8，9-脫氫雌酮作為抗氧化劑的應用的製作方法

2023-04-29 13:31:01

專利名稱：8，9-脫氫雌酮作為抗氧化劑的應用的製作方法
生物產生的自由基與許多疾病有關。需氧生物在氧氣環境中的存活涉及這些非常活潑的化學基團的生物生成和控制它們的生物能力之間複雜的相互作用(Del Maestro RF，Acta Phy Scan Suppl.492153-68(1980))。在寄主生物和生物生成的自由基之間的相互作用導致了以細胞損傷和該生物死亡為終結的深奧的生物化學變性。自由基反應的產物的累積導致了許多病態中的一些疾病，這已被認為部分地是由細胞內自由基增長量誘發細胞損傷引起的。這些包括—但不局限於—癌症、心血管疾病、中樞神經系統紊亂、骨疾、衰老、早老性痴呆、炎症、類風溼性關節炎、自身免疫疾病、呼吸窘迫和肺氣腫。
自由基損害與許多疾病的聯繫被廣泛報導，許多細胞成分包括酶、離子通道、結構蛋白和膜脂質是活潑的自由基的可能的目標(Rice-Evans C，MolAspects of Med 13(1)1-111(1992))。在合適的位置抗氧化劑成份將限制損害。與這些可能目標反應的自由基可以損害一系列細胞功能而導致病變和最終細胞死亡。在可能的反應位點的抗氧化劑成份將限制損害。在保護DNA、蛋白質(包括脂蛋白)和膜脂質免受氧化損害中抗氧化劑扮演了重要角色。
自由基損害對許多長期健康問題的病源產生影響是特別明顯的。對於大部分人類疾病，由內源產生的氧化劑對初期疾病的過程是次要的，但氧化損害加重了開始的損傷。例如，在一段局部缺血之後在血液流通恢復期間發生在器官上的損害可被定義為消腫損傷。儘管是必須的，氧修復還是造成損傷的組織生成的氧化劑增加但也使損傷暫時惡化(Uraizee A，Circulation 75(6)1237-1248(1987))。Guanieri(Biochim-Biophys-ACTA 718(2)157-164(1982))描述了在含氧量低的心肌裡減少抗氧劑保護，隨後使起重新充氧作用的脂質過氧化增加。在消腫損傷裡，局部缺血損傷後由於粘連和激活中性白細胞在內皮損傷位置處的炎性反應產生超氧化物。在許多不同的臨床情況中，也增加了在肝臟氧自由基的產生。對於病毒性肝炎和慢性活動性肝炎，在肝臟累積了大量被刺激的巨噬細胞，它們產生自由基。大量有毒的化學物質使肝中毒，這是由於肝臟裡增加自由基的生成，通常由細胞色素P-450做為引起的媒介。可以斷定從鐵蛋白釋放出的鐵催化羥基的生成是許多肝臟疾病易發的機理(Lee WM，N Eng J of Med；Review P.1118(1995))。
氧化和抗氧化劑的使用對於許多炎症的治療也很重要。類風溼性關節炎(RA)是最常見的慢性炎性疾病。流行病學研究表明標準的和確定的RA流行率在0.3％和1.5％之間。慢性持續性炎性關節疾病伴隨著在發炎的患風溼病的關節裡生成H2O2。在發炎期間，也生成氧自由基，尤其是由多形核白細胞(PMN)和巨噬細胞產生。在任何慢性或急性炎性疾病中，PMN和巨噬細胞將產生O2-和H2O2。結核病、牛皮癬、系統性紅斑狼瘡、其它自體免疫疾病和成人呼吸窘迫綜合症也可以被稱為由氧化作為誘因的炎性疾病，其它許多疾病還可以加入到這個行列中。
氧自由基的生成和脂質過氧化過程也已成為中樞神經系統(CNS)創傷和發作(例如局部缺血)領域的研究人員關注的焦點。許多研究提供大量證明，在損傷的或局部缺血的CNS存在自由基和脂質過氧化反應(Hall ED，J-Neurotrauma 9(Suppl，1)S165-S172(1992))。
