五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途的製作方法
2023-05-29 11:03:21 1
專利名稱：五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及一種五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途。
背景技術：
五倍子為同翅目蚜蟲科的角倍蚜或倍蛋蚜雌蟲寄生於漆樹科植物「鹽膚木」及其同屬其他植物的嫩葉或葉柄，而生成的蟲癭，經烘倍乾燥後所得。其味酸、澀，性寒。歸肺、 大腸、腎經。具有斂肺、止汗、澀腸、固精、止血、解毒的功效。中醫常將五倍子用於治療肺虛久咳、自汗盜汗、久痢久瀉、脫肛、遺精、白濁、各種出血、癰腫瘡癤等症。現代藥理研究顯示， 五倍子具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗癌等藥理作用。雖然亦有五倍子體外抗植物及魚類真菌作用的報導，但未見五倍子作用於人的深部真菌，及與抗真菌藥物聯合使用治療真菌病的報導。
發明內容
本發明的目的在於提供一種五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途。體外細胞實驗表明，五倍子對各種臨床真菌菌株如白念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平念珠菌、新生隱球菌具有抑制活性。當抗真菌藥物氟康唑和五倍子合用時，能明顯降低抗真菌藥物的用藥劑量，並增強對耐藥真菌的抑制作用，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用。因此可將五倍子用作抗真菌治療及抗真菌藥物的增效劑。本發明提出一種五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途。其中 所述五倍子的藥材原料為同翅目蚜蟲科的角倍蚜或倍蛋蚜雌蟲寄生於漆樹科植物「鹽膚木」及其同屬其他植物的嫩葉或葉柄，而生成的蟲癭。本發明中，所述五倍子是五倍子藥材水提物或乙醇提取物的一種。本發明中，所述的乙醇提取是指用75%乙醇提取。本發明中，所述的抗真菌藥物中的真菌包括1)敏感菌株敏感白色念珠菌 (SC5314)，近平滑念珠菌(22019)，新生隱球菌；2)耐藥菌株耐藥白色念珠菌(103)，耐藥熱帶念珠菌，天然耐藥克柔念珠菌(ATCC2340)，天然耐藥光滑念珠菌(ATCC2^1 )。本發明中，所述的耐藥菌株是對氟康唑耐受，敏感菌株是對氟康唑敏感。本發明中，所述的抗真菌藥物包括1)多烯類藥物如兩性黴素B、甲帕黴素等；2) 唑類藥物如氟康唑、咪康唑、酮康唑、伊曲康唑等；3)其他藥物如5-氟胞嘧啶、卡泊芬淨寸。本發明為五倍子開闢了新的用途，將其用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物的增效劑，不僅為真菌治療提供了新的候選藥物，而且提高了現有藥物的抗真菌作用，在臨床真菌耐藥性日趨普遍、耐藥程度日趨嚴重的情況下，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用，降低了抗真菌藥物的用藥劑量，從而為患者節省了醫療費用，減少藥物的毒副作用。
具體實施例方式以下所列實施例，僅為幫助本領域技術人員更全面理解本發明，但不以任何方式限制本發明。實施例1.五倍子對不同臨床真菌株的作用材料和方法
1.試藥
五倍子藥材購於上海雷允上北區藥品零售有限公司。氟康唑sigma公司，批號 460M4707V。二甲亞碸上海世儀生物科技有限公司。各試藥置於-20°C保存。實驗前，將藥物取出置於35°C溫箱融化，充分混勻，分別進行藥效學檢驗。2.菌株
臨床株1)白念珠菌，分103、SC5314兩株；2)熱帶念珠菌2718，1株；3)光滑念珠菌 ATCC1182，1株；4)克柔念珠菌ATCC2340,1株；5)近平念珠菌ATCC22019,1株；6)新生隱球菌，1株。光滑念珠菌和克柔念珠菌由安徽中醫學院汪長中教授惠贈，其餘均由上海長海醫院真菌室提供，分別採自長海醫院不同科室臨床樣本，並經形態學和生化學鑑定。所有實驗用菌株均於沙堡葡萄糖瓊脂培養基(SDA)劃板活化，白念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平念珠菌、新生隱球菌等球狀菌於30°C培養2周後，分別挑取單克隆再次劃板活化，取第二次所得單克隆置SDA斜面，用上述方法培養後於4°C保存備用。3.培養液
1) RPMI 1640液體培養液
RPMI1640 (Gibco BRL)10 g,NaHCO3 2.0 g，嗎啡啉丙磺酸(Sigma)34.5 g(0. 165 Μ), 加三蒸水900 ml溶解，1 N NaOH調pH至7. 0 (25°C )，三蒸水定容至1000 ml，0. 22Mm微孔濾膜過濾除菌，分裝後於4°C保存備用。2)沙堡葡萄糖瓊脂固體培養基(SDA)
蛋白腖10 g，葡萄糖40 g，瓊脂18 g，加三蒸水900 ml溶解，加入2 mg/ml氯黴素水溶液50 ml，調整pH至7.0，以三蒸水定容至1000 ml，高壓滅菌(121°C，15min)後於4°C保存備用。3 ) YEPD 培養液
酵母浸膏10 g，蛋白腖20 g，葡萄糖20 g，加三蒸水900 ml溶解，加入2 mg/ml氯黴素水溶液50 ml，三蒸水定容至1000 ml，高壓滅菌(121°C，15min)後於4°C保存備用。4.儀器設備
