牛膝提取物及其應用的製作方法

2023-07-28 01:11:41 1

專利名稱：牛膝提取物及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種天然植物提取物及其提取方法和新用途。
背景技術：
慢性咽炎(chronicpharyngitis)為咽部黏膜、黏膜下層及淋巴組織的慢性炎症， 可分為單純性、增生性和萎縮性三種類型。以發音困難，咽部不適、發乾、異物感或輕度疼痛、乾咳、噁心，咽部充血呈暗紅色，咽後壁可見淋巴濾泡等為主要臨床表現。慢性咽炎患者，因咽分泌物增多，故常有清嗓動作，吐白色痰液。目前治療慢性咽炎的方法很多，如西醫一般主張用口泰、複方硼砂溶液等漱口液， 含服華素片、安吉含片、g菌含片等。這些藥物長期使用會導致口腔內環境紊亂，採用抗生素藥物達到咽部較少，且會產生耐藥性和毒副作用。對於肥厚增生性咽炎，可採用雷射、微波、 冷凍等方法。但這些療法目前有濫用趨勢，門診上經常見到因手術後咽部瘢痕嚴重增生、攣縮而病情加重前來就診的病人。因此，採用天然植物有效成分預防或治療慢性咽炎越來越受人關注。在江蘇省揚州等地民間，常用莧科牛膝屬植物牛膝Uchyran thes biden ta ta Blume.)泡茶治療和預防慢性咽炎，效果顯著。中國傳統醫學認為，牛膝性味酸平，歸肝、腎經，具有補肝腎，強筋骨，活血通經，引火下行，利尿通淋等功效。現代藥理學研究表明，牛膝具有抗衰老、抗腫瘤、鎮痛消炎、提高機體免疫力等多種生物活性和藥理作用，其主要活性物質以牛膝多糖、牛膝皂苷研究較多。但是，在研究和應用方面存在以下問題
(1)牛膝治療和預防慢性咽炎雖在民間有所應用，但應用地域並不廣泛，其它地區用於治療咽炎的記載較少。(2)對牛膝功效的研究，目前以抗衰老、抗腫瘤、提高免疫力等較多，對抗炎作用報導較少，抗炎研究都大多停留在對急性炎症及其可能相關因素方面，針對在慢性咽炎方面的研究更為少見。(3)將牛膝用於治療和預防慢性咽炎還停留在經驗水平上，其作用機理尚不明確。以牛膝為原料，具有以下優點
(1)在河南焦作等地，有大面積栽培，即歷史上有名的地道藥材「懷牛膝」。每年秋後採收地下部分，並將地上莖葉部分廢棄。因此，與一般市售清咽功能產品原料相比，牛膝原料豐富易得，原料成本更低。(2)中國傳統醫藥學認為，牛膝性平，適宜人群更廣泛，特異體質者長期食用也不易對身體產生不良影響。在我國衛生部於2002年3月5日公布的《關於進一步規範保健食品原料管理的通知》中，牛膝已經被批准列入「可用於保健食品的物品名單」。因此，安全性較高，無毒副作用。(3)將牛膝作為單方使用，更易於質量控制。本發明涉及牛膝提取物的製備方法及其在清咽功能方面的新用途。取本發明提取物的有效部位，附加常規使用的輔料，按照常規工藝方法，可製成多種劑型的清咽保健食品或是藥品，如清咽保健飲料、清咽保健口香糖、清咽保健糖果製品或是藥用片劑、顆粒劑、軟
膠囊劑等。

發明內容
本發明的目的是提供牛膝有效部位在清咽功能方面的新用途，並公開牛膝提取物有效部位的製備方法。本發明所述的牛膝提取物，是通過以下方法製備將牛膝以極性溶劑室溫提取 3-5次，每次1-3天；將3-5次提取液過濾後合併，常壓濃縮得粗提物浸膏。將粗提物浸膏以蒸餾水溶解，採用石油醚脫脂後，分別用乙酸乙酯、正丁醇依次萃取3-5次，合併正丁醇萃取液，常壓濃縮至無醇味後_70°C冷凍乾燥成凍乾粉，即為牛膝的提取物有效部位。所述的牛膝可取全株植物，包括根、莖、葉和種子，優選地上部分。提取的極性溶劑使用水、醇類，或是水與醇類的混合物。優選的醇包括甲醇、乙醇、 正丁醇或是其混合物，最優選的是乙醇，乙醇濃度為體積比10%-95%。浸提時溶劑量為原料重量的1-15倍。提取可以在靜態或是動態下，優選在靜態條件下。提取溫度從室溫到溶劑回流溫度的範圍內，優選在15°C _35°C的溫度下。提取可連續或間歇進行，間歇提取時可重複3-5次，提取時間是8-72小時，優選為M-觀小時。本發明還公開了上述牛膝提取物在製備清咽類和/或抗炎類的保健食品或藥品中的應用。依據《保健食品檢驗與評價技術規範》(2003)中「清咽功能」的評價方法，通過動物實驗證明，牛膝的該有效部位對慢性炎症模型的大鼠具有顯著的抗炎消腫的作用，可預防慢性炎症類疾病的發生。