抗氧化劑已被建議是保護性的以抗乳癌和包括那些腦癌和肝癌的其它癌症，並且保護以抗心血管疾病和骨質疏鬆(Wiseman H，Free Radical Res21(3)187-94(1994)。它們已被證明可保護模型和包括核膜的細胞膜可能致癌的自由基中間物和脂質過氧化產物。涉及粥樣硬化及其普遍發病率的嚴峻困難已使該血管疾病的預防和治療成為關注的焦點，可能通過它們保護低密度脂蛋白的性能(LDL)以抗氧化損傷(Steinberg D，NEngl J of Med 14915-924)(1989))。
根據本發明，這裡提供了一種通過給需要的哺動物施用抗氧化劑8，9-脫氫雌酮或其3-硫酸酯藥用可接受的鹽治療或抑制自由基誘發疾病的方法。作為此過程的推論，本發明提供一種在哺乳動物中用酶、離子通道、結構蛋白和膜脂質處理自由基的過程，其包括施用8，9-脫氫雌酮或其藥用可接受的硫酸酯作為犧牲底物以充足的量選擇性地反應和抑制與患者的酶、離子通道、結構蛋白或膜脂質的自由基反應。描述為被承認的抗氧化劑療法中有特效的情況是癌症、中樞神經系統紊亂、骨疾、衰老、炎症、末梢血管疾病、類風溼性關節炎，自身免疫疾病、呼吸窘迫、肺氣腫、預防消腫損傷、病毒性肝炎、慢性活動性肝炎、結核病，牛皮癬、系統性紅斑狼瘡、成人呼吸窘迫綜合症，中樞神經系統創傷和發作。
作為根據本發明的應用，治療包括實際病情的、改善的情況，或病情的維持減緩，和抑制包括抑制或預防過程或狀況改善。
8，9-脫氫雌酮3-硫酸酯的藥用可接受的鹽包括—但不局限於—鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、銨鹽、含1-6個碳原子的烷基胺鹽或每個烷基含1-6個碳原子的二烷基胺鹽。
8，9-脫氫雌酮的抗氧化劑性能用標準藥學測試方法確定，該方法測量其抑制由暴露在Cu++離子或培養的內皮細胞誘發的氧化變性的低密度脂蛋白(LDL)的生成的能力(Parthasarathy S，Proc Natl Acad SciUSA 861046-1050(1989)，採用TBARS(硫代巴比土酸反應物質)方法分析游離醛(YagiK.，Biochem Med 15212-216(1976))。
這個標準藥理學測試方法得到的結果證明，8，9-脫氫雌酮是有力的LDL氧化抑制劑，抑制過程可達100％。在Cu++傳遞的和豬主動脈細胞傳遞的氧化中分別得到0.22μM和0.12μM的IC50。通過比較在豬主動脈細胞傳遞的氧化測試方法中，對於此酮得到0.56μM的IC50。
為進一步證明8，9-脫氫雌酮的抗氧化性能，使用培養的細胞進行了兩個附加標準藥理學測試過程。在第一個測試過程中，放射性同位素標記的LDL(125I-LDL)(McFarlane AS，InMunro HN，Allison JB，eds，Mammalian Protein metabolism，Vol.1，New YorkAcademic Press297-341(1964))通過在存在和不存在8，9-脫氫雌酮條件下暴露在Cu++裡變性。然後，表示清除結合氧化變性LDL的脂蛋白受體的J774巨噬細胞放在處理的125I-LDL中。該試驗的結果表明，在8，9-脫氫雌酮存在下氧化的LDL的結合被降低了72％和56％(分別為2.5和0.25μM 8，9-脫氫雌酮)。通過比較，同樣濃度的雌酮降低了氧化的LDL的結合39％和0％。由於氧化的LDL被巨噬細胞結合和代謝被認為是對海綿狀細胞的改善以及粥樣硬化斑產生強烈影響，這種減少LDL氧化反應和隨後結合以清除受體的影響被認為是特別有益的。
