芪類化合物及其衍生物在製備內皮素拮抗劑中的應用的製作方法
2023-04-28 00:46:26
專利名稱：芪類化合物及其衍生物在製備內皮素拮抗劑中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種含有中草藥植物紅背絲綢有效成分的藥物製劑以及紅背絲綢有效成分的提取方法；本發明還涉及茋類化合物及其衍生物的藥物新用途，具體講是茋類化合物及其衍生物在製備內皮素拮抗劑中的應用，特別是3，4』，5-三羥基反式茋在製備內皮素拮抗劑中的應用，屬於藥物領域。
紅背絲綢[Cissus assamica(Laws.)Craib]為葡萄科(Vitaceae)白粉藤屬(Cissus L.)植物，民間用於治療跌打損傷、扭傷、風溼性關節炎痛、骨折及癰瘡腫毒。廣西一帶用於治療毒蛇咬傷具有良好的效果。有關該植物有效部位的提取及化學成分的研究至今尚未見報導。
內皮素是國際上最新報導的一種生物活性物質，許多心腦血管疾病的發生發展與內皮素有著密切的關係，如高血壓、冠心病、腦血管意外、心力衰竭等，內皮素參與這些疾病的病理、生理過程，許多國家已經把內皮素作為高血壓、冠心病、腦血管意外、心力衰竭等疾病的一項病理指標，並通過調節內皮素的生物作用來治療上述疾病。因此，篩選一種能夠拮抗內皮素生物活性的藥物是目前非常重要而有意義的事情。
茋類化合物是結構式母核為1，2-二苯乙烯的一類化合物。其結構式為下述通式I
其中兩個苯環上的3，4，5，2』，3』，4』，5』，6』不同位置、不同基團的取代構成了眾多的茋類化合物。這類化合物能夠作為藥物已經是已知的，但是，到目前為止，尚未見有關這類化合物用於製備內皮素拮抗劑應用的報導。
本發明目的之一是提供一種藥物製劑，它含有中草藥植物紅背絲綢的有效成分提取物。
本發明的另一個目的是提供中草藥植物紅背絲綢有效成分的提取方法。
本發明的另一個目的是提供茋類化合物及其衍生物在製備內皮素拮抗劑中的應用。
進一步說，本發明的另一個目的是提供3，4』，5-三羥基反式茋在製備內皮素拮抗劑中的應用。
我們曾對紅背絲綢植物進行了拮抗內皮素(ET)的藥理研究，發現它能拮抗由ET導致的離體主動脈條的收縮，並且對所致的整體動物死亡具有保護作用，進而對其進行了化學成分的提取和分離工作，以期發現拮抗ET的有效成分，從而完成了本發明。
本發明藥物製劑含有治療有效量的紅背絲綢植物有效提取部位。
本發明藥物優選含有0.1-99.9％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
本發明藥物更優選含有10-90％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
本發明藥物進一步優選含有15-80％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
本發明藥物最佳含有20-70％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
本發明所說的紅背絲綢植物的有效提取部位是以下述方法提取的有效提取物取紅背絲綢植物的根10公斤(幹品)，粉碎後用95％乙醇回流提取3次，合併提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分攪拌分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的有效提取部位。
上述的紅背絲綢的有效提取部位是一種提取混合物，按照常規的藥物製劑工藝，可以將其作為有效成分，加入常規的賦性劑，製備成任何一種適合於臨床上使用的藥物製劑。例如，丸劑、片劑、膠囊劑、口服液體製劑、注射劑、散劑、膏劑、氣霧劑等。製備這些藥物製劑是本領域普通技術人員的常規性技術活動。
對於上述的紅背絲綢植物的有效提取部位，我們進行了進一步的純化，通過提取、分離及光譜數據分析，得到了單體化合物3，4』，5-三羥基反式茋，該化合物經體內外藥理實驗證實，對ET有具有生物效應拮抗作用，是紅背絲綢植物的抗ET的有效成分。
