一種老鸛草提取物的製作方法

2023-06-12 06:27:01

專利名稱：：一種老鸛草提取物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種新的老鸛草提取物及其製備方法，具體地涉及含有柯裡拉京的老鸛草提取物及其製備方法，還涉及所述老鸛草提取物抑制胃酸分泌、降低胃液酸度的用途，以及治療或預防胃酸過多症、消化性潰瘍、慢性胃炎等疾病的用途。
背景技術：
：老鸛草是我國常用的藥材，其種類繁多，包括犛牛兒苗科犛牛兒苗屬植物犛牛兒苗(五ra&wmWeptom'朋wm附〃d)和同科老鸛草屬植物老鸛草((7eram'w附Ma;c/w)，以及尼泊爾老鸛草(Geram'www印a/eraeSwe^.)、粗根老鸛草(Gd/a/wn.cwAWZ)C)、鼠掌老鶴草(Gw力z.n'cww丄.)、野老鶴草(Gcan//m.zwwm丄.)、毛蔬老鶴草(Gehaste附o"sx;.Z)C)、級背老鶴草(Gera"/w附v/assov/a"ww)、青島老鸛草(C7erafw'wm^sz'"gfawem^Kz6e入大根老鸛草(C7eram'"mmacrc^r/^zMw)和童氏老鸛草(G^/"&^7SW."Zwcc.)等。老鸛草中的化學成分眾多，主要包括鞣質、類黃酮、有機酸和揮髮油等。隨著人們對老鸛草研究的不斷深入，其越來越多的藥理作用不斷被發現，如抗炎、鎮痛作用，抗菌作用，抗病毒作用，抗氧化作用，免疫作用，鎮咳作用，止瀉作用，保肝作用，抗腫瘤作用，降糖作用，止血作用等。然而還未見老鸛草抑制胃酸分泌、降低胃液酸度等方面活性的相關報導。發明人長期從事老鸛草的實驗研究，發現老鸛草具有抑制胃酸分泌、降低胃液酸度的活性，在治療或預防胃酸過多症、消化性潰瘍、慢性胃炎等疾病方面有很好的效果。胃酸過多症是指胃液(包括鹽酸和胃蛋白酶等成分)分泌過多，並使患者感到胃部不適，反酸水，燒心(胃燒灼感)。輕度的胃酸過多症主要表現為反覆出現胃燒灼感、反酸，如果胃酸過多損害胃黏膜，還會引起胃痛、噁心、嘔吐等症狀，胃酸過多症還可能進一步發展成消化性潰瘍，甚至出現潰瘍穿孔。胃酸過多症的治療藥物可分為三類第一類為中和胃酸藥，如碳酸氫鈉、氫氧化鋁等；第二類為抑酸