治療糖尿病藥物的製備方法

2023-07-07 03:39:36

專利名稱：：治療糖尿病藥物的製備方法
技術領域：
：本發明涉及含有的原材料來源於傳統中藥的醫用配置品的製備方法，具體是應用生物酶解技術對原料藥物進行提取的治療糖尿病藥物的製備方法。
背景技術：
：金芪降糖片作為一種純中藥製劑。主要由黃芪、金銀花、黃連等組成，有清熱益氣的功能，用於消渴病氣虛內熱症。黃芪補氣、使脾胃健運，有較好的降血糖作用；金銀花具有清熱解毒、止渴補氣的功效以及提高免疫力、減少膽固醇吸收作用；黃連清熱瀉火去溼熱，消渴，通過抑制糖元異生及促進糖酵解而產生降糖作用，同時有降低血脂的作用。現代藥理實驗已經表明黃芪多糖和黃連中生物鹼具有明顯的降血糖作用，所以金芪降糖片中的多種化學組分從糖代謝、脂質代謝、抗氧化、免疫調節等多個環節，通過整體、細胞、分子等不同水平的作用，改善了機體對胰島素的敏感性並增強機體免疫功能的作用，有益於糖尿病某些微血管併發症的防治。中國專利155954公開了"一種治療糖尿病藥物及其製備方法"，該藥物商品名稱為金芪降糖片。它是以黃連、金芪、金銀花為組方的原料提取工藝，其中黃連直接粉碎入藥；黃芪的提取工藝為50%乙醇提取三次，時間4、2、2小時；金銀花的提取工藝為總量1/6粉碎，5/6水溫浸。中國專利1965929A公開的是"一種治療糖尿病藥物的製備方法"，該藥物商品名稱為金芪降糖片。其是以黃連、黃芪、金銀花為組方的原料提取工藝，其中黃連以50%乙醇提取、純化；黃芪的提取工藝為75%乙醇提取二次，每次提取2小時；金銀花的提取工藝為全部水溫浸、醇沉。但是，在上述原材料來源於植物的醫用配置品製備過程中，由於植物細胞壁中的纖維素、半纖維素、果膠質等物質對植物細胞內有效成分的浸出形成一種屏障，阻礙細胞內成分的擴散，影響植物成分的提取效果，有效成分的浸出率低；而且，臨床用藥劑量大，患者服用不便，甚至造成藥材資源浪費和耗能成本居高。
發明內容本發明就是為了解決藥物原料的提取工藝中，有效成分轉移率低、製劑內在質量有待提高，以及縮小服用劑量的問題，而提供一種治療糖尿病藥物的製備方法。本發明是按以下技術方案實現的。—種治療糖尿病藥物的製備方法，包括按重量份配比的黃連10.3份，黃芪15.4份，金銀花61.8份，分別提取藥物有效成分後，加入24份輔料，製成顆粒，壓製成片，包薄膜衣製成，其藥物有效成分的提取步驟為①黃芪總皂苷提取物的提取步驟a.黃芪加入38倍量pH3.06.0的硫酸水，再加入黃芪用量0.11.0%的纖維素酶，356(TC酶解，收集酶解液；b.酶解液以氫氧化鈉溶液調至pH中性後，加入6080X乙醇回流提取，收集濾液，減壓濃縮；c.濃縮液上大孔吸附樹脂柱以210倍樹脂體積的蒸餾水洗脫，再以510倍樹脂體積的6080%乙醇洗脫，收集乙醇濃縮液；d.於乙醇濃縮液中加入丙酮至無沉澱產生為止，過濾、收集、乾燥沉澱劑，即得黃芪總皂苷提取物；②黃連總生物鹼提取物的提取步驟a.將黃連剪切成段，加入35倍量pHl.05.0的硫酸水，再加入黃連用量0.11.0%的纖維素酶，306(TC溫浸，分別收集酶解液和藥渣；b.藥渣以816倍0.12.0%的硫酸水溶液浸泡，得酸水浸出液；c.將酶解液與酸水浸出液合併、過濾，濃縮；d.以鹽酸調至pHl4，在攪拌下加入食鹽，放置至黃色結晶析出；e.抽濾收集沉澱，蒸餾水洗沉澱至pH46，烘乾，即得黃連總生物鹼；③金銀花提取物的提取步驟a.向金銀花中加入812倍量pH4.06.0的檸檬酸緩衝液，再加入金銀花用量0.12.0%的果膠酶，收集酶解液；b.酶解後金銀花加815倍量水溫浸提取，收集溫浸液；c.將酶解液與溫浸液合併，過濾，6(TC減壓濃縮至相對密度1.101.20;d.於濃縮液中加入24倍量的乙醇，靜置醇沉，過濾，上清液減壓濃縮即得金銀花提取物。所述治療糖尿病藥物的製備方法，向金銀花中加入812倍量pH4.06.0的檸檬酸緩衝液，再加入金銀花用量O.12.0%的複合酶，收集酶解液，其中複合酶是由纖維素酶與果膠酶分別按i:i、i:2、2:i的比例組成。所述治療糖尿病藥物的製備方法，其黃芪總皂苷提取物中的黃芪浸膏收率為1017%，黃芪總皂苷提取轉移率為6588%，其中黃芪甲苷含量佔519%。所述治療糖尿病藥物的製備方法，其黃連總生物鹼提取物中的黃連總生物鹼粗品得率為1025%，黃連總生物鹼提取轉移率為7090%，鹽酸小檗鹼提取轉移率為5090%。