因此，本發明提供了一種從紅背絲綢植物中提取3，4』，5-三羥基反式芪的方法，該方法是取紅背絲綢植物的根10公斤(幹品)，粉碎後用95％乙醇回流提取3次，合併提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分攪拌分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的活性部位。該部位經多次矽膠H柱層析分離，優選進行三次分離，再以石油醚-乙酸乙酯(9∶1-5∶5)梯度洗脫，得到結晶。
該結晶呈白色，熔點。紫外光下呈藍色螢光。
其光譜數據如下EI-MS m/z228(M+)，211，199，181，157，115，91，分子式為C14H12O3，不飽和度Ω＝9。
IR(KBr)cm-13280，1600，1580，1410，1150。
1H-NMR(DMSO-d6)δppm9.50(1H，s)，9.20(2H，s)，7.40(2H，d，J＝8.5Hz)，6.90(1H，d，J＝16Hz)，6.80(1H，d，J＝16Hz)，6.70(2H，d，J＝8.5Hz)，6.40(2H，d，J＝1.8Hz)，6.10(1H，s)。
13C-NMR(DMSO-d6)δppm158.4，157.1，139.1，127.9，127.8，127.7，125.6，115.4，104.2，101.7。
由以上數據可以鑑定為3，4』，5-三羥基反式芪，結構式如下
3，4』，5-三羥基反式芪作為芪類化合物的代表，是內皮素拮抗劑中的一個新的結構類型。經過實驗表明，芪類化合物均具有拮抗內皮素的作用。
本發明所說的芪類化合物及其衍生物是具有下述通式II的一類化合物
其中，R基團是H或-OR』，所述的R』是選自於H，-CH3，或葡糖苷的任何一種或一種以上的基團。
本發明上述通式II按下述表示時
其中優選下列化合物4-羥基茋；3，5-二羥基茋；4，4』-二羥基茋；3，5，4』-三羥基茋；3，5，3』，4』-四羥基茋；3，5，2』，4』-四羥基茋；3，5-二羥基芪一甲基醚；3』-甲氧基-4』-羥基茋；丹葉大黃素；4，3』-二甲氧基-4』-羥基茋；蝶茋；3，3』-二甲氧基-4，4』-二羥基茋；3，4，2』，4』，6』-五甲氧基茋；白藜蘆醇葡糖苷；5，3』，4』-三羥基-3-羥基茋葡糖苷；3，5-二羥基茋一甲基醚葡糖苷；3』-甲氧基-4』-羥基茋葡糖苷；5，3』-二羥基-4』-甲氧基-3-羥基茋葡糖苷；
4，3』-二甲氧基-4』-羥基茋葡糖苷。
本發明通式化合物中最優選化合物的是3，4』，5-三羥基反式茋。
實施例1取紅背絲綢植物的根10公斤(幹品)，粉碎後用95％乙醇回流提取3次，合併提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分攪拌分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的有效提取部位。取有效提取部位100克，加入澱粉500克，混合均勻，造粒，整粒，壓片，包糖衣，得片劑。
實施例2取紅背絲綢植物的根10公斤(幹品)，粉碎後用95％乙醇回流提取3次，合併提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分攪拌分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的活性部位。該部位經多次矽膠H柱層析分離，優選進行三次分離，再以石油醚-乙酸乙酯(9∶1-5∶5)梯度洗脫，得到結晶。
取結晶10克，加入100克澱粉，入攪拌機混勻，裝膠囊，每粒裝藥粉1克，製得膠囊劑。
在藥理實驗資料中，為了描述方便，將本發明的化合物3，4』，5-三羥基反式茋縮寫為CA-1201，因此，在下述的實驗例中，該術語「CA-1201」是指3，4』，5-三羥基反式茋。下述實驗例詳細地描述了本發明的化合物3，4』，5-三羥基反式茋拮抗內皮素-1生物效應的作用。實驗例1 CA-1201對內皮素-1引起小鼠急性死亡的保護作用♂性昆明種小鼠40隻，體重20±2g，禁食供水18小時後，CA-1201以10mg/kg腹腔注射15分鐘後，尾靜脈注射6nmol/kg的ET-1，以存活時間超過15分鐘為存活，記錄動物死亡時間和死亡數。