在第二個測試過程裡，豬主動脈細胞(PAEC)容易受到如上所述由在8，9-脫氫雌酮存在或不存在下暴露在Cu++中的改性的LDL影響。氧化的LDL被證明對主動脈細胞有細胞毒素作用，這個過程也被證明與粥樣硬化過程有很強的連帶關係。隨後將處理過的LDL與細胞孵育24小時。用MTT方法評估細胞毒素(Hansen MB，J Immu Methods 119203-210(1989))。該測試方法評定在所給試樣中存活的細胞的百分比。在此測試裡，其後放在無化合物存在的25μg/ml氧化LDL中只有2％的細胞存活。在對此實驗中，放在在8，9-脫氫雌酮(2.5μM)存在下Cu++處理的LDL中之後，存活的細胞的百分比是100％或絕大部分。在相同的試樣裡測試的其它化合物對PACE的保護影響最小(17β-雌二醇-11％存活。馬烯雌酮＝4％存活；雌酮＝37％存活)。該測試過程的結果證明在8，9-脫氫雌酮存在下改性的LDL不是細胞毒素的，並因此得到的數據與上述用TBARS方法證明的用8，9-脫氫雌酮氧化改性的抑制相符合。
基於上述這些測試過程的結果，8，9-脫氫雌酮及其硫酸酯藥用可接受的鹽諸如鹼金屬鹽鹼土金屬鹽、銨鹽、含有1-6碳原子的烷基胺鹽或每個烷基含有1-6個碳原子的二烷基胺鹽作為抗氧化劑用於治療和抑制導致疾病的自由基。
本發明的抗氧化劑可以配成純的或與藥用載體配合用於給藥，由化合物的溶解及化學性質決定的特性選擇給藥途徑和穩定的藥理學實施。藥用載體可以是固體或液體。
固體載體可以包括一種或多種也可以作為矯味劑、潤滑劑、增溶劑、懸浮劑、填充劑、glidants、壓縮助劑、粘合或片劑崩解劑的物質；它也可以是一種用膠囊包裹的材料。在粉末裡，載體是被細分的固體，其與精細分開的有效組分成混合物形式。在片劑裡，有效組分與具有需要的組分性質的載體以適當的比例混合併壓成所希望的形狀和大小。粉末和片劑優選含最多99％的有效組分。適合的固體載體包括例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、蔗糖、乳糖、糊精、澱粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點蠟和離子交換樹脂。
液體載體在製備溶液、懸浮液、乳劑、糖漿、酏劑和加壓成分時使用。有效組分可以被溶於或懸浮於藥用可接受的液體載體諸如水、有機溶劑、藥用可接受的油或脂或這兩者的混合物中。液體載體可含有其它適合的藥用可接受的諸如增溶劑、乳化劑、緩衝液、防腐劑、甜味劑、矯味劑、懸浮劑、增稠劑、色素、粘度調節劑、穩定劑或滲透調節劑。用於口服或腸胃外給藥的液體載體適合的例子包括水(部分地含有上述添加劑，例如纖維素衍生物，優選羧甲基纖維素鈉)、醇類(包括一羥基醇類和多羥基醇類，例如甘醇)和它們的衍生物、lethicins和油類(例如精餾的椰子油和花生油)。對腸胃外給藥，載體也可以是油酯。諸如油酸乙酯和肉豆蔻異丙酯。對於腸胃外給藥、無菌液體載體以無菌液體形式成分使用。用於加壓的成分的液體載體可以是滷化的烴或其它藥用可接受的推進劑。
