一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的製備方法

2023-05-27 18:03:41

一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的製備方法，所述製備方法包括以下步驟：(1)向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液，隔日注射一次，共注射2～4次使豚鼠致敏；(2)在步驟(1)末次致敏後第12～15天，使豚鼠經由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液，從而激發氣道過敏性哮喘，即得。與現有方法比，本發明所述製備方法模擬霧化吸入給藥，模擬鼻腔給藥的吸入製劑，靶器官唯一，針對性強，而普通豚鼠靜脈注射激發過敏試驗無法預測呼吸道吸入藥物是否引起過敏。實驗證明該製備方法致敏效果良好，以僅經口鼻吸入霧化的OVA生理鹽水溶液為途徑進行致敏激發，成功地建立了豚鼠氣道過敏性哮喘模型。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明屬生物醫學領域，具體涉及一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的製備方法。 一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的製備方法

【背景技術】
[0002] 目前，隨著對肺疾病和呼吸功能的了解愈發深入，鼻腔給藥的應用範圍逐漸擴大， 各類吸入製劑作為行之有效的治療手段也越來越受重視。定量吸入氣霧劑因具有靶向和局 部給藥的特點，已成為哮喘和慢性阻塞性肺病最有效的維持治療方式。而哮喘本身對呼吸 道過敏及其敏感，判斷吸入藥物是否對患者具有過敏性非常重要。
[0003] 通常採用低劑量卵白蛋白（0VA)構建豚鼠過敏性哮喘模型，致敏階段：哮喘模型 組在腹腔注射3mg/mL卵白蛋白生理鹽水加氫氧化鋁（粉劑）作為免疫佐劑致敏，分3次反 復致敏；末次致敏後14天通過靜脈注射卵白蛋白，激發後即刻起至少觀察30分鐘，觀察豚 鼠過敏徵狀。該方法可出現過敏反應徵狀，但無法模擬鼻部吸入給藥時，靶器官為呼吸道的 過敏性哮喘，具有局限性。


【發明內容】

[0004] 本發明針對目前缺乏豚鼠氣道過敏性哮喘模型這一臨床上常見疾病的疾病動物 模型的現狀，提供用於一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的製備方法。
[0005] 為解決上述技術問題，本發明採取的技術方案之一為：一種豚鼠氣道過敏性哮喘 模型的製備方法，所述製備方法包括以下步驟：
[0006] (1)向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液，隔日注射一次，共注射2?4次使豚 鼠致敏；
[0007] (2)在步驟⑴末次致敏後第12?15天，使豚鼠經由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生 理鹽水溶液，從而激發氣道過敏性哮喘，即得。
[0008] 其中步驟（1)所述的注射為本領域常規的注射方法，較佳地為腹腔注射。其中所 述卵白蛋白生理鹽水溶液的濃度較佳地為2?5mg/ml，優選地為3mg/ml。
[0009] 其中步驟（1)所述的卵白蛋白生理鹽水溶液的注射的劑量較佳地為2?5ml/kg， 優選地為3ml/kg。
[0010] 其中步驟（1)所述向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液，隔日注射一次的方法 較佳地為：在豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液的第一天，第三天和第五天，共注射三次 卵白蛋白生理鹽水溶液。
[0011] 其中步驟⑵所述的霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液濃度較佳地為4?7mg/ml，優 選地為5mg/ml。
[0012] 其中步驟（2)所述的霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液的流速較佳地為2. 0?3. 0升 /分，優選地為2. 5升/分。
[0013] 其中步驟⑵所述使豚鼠經由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液的方法為 本領域常規方法，較佳地是利用ΙΝ-Τ0Χ小動物鼻式暴露系統使豚鼠經由口鼻吸入霧化的 卵白蛋白生理鹽水溶液。
[0014] 其中步驟（2)所述的豚鼠經由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生理鹽水溶液的時間較 佳地為15?25分鐘，優選地為20分鐘。
[0015] 在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發
[0016] 明各較佳實例。
[0017] 本發明所用試劑和原料均市售可得。
[0018] 本發明的積極進步效果在於：與現有方法比，本方法模擬霧化吸入給藥，模擬鼻腔 給藥的吸入製劑，靶器官唯一，針對性強，選擇性強、重複性好。而且普通豚鼠靜脈注射激發 過敏試驗無法預測呼吸道吸入藥物是否引起過敏。實驗證明致敏效果良好，以僅經鼻霧化 吸入0VA為途徑進行致敏激發，成功地誘發了氣道過敏性哮喘，成功建立了豚鼠氣道過敏 性哮喘模型。