CA-1201在腹腔給予10mg/kg劑量後，動物死亡時間明顯延長，對照組(靜脈注射ET-1)後，動物死亡的時間為3.22±0.62分鐘，而預先用CA-1201保護後，動物死亡時間為11.52±4.50分鐘，經統計學處理，二者有顯著性差異(p＜0.05)。表1.CA1201對ET1致小鼠急性死亡保護作用對照組 CA-1201組體重 死亡時間體重 死亡時間(g) (min) (g) (min)23.04.17 21.0 1521.54.10 22.5 4.8823.03.03 20.5 7.0819.02.13 21.0 6.9721.03.15 21.5 1523.03.00 21.0 4.9522.03.93 18.5 12.9221.03.18 19.0 1519.03.28 20.5 1520.03.33 20.5 153.22±0.6211.52±4.50實驗例2離體動脈肌條灌注實驗♂性SD大鼠，體重230±10g，，將大鼠擊昏後快速摘取胸主動脈，經分離結締組織後，剪成2-3mm長的血管環，分別置於Krebs-Henseleit生理溶液(K-H液，pH7.40±0.05，95％O2+5％CO2，37.0±0.5℃)中，穩定、加2g基礎張力、用10-7M去甲腎上腺素預激二次、平衡後，加入ET-1 10-9M，待達到最大收縮效應後，分別加不同濃度的CA-1201(用2％DMSO為溶媒，實驗用2％DMSO作對照)，經張力換能器連臺式平衡記錄儀，記錄血管等張收縮與舒張情況。
在離體環境中，CA-1201(10-8M和10-9M)均能拮抗ET-1引起的大鼠胸主動脈縮血管效應，與對照組相比，該作用具顯著性意義(p＜0.05)；且CA-1201拮抗ET-1縮血管效應具劑量依賴性。
表2.CA-1201對ET-1縮血管效應的拮抗作用組 別 濃度 血管張力ET-110-9M100.00±3.28ET-1+CA-120110-9M55.76±8.93*ET-1+CA-120110-8M32.48±3.19**實驗例3對血壓的作用♂性SD大鼠，體重230±10g，，空腹供水18h後，CA-1201尾靜脈注射5和10mg/kg後，即刻從尾靜脈再給予ET-16μg/kg，觀察血壓的變化，用阻抗法測定大鼠尾動脈血壓變化，並將變化值與對照組比較。結果列於表3-5。
表3對照組血壓變化情況時間對照組(ΔSBPmmHg)1 2345M±SD0 0 0000 053535 35 40 3536±2.24105550 50 60 6055±5.00156055 60 80 8067±12.04204045 40 45 5545±6.12253540 35 45 4539±4.18302025 25 30 3527±5.70451015 15 15 1514±2.2460 0 00531.6±2.30表4 CA-1201大劑量組(10mg/kg)血壓變化情況時間 ΔSBP(mmHg)1 2 3 4 5M±SD0 0 0 0 0 005 3 151910 811±6.2010 8 2525151718±7.2115 3 2025192318±8.7220 3 2028152017.2±9.2025 7 1525131615.2±6.503013 1727121316.4±6.234518 1325101015.2±6.386013 510 7 510.4±3.25
表5 CA-1 201小劑量組(5mg/kg)血壓變化情況時間 ΔSBP(mmHg)1 2 3 4 5M±SD0 0 0 0 0 005 302825302026.6±4.2210505045454046.0±4.1815485550554751.0±3.8120505545454548.0±4.4725454837354041.0±5.4330204532323532.8±8.9345251524252522.8±4.3860101010101511.0±2.24從上表可以看出，大劑量CA-1201(10mg/kg)對ET-1引起的升壓效應有明顯的拮抗作用，與對照組相比該拮抗作用有明顯的劑量依賴性，但小劑量CA-1201(5mg/kg)有鈍化ET-1的升壓作用的趨勢，但無顯著性意義。實驗例4 CA-1201對ET-1致心律失常的拮抗作用SD大鼠，體重250±50g，禁食供水18小時後，用846動物複合麻醉劑肌肉注射後，背位固定，用標準肢體II導記錄心電圖的變化。待心電圖穩定後，靜脈注射ET-1 0.6nmol/kg，記錄給藥後的心電圖，然後給予不同劑量組(靜脈注射10、30、90和肌肉注射10μg/kg)的CA-1201，觀察在整個實驗過程(60分鐘)中各組心電圖的變化。
