富芸香苷提取物及製造它的方法
2023-05-15 17:07:46
富芸香苷提取物及製造它的方法
【專利摘要】本發明公開了一種從植物獲得富芸香苷提取物的方法和由這樣獲得的Uncaria elliptica的富芸香苷提取物。
【專利說明】富芸香苷提取物及製造它的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及富芸香苷提取物和製造富芸香苷提取物的方法。
【背景技術】
[0002] 芸香苷（rutin)是用作輕乙蘆丁（Troxerutin)的原材料的天然類黃酮，其增 加毛細管的耐力並降低靜脈血管壁的滲透性。臨床研究顯示，用芸香苷衍生物羥乙蘆丁 (Venoruton)治療患者導致血栓形成後症候群（post thrombotic syndrome)的改善。參見 Panminerva Medicine, 53,第13頁，2011。另一個研究發現，芸香苷是最有效的抗血栓形成 劑之一。參見 The Journal of Clinical Investigation(臨床研究期刊），122,第 6 號， 2012。芸香苷作為用於藥劑的原材料正在變得更加重要。
[0003] 為了從多種植物源,例如槐樹（Sophora Japonica)(亞洲）、Fava d' anta(巴西） 和Uncaria elliptica(巴西）中提取和純化芸香苷,典型地使用水和甲醇溶劑。然而,在 實踐中，得自這樣的植物源的富芸香苷提取物具有很多缺點，比如是濃棕色的，且與來自其 他源的富芸香苷提取物相比含有更高的鐵含量。該棕色歸因於在植物中的色素。
[0004] 發明概述
[0005] 通過常規的提取和/或純化方法非常難以消除該棕色和降低鐵含量，因為鐵似乎 緊密地結合至色素中。已經進行了克服這些缺點的嘗試。然而，這些嘗試未能在保持良好 的芸香苷收率的同時減少結合在色素中的鐵。
[0006] 對於適合於大規模的能夠製備具有高的芸香苷含量、低的鐵含量和減少的著色的 富芸香苷提取物的應用的經濟方法，存在著需要。
[0007] 本發明基於以下出人意料的發現：醇和酸的特別的組合，其能夠用於從植物獲得 鐵含量和著色低的富芸香苷提取物。
[0008] 因此，本文描述的是從植物獲得富芸香苷提取物的方法。該方法包括：將含有芸香 苷的植物提取物溶解在甲醇或乙醇中，以獲得粗製芸香苷提取物溶液，所述固態的含有芸 香苷的植物提取物含有90重量％至95重量％芸香苷和100至300ppm鐵；減少所述粗製芸 香苷提取物溶液的體積，以獲得濃縮物；通過向所述濃縮物加入所述含有芸香苷的植物提 取物的1-15重量％的酸、和任選地加入C1-C4醇、水、或者C1-C4醇和水，從而獲得混合物， 其中，所述含有芸香苷的植物提取物構成所述混合物的8 %至30 % (w/v)，並且所述酸選自 由以下各項組成的組：抗壞血酸、檸檬酸、酒石酸、沒食子酸和蘋果酸；允許所述混合物靜 置，以形成沉澱物；和將所述沉澱物分離，從而獲得含有少於20ppm鐵的富芸香苷提取物。 [0009] 所述含有芸香苷的植物提取物可以是由用水、醇或醇的水溶液提取Uncaria elliptica、槐樹或Fava (Γ anta產生的粗製沉澱物形式獲得的。
[0010] 在一些實施方案中，以含有芸香苷的植物提取物的1-10重量％，例如，1-5重量％ 或2-4重量％，加入酸。在加入水和C1-C4醇的情況下，水與C1-C4醇的比率可以是I : 1 至5 : 1，例如，I : 1至3 : 1。可以分別地、同時地、或者以C1-C4醇水溶液的形式，加入 水和C1-C4醇。