是無菌溶液或懸浮液的液體藥用成分可通過肌肉內、腹膜內或皮下注射使用。無菌溶液也可以靜脈給藥。本發明的化合物也可以液體或固體成分的形式口服給藥。
本發明的抗氧化劑可以慣用的栓劑形式從直腸給藥。為了通過從鼻內或支氣管內用吸入劑或吸入劑給藥，本發明的抗氧化劑可以被配成水溶液或部分水溶液然後以氣霧劑形式使用。本發明的化合物也可以使用含有活性化合物和對活性化合物是惰性的對皮膚無毒的並允許經皮膚傳送藥劑以系統吸收到血流中的載體的透皮片經皮膚給藥。載體可以採用多種形式諸如霜劑和軟膏劑、糊劑、凝膠、和閉合的裝置。霜劑和軟膏劑可以是水包油型或油包水型的粘的液體或半固態的乳劑。由分散在含有效組分的石油或親水石油裡吸收的粉末組成的糊劑也是適用的。許多閉合裝置可被用於釋放有效組分進入血流裡，諸如覆蓋含有有效組分含或不含載體的貯器的半透膜，或含有有效組分的基層。其它閉合裝置在文獻裡已知。
另外，本發明的抗氧化劑可以用作溶液、霜或洗液，將其與藥用可接受的賦形劑配伍，活性化合物含量0.1-5％，優選2％，用於給感染真菌區域施藥。
所需的測量根據使用的特定的成分、給藥途徑、呈現的症狀的嚴重性和被處理的特定目標而不同。基於在標準藥理學測試過程所得的結果，活性化合物的計劃每日劑量應為0.02μg/kg-500μg/kg。治療通常從小於最佳化合物劑量的小劑量開始。然後增加劑量-直達到在這些情況下的最佳作用；根據基於各個被處理的實際情況的給藥物理條件確定用於口服、腸胃外、鼻內或腹膜內給藥的最精確劑量。優選藥用化合物是單位劑量形式，例如，片劑或膠囊。在這樣的形式裡，成分被再分為含有適當量的有效組分的單元劑；單位劑形可以是被包裹的成分，例如被包裹的粉末、藥瓶、安瓿、預裝的注射器或含液體的sachets。單位劑量形式可以是例如膠囊或片劑本身，或可以是任何這樣的成分的適當量的組合形式。
權利要求
1.一種抑制或處理導致疾病的自由基的方法，通過對需要的哺乳動物施用8，9-脫氫雌酮或8，9-脫氫雌酮-3-硫酸酯的藥用可接受鹽抗氧化劑。
2.根據權利要求1的方法，其中3-硫酸酯的藥用可接受鹽是鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、銨鹽、含有1-6個碳原子的烷基胺鹽或每個烷基含有1-6個碳原子的二烷基胺鹽。
3.一種抑制自由基，在需要這種治療的哺乳動物體內與酶、離子通道、結構蛋白和膜脂質反應的方法，其包括施用8，9-脫氫雌酮或8，9-脫氫雌酮-3-硫酸酯的藥用可接受鹽作為犧牲底物，以足夠的量選擇反應並抑制與所述動物的酶、離子通道、結構蛋白和膜脂質的自由基反應。
4.一種抑制和下列疾病發展有關的內生的自由基的方法，疾病包括癌症、中樞神經系統紊亂、骨疾、衰老、炎症、末梢血管疾病、類風溼性關節炎、自身免疫疾病、呼吸窘迫、肺氣腫、預防消腫損傷、病毒性肝炎、慢性活動性肝炎、結核病、牛皮癬、系統性紅斑狼瘡、成人呼吸窘迫綜合症、中樞神經系統創傷或發作，或在消腫過程中的損傷，其方法包括施用8，9-脫氫雌酮或8，9-脫氫雌酮-3-硫酸酯的藥學上可接受的鹽。
全文摘要
本發明提供了一種用8，9-脫氫雌酮或8，9-脫氫雌酮-3-硫酸酯藥學上可接受的鹽作為抗氧化劑的方法。
文檔編號A61KGK1158725SQ9612334
公開日1997年9月10日 申請日期1996年12月3日 優先權日1995年12月4日
發明者S·J·阿德爾曼 申請人:美國家用產品公司