一種甾體激素複方片劑的檢測方法

2023-06-06 09:50:06 2

專利名稱：：一種甾體激素複方片劑的檢測方法
技術領域：
：本發明涉及一種藥物製劑的檢測方法，特別是一種甾體激素複方片劑有效成分的檢測方法。
背景技術：
：地諾孕素(dienogest，CAS:65928-58-7)化學式如下圖formulaseeoriginaldocumentpage4dienogest地諾孕素是一種混和性孕激素，它具有19-去甲睪丸酮衍生物和孕酮衍生物的職重性質，並且兼具獨特的藥效學和藥動學性質。地諾孕素的內分泌藥理學非常理想，它因僅結合於孕激素受體，故無雌激素、抗雌激素和雄激素活性，抗促性腺激素作用(抑制促卵泡激素和黃體激素的分泌)亦很弱。戊酸雌二醇(estradiolvalerate,CAS:979-32-8)分子式如下formulaseeoriginaldocumentpage4、estradiolvalerate'戊酸雌二醇是天然雌二醇的戊酸鹽，具有天然雌二醇的藥理作用，廣泛適用於各種需要補充雌激素的症狀。Schring公司生產的地諾孕素與戊酸雌二醇複方片劑己於2001年在歐洲上市，商品名Climodien，規格為每片含有2mg地諾孕素與2mg戊酸雌二醇，用於治療更年期綜合症。然而對該地諾孕素與戊酸雌二醇複方片劑中兩種有效成分的檢測方法卻並未一同公開。在研製國產地諾孕素與戊酸雌二醇複方片劑的過程中，我們遇到了無法快速高效的檢測製得的複方片劑中有效成分含量的問題。現有技術中，Wehrberger,K.等((Centralinst.Microbiol.Exp.Therapy,Ger.Acad.Sci.，JenaGDR-6900,Ger.Dem.Rep.).Anal.Chem.Symp.Ser.,23(Adv.SteroidAnal.'84),511-18(English)1985)公丌了對地諾孕素利用HPLC進行分析的方法，色譜條件採用LichrosorbRP-18固定相色譜柱，，以甲醇-水(55:45)作為流動相，然而該文獻中並未公開色譜分析時使用檢測波長，並且我們發現在該條件下雖然兩者能夠分離，但戊酸雌二醇的出峰時間過晚，超過了60min，使儀器的利用效率大為降低。姜麗霞(高效液相色譜法測定複方戊酸雌二醇片中戊酸雌二醇和炔諾酮含量，浙江省醫學科學院學報，2000年12月；21-21，29)公開了用HPLC在氰基固定相色譜柱上測定複方戊酸雌二醇片中戊酸雌二醇和炔諾酮含量的方法，色譜條件為色譜柱選用ZORBAXCN(5um，4.6mmX250mm)，流動相為乙腈水(47:53)，流速為1.0ml/min，檢測波長為280nm，AUFS(absorbanceunitsfullscale,滿量程的吸光度單位)為0.32，檢測溫度為室溫，進樣量15pL，採用內標法定量，黃體酮為對照品。經過實驗我們發現，與戊酸雌二醇的吸收度相比，地諾孕素在該方法的檢測波長下吸收度過低，並且用該方法在檢測地諾孕素與戊酸雌二醇複方片時我們發現該方法在測定該片劑的有關物質含量時，部分有關物質不能有效檢出。陳宗岱等(用高效液相色譜法測定複方己酸孕酮注射液中兩組分的含量，藥物分析雜誌14(6)1994;10-12)公開了利用HPLC測定複方己酸孕酮注射液中戊酸雌二醇和己酸孕酮的方法，色譜條件為色譜柱採用PORASIL10um3.9mmX30cm，流動相為正己烷-異丙醇(91:9)，流速為0.6ml/min，檢測波長採用280nm，當我們用該文獻色譜分析條件用來分析地諾孕素與戊酸雌二醇複方片劑時，卻發現，除了吸收度過低外，由於地諾孕素中具有強極性的氰基集團，在該條件下地諾孕素的出峰時間過長，嚴重影響了分析工作的效率，使得該方法的實用性很差。