[0011] 本文的特徵還在於Uncaria elliptica的富芸香苷提取物，該提取物含有通過 HPLC測量得出的97%至99%的芸香苷，和少於20ppm的鐵，該提取物在550nm的吸收低於 0.2。該提取物還可以含有5重量％至10重量％水。它可以通過上述方法製備。
[0012] 實施方案描述
[0013] 在以下說明書中，描述本發明的一個以上實施方案的細節。通過說明書和通過權 利要求，本發明的其他特徵，目的和優點將是明顯的。
[0014] 本文描述的是一種使用醇和酸的新組合從植物源獲得富芸香苷提取物的方法。通 過本方法獲得的富芸香苷提取物與通過常規方法製備的提取物相比具有明顯降低的著色 和鐵含量。
[0015] 使用本領域中已知的常規方法，可以由不同植物源，例如槐樹（Sophora Japonica)(亞洲）、Fava d' anta (巴西）和Uncaria elIiptica (巴西）製備含有芸香苷 的固態提取物。這樣的方法包括但不限於：在不同溶劑中浸漬、加熱、搖動、攪拌或泡製植物 材料，例如莖和葉。所用的植物材料可以為整體乾燥的植物、粉碎的植物、或者粉末的形式。 溶劑包括水、醇（例如甲醇）或醇的水溶液。在提取之後，可以通過過篩、過濾、加壓或其 他合適的技術，將提取物溶液從固體分離。可以將濾液濃縮並冷卻，以允許沉澱物形成，從 而獲得含有芸香苷的固態提取物。對於各種提取方法的描述，參見例如中國專利1013579; US2006/0099690;和 Dighe 等，International Journal of Pharma and Bio Sciences (制 藥和生物科學國際期刊），2(1) :750-757(2011)。
[0016] 典型地，通過這些方法製得的含有芸香苷的固態提取物具有高的鐵含量，例如， 100-300ppm，和嚴重的著色，例如，黃色或棕色，特別是在源自Uncaria elliptica.的提取 物中。芸香苷可以構成這些含有芸香苷的固態提取物的85重量％至90重量％。
[0017] 可以將這樣製得的含有芸香苷的固態提取物溶解在醇溶劑，優選甲醇或乙醇中， 以獲得粗製芸香苷提取物溶液。例如每Iml的溶劑可以溶解0. 05-0. 13g的固態提取物。可 以將粗製提取物溶液進一步濃縮，例如，在大氣壓下，以減少它的體積，例如，減少到四分之 一至十分之一。可以基於想要的下述混合物的體積和含量，預定粗製提取物溶液的最終體 積。
[0018] 向上述粗製芸香苷提取物溶液中，加入酸和任選地C1-C4醇，例如，甲醇、乙醇、丙 醇或正丁醇，以獲得混合物。在混合物中也可以包含水。
[0019] 所用的酸選自抗壞血酸、檸檬酸、酒石酸、沒食子酸和蘋果酸。以上述用於製備粗 制芸香苷提取物溶液的含有芸香苷的固態提取物的約1-15重量％，例如，1-10重量％或 1-5重量％，向粗製芸香苷提取物溶液中加入酸。
[0020] 混合物必須含有至少一種C1-C4醇。例如，如上所述，可以使用甲醇或乙醇（即， C1-C4醇）並由含有芸香苷的固態提取物製造粗製芸香苷提取物溶液。可以無需向粗製芸 香苷提取物溶液中加入附加的C1-C4醇。在一些情況下，為了獲得含有8%至30% (w/v) 含有芸香苷的固態提取物的混合物，可以例如以含有芸香苷的固態提取物的2-12倍（v/w) 添加 C1-C4醇、C1-C4醇水溶液，或C1-C4醇和水。添加的附加的C1-C4醇可以與用於製造 粗製芸香苷提取物溶液的醇相同或不同。