Multiskan MK3型酶標檢測儀(芬蘭Labsystems產品) 隔水式電熱恆溫培養箱(上海躍進醫療器械廠) THZ - 82A臺式恆溫振蕩器(上海躍進醫療器械廠) Sff-CT-IF型超淨化工作檯(蘇州安泰空氣技術有限公司) 5.五倍子提取物的製備
將五倍子果實粉碎後，過60目篩，以1 :20比例，用75%乙醇，85°C回流提取2h，溶液紗布過濾後，50°C減壓回收乙醇，再於50°C烘箱烘乾，粉碎成粉末，用DMSO溶解，配成濃度 0. 5g/ml (按生藥量計算)，分裝後於-20°C保存備用。6.菌液製備
實驗前，用接種圈從4°C保存的SDA培養基上分別挑取白念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平念珠菌、新生隱球菌各球狀菌少量，分別接種至1 ml YEPD培養液， 於30°C，200 rpm振蕩培養，活化16 h，使真菌處於指數生長期後期。然後將各菌液分別加至1 mlYEPD培養液中，用上述方法再次活化，培養16 h，用血細胞計數板計數，以RPMI 1640培養液分別調整各菌液濃度至1 X IO3 5X 103CFU/ml。7.藥敏板製備
各菌株分別取無菌96孔板一塊，於每排1號孔加RPMI 1640液體培養基ΙΟΟμΙ作空白對照；3 12號孔各加上述新鮮配製的菌液ΙΟΟμΙ ；2號孔加菌液198μ1 ；12號孔不含藥物， 只加菌液ΙΟΟμΙ作陽性生長對照。在每排的2號孔加母液濃度為0. 5g/ml的五倍子或氟康唑各2μ1。對2 11號孔進行10級倍比稀釋，使各孔的最終五倍子藥物濃度分別為5000、 2500、1250、625、312. 5,156. 25,78. 125,39. 06,19. 53,9. 76μδ/πι1,氟康唑的藥物濃度分別為 64、32、16、8、4、2、1、0· 5、0· 25、0· 125Pg/ml。各孔中 DMSO 含量均低於 1%。將各藥敏板於30°C恆溫箱培養。8. MIC80 值判定
在30°C恆溫箱中，念珠菌培養對h，新生隱球菌培養72h，用酶標分析儀於630 nm測各孔OD值。與陽性對照孔比，以OD值下降80%以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC8tl (真菌生長80%被抑制時的藥物濃度)。當藥物的MIC8tl值超過測定濃度範圍時，按以下方法進行統計如以氟康唑為例，MIC8tl值高於最高濃度64Pg/ml時，計為「>64Pg/ml 」 ； MIC8tl值為最低濃度或在最低濃度以下時，不作區別，均計為「彡0. 125Pg/ml」。上述實驗均平行操作2到3次，當MIC8tl值能準確重複或只差一個濃度時才被接受，並以較高濃度作為MIC8tl值；當MIC8q值相差兩個濃度以上時，則需重新實驗，直到符合要求為止。實驗結果見表1
表1五倍子對7株臨床真菌的MIC8tl值(μ g/ml)
權利要求
1.一種五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途，其特徵在於，所述的五倍子的藥材原料為同翅目蚜蟲科的角倍蚜或倍蛋蚜雌蟲寄生於漆樹科植物「鹽膚木」及其同屬其他植物的嫩葉或葉柄，而生成的蟲癭。
2.根據權利要求1所述的五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途，其特徵在於，所述的五倍子是五倍子藥材水提物或乙醇提取物的一種。
3.根據權利要求2所述的五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途，其特徵在於，所述的乙醇提取是指用75%乙醇提取。
4.根據權利要求1所述的五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途，其特徵在於，所述的抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑中涉及到的的真菌包括敏感菌株、耐藥菌株。
5.根據權利要求4所述的五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途，其特徵在於，所述的耐藥菌株是對氟康唑耐受，敏感菌株是對氟康唑敏感。
6.根據權利要求1所述的五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途，其特徵在於，所述的抗真菌藥物包括多烯類藥物、唑類藥物、5-氟胞嘧啶或卡泊芬淨。
全文摘要
本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及一種五倍子用於製備抗真菌藥物及抗真菌藥物增效劑的用途。體外實驗表明，五倍子對真菌感染有較好的治療效果，並能使抗真菌藥物氟康唑恢復對耐藥真菌的作用，因此五倍子可用作抗真菌治療及抗真菌藥物的增效劑。本發明為五倍子開闢了新的用途，將其用於抗真菌藥物及抗真菌藥物的增效劑，不僅為真菌治療提供了新的候選藥物，而且提高了現有藥物的抗真菌作用，在臨床真菌耐藥性日趨普遍、耐藥程度日趨嚴重的情況下，使抗真菌藥物恢復對耐藥真菌的作用，降低了抗真菌藥物的用藥劑量，從而為患者節省了醫療費用，減少藥物的毒副作用。
文檔編號A61P31/10GK102526117SQ20121002480
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月6日 優先權日2012年2月6日
發明者劉偉, 姜遠英, 安毛毛, 張軍東, 慎慧, 陳思敏 申請人:同濟大學