發明內容為克服現有技術中的上述缺陷，實現用高效液相色譜法測定地諾孕素與戊酸雌二醇複方片劑中活性成分以及有關物質的目的，本發明提供了一種用高效液相色譜法檢測地諾孕素與戊酸雌二醇複方片中活性成分含量的技術方案，其特徵是所述的分析條件如下所用的流動相為乙腈水二70:3050:50(體積比)所用的色譜柱為採用氰基鍵合矽膠為填料的色譜柱檢測波長為205225nm檢測溫度為2040。C，優選在室溫下檢測(2030°C)操作方法為，精密稱取片粉適量，用流動相配製成樣品濃度(以戊酸雌二醇計)為10500ug/ml的溶液，量取550uL的溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。如上所述的分析方法，其特徵是優選所用的流動相為乙腈水=60:40(體積比)；用流動相配製成的樣品溶液濃度為1050ug/ml;進樣量為1050uL。流速為0.61.5ml/min其中，特別優選進樣量為20"L。流速為lml/min用流動相配製成的樣品溶液濃度(以戊酸雌二醇計)為40ug/ml;更進一步地，本發明還提供了一種公開了一種用高效液相色譜法同時檢測地諾孕素與戊酸雌二醇複方片有效成分含量和有關物質含量的技術方案，其特徵是於所述的分析條件如下:所用的流動相為乙腈與水混和溶媒流動相，採用梯度淋洗方法，梯度程序見下表tableseeoriginaldocumentpage501030406070102570802030253030406070303530406070所用的色譜柱為採用氰基鍵合矽膠為填料的色譜柱檢測波長為205225nm操作方法為，精密稱取樣品片粉適量，用流動相配製成濃度(以戊酸雌二醇計)為100500yg/ml的溶液，量取1050uL的溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。如上所述的分析方法，其特徵是梯度程序優選時間(min)乙腈％(v/v)水％(v/v)0103070102580202530307030353070優選樣品溶液濃度(以戊酸雌二醇計)為200ug/ml;色譜儀進樣量為20"L。在確定本發明技術方案所用的檢測波長，我們分別對戊酸雌二醇和地諾孕素進行了紫外-可見吸收光譜的檢測(見圖1和圖2)，根據現有技術，應選取吸收度大的波長作為檢測波長。從光譜圖中可以看出，在現有技術中使用的280nm波長下，地諾孕素的吸收度幾乎為零，如果使用該波長進行檢測，則地諾孕素基本無法檢出。而通過分析譜圖，我們發現在205220nm的波長下，兩種有效成分吸收度基本相同，因此在使用該波長範圍作為檢測波長時，兩種有效成分的校正因子基本一致，便於生產過程中對片劑質量的控制，並且通過檢測我們發現，在這個波長範圍內兩種有效成分的線性範圍都足以滿足檢測需要。此外，在實驗中我們意外地發現，在檢測製得片劑的有關物質含量時，在其它條件相同時，只有採用205225run的檢測波長才能檢測出所有的雜質種類，並且由於在此波長下，作為有效成分的地諾孕素和戊酸雌二醇的吸收度相近，同時，我們意外發現，各種雜質在該檢測波長下也具有和有效成分相近的吸收度，因此我們選定205225nm為本發明技術方案中所用的檢測波長。圖l:戊酸雌二醇紫外-可見吸收光譜圖圖2:地諾孕素紫外-可見吸收光譜圖圖3:實施例l所得液相色譜圖圖4:實施例2所得液相色譜圖圖5:實施例3所得液相色譜圖圖6:實施例4所得液相色譜圖圖7:實施例5所得液相色譜圖圖8:實施例6所得液相色譜圖具體實施例方式本部分公開是具體實施例是為了更好的實現本發明的技術方案，不能解釋為對本發明實施方式的限制。在本部分的實施例採用的設備如下色譜儀型號島津(shimadzu)LC-10A檢測器型號SPD-10A紫外檢測器色譜柱CN-3inertsil44.6X250mm，5um。自製複方片劑每片含有2mg戊酸雌二醇和2mg地諾孕素供試液配製方法精密量取樣品片粉適量，加流動相溶解，配製成適當濃度(以戊酸雌二醇計)的溶液。外標法標準溶液配製精密量取地諾孕素與戊酸雌二醇標準品(含量〉99.5%)，分別用流動相配製成一定濃度的標準溶液，製作標準曲線，在本發明技術方案所涉及的濃度範圍內，兩種活性成分的標準曲線都具有很好的線性。稱取自製複方片劑所用輔料適量，用流動相溶解、過濾，量取20"L注入液相色譜儀，圖譜顯示輔料在此色譜條件下，無色譜峰出現，不幹擾主藥測定。在測定自製複方片劑的有關物質時，採用主成分自身對照法，計算有關物質含量。所述主成分自身對照法即當雜質峰面積與成分峰面積相差懸殊時，所採用的有關物質測定方法。在測定前，先將供試品稀釋成一定濃度的溶液作為對照溶液，進樣，調節檢測器的靈敏度或進樣量，使對照溶液中的主成分色譜峰面積滿足準確測量要求。測量時記錄時間應為主成分保留時間的倍數。根據測得的供試品溶液的各雜質峰面積及其總和並與對照溶液主成分的峰面積比較，計算有關物質限度。