[0021] 芸香苷以各種水合物如一水合物、二水合物和三水合物的形式存在。已知的是，無 水合物（anhydrate)和一水合物是不穩定的。因此，優選的是在純化過程中通過與水水合 而製備出相對穩定的二水合物或三水合物。因此，可以向粗製芸香苷提取物溶液中加入水。 可以獨立地加入水。也可以以C1-4醇的水溶液的形式加入水。水與C1-C4醇的比率可以 是I : 1至5 : 1，例如，I : 1至3 : 1。如上所述，最終混合物優選含有8%至30% (w/ v)含有芸香苷的固態提取物。
[0022] 隨後，使含有粗製芸香苷提取物溶液、C1-C4醇、酸和任選的水的混合物靜置，用於 形成沉澱物例如晶體。例如，可以進一步將混合物濃縮，並且將濃縮的混合物攪拌並使其冷 卻，以形成沉澱物。可以通過任何合適的技術，例如過濾收集沉澱物、用醇和/或水清洗、並 乾燥。
[0023] 沉澱物，即富芸香苷提取物，可以含有當通過HPLC測量時97%至99%芸香苷，和 少於20ppm的鐵，也是，少於lOppm。它還具有低的著色，例如，提取物在550nm的吸收低於 0.2。它還可以含有5重量％至10重量％水。富芸香苷提取物可以具有任何粒度，例如， 5 μ m(微米）以下。例如，它可以具有納米大小的粒子。
[0024] 通過上述方法製備的富芸香苷提取物可用於多種應用。它可以是作為藥物組合物 例如藥品的製劑。它也可以用作營養補劑或食品添加劑。 實施例
[0025] 以下的具體實例被解釋為僅僅是說明性的，並且無論如何不以任何形式限制公開 的其餘部分。在沒有進一步詳細細節的情況下，據信本領域技術人員能夠基於本文的描述 以本發明的最完整的範圍利用本發明。本文引述的全部公開物通過引用將它們的全部結合 在此。
[0026] 通過以下過程，獲得在以下實施例1-4中所述的鐵含量、純度和吸光度的值：
[0027] (1)鐵含量
[0028] 精確獲得I. Og的樣品，並硫酸化。向殘餘物中加入2ml的鹽酸。隨後將樣品乾燥， 並在加入IOml水和一滴鹽酸之後，在沸水中加熱。在冷卻之後，將體積精確調整至10. 0ml， 並隨後通過0. 45微米過濾器過濾。通過ICP分析，測定樣品溶液中鐵的濃度。
[0029] (2)可見光吸收
[0030] 將I. Og的樣品溶解在15ml的二甲基甲醯胺（DMF)中。在用DMF將體積調節至 20. Oml之後，將溶液過濾通過0. 45微米過濾器。在550nm，在I. Ocm的路徑長度，測量過濾 後的樣品的吸收。
[0031] ⑶ HPLC 分析
[0032] 按照歐洲藥典專論三水合蘆丁，相關物質（EP monograph Rutoside trihydrate， related substances),通過液相色譜進行HPLC分析。所用的試劑和條件簡單陳述如下：
[0033] [化學 1]
[0034] 試驗溶液：將0. IOg的待檢測物質溶解在20ml的甲醇中，並用流動相B稀釋至 100.Omlo
[0035] 參比溶液（a):將10. Omg的三水合蘆丁 CRS溶解在10. Oml的甲醇中。
[0036] 參比溶液（b):用流動相B將I. Oml的參比溶液（a)稀釋至50. 0ml。
[0037] 柱子（LiChrospher 100RP-8, C8,4. Ox 250mm，Agilent):
[0038] -尺寸：1 = 0· 25m，i. d. = 4. 0mm，
[0039] -固定相：用於色譜的辛基甲矽烷基矽膠（5 μ m)
[0040] -溫度：30°C
[0041] 流動相：
[0042] -流動相A :將5體積的四氫呋喃與95體積的15. 6g/l磷酸二氫鈉的溶液混合，該 磷酸二氫鈉的溶液用磷酸調節至pH 3. 0。
[0043] -流動相B :將40體積的四氫呋喃與60體積的15. 6g/l磷酸二氫鈉的溶液混合， 該磷酸二氫鈉的溶液被用磷酸調節至PH 3.0。
