一種格列苯脲快速檢測卡的製作方法

2023-08-07 19:17:11

專利名稱：一種格列苯脲快速檢測卡的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種格列苯脲快速檢測卡及其檢測方法，是一種檢測格列苯脲的 檢測器具，屬於中藥非法添加西藥成分檢測技術領域。
背景技術：
中成藥中添加西藥成分，一類是合法的，例如消渴丸中加上了格列苯脲，這就使得 療效明顯提高。另一類是非法添加西藥的，說明書中根本就沒有說明其中添加了什麼西藥， 這是最危險的，患者服用不當必然釀成大禍。糖尿病藥品或保健品中最常添加的降糖西藥成分是格列苯脲、格列齊特和格列吡 嗪。格列苯脲又叫優降糖，是一種降糖效果明顯的西藥，但是由於副作用也比較明顯，如果 長期大量服用格列苯脲，最終會造成病人的低血糖和腎病，甚至導致死亡。在臨床上經常會 遇到患者因私自服用過量號稱純中藥的藥物而出現病情加重或惡化的情況。因此，加強對中成藥中非法添加西藥成分的檢測是非常必要的。目前，檢測這些西 藥成分的主要方法有高效液相色譜法及液質聯用等進行定性和定量的分析。這些方法對實 驗儀器設備要求高，操作繁瑣，對操作人員的專業知識要求高，費時費力。因此建立一種準 確可靠又快速方便的檢測中藥中西藥成分的分析方法是非常必要的。本實用新型擬發明一種基於小分子物質格列苯脲偶聯蛋白質後而具有抗原性的 免疫學檢測方法，採取免疫學競爭法的原理，結合膠體金標記技術和免疫層析法設計的一 種快速檢測試劑，可快速特異地檢測降糖中藥樣品中的格列苯脲。根據檢測卡樣品檢測線 (T)和質控線(C)的有無顯色來判定降糖中藥樣品中的格列苯脲含量。反應是利用格列苯 脲蛋白質偶聯物抗原性而建立的一種檢測方法，具有特異性強的優點，可避免其它檢測方 法的假陽性導致的誤檢問題。同時檢測卡操作簡單快速，無需特殊的儀器設備，既可以在實 驗室進行，也可在超市、家庭、車間等實地進行測定。由於樣本量需要少、簡便快速，適用於 大量樣本的篩查。結果準確，靈敏度高，準確率大。
發明內容本實用新型的目的在於提供一種能檢測格列苯脲的檢測器具，直接應用免疫學的 方法檢測降糖中藥樣品中格列苯脲的含量，克服現有色譜法檢測的操作繁瑣等缺點，建立 基於免疫學特異性的檢測方法。本實用新型的技術方案一種格列苯脲快速檢測卡，其為在長條扁平薄殼狀的檢 測卡外殼1中設置測試條2，檢測卡外殼表面有檢測窗孔3和加樣孔4 ；測試條2是由支承 背板5上通過不乾膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜7、硝酸纖維素膜6、和吸水膜9所 組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜9，另一端疊 置粘貼樣品墊8，吸水膜內端與樣品墊內端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸 纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜7 ；膠體金膜為含抗格列苯脲抗體膠 體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質控帶，依次是含格列苯脲蛋白質偶聯物的檢測帶10，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質控帶11，測試條置入檢測卡外殼 內，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。應用免疫學的方法直接檢測樣品中格列苯脲的含量，檢測樣品為膠囊、片劑和藥 丸降糖中藥樣品，處理方法如下(1)隨機採集一定量的待測樣本，粉碎均勻；(2)稱取5g粉碎後的樣品，加入IOmL樣品抽提液，充分攪拌混合5min以上，震蕩 反應30min ；抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸餾水；(3)將步驟(2)所得溶液移入IOmL離心管，4000r/min離心lOmin，取離心後的上 清液；若上清液澄清，則按上清液樣品稀釋液為1 3的比例稀釋，即取上清液100 μ L加 入300 μ L樣品稀釋液，混合均勻後測定；上清液渾濁，則用濾紙過濾，取過濾後的上清液按 上清液100 μ L加入300 μ L樣品稀釋液進行稀釋，混合均勻後測定；樣品稀釋液為ρΗ7. 6、IOmmol PBST溶液；當檢測帶10和質控帶11同時顯現棕紅色印跡，檢測結果為陰性，表示被檢測樣品 中格列苯脲含量未超標。當檢測帶10不顯示顏色，只有質控帶11顯現棕紅色印跡，檢測結果為陽性，表示 被檢測樣品中格列苯脲含量超標。當檢測帶10和質控帶11均不顯色，則表明測試條已失效。本實用新型的有益效果本實用新型的優點是能檢測降糖中藥樣品中含有的格列 苯脲，易於製備且節省檢測費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結果準確。