具體實施例方式在本發明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。下面結合具體的實施例，並參照數據進一步詳細地描述本發明。應理解，這些實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的範圍。在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。 所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時表明，其後所用相同試劑如無特殊說明，均以首次標明的內容相同。牛膝的該有效部位可以用於各種清咽類和/或抗炎類的保健食品或藥品，使用範圍包括在此主料基礎上，適量添加其它提取物、和/或添加其它原料和/或添加食品添加劑的各種配方。實施例1 牛膝有效部位的製備
選用懷牛膝地上部分包括莖、葉、種子為植物原料，85%的乙醇溶劑在靜態條件下浸提， 浸提時溶劑量為原料重量的1倍，溫度為室溫，間歇提取三次，一次Mh。將上述方法所得的提取液進行合併，過濾。濾液常壓加熱濃縮至無醇味並呈一定體積後，以蒸餾水轉移溶解，通過萃取，得到有效部位。萃取劑分別為石油醚、乙酸乙酯和正丁醇。具體方法為講蒸餾水稀釋轉移液倒入萃取瓶中，先用石油醚脫脂，共3次，合併萃取液；取石油醚萃取水相再以乙酸乙酯進行萃取，共3次，合併萃取水相溶液；再以正丁醇對其進行萃取，共3次，合併正丁醇萃取有機相溶液，常壓加熱濃縮至無溶劑殘留後，入超低溫冰箱-70°C冷凍一晝夜，再進冷凍乾燥機凍幹成粉末，此凍乾粉末即為本發明的有效部位。牛膝提取物清咽保健功效的測定
本發明牛膝有效部位經藥理學試驗實驗證實，具有清咽保健功效，可用於製備具有清咽功效的保健品。以下藥理實驗用於進一步說明但不限於本發明。牛膝有效部位的清咽功效評價實驗 1. 1試驗材料
試驗材料本發明有效部位，置於玻璃乾燥器或冰箱內在陰涼處保存。試驗動物SPF級Wistar大鼠，單一性別，本實驗優選雌性性別，體重150_220g。 共50隻，隨機分5組，每組10隻。試驗環境條件無對流風，屏障系統。溫度為21_27°C，相對溼度為50%士5。樣品處理按《中國藥典》2010年版中藥材及飲片臨床標準修訂內容中牛膝用法用量的推薦量4. 5-9. 0g，分別擴大相應倍數，設牛膝有效部位提取物低、中、高劑量，分別為400mg/kg、800mg/kg、1200mg/kg(大概相當於人體推薦劑量的5、10、15倍)。低、中、高劑量受試液配製時分別按容量ImVlOOgBW的標準配製，配製液使用蒸餾水。主要儀器和試劑遊標卡尺、大鼠灌胃器、瓊脂、解剖手術設備。1. 2試驗方法與結果
1. 2. 1大鼠足趾腫脹試驗(參照《保健食品檢驗與評價技術規範》中「清咽功能」的評價方法)
單一性別雌性大鼠按體重分為5組，分別為空白對照組、陽性對照組和3個受試樣品劑量組。各組分別按lml/100g灌胃量給藥。第一組為空白對照組灌胃給予10ml/kg蒸餾水， 第二組為陽性對照組灌胃給予50mg/kg阿司匹林，第三組為有效部位小劑量組灌胃給予 400mg/kg的活性物質，第四組為有效部位中劑量組灌胃給予800mg/kg的活性物質，第五組為有效部位高劑量組灌胃給予1200mg/kg的活性物質。每日清晨空腹灌胃，晚間禁食12h， 不控制飲水，連續給藥30天，試驗結束當天再給一次受試樣品，1小時後於大鼠右後足趾皮下注入1%瓊脂0. Iml/只，分別在致炎後1、3、5、7小時，測量各鼠足趾部厚度，同一部位測量三次，取平均值。分別比較不同濃度樣品和空白對照組在不同時間點足趾部厚度差異情況，觀察時間不少於30天。任一時間點刺激前後足蹠厚度的差值明顯減少，差異有顯著性， 可判定該受試品動物實驗結果為陽性。試驗結果