【具體實施方式】
[0019] 下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但並不因此將本發明限制在所述的實 施例範圍之中。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0020] 實施例1製備豚鼠氣道過敏性哮喘模型
[0021] 實驗動物：採用豚鼠12隻，雌雄各半。Hartley-Dunkin，SPF級，體重300?360g, 購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。
[0022] 實驗用卵白蛋白（0VA)購買自SIGMA公司。
[0023] 飼養環境為：溫度：20?26°C;溼度：40%?70%;換氣次數：每小時換氣次數不小 於15次，使用100%的全新風（無空氣循環）。光照：自動光照，每12小時明暗交替，7:00ΡΜ 關燈，次日7:00AM開燈。
[0024] 豚鼠氣道過敏性哮喘模型製備方法主要分為致敏期和激發期兩個階段。
[0025] 致敏期為：豚鼠腹腔注射3mg/ml 0VA生理鹽水溶液3ml/kg致敏，隔日注射1次， 給藥時間為Dl、D3和D5天，共給藥3次。
[0026] 激發期為：上述末次致敏後第14天（D19)，單次霧化給藥激發：將豚鼠置入 ΙΝ-Τ0Χ小動物鼻式暴露系統的動物試管，將動物試管插入暴露艙內。吸入霧化的0VA生理 鹽水溶液（0VA生理鹽水溶液的濃度為5mg/ml)進行攻擊，吸入霧化的0VA生理鹽水溶液的 時間為20min。
[0027] 激發途徑為吸入霧化的OVA生理鹽水溶液。設定霧化生理鹽水溶液的流速：按照 豚鼠的最小呼吸量，一次暴露6隻動物，設定流速為2. 5升/分。運用ΙΝ-Τ0Χ鼻式暴露系統， 動物在暴露試管內，僅有口鼻接觸藥物，能最大程度上模擬臨床上吸入藥物的給藥途徑。將 實驗動物分為兩組，其中組1為陰性對照組，組2為0VA激發組。
[0028] 所得結果為：致敏期各組豚鼠均無異常表現。激發期：激發後立即觀察動物表現， 觀察有無出現顫抖、堅毛、呼吸困難、步態不穩、痙攣、休克以及死亡等反應徵狀，按表1的 標準對過敏反應的強度進行判斷。致敏期間每日2次進行動物的一般觀察，上、下午各1次 (致敏給藥當天給藥前、後各1次）；激發後即刻起至少觀察30分鐘，觀察以下徵狀，徵狀 0-20為：0、正常；1、躁動；2、堅毛；3、顫抖；4、搔鼻；5、噴嚏；6、咳嗽；7、呼吸急促；8、排尿； 9、排糞；10、流淚；11、呼吸困難；12、哮鳴音；13、紫癜；14、步態不穩；15、跳躍；16、喘息； 17、痙攣；18、橫轉；19、潮式呼吸；20、死亡。若出現以上症狀，記錄出現及消失時間，觀察最 長不超過3小時。根據表1判斷過敏反應發生程度。
[0029] 表1豚鼠全身致敏性標準
[0030]

【權利要求】
1. 一種豚鼠氣道過敏性哮喘模型的製備方法，其特徵在於，所述製備方法包括以下步 驟： (1) 向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液，隔日注射一次，共注射2?4次使豚鼠致 敏； (2) 在步驟（1)末次致敏後第12?15天，使豚鼠經由口鼻吸入霧化的卵白蛋白生理鹽 水溶液，從而激發氣道過敏性哮喘，即得。
2. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（1)所述卵白蛋白生理鹽水溶液的 濃度為2?5mg/ml。
3. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（1)所述卵白蛋白生理鹽水溶液的 濃度為3mg/ml。
4. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（1)所述卵白蛋白生理鹽水溶液的 注射的劑量為2?5ml/kg。
5. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（1)所述卵白蛋白生理鹽水溶液的 注射的劑量為3ml/kg。
6. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（2)所述的霧化的卵白蛋白生理鹽 水溶液的濃度為4?7mg/ml。
7. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（2)所述的霧化的卵白蛋白生理鹽 水溶液的流速為2. 0?3. 0升/分。
8. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（2)所述的使豚鼠經由口鼻吸入霧 化的卵白蛋白生理鹽水溶液的方法是利用IN-TOX小動物鼻式暴露系統給予豚鼠霧化的卵 白蛋白生理鹽水溶液。
9. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（2)所述的豚鼠經由口鼻吸入霧化 的卵白蛋白生理鹽水溶液的時間為15?25分鐘。
10. 如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟（2)所述的豚鼠經由口鼻吸入霧 化的卵白蛋白生理鹽水溶液的時間為20分鐘。
【文檔編號】A61K38/38GK104096220SQ201410328516
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月10日 優先權日:2014年7月10日
【發明者】馬璟, 李華, 胡天羽, 史民華, 劉毅, 黃歡夏, 南雅萍 申請人:上海益諾思生物技術有限公司