圖1格列苯脲快速檢測卡外殼及測試條在外殼內的安置圖。1、外殼，2、測試條，3、 檢測窗孔，4、加樣孔。圖2檢測試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測帶， 11、質控帶。圖3格列苯脲快速檢測卡的檢測試條結構示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜， 7、膠體金膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實施方式
本實用新型結合具體實施例參見附圖進一步說明如下實施例1一種格列苯脲快速檢測卡，它是在檢測卡外殼1中設置測試條2，檢測卡外殼1的 結構及測試條2的設置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長70mm，寬20mm， 厚5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料製成。檢測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯接構成，在檢測 卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座內。測試條2是多層結構的窄條薄片，片長約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測試 條2是多層結構底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長60mm，寬4mm ；支 承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長20_25mm，寬4mm。硝酸纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢 測帶10，含格列苯脲蛋白質偶聯物；另一條是質控帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背 板5 —端部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內端 與樣品墊8內端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭 接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜7，膠體金膜7是含抗格列苯脲單克隆抗體膠體金標 記物的玻璃纖維膜。膠體金膜7厚0. 5-0. 8mm,長5_，寬4_。樣品墊8厚0. 5-0. 8mm,長 20mm,寬4_。吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,長16-20_，寬4_。膠體金膜7、樣品墊8及吸水膜 9與硝酸纖維素膜搭接長度為l_2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖 維膜。本實用新型格列苯脲檢測卡用於檢測降糖中藥樣品中的格列苯脲的檢測。實施例2使用格列苯脲快速檢測卡進行檢測時，先將待檢測的樣品液從加樣孔4中滴注入 格列苯脲快速檢測卡的樣品墊8上，由於虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜7 所含的抗格列苯脲單克隆抗體膠體金標記物一起向硝酸纖維素膜6擴散，5-10分鐘內觀察結果。應用免疫學的方法直接檢測樣品中格列苯脲的含量，檢測樣品為膠囊、片劑和藥 丸降糖中藥樣品，處理方法如下(1)隨機採集一定量的待測樣本，粉碎均勻；(2)稱取5g粉碎後的樣品，加入IOmL樣品抽提液，充分攪拌混合5min以上，震蕩 反應30min ；抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸餾水；(3)將步驟(2)所得溶液移入IOmL離心管，4000r/min離心lOmin，取離心後的上 清液；若上清液澄清，則按上清液樣品稀釋液為1 3的比例稀釋，即取上清液100 μ L加 入300 μ L樣品稀釋液，混合均勻後測定；上清液渾濁，則用濾紙過濾，取過濾後的上清液按 上清液100 μ L加入300 μ L樣品稀釋液進行稀釋，混合均勻後測定；樣品稀釋液為ρΗ7. 6、IOmmol PBST溶液。檢測卡的主要反應是免疫學的抗原和抗體反應，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金 標記的抗體，在測試帶上分別與含格列苯脲蛋白質偶聯物，以及質控帶抗兔抗體或抗鼠抗 體反應，形成棕紅色條帶。若樣品中有待檢格列苯脲存在，當樣品加入後即與抗體發生反 應，而不會與檢測帶所含的格列苯脲蛋白質偶聯物反應，從而不顯色。主要反應的結果有以 下3種情況1、當檢測帶10和質控帶11同時顯現棕紅色印跡，表示檢測結果為陰性，說明被檢 測樣品中格列苯脲含量未超標；2、當檢測帶10不顯示顏色，只有質控帶11顯現棕紅色印跡，檢測結果為陽性，說 明被檢測樣品中格列苯脲含量超標；3、當檢測帶10和質控帶12均不顯色，則表明檢測試條已失效。
權利要求1. 一種格列苯脲快速檢測卡，其特徵在於在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼(1)中設 置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4);測試條(2)是由支承背板(5) 上通過不乾膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9) 所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另 一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內端與樣品墊內端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品 墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜(7);硝酸纖維素膜上有一條 檢測帶和一條質控帶，依次是含格列苯脲蛋白質偶聯物的檢測帶(10)，含抗兔抗體或抗 鼠抗體的質控帶(11)，測試條置入檢測卡外殼內，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢 測窗孔。
專利摘要一種格列苯脲快速檢測卡，屬於中成藥中非法添加西藥成分檢測技術領域。本實用新型格列苯脲快速檢測卡外殼內有測試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗格列苯脲單克隆抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條檢測帶，一條為含格列苯脲蛋白質偶聯物的檢測帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質控帶。本實用新型優點是應用免疫學的方法直接檢測降糖中藥樣品中非法添加的格列苯脲的含量。本實用新型格列苯脲快速檢測卡易於製備，使用方便快速，結果準確。
文檔編號G01N33/558GK201909787SQ20102067760
公開日2011年7月27日 申請日期2010年12月24日 優先權日2010年12月24日
發明者吳文曄, 周堅, 熊曉芳 申請人:無錫安迪生物工程有限公司