[0044] [化學 2]
[0045] 梯度時間表
[0046]
【權利要求】
1. 一種從植物獲得富芸香苷提取物的方法，所述方法包括： 將含有芸香苷的植物提取物溶解在甲醇或乙醇中，以獲得粗製芸香苷提取物溶液，所 述含有芸香苷的植物提取物含有90重量％至95重量％芸香苷和100至300ppm鐵； 減少所述粗製芸香苷提取物溶液的體積，以獲得濃縮物； 通過向所述濃縮物加入所述含有芸香苷的植物提取物的1-15重量％的酸、以及任選 地加入C1-C4醇、水、或者C1-C4醇和水，從而獲得混合物，其中，所述含有芸香苷的植物提 取物佔所述混合物的8%至30% (w/v)，並且所述酸選自由以下各項組成的組：抗壞血酸、 檸檬酸、酒石酸、沒食子酸和蘋果酸； 使所述混合物靜置，以形成沉澱物；以及 將所述沉澱物分離，從而獲得含有少於20ppm鐵的富芸香苷提取物。
2. 權利要求1所述的方法，其中所述含有芸香苷的植物提取物是以用水、醇或醇的水 溶液提取Uncaria elliptica、槐樹或Fava (T anta產生的粗製沉澱物形式獲得的。
3. 權利要求1所述的方法，其中加入所述C1-C4醇和水。
4. 權利要求1所述的方法，其中所述酸以所述含有芸香苷的植物提取物的1-10重量％ 加入。
5. 權利要求4所述的方法，其中所述酸以所述含有芸香苷的植物提取物的1-5重量％ 加入。
6. 權利要求5所述的方法，其中所述酸以所述含有芸香苷的植物提取物的2-4%加入。
7. 權利要求3所述的方法，其中所述C1-C4醇和水以含有5-80體積％水的C1-C4醇水 溶液的形式加入。
8. 權利要求3所述的方法，其中水與所述C1-C4醇的比率為按體積計的1 : 1至5 : 1。
9. 權利要求8所述的方法，其中水與所述C1-C4醇的比率為按體積計的1 : 1至3 : 1。
10. 權利要求1所述的方法，其中所述C1-C4醇是甲醇且所述酸是抗壞血酸。
11. 權利要求1所述的方法，其中所述C1-C4醇是正丁醇或丙醇。
12. 權利要求11所述的方法，其中所述酸是抗壞血酸。
13. 權利要求12所述的方法，其中所述C1-C4醇是正丁醇。
14. 權利要求13所述的方法，其中所述酸以所述含有芸香苷的植物提取物的1-10重 量％加入。
15. 權利要求14所述的方法，其中所述酸以所述含有芸香苷的植物提取物的1-5重 量％加入。
16. 權利要求15所述的方法，其中所述酸以所述含有芸香苷的植物提取物的2-4重 量％加入。
17. 權利要求13所述的方法，其中水與所述C1-C4醇的比率為按體積計的1 : 1至 5 : 1〇
18. 權利要求13所述的方法，其中水與所述C1-C4醇的比率為按體積計的1 : 1至 3 : 1〇
19. 一種Uncaria elliptica的富芸香苷提取物，所述提取物包含通過HPLC測量得出 的97%至99%的芸香苷，和少於20ppm的鐵，所述提取物在550nm的吸收小於0. 2。
20. 權利要求19所述的富芸香苷提取物，其中所述提取物含有通過HPLC測量得出的至 少98%的芸香苷，和少於lOppm的鐵，所述在550nm的吸收小於0? 1。
21.權利要求19所述的富芸香苷提取物，其中所述提取物含有5重量％至10重量％的 水。
【文檔編號】A61K36/18GK104334569SQ201280073518
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2012年10月22日 優先權日:2012年10月22日
【發明者】南和伸, 谷脅慎治, 勝又亞希子 申請人:阿爾卑斯藥品實業株式會社