經口灌胃給予Wistar大鼠本發明樣品三種不同的濃度30天後，小劑量組即每公斤體重給藥400mg組沒有表現出抗炎消腫的功能，SPSS統計分析的/7值大於0. 05。中劑量組 800mg/kg和高劑量組1200mg/kg灌胃給藥30天後給予致炎劑，分別在1小時、3小時、5小時、7小時時足趾厚度的差值與對空白照組相比差異顯著，經SPSS統計軟體分析，/7 < 0. 01 或/7 < 0. 05，提示該濃度的受試樣品對試驗動物具有清咽功能，且抗炎功效可維持7小時之久。
本發明樣品的三個劑量組與陽性對照組阿司匹林相比較，抗炎效果略低於阿司匹林；且本發明樣品的用藥劑量也高於阿司匹林，但與國藥字號的抗炎藥物相比，從服用安全性或是服用後的毒副作用角度考慮，本樣品的食用安全性遠比阿司匹林要高。小劑量組經SPSS統計軟體分析，ρ值大於0. 05，表明該劑量組的藥物對試驗動物沒有抗炎消腫的影響，抗炎功能不顯著。由此可表明，牛膝提取物的抗炎消腫功效是有一定劑量要求的。大鼠瓊脂肉芽腫實驗(參照《保健食品檢驗與評價技術規範》中「清咽功能」的評價方法)
單一性別雌性大鼠按體重分為5組，分別為空白對照組、陽性對照組和3個受試樣品劑量組。各組分別按lml/100g灌胃容量給藥。第一組為空白對照組灌胃給予10ml/kg蒸餾水，第二組為陽性對照組灌胃給予50mg/kg阿司匹林，第三組為有效部位小劑量組灌胃給予400mg/kg的活性物質，第四組為有效部位中劑量組灌胃給予800mg/kg的活性物質，第五組為有效部位高劑量組灌胃給予1200mg/kg的活性物質。給藥前各大鼠左腋下注射洲瓊脂溶液anl。每日清晨空腹灌胃，晚間禁食12h，不控制飲水，連續給藥30天。末次給藥後lh， 處死動物，剝離出肉芽瓊脂腫塊，稱取溼重，比較各給藥組與空白對照組之間有無統計學差異。實驗組與空白對照組比較，肉芽腫淨量明顯下降，經統計處理差異有顯著性，可判定該受試樣品動物實驗結果陽性。試驗結果
給予致炎劑後，經口灌胃給予Wistar大鼠本發明樣品三種不同的濃度30天後，小劑量組即每公斤體重給藥400mg組沒有表現出抗炎消腫的功能，SPSS統計分析的/7值大於 0. 05。中劑量組800mg/kg和高劑量組1200mg/kg灌胃給藥30天後，實驗組與空白照組相比差異顯著，肉芽腫淨量明顯下降，經SPSS統計軟體分析/7 <0.01，提示該濃度的受試樣品對試驗動物具有清咽功能，且抗炎功效顯著。本發明樣品的三個劑量組與陽性對照組阿司匹林相比較，抗炎效果雖不及阿司匹林，且本發明樣品的用藥劑量也遠遠高於阿司匹林，但與國藥字號的抗炎藥物相比，從服用安全性或是服用後的毒副作用角度考慮，本樣品的食用安全性遠比阿司匹林要高。小劑量組經SPSS統計軟體分析，ρ值大於0. 05，表明該劑量組的藥物對試驗動物沒有抗炎消腫的影響，不具有抗炎功能。由此可表明，牛膝提取物的抗炎消腫功效是有一定劑量要求的。從試驗數據分析可看出，在800mg/kg和1200mg/kg劑量範圍內，本發明樣品的抗炎功能與用藥劑量呈量效正相關關係。2牛膝有效部位的安全性研究 2. 1試驗材料
試驗材料本發明有效部位(詳見實施例1)，置於玻璃乾燥器在陰涼處保存。實驗動物SPF級Wistar大鼠，雌雄各半。試驗環境條件無對流風，屏障系統。溫度為21_27°C，相對溼度為50%士5。2. 2試驗方法與結果 (1)急性毒性
SPF級Wistar大鼠按外來化學物急性毒性分級(WHO)微毒(5000 mg/kg)劑量灌胃給藥。試驗結果