所述治療糖尿病藥物的製備方法，其金銀花提取物中金銀花浸膏得率為1540%，綠原酸提取轉移率為5090%。這樣，應用本發明製備的治療糖尿病藥物，其處方組分與劑型不變。由於生物酶解作用能夠將植物組織中的纖維素、半纖維素等分解，破壞植物成分浸出的屏障作用，從而達到提高有效成分轉移率的目的；酶反應具有反應條件溫和、選擇性強、反應效率高等特點。本發明不僅提高有效成分的浸出率，因為降低了提取溫度和縮短提取時間，所以還降低了提取過程中耗能成本。該工藝操作簡單易行，安全性高，更適合工業生產。圖1是黃連總生物鹼的提取流程圖；圖2是黃芪總皂苷的提取流程圖3是金銀花中綠原酸的提取流程圖。具體實施例方式下面結合附圖及實施例對本發明進行詳細的說明。—、處方組成與提取工藝1.1因為本發明是製備工藝改進，所以其處方用藥量保持不變，劑型仍然為片劑。由於所得提取物重量變化致使藥片規格改變，根據實驗結果，以原服用生藥量計算，片重約為0.50克。其組方與工藝如下表。項目現有技術工藝本發明治療糖尿病藥物(金芪降糖片)處方組成黃連IO.3重量份黃甚15.4重量份金銀花61.8重量份黃連IO.3重量份黃甚15.4重量份金銀花61.8重量份黃連粉碎酶解2小時，酸水溶液浸泡2次(24，24小時)黃芪50%乙醇提取3次(4，2，2小時)酶解2小時，70%乙醇提取2次(2，2小時)金銀花總量l/6粉碎，5/6溫浸酶解2小時，全部水溫浸、醇沉服用劑量710片23片1.2本製劑的提取工藝中，黃連具有清熱瀉火去溼熱，消渴等功效，為處方中君藥。藥理實驗證明，黃連中小檗鹼及其生物鹼通過抑制糖元異生及促進糖酵解而產生降糖作用，同時有降低血脂的作用，本研究中以小檗鹼、藥根鹼、巴馬汀含量為考察指標，採用正交實驗法，優選了黃連總生物鹼的提取工藝，同時對酶解的條件也進行了優選。採用了酶解一酸水常溫浸漬法，該方法較原工藝黃連粉劑量大大縮小。小檗鹼及總生物鹼提取率可比單純酸水浸漬法提高2040%。黃芪具有補氣固表，利尿託毒等功效，用於內熱消渴、糖尿病等治療。黃芪中含有黃芪皂苷、黃酮等成分具有改善機體對胰島素的敏感性並增強機體免疫功能、調節血糖等作用。所以，本研究中以黃芪甲苷和黃芪總皂苷為含量指標，採用了正交實驗，優選了酶解與提取工藝條件。新的提取工藝，使黃芪總皂苷的提取率比未加酶的對照組高出3050%。金銀花具有清熱解毒功效，含有的綠原酸、黃酮等物質，現代藥理實驗表明除了抗菌、消炎作用外，還可以降低血脂，保護胰腺B細胞及降血糖作用。因為上述有效成分對熱較敏感，所以考慮降低提取溫度而不降低綠原酸含量的原則。以綠原酸含量為指標，通過正交實驗篩選了酶解與提取條件，由於增加酶解處理步驟，較常規水溫浸法，金銀花中綠原酸得率提高了3050%。通過處方中的金銀花全部採取提取，並結合醇沉的步驟，使得現工藝比原工藝的浸膏收率降低，綠原酸含量提高1550%。上述各藥材均採用了酶輔助提取的方法，減弱了植物細胞對有效成分浸出的屏障作用，不僅提高有效成分的浸出率，因為降低了提取溫度和縮短提取時間，所以還降低了提取耗能成本。該工藝操作簡單易行，安全性高，更適合工業生產。2.1黃連總生物鹼提取物的提取步驟a.將黃連挑選並除去泥土、雜物，烘乾後，適當剪切成段；b.向黃連中加入35倍量、pHl.05.0的硫酸水，再加入纖維素酶，其用量為黃連重量的0.11.0%，於306(TC下溫浸0.54小時，分別收集酶解液和藥渣；c.經酶解處理後的藥渣以0.12.0%的硫酸水溶液浸泡24次，每次1248小時，硫酸水溶液加入量為藥材的816倍，收集酸水浸出液；d.將酶解液與酸水浸出液合併、過濾，將過濾後的提取液濃縮至原體積的1/41/2;e.以鹽酸調pHl4，使硫酸鹽轉為溶解度較小的鹽酸鹽，在攪拌下加入食鹽，其加入量為提取液體積的615%，放置1248小時，至黃色結晶完全析出為止；f.抽濾收集沉澱，用少量蒸餾水洗沉澱至pH46，將洗滌後的沉澱於5080°C下烘乾，即得黃連總生物鹼產品。2.2黃芪總皂苷提取物a.將黃芪根莖原料適當碾壓，加入38倍量、pH3.06.0的硫酸水，再加入纖維素酶，其用量為生藥重量的O.11.0X，於356(TC下酶解0.54小時；b.將上述酶解液以氫氧化鈉調至pH中性後，加入乙醇至含醇量6080%，回流提取2次，每次2小時，過濾，減壓濃縮；c.濃縮液上AB-8或D-101大孔吸附樹脂柱，先以210倍樹脂體積的蒸餾水洗脫糖類等水溶性雜質，再以210倍樹脂體積的6080%乙醇洗脫，收集乙醇液並進行適當濃縮；d.