一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及其製備方法和應用的製作方法
2023-04-25 20:42:06
一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及其製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及其製備方法和應用。金剛烷胺人工半抗原的分子結構式如式(Ⅰ)，金剛烷胺人工抗原的分子結構式如式(Ⅱ)。所述應用是所述金剛烷胺人工抗原在製備抗金剛烷胺抗體中的應用。本發明的金剛烷胺人工半抗原最大程度地保留了金剛烷胺的特徵結構，且具有可以與載體蛋白發生偶聯的活性基團，可作為抗原決定簇；進一步製備獲得的金剛烷胺人工抗原可免疫獲得親和力高、靈敏度高、特異性強的抗金剛烷胺抗體，經免疫紐西蘭白兔獲得的免疫血清的效價高達1:70000，可用於對金剛烷胺進行快速、準確的免疫檢測和免疫分析。
【專利說明】一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及其製備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬於生物化工【技術領域】，具體涉及一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及 其製備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 金剛烷胺可以抑制病毒穿入宿主細胞，並影響病毒的脫殼，抑制其繁殖，在臨床上 用於預防和治療人流感病毒的感染，具有價格低廉、藥效明顯等特點，同時也曾是帕金森綜 合症的治療藥物。但金剛烷胺蓄積會對人體造成嗜睡、失眠、眩暈、抑鬱、噁心、食慾減退等 多種不良反應，具有一定的毒副作用。長期使用金剛烷胺還可使病毒產生不同程度的耐藥 性，誘導產生新型耐藥病毒。
[0003] 然而，2012年11月媒體曝出國內養殖的"速生雞"從孵出到端上餐桌只需45天，不 法商販為了保證其存活，給雞餵養了大劑量人用藥物來抑制禽類的禽流感等病症。2012年 12月，央視調查中稱，一些養殖戶為進一步縮短養殖周期，讓原本已經是速成品種的白羽雞 長得更快，偷偷餵食違禁藥物，其中包括金剛烷胺等抗病毒藥品和地塞米松等激素類藥品。 "速成雞"事件的爆發引發了全國消費者對禽肉食品安全的廣泛關注和擔憂，對建立快速、 靈敏、準確的檢測技術提出了迫切需求。
[0004] 目前，對金剛烷胺的檢測主要依靠高效液相色譜法（HPLC)、氣相色譜法（GC)、薄 層色譜法（TLC)、質譜法（MS)等，但是存在儀器昂貴，檢測費時，並且需要專業技術人員進 行操作，不能達到現代檢測對快速、準確的要求。
[0005] 免疫分析法可以彌補以上所有缺點，免疫分析法是一種利用抗原抗體特異性結合 反應檢測各種物質（藥物、激素、蛋白質、微生物等）的分析方法，建立小分子化合物的免疫 分析方法的關鍵是能夠製造出對小分子化合物具有高親和力和高特異性的抗體。但是，由 於包括金剛烷胺在內的大多數小分子化合物（分子量小於1000)，不具有免疫原性，即缺乏 T細胞表位而無法直接誘導動物機體產生特異性抗體，故小分子物質被稱為半抗原。通過適 當的化學修飾，在半抗原分子結構的某個位置上帶上端部為活性基團的連接臂，再與大分 子載體結合，生成半抗原-載體偶聯物（即人工抗原），人工抗原可以藉助T細胞表位來間 接誘導B細胞的增殖和分化，繼而產生特異性抗體。
[0006] 現有技術中還未有金剛燒胺人工半抗原、人工抗原的相關報導。
【發明內容】
[0007] 本發明提供了一種金剛烷胺人工半抗原，該金剛烷胺人工半抗原最大程度地保留 了金剛烷胺的特徵結構，且具有可以與載體蛋白發生偶聯的活性基團，可作為抗原決定簇。
[0008] -種金剛烷胺人工半抗原，其分子結構式如（I )所示：
[0009]
【權利要求】
1. 一種金剛烷胺人工半抗原，其特徵在於，其分子結構式如（I)所示：
2. 如權利要求1所述金剛烷胺人工半抗原的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟： (1) 將金剛烷胺與丁二酸酐按摩爾比1:1. 1?1.5混合，於100?105°C下攪拌反應 16?17h，反應產物經水-二氯甲烷萃取，取有機相，得無色油狀產物A; (2) 將無色油狀產物A、N-羥基琥珀醯亞胺、1- (3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽 酸鹽按摩爾比1:1. 35?1.5:1.35?1.5混合，於20?30°C下攪拌反應18?20h，反應產 物經洗滌、旋蒸後，得無色油狀產物B; (3) 將無色油狀產物B與對氨基苯甲酸按摩爾比1:1混合，於pH9?10、20?30°C下 攪拌反應3?3. 5h，反應結束後調節pH至5?6、用乙酸乙酯萃取，取有機相，獲得如權利 要求1所述的金剛烷胺人工半抗原。
3. -種金剛烷胺人工抗原，其特徵在於，其分子結構式如（II)所示：
式（II)中，BGG為牛丙種球蛋白。
4. 如權利要求3所述金剛烷胺人工抗原的製備方法，其特徵在於，包括：通過混合酸酐 法使權利要求1所述的金剛烷胺人工半抗原與牛丙種球蛋白結合，獲得如權利要求3所述 的金剛烷胺人工抗原。
5. 如權利要求4所述金剛烷胺人工抗原的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟： (a) 將所述金剛烷胺人工半抗原、三乙胺、氯甲酸異丁酯按摩爾比1:1?1. 2:1?1. 3 混合，20?30°C下攪拌反應18?19h，反應結束後離心取上清液； (b) 將所述上清液滴加到牛丙種蛋白溶液中，將所得混合液置於3?5°C下靜置過夜， 經透析、離心取上清，獲得如權利要求3所述的金剛烷胺人工抗原。
6. 如權利要求5所述金剛烷胺人工抗原的製備方法，其特徵在於，步驟（b)中，所述牛 丙種蛋白溶液的濃度為5mg/mL，上清液與牛丙種蛋白溶液的體積比為1:5?6。
7. 如權利要求3所述金剛烷胺人工抗原在製備抗金剛烷胺抗體中的應用。
8. -種抗金剛烷胺抗體，其特徵在於，是由權利要求3所述金剛烷胺人工抗原經動物 免疫得到的、可與金剛烷胺發生特異性免疫反應的球蛋白。
9. 如權利要求8所述抗金剛烷胺抗體在檢測金剛烷胺中的應用。
【文檔編號】G01N33/53GK104402753SQ201410652826
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月17日 優先權日:2014年11月17日
【發明者】楊華, 邵越水, 張巧豔, 錢鳴蓉, 汪建妹, 吳俐勤, 肖英平 申請人:浙江省農業科學院, 杭州傲銳生物醫藥科技有限公司