CA-1201對內皮素-1引起的各種類型的心律失常有明顯的拮抗作用，對室性心律失常的作用較為明顯；肌肉注射後，亦能有效地拮抗ET-1引起的心律失常，對室性及房性心律失常的拮抗作用趨勢優於靜脈注射。
附
圖1是用於說明CA-1201靜脈注射對ET-1升壓作用的影響(n＝5，x±SD)。
權利要求
1.一種內皮素拮抗劑，其特徵在於它含有治療有效量的紅背絲綢植物有效提取部位，所述的有效提取部位是以下述方法提取的提取物取紅背絲綢植物的根，粉碎後用95％乙醇回流提取3次，合併提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分攪拌分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的有效提取部位。
2.根據權利要求1的內皮素拮抗劑，其特徵在於它含有0.1-99.9％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
3.根據權利要求1的內皮素拮抗劑，其特徵在於它含有10-90％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
4.根據權利要求1的內皮素拮抗劑，其特徵在於它含有15-80％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
5.根據權利要求1的內皮素拮抗劑，其特徵在於它含有20-70％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
6.一種內皮素拮抗劑的提取方法，其特徵在於該方法包括取紅背絲綢植物的乾燥根，粉碎後用95％乙醇回流提取3次，合併提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分攪拌分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的活性部位，該部位經多次矽膠H柱層析分離，再以石油醚乙酸乙酯(9∶1-5∶5)梯度洗脫，得到結晶。
7.具有通式II的茋類化合物及其衍生物在製備內皮素拮抗劑藥物中的應用，
其中，R基團是H或-OR』，所述的R』是選自於H，-CH3，或葡糖苷的任何一種或一種以上的基團。
8.根據權利要求7的應用，其中所述的茋類化合物是選自於下述一組化合物中的任何一種4-羥基茋；3，5-二羥基茋；4，4』-二羥基茋；3，5，4』-三羥基茋；3，5，3』，4』-四羥基茋；3，5，2』，4』-四羥基茋；3，5-二羥基茋一甲基醚；3』-甲氧基-4』-羥基茋；丹葉大黃素；4，3』-二甲氧基-4』-羥基茋；蝶芪；3，3』-二甲氧基-4，4』-二羥基茋；3，4，2』，4』，6』-五甲氧基茋；白藜蘆醇葡糖苷；5，3』，4』-三羥基-3-羥基茋葡糖苷；3，5-二羥基茋一甲基醚葡糖苷；3』-甲氧基-4』-羥基茋葡糖苷；5，3』-二羥基-4』-甲氧基-3-羥基茋葡糖苷；4，3』-二甲氧基-4』-羥基茋葡糖苷。9、3，4』，5-三羥基反式茋在製備內皮素拮抗劑藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種含有中草藥植物紅背絲綢有效成分的藥物製劑以及紅背絲綢有效成分的提取方法;本發明還涉及芪類化合物及其衍生物的藥物新用途,具體講是芪類化合物及其衍生物在製備內皮素拮抗劑中的應用,特別是3,4』,5－三羥基反式芪在製備內皮素拮抗劑中的應用。
文檔編號A61K31/70GK1196245SQ97103928
公開日1998年10月21日 申請日期1997年4月16日 優先權日1997年4月16日
發明者楊連春, 王峰 申請人:中國人民解放軍空軍總醫院