於乙醇濃縮液中加入丙酮至無沉澱產生，過濾、收集乾燥沉澱劑，即得黃芪總皂苷提取物。2.3金銀花提取物(金銀花提取方法1)，以綠原酸為代表成分作為考察工藝的標準，它包括以下步驟a.向銀花中加入812倍量、pH4.06.0的檸檬酸緩衝液，再加入金銀花重量的0.12.0%果膠酶，於306(TC下溫浸0.54小時，收集酶解液；b.酶解後藥材加水於407(TC溫浸提取兩次，每次13小時，加水量為藥材重量的815倍量，收集提取溫浸液；c.將酶解液與溫浸液合併，過濾，6(TC濾液減壓濃縮至相對密度1.101.20;d.上述濃縮液中加入24倍量的乙醇靜置1248小時進行醇沉，過濾，上清液經減壓濃縮、乾燥即得到金銀花的有效部位。2.4金銀花提取物(金銀花提取方法2)，以綠原酸為代表成分作為考察工藝的標準，它包括以下步驟a.向金銀花中加入812倍量、pH4.06.0的檸檬酸緩衝液，再加入金銀花重量的o.11.0%複合酶，所述複合酶是由纖維素酶與果膠酶，分別按1:i、i:2、2:i的比例組成，於306(TC下溫浸0.54小時，收集酶解液；b.酶解後藥材加水於407(TC溫浸提取兩次，每次13小時，加水量為藥材重量的815倍量，收集溫浸液；c.將酶解液與溫浸液合併，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度1.101.20(60°C);d.於上述濃縮液中加入24倍量的乙醇靜置1248小時進行醇沉，過濾，上清液經減壓濃縮、乾燥即得到金銀花的有效部位。二.製劑與質量標準1、製劑本發明中三種藥材均採取提取物的形式成型，其中黃連是以總生物鹼入藥，黃芪總皂苷提取物、金銀花是以浸膏粉的形式壓片，所以選用了流動性強、可壓性好的藥用輔料，以利於片劑的崩解問題。依據文獻與原處方，選用了微晶纖維素、預膠化澱粉、交聯羧甲基纖維素鈉、羧甲基澱粉鈉、硬脂酸鎂等輔料進行配比篩選，確定製劑。稱取按各自重量份配比製備的黃連總生物鹼、黃芪總皂苷提取物、金銀花浸膏粉三者的混合物68重量份，再加入輔料24份，製成顆粒，壓製成片，包薄膜衣，即得。上述輔料是預膠化澱粉0.71.5份，微晶纖維素1.01.8份，交聯羧甲基纖維素鈉0.10.2份，羧甲基澱粉鈉0.10.3份，硬脂酸鎂0.10.2份組成。2、質量標準2.1原料、輔料質量原料、輔料質量按照《中國藥典》2005版標準，金銀花、黃芪原料的質量按照《中國^典》2005版標準，黃連原料的質量以自定HPLC法測定含量，其中黃芪總皂苷選擇紫外法2.2中間體質量標準根據實驗結果，分別進行各原料提取中間過程中黃芪、金銀花浸膏的相對密度、指標有效成分的收率檢測與含量限度檢查。2.3成品質量標準鑑別以鹽酸小檗鹼、鹽酸藥根鹼、鹽酸巴馬汀、綠原酸、黃芪甲苷為對照，對成品做TLC鑑別，與原工藝產品的TLC進行比較，上述檢測成分基本一致。檢查重金屬檢測按照《中國藥典》2005版標準一部附錄檢查。結果5批樣品中鉛含量<5ppm，砷含量〈2ppm，符合常規口服製劑的要求，故該2項未納入常規檢查標準中。含量測定以HPLC法對成品中的黃連、黃芪、金銀花中的指標成分小檗鹼、藥根鹼、巴馬汀、綠原酸、黃芪甲苷的含量進行檢測。黃連，原質量標準的黃連是以生藥粉直接入藥，僅對小檗鹼的含量進行了測定，新工藝中對黃連實行了酸水浸漬，其質量標準也做了相應調整。採用HPLC法分別測定了小檗鹼、藥根鹼、巴馬汀3種生物鹼的的含量，制定的含量限度為每片小檗鹼的含量不小於15mg。黃芪，本發明製備的成品也按照《中國藥典》2005版黃芪藥材的質量標準，採用HPLC法測定黃芪甲苷的含量，在生產的中間過程還對黃芪總皂苷進行了檢測。制定的含量限度為每片黃芪甲苷的含量不小於0.20mg。金銀花，金銀花中綠原酸對熱較敏感，所以在提取工藝考察中儘可能降低溫度，以提高綠原酸的穩定性。本發明製備的成品也按照《中國藥典》2005版金銀花葯材的質量標準，採用HPLC法測定綠原酸的含量，制定的含量限度為每片綠原酸的含量不小於20mg。本發明由於在提取工藝中增加了酶解輔助浸取的過程，有效成分浸出的細胞壁屏障作用減弱，使得提取溫度降低，時間縮短，因此使各味藥材中的指標成分含量均有不同程度的提高，因此，制定成品的質量標準也隨之提高，從而新工藝製劑比原工藝產品的內在質量提高了。三、應用本發明製備的治療糖尿病藥物片劑(金芪降糖片)的藥效學實驗1.