實施例1:(有效成分測定)檢測波長220nm流速1.0ml/min進樣量20yL供試液濃度40ug/ml流動相乙腈水=60:40檢測方法將供試液注入色譜儀，記錄譜圖，譜圖見圖3，其中地諾孕素保留時間為4.510min，戊酸雌二醇保留時間為7.475min。實施例2:(有效成分測定)檢測波長205nm流速0.8ml/min進樣量15uL供試液濃度20"g/ml流動相乙腈水=70:30檢測方法檢測方法將供試液注入色譜儀，記錄譜圖，譜圖見圖4，其中地諾孕素保留時間為3.927min，戊酸雌二醇保留時間為4.683min。實施例3(有效成分測定)檢測波長210nm流速1.2min/L進樣量40ixL供試液濃度40ng/min流動相乙腈水=50:50檢測方法將供試液注入色譜儀，記錄譜圖，譜圖見圖5，其中地諾孕素保留時間為4.702min，戊酸雌二醇保留時間為8.943min。實施例4(有關物質測定)供試液濃度200ug/ml其它初始條件如實施例1梯度程序如下時間(min)乙腈％(v/v)水％(v/v)0103070102580202530307030353070檢測方法將供試液注入色譜儀，按照梯度程序進行色譜分析，記錄譜圖，採用主成分自身對照法來確定有關物質含量。譜圖見圖6，其中地諾孕素保留時間為8.382min,戊酸雌二醇保留時間為23.586min。實施例5(有關物質測定)供試液濃度300ug/ml初始條件如實施例2梯度程序如下時間(min)乙腈％(v/v)水％(v/v)0103565102575252530356530353565檢測方法同實施例4，譜圖見圖7，其中地諾孕素保留時間為7.918min，戊酸雌二醇保留時間為23.986min。實施例6(有關物質測定)供試液濃度400g/ml初始條件如實施例5梯度程序如下時間(min)乙腈％(v/v)水％(v/v)0104060102530702530406030354060檢測方法同實施例4，譜圖見圖8，其中地諾孕素保留時間為7.518min，戊酸雌二醇保留時間為24.168min。注實施例4-6採用同樣的供試液。權利要求1、一種地諾孕素與戊酸雌二醇複方片劑中活性成分含量的檢測方法，其特徵是採用高效液相色譜分析，色譜條件如下所用的流動相為乙腈∶水＝70∶30～50∶50(體積比)；所用的色譜柱為採用氰基鍵合矽膠為填料的色譜柱；檢測波長為205～225nm；檢測溫度為20～40℃。2、如權利要求1所述的色譜分析方法，其特徵是所用的流動相為乙腈水=60:40(體積比)。3、如權利要求2所述的色譜分析方法，其特徵是優選-用流動相配製成的供試液濃度以戊酸雌二醇計為1050ug/ml;進樣量為1050uL流速為0.61.5ml/min。4、如權利要求1至3中任一所述的色譜分析方法，其特徵是-所用的流動相為乙腈水=70:30(體積比)。5、如權利要求1至3中任一所述的色譜分析方法，其特徵是-所用的流動相為乙腈水=50:50(體積比)。6、一種地諾孕素與戊酸雌二醇複方片劑中活性成分和有關物質含量的檢測方法，其特徵是採用高效液相色譜分析，色譜條件為採用所用的色譜柱為採用氰基鍵合矽膠為填料的色譜柱；檢測波長為205225nm;檢測溫度為204(TC;並採用梯度淋洗程序如下tableseeoriginaldocumentpage27.如權利要求6所述的色譜分析方法，其特徵是梯度程序優選tableseeoriginaldocumentpage28、如權利要求6所述的色譜分析方法，其特徵是梯度程序優選tableseeoriginaldocumentpage29、如權利要求6所述的色譜分析方法，其特徵是梯度程序優選:tableseeoriginaldocumentpage310、如權利要求6至9中任一所述的色譜分析方法，其特徵是用流動相配製成的供試液濃度以戊酸雌二醇計為100-500ixg/ml;進樣量為1050uL流速為0.61.5ml/min。全文摘要一種甾體激素複方片劑的檢測方法，能夠檢測複方片劑的有效成分地諾孕素和戊酸雌二醇以及有關物質，該方法為利用高效液相色譜法，採用氰基色譜柱，以乙腈和水混合溶媒為流動相，以205～225nm為檢測波長，並採用梯度淋洗的方法檢測有關物質。文檔編號G01N30/00GK101625338SQ20081005376公開日2010年1月13日申請日期2008年7月7日優先權日2008年7月7日發明者劉要強,李志耕申請人:天津金耀集團有限公司