施例10。
[0136]在本發明的描述中，需要理解的是，術語「第一」、「第二」僅用於描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性或者隱含指明所指示的技術特徵的數量。由此，限定有「第一」、「第二，，的特徵可以明示或者隱含地包括一個或者更多個該特徵。在本發明的描述中，「多個」的含義是兩個或兩個以上，除非另有明確具體的限定。
[0137]在本說明書的描述中，參考術語「一個實施例」、「一些實施例」、「示例」、「具體示例」、或「一些示例」等的描述意指結合該實施例或示例描述的具體特徵、結構、材料或者特點包含於本發明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術語的示意性表述不必須針對的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特徵、結構、材料或者特點可以在任一個或多個實施例或示例中以合適的方式結合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領域的技術人員可以將本說明書中描述的不同實施例或示例以及不同實施例或示例的特徵進行結合和組合。
[0138]儘管上面已經示出和描述了本發明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發明的限制，本領域的普通技術人員在本發明的範圍內可以對上述實施例進行變化、修改、替換和變型。
【權利要求】
1.一種利用高效液相色譜法測定安立生坦原料藥及其製劑含量的方法，其特徵在於， 採用十八烷基矽烷鍵合矽膠柱為色譜柱； 流動相由流動相A、流動相B組成； 採用用磷酸調pH至2.8?3.5的磷酸鹽溶液為所述流動相A ;以及 米用乙腈作為所述流動相B, 洗脫方式為等度洗脫。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，檢測波長為263nm。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述色譜柱的柱溫為25?35攝氏度。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述磷酸鹽溶液是將4.5?5.5mmol/L的磷酸二氫鉀溶液、4.5?5.5mmol/L的磷酸二氫鈉溶液的至少一種,用磷酸調節至pH為2.8?3.5而獲得的。
5.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，在所述流動相中，所述磷酸鹽溶液和乙腈的體積比例為(35?55): (65?45)。
6.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，包括以下步驟: .(1)取安立生坦原料藥或製劑粉末，用乙腈超聲溶解，離心，配製成安立生坦濃度為0.5mg/ml的供試品溶液； . (2)色譜條件:採用十八烷基鍵合矽膠柱作為色譜柱，流動相由流動相A、流動相B組成，採用用磷酸調pH至2.8?3.5的磷酸鹽溶液為流動相A，採用乙腈作為流動相B，調節柱溫為25?35°C、流速為0.8?1.2ml/min、檢測波長為263nm，進行等度洗脫，其中，在所述流動相中，所述磷酸鹽溶液和乙腈的體積比例為(35?55): (65?45); .(3)取所述供試品溶液20μ L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論板數按安立生坦峰計算應不低於3000，按外標法以峰面積計算，得到樣品中安立生坦原料藥及其製劑的含量。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於，色譜條件為選自下列的任意一種: 米用150X4.6mm, 5 μ m的Agilent Zobox SB-C18柱，米用用磷酸調pH至3.0、濃度為5mmol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為45: 55，柱溫為30攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1.0毫升/分鐘,進樣體積為20 μ L ; 米用150 X 4.6mm, 5 μ m的Agilent Zobox SB-C18柱，米用用磷酸調pH至2.8、濃度為4.5mmol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為35: 65，柱溫為28攝氏度，檢測波長為263nm，流速為0.8毫升/分鐘,進樣體積為20 μ L ; 米用150X4.6mm, 5 μ m的Agilent Zobox SB-C18柱，米用用磷酸調pH至3.5、濃度為5.5mmol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為55: 45，柱溫為35攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1.2毫升/分鐘,進樣體積為20 μ L0
8.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於，色譜條件為選自下列的任意一種: 米用150X4.6mm, 5 μ m的Agilent Zobox SB-C18柱，米用用磷酸調pH至3.0、濃度為5mmol/L磷酸二氫鈉溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為45: 55，柱溫為30攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1.0毫升/分鐘,進樣體積為20 μ L ;米用150X4.6mm, 5 μ m的Agilent Zobox SB-C18柱，米用用磷酸調pH至2.8、濃度為4.5mmol/L磷酸二氫鈉溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為35: 65，柱溫為28攝氏度，檢測波長為263nm，流速為0.8毫升/分鐘,進樣體積為20 μ L ;米用150X4.6mm, 5 μ m的Agilent Zobox SB-C18柱，米用用磷酸調pH至3.5、濃度為5.5mmol/L磷酸二氫鈉溶液作為流動相A，採用乙腈作為流動相B，進行等度洗脫，其中，所述流動相A和所述流動相B的體積比例為55: 45，柱溫為35攝氏度，檢測波長為263nm，流速為1.2毫升/分鐘,進樣體積為20 μ L0
【文檔編號】G01N30/02GK104237399SQ201410426212
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月27日 優先權日:2014年8月27日
【發明者】許勇, 王學海, 李莉娥, 黃怡, 吳迪, 範昭澤, 黃璐, 黃翔, 樂洋, 楊仲文, 劉亞璇, 袁李芳, 肖強, 田華, 唐靜, 周文, 楊菁, 張毅 申請人:人福醫藥集團股份公司