SPF級Wistar大鼠雌雄性均未出現急性中毒症狀，這個劑量換算到人體的可能致死量為> 1000g/60kg，即60kg體重的人每天服用大於IOOOg的量也許會產生微量的毒副作用， 而一般人每天是無法達到這個劑量的，所以認定牛膝提取物的安全性很高，為確保其性狀穩定，我們將繼續進行下一步的亞慢性毒理實驗，以確保其安全性。( 2 )亞慢性毒性試驗(30天餵養)
本發明有效部位(詳見實施例1)，以外來化學物急性毒性分級(WHO)微毒劑量5000mg/ kg的劑量灌胃連續給藥30天。試驗結果
通過30天的餵養實驗後觀察，10隻大鼠(雌雄各半)飲食、活動糞便情況正常，生長發育良好，無一隻出現明顯中毒症狀，也無一隻死亡。大鼠的肝、血液循環系統、腸胃系統、泌尿系統、造血或凝血系統、神經系統、眼、呼吸系統、內分泌系統、生殖系統、骨骼系統、心血管系統、皮膚和肌肉的一般檢查均無異常反應出現，證明牛膝提取物是無毒、副作用的。長期食用也不會對人體產生不良的副作用。實施例2 選用懷牛膝地上部分包括莖、葉、種子為植物原料，甲醇溶劑回流提取， 浸提時溶劑量為原料重量的5倍，溫度為15°C _35°C，間歇提取5次，一次他。將上述方法所得的提取液進行合併，過濾。濾液常壓加熱濃縮至無醇味並呈一定體積後，以蒸餾水轉移溶解，通過萃取，得到有效部位。萃取劑分別為石油醚、乙酸乙酯和正丁醇。具體方法為講蒸餾水稀釋轉移液倒入萃取瓶中，先用石油醚脫脂，共3次，合併萃取液；取石油醚萃取水相再以乙酸乙酯進行萃取，共5次，合併萃取水相溶液；再以正丁醇對其進行萃取，共5次，合併正丁醇萃取有機相溶液，常壓加熱濃縮至無溶劑殘留後，入超低溫冰箱-70°C冷凍一晝夜，再進冷凍乾燥機凍幹成粉末，此凍乾粉末即為本發明的有效部位。清咽功效評價與安全性與實施例1相似。實施例3 與實施例1基本相同，不同之處在於原料用10%的乙醇溶劑在靜態條件下浸提，浸提時溶劑量為原料重量的15倍，溫度為室溫，間歇提取三次，一次48h。實施例4 與實施例1基本相同，不同之處在於原料用95%的乙醇溶劑在靜態條件下浸提，浸提時溶劑量為原料重量的5倍，溫度為室溫，間歇提取三次，一次48h。實施例5 與實施例1基本相同，不同之處在於原料用正丁醇溶劑在靜態條件下浸提，浸提時溶劑量為原料重量的5倍，溫度為室溫，間歇提取三次，一次72h。
權利要求
1.一種牛膝提取物，其特徵在於，由如下方法製成牛膝以極性溶劑室溫提取3-5次， 每次1-3天；將3-5次提取液過濾後合併，常壓濃縮得粗提物浸膏；粗提物浸膏以蒸餾水溶解，採用石油醚脫脂後，分別用乙酸乙酯、正丁醇依次萃取3-5次，合併正丁醇萃取液，常壓濃縮至無醇味後冷凍乾燥為凍乾粉。
2.根據權利要求1所述的牛膝提取物，其特徵在於，所述的極性溶劑為水、甲醇、乙醇、正丁醇或水與醇類的混合物。
3.根據權利要求2所述的牛膝提取物，其特徵在於，所述的極性溶劑是乙醇，乙醇濃度為體積比10%-95%。
4.權利要求1所述牛膝提取物在製備清咽類和/或抗炎類的保健食品或藥品中的應用。
全文摘要
本發明涉及牛膝有效部位及清咽功能方面的新用途。所述牛膝有效部位由如下方法製成牛膝以極性溶劑室溫提取3-5次，每次1-3天；將3-5次提取液過濾後合併，常壓濃縮得粗提物浸膏；粗提物浸膏以蒸餾水溶解，採用石油醚脫脂後，分別用乙酸乙酯、正丁醇依次萃取3-5次，合併正丁醇萃取液，常壓濃縮至無醇味後冷凍乾燥為凍乾粉。本發明根據《保健食品檢驗與評價技術規範》(2003)中「清咽功能」的評價方法，通過動物實驗說明牛膝有效部位對慢性炎症模型的大鼠具有顯著的抗炎消腫作用，可以用來製備預防慢性咽炎或抗炎的保健品或藥物。
文檔編號A61K36/21GK102357108SQ201110308159
公開日2012年2月22日 申請日期2011年10月12日 優先權日2011年10月12日
發明者崔桂友, 潘冬梅 申請人:揚州大學