兩種工藝製備的金芪降糖片對四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影響1.1四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的建立將昆明種小鼠($早兼用，由人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供，24±2g，許可證號SCXK-軍2002-001)，實驗前在室溫22±2°C、相對溼度65%70%飼養l周，適應環境。然後禁食，不禁水約12h後，尾靜脈注射新配製的四氧嘧啶(Sigma公司，A17413)溶液(1.4mg/mL)，劑量為70mg/kg。於60h後再禁食12h，眼靜脈叢取血，離心分離血清。採用血糖試劑盒(中生北控生物科技有限公司，240181)以葡萄糖氧化酶(GOD)法測血糖值，大於11.lmmol/1為合格的實驗性糖尿病小鼠模型。1.2分組給藥挑選合格的模型小鼠140隻，按血糖值均勻分成10組，每組14隻，分別為本發明(實施例5方法提取)與原工藝金芪降糖片的高劑量組(4.20生藥g/kg)、中劑量組(2.10生藥g/kg)、低劑量組(1.05生藥g/kg)、正常給藥組(2.10生藥g/kg)、正常對照組及模型組(自來水10ml/kg)。另取30片苯乙雙胍(25mg/片)，研碎，以煮沸過的蒸餾水溶解，配成7.5mg/ml的水溶液，作為苯乙雙胍陽性對照組(75mg/kg)、每天灌胃一次，連續給藥14天。1.3血糖測試結果末次給藥後禁食(不禁水)12小時。眼靜脈叢取血，離心分離血清。GOD法測定葡萄糖值，並進行t檢驗，結果見表1、表2。表1本發明金芪降糖片對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖的影響(x士S)組別毅。鬆n(裔w血糖值(咖ol/L)給藥前給藥14天血糖前後變化率(%)本發明低劑量組1024.16±7.56"JV八18.06±6.63*"AA一25.25本發明中劑量組ii23.81±7.2915.43±7.15*"—35.19本發明高劑量組1223.38±8.02"13.95±6.35**AA—40.33模型組923.11±5.28"25.08±6.26"+8.52陽性對照組1123.57±6.21AA14.11±8.26**AA—40.14正常給藥組105.64±1.69**5.08±1.24**一9.93正常對照組105.83±1.53**6.25±2.14**+7.208承與模型組比較p<0.05;林與模型組比較p<0.01;AA與正常對照組比較p<0.01;從表1知，四氧嘧啶糖尿病小鼠各組經本發明金芪降糖片治療14天後，比給藥前空腹血糖相比均有不同程度的下降(-25.25%-40.33%)。給藥後，本發明金芪降糖片各劑量組與模型組比較空腹血糖也顯著降低(P<0.05，P<0.01)，並且各給藥組在降血糖作用上呈現一定的量效關係與時效關係。正常小鼠給藥組同正常對照組及同組給藥前比較均無統計學意義，說明本發明金芪降糖片對正常小鼠的血糖水平不產生影響。表2兩種工藝金芪降糖片對四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的比較(x士S)tableseeoriginaldocumentpage9注*與模型組比較P<0.05;**與模型組比較P<0.01;A本發明金芪降糖片與原工藝金芪降糖片同劑量組比較P<0.05;從表2知，四氧嘧啶糖尿病小鼠各組經給藥後，兩種工藝金芪降糖片各劑量組與模型組比較空腹血糖均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，並且各給藥組在降血糖作用上呈現一定的量效關係與時效關係。兩種工藝金芪降糖片分別在低、中同劑量空腹血糖比較具有顯著性差異(P<0.05)，由血糖值知本發明金芪降糖片在低、中劑量給藥時降血糖效果優於原工藝，而在高劑量時兩種提取工藝的產品對四氧嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖無顯著性差異。2.兩種工藝金芪降糖片對STZ誘導糖尿病大鼠血糖、血脂的影響2.1糖尿病大鼠模型的建立SD雄性大鼠，SPF級，220-240g，由人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供，140-170g，許可證號SCXK-(軍)2002-001。以普通飼料適應性餵養5天，按體重隨機分為正常對照組和造模組。其中正常對照組給予基礎飼料餵養，造模組給予高糖高脂飼料(由天津醫科大學動物實驗中心提供)，連續8周。8周後，禁食、不禁水12h，造模組按30mg/kg劑量一次性靜脈注射，給予小劑量2%鏈脲佐菌素(STZ，Sigma公司，053K3869)溶液，建立2型糖尿病模型。STZ注射一周後，測動物空腹血糖(FBG)，選擇空腹血糖^11.lmmol/L的動物為合格模型動物。2.2分組給藥挑選建模合格的大鼠，按血糖值和體重均勻分成10組。分別為兩種工藝金芪降糖片高劑量(3.6生藥g/kg)、中劑量(1.8g生藥/kg)、低劑量組(0.9g生藥/kg)、鹽酸二甲雙胍(天津中新藥液集團股份有限公司，4105478)陽性對照組(92.5mg/kg)、模型對照組以及正常對照組和正常給藥組，正常對照組給予蒸餾水(10ml/kg)，正常給藥組(1.8g生藥/kg)，每組ll只。以上各組每日灌胃l次，連續灌胃IO周。用藥治療期間各組糖尿病大鼠每日飼以高糖高脂飼料，正常對照組和正常給藥組給予普通飼料。於用藥治療第10周，末次給藥後12h，禁食(不禁水)，眼靜脈叢取血，離心10min後，分離血清分裝於1.5ml離心管中，_201:冰箱冷貯待檢血糖以及血脂等相關生化指標，結果見表3表6。2.3測試結果2.3.1兩種工藝金芪降糖片對實驗性糖尿病大鼠空腹血糖影響利用美國強生OneTouchUltra型血糖儀，分別於給藥前、給藥後4周、6周、8周、IO周后禁食不禁水12h，檢測血糖變化，採用SPSS16.O統計軟體，運用單因素方差分析進行各組間比較，計算數據，結果見表2。從表3知，各組糖尿病大鼠經本發明金芪降糖片治療4周、6周後，高劑量組、陽性對照組與模型組比狡，空腹血糖均有明顯下降(P〈0.05)，至給藥8、10周時，本發明金芪降糖片各劑量組、陽性對照組與模型組比較空腹血糖顯著降低(P<0.Ol，P<0.05)，並且給藥各組在降血糖作用上呈現一定的劑量相關。正常大鼠給藥組同正常對照組相比，以及自身給藥前後比較均無顯著性差異，說明本發明金芪降糖片對正常大鼠的血糖水平影響不明顯。從表4知，各組糖尿病大鼠經本發明金芪降糖片治療4周後，僅高劑量組與模型組比較，空腹血糖均有明顯下降(P<0.05);至給藥8、10周時，本發明金芪降糖片各劑量組、陽性對照組與模型組比較空腹血糖均顯著降低(P<0.01，P〈0.05)，而原工藝金芪降糖片僅中、高劑量與模型組比較，空腹血糖明顯下降(P<0.05，P<0.01);兩種工藝金芪降糖片低劑量空腹血糖比較具有顯著性差異(AP<0.05)，說明本發明金芪降糖片在低、中劑量給藥時降血糖效果優於原工藝，而在高劑量時兩種工藝的產品對高糖、高脂的糖尿病大鼠的空腹血糖無顯著性差異。(寸實驗性糖尿病大鼠空腹血糖影響的比較(x士S)眠o網歐敘呢還細攻違效.頃a亂鄰培亂龍J-s-。尿l糖(TZIOSB〕剖鵬萄降-^芪金〔^《-齒0-銜^瞎^鵬￥瞎瞎鵬扭每試智.1￡*敏賊禍沼與*E媽*h兩表二0,0:v^qq闢匪貨I;15n二Q.OV總qq崩p雜f*一S.0V違；R細勒雜5Y..aas宰眾UBI7d-SBOrf9soz7d4s^snN47-寸"B認-s3iiss5i9K3豕I500K:rf-d-SB!tzlz33*JS39S寶SKVV寸.3WS€Z**i=FS3**S3=_W￡S.1SIZ6崩n霜被堅扭長崩擁霜+豕l扭恃、親擁頃9，豕弒褲盟院敘扭H1tableseeoriginaldocumentpage12*與模型組比較。<0.05;**與模型組比較。<0.01;A本發明金芪降糖片與原工藝金芪降糖片同劑量組比較P<0.05;2.3.2兩種工藝金芪降糖片實驗性糖尿病大鼠的血脂影響按照總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-C)試劑盒(中生北控生物科技有限公司)說明書的具體操作，檢測大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。結果見表5、表6。表5本發明金芪降糖片對實驗性糖尿病大鼠血脂的影響(x士S)tableseeoriginaldocumentpage12*與模型組比較。<0.05;**與模型組比較。<0.01;A與空白對照組比較p<0.05;AA與空白對照組比較p<0.01;由表5知，給藥10周後，本發明金芪降糖片各劑量組的總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)濃度與模型組比較均顯著降低，有顯著性差異(P<0.Ol，P<0.05);並且隨著本發明金芪降糖片劑量的增加，總膽固醇水平的均值呈現逐步降低的趨勢，降血脂作用呈現一定的量效相關性。各給藥組可以部分糾正糖尿病造成的甘油三酯水平異常，使糖尿病大鼠的甘油三酯濃度達到正常大鼠的水平。正常給藥組大鼠同空白對照組比較無顯著性差異，說明本發明金芪降糖片對正常大鼠的總膽固醇和甘油三酯水平影響不明顯。從表5試驗結果知，給藥10周後，本發明金芪降糖片各劑量組的LDL-C濃度與模型組比較均顯著下降，有顯著性差異(P<0.05，P<0.01);隨著本發明金芪降糖片劑量的增加，其LDL-C水平逐步降低。並且本發明金芪降糖片高劑量組LDL-C濃度與空白對照組比較無顯著性差異(P<0.05)，說明本發明金芪降糖片可以糾正糖尿病造成的LDL-C水平異常，使糖尿病大鼠的LDL-C濃度達到正常大鼠的水平。本發明金芪降糖片各劑量組的HDL-C濃度與模型組比較均顯有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，各劑量組升高HDL-C的作用呈現一定的量效相關性。並且本發明金芪降糖片各劑量組HDL-C濃度與空白對照組比較無顯著性差異(P<0.05，P〈0.01)，說明本發明金芪降糖片可以使糖尿病大鼠的HDL-C濃度達到正常大鼠的水平。正常給藥組同空白對照組LDL-C、HDL-C比較均無顯著性差異，說明本發明金芪降糖片對正常大鼠的LDL-C和HDL-C水平影響不明顯。表6兩種工藝金芪降糖片對實驗性糖尿病大鼠血脂的影響的比較(x±S)組別nTC(mmol/UTG(mmol/ULDL-C(mmol/UHDL-C(mmol/U本發明低劑量組104.61±1.23*1.56±0.65承承a0.79±0.24*A0.66±0.19承承a本發明中劑量組104.02±0.63*1.59±0.39**0.61±0.25**0.79±0.21**本發明高劑量組103.86±0.71**1.29±0.45**0.53±0.19**0.86±0.23**模型對照組95.65±0.842.35±0.870.94±0.500.54±0.29原工藝低劑量組94.73±0.81*1.93±0.32*0.89±0.350.56±0.15原工藝中劑量組103.97±0.78**1.64±0.49**0.68±0.28**0.72±0.23**原工藝高劑量組104.04±1.06**1.36±0.58**0.64±0.20**0.89±0.29***與模型組比較p<0.05;**與模型組比較p<0.01;a本發明金芪降糖片與原工藝金芪降糖片同劑量組比較P<0.05;13從表6知，各組糖尿病大鼠經本發明金芪降糖片治療10周後，各劑量組與模型組比較，其TC、TG、LDL-C、HDL-C值均有顯著性差異(P<0.05，P<0.01);而原工藝金芪降糖片各劑量組與模型組比較其TC、TG有顯著性差異(P<0.05，P<0.01);但是LDL-C、HDL-C水平僅中、高劑量與模型組比較有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)。本發明與原工藝金芪降糖片比較，低劑量的TG、LDL-C、HDL-C水平具有顯著性差異(AP<0.05)，而在中、高劑量給藥時兩種工藝提取的產品對糖尿病大鼠的血脂的代謝無顯著性差異。說明本發明金芪降糖片在低劑量給藥時降血脂效果優於原工藝金芪降糖片，也正說明新的提取工藝在提高有效成分的基礎上也顯示較好地降血脂效果。綜上，本發明與原來金芪降糖片對正常小鼠的空腹血糖影響不明顯。兩種工藝下的金芪降糖片均可以降低四氧嘧啶誘發的糖尿病小鼠的血糖值，本發明金芪降糖片在低、中劑量給藥時降血糖效果優於原工藝，而在高劑量時兩種工藝的產品降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖作用相當。兩種工藝金芪降糖片對高脂飼料餵養，並注射鏈脲佐菌素誘導的糖尿病大鼠，通過降低血清TC、TG、LDL-C，升高HDL-C水平，調節血脂的代謝作用，中、高劑量給藥時本發明與原工藝工藝金芪降糖片對糖尿病大鼠的血脂的調節作用相當，在低劑量時本發明金芪降糖片的降血糖與降血脂作用優於原工藝金芪降糖片。研究表明，長期應用該製劑可以明顯抑制糖尿病模型動物的血糖、血脂升高，而對正常機體血糖、血脂無明顯影響。本發明的降血糖製劑與原工藝比較有效成分含量、藥效作用均有所增強，且本發明製劑的劑型縮小，更便於生產保管與臨床服用。四、實施例實施例1:黃芪總皂苷提取物的提取方法。稱取中藥材黃芪lkg，碾壓後剪成23cm長，加入5g纖維素酶，再加入4000mlpH4.5的硫酸水，於45。C酶解2小時，調pH至中性後，加入7000ml乙醇(含醇量約60%)，回流提取兩次，每次2小時。過濾、減壓濃縮至無醇味，加水10000ml到已處理好的AB-8或D101大孔吸附樹脂柱上(約500g樹脂)，以3000ml蒸餾水洗脫糖類等水溶性雜質，以4000ml的80%乙醇洗脫黃芪皂苷，收集洗脫液，濃縮至原體積的1/4後，加入丙酮至無沉澱產生，過濾，乾燥沉澱，即得黃芪總皂苷提取物。經測定，該工藝條件下黃芪的浸膏收率為15%，黃芪總皂苷的提取轉移率為87%，其中黃芪甲苷佔19%。實驗顯示通過酶解輔助提取的黃芪總皂苷比未加酶的對照組高出35%。實施例2:黃連總生物鹼提取物的提取方法。稱取中藥材黃連lkg，剪切成段，長23cm，加入3g纖維素酶，再加入4000mlpH4.5的硫酸水，於35t:酶解2.5小時後，過濾，收集濾液，藥渣再用8倍量、0.3%硫酸水溶液冷浸提取兩次，每次24小時，合併濾液，減壓濃縮至3升，然後以鹽酸調節pHl2，在攪拌下加入溶液體積8%的食鹽進行鹽析，靜置12小時，抽濾，得沉澱物於6(TC下烘乾、研碎，即可得到黃連總生物鹼鹽酸鹽成品。經測定，該工藝條件下黃連鹼提取物收率達到18%，小檗鹼及總生物鹼提取轉移得率分別為85%和87%，與傳統的冷浸法相比，小檗鹼及總生物鹼提取率分別提高了32%和31%。實施例3:金銀花提取物的提取方法1。稱取中藥材金銀花lkg，加入果膠酶5g、p朋.0檸檬酸緩衝液10000ml，於40oC酶解1.5小時後，收集酶解液，再將藥材用水於70oC進行溫浸提取兩次，每次1小時，水的用14量依次為8000ml、6000ml。合併濾液，濃縮至相對密度為1.101.20(60°C)，待溫度降低至室溫，於濃縮液中加入3倍量乙醇，靜置過夜，過濾，減壓濃縮，乾燥即得到金銀花提取物。經測定，金銀花的浸膏得率為20%，綠原酸的提取轉移率達到73%。增加酶解輔助提取工藝方法較常規溫浸法，可使綠原酸得率提高了27%。實施例4:金銀花提取物的提取方法2稱取中藥材金銀花lkg，加入複合酶(纖維素酶果膠酶l:1)2g、pH6.0檸檬酸緩衝液10000ml，於4(TC酶解1.5小時後，收集酶解液，再將藥材用水於70oC進行溫浸提取兩次，每次1小時，水的用量依次為8000ml、6000ml。合併濾液，濃縮至相對密度為1.101.20(60°C)，待溫度降低至室溫，於濃縮液中加入3倍量乙醇，靜置過夜，過濾，減壓濃縮，乾燥即得到金銀花提取物。經測定，金銀花的浸膏得率為24%，綠原酸的提取轉移率達到82%。與傳統溫浸法相比，綠原酸得率提高了34%。實施例5:應用本發明製備的治療糖尿病藥物片劑組分及配比黃連343g、黃芪513g、金銀花2058g、預膠化澱粉65g、微晶纖維素70g、交聯羧甲基纖維素鈉5.5g、羧甲基澱粉鈉9g，硬脂酸鎂2.5g。製備方法1.將黃連挑選並除去泥土、雜物，適當剪切成段，長23cm，於343g黃連中加入4倍量硫酸水(pH4.5)1372ml，再加入黃連重量0.5%的纖維素酶1.715g，於5(TC下溫浸酶解2小時，收集溫浸提取液；於酶解後的藥渣加入12倍量的0.1%的硫酸水浸泡2次，每次24小時，合併酶解液與酸水浸出液、調至中性，過濾，將濾液減壓濃縮至原體積的1/3;以鹽酸調pH2，攪拌下加入濾液體積8%的食鹽，放置12小時，至黃色結晶析出為止，過濾、蒸餾水洗沉澱至pH6，8(TC下烘乾，即得黃連總生物鹼產品。2.將黃芪513g根莖碾壓，加入4倍量、pH5.0的硫酸水2052ml及生藥量1.0%的纖維素酶5.13g，於4(TC下酶解2小時後調至中性，再加入70%乙醇回流提取兩次，每次2小時，收集濾液，減壓濃縮；濃縮液上AB-8或D-lOl大孔吸附樹脂柱，先以5倍樹脂體積的蒸餾水洗，再以5倍樹脂體積的80%乙醇洗脫，收集乙醇液並減壓濃縮至原體積的1/5;加入丙酮至無沉澱產生，過濾、收集沉澱、乾燥，即得黃芪總皂苷提取物。3.於2058g金銀花中加入10倍量、pH5的檸檬酸緩衝液20580ml，再加入金銀花重量的0.2%纖維素酶與果膠酶(1:1)混合物4.116g，5(TC下溫浸2小時，過濾，收集酶解液；再於藥材中分別加10、8倍量水20580ml、16464ml於60。C溫浸提取2次(2，2小時)，收集提取液；合併酶解液與溫浸提取液，過濾，減壓濃縮濾液至相對密度1.101.20(60°C);於上述濃縮液(冷至4(TC)中加入3倍量的乙醇靜置12小時，過濾，上清液經減壓濃縮、乾燥粉碎備用，即得到金銀花的有效部位。取上述3種粉末，加入預膠化澱粉65g，微晶纖維素70g，交聯羧甲基纖維素鈉5.5g，羧甲基澱粉鈉9g，硬脂酸鎂2.5g混合的輔料，制粒，壓製成1000片，包薄膜衣，即得本發明製備的製劑。權利要求一種治療糖尿病藥物的製備方法，包括按重量份配比的黃連10.3份，黃芪15.4份，金銀花61.8份，分別提取藥物有效成分後，加入輔料，製成顆粒，壓製成片，包薄膜衣製成，其特徵在於藥物有效成分的提取步驟為①黃芪總皂苷提取物的提取步驟a.黃芪加入3～8倍量pH3.0～6.0的硫酸水，再加入黃芪用量0.1～1.0％的纖維素酶，35～60℃酶解，收集酶解液；b.酶解液以氫氧化鈉溶液調至pH中性後，加入60～80％乙醇回流提取，收集濾液，減壓濃縮；c.濃縮液上大孔吸附樹脂柱以2～10倍樹脂體積的蒸餾水洗脫，再以5～10倍樹脂體積的60～80％乙醇洗脫，收集乙醇濃縮液；d.於乙醇濃縮液中加入丙酮至無沉澱產生為止，過濾、收集、乾燥沉澱劑，即得黃芪總皂苷提取物；②黃連總生物鹼的提取步驟a.將黃連剪切成段，加入3～5倍量pH1.0～5.0的硫酸水，再加入黃連用量0.1～1.0％的纖維素酶，30～60℃溫浸，分別收集酶解液和藥渣；b.藥渣以8～16倍0.1～2.0％的硫酸水溶液浸泡；得酸水浸出液；c.將酶解液與酸水浸出液合併、過濾，濃縮；d.以鹽酸調至pH1～4，在攪拌下加入食鹽，放置至黃色結晶析出；e.抽濾收集沉澱，蒸餾水洗沉澱至pH4～6，烘乾，即得黃連總生物鹼。③金銀花提取物的提取步驟a.向金銀花中加入8～12倍量pH4.0～6.0的檸檬酸緩衝液，再加入金銀花用量0.1～2.0％的果膠酶，收集酶解液；b.酶解後金銀花加8～15倍量水溫浸提取，收集溫浸液；c.將酶解液與溫浸提取液合併，過濾，60℃減壓濃縮至相對密度1.10～1.20；d.於濃縮液中加入2～4倍量的乙醇，靜置醇沉，過濾，上清液減壓濃縮即得金銀花提取物。2.根據權利要求1所述治療糖尿病藥物的製備方法，其特徵在於向金銀花中加入812倍量pH4.06.0的檸檬酸緩衝液，再加入金銀花用量0.12.0%的複合酶，收集酶解液，其中複合酶是由纖維素酶與果膠酶分別按i:i、i:2、2:i的比例組成。3.根據權利要求1所述治療糖尿病藥物的製備方法，其特徵在於黃芪總皂苷提取物中的黃芪浸膏收率為1017%，黃芪總皂苷提取轉移率為6588%，其中黃芪甲苷含量佔519%。4.根據權利要求1所述治療糖尿病藥物的製備方法，其特徵在於黃連總生物鹼提取物中的黃連總生物鹼粗品得率為1025%，黃連總生物鹼提取轉移率為7090%，鹽酸小檗鹼提取轉移率為5090%。5.根據權利要求1所述治療糖尿病藥物的製備方法，其特徵在於金銀花提取物中金銀花浸膏得率為1540%，綠原酸提取轉移率為5090%。全文摘要本發明公開了一種治療糖尿病藥物的製備方法，屬於含有的原材料來源於傳統中藥的醫用配置品的製備方法。本發明是將黃芪經纖維素酶處理後乙醇回流提取，黃連、金銀花分別經纖維素酶、果膠酶處理後冷浸提取。本發明與傳統的提取方法比較，黃芪總皂苷的提取率提高30～50％，小檗鹼及總生物鹼提取率均可提高20～40％，綠原酸得率分別提高了15～30％、30～50％，本發明提高植物藥材中有效物質的轉移率，能夠充分利用藥材資源。文檔編號A61K36/718GK101695520SQ200910309588公開日2010年4月21日申請日期2009年11月12日優先權日2008年12月30日發明者喬衛,周晶,寧娜,張金紅,楊茉,符敬偉申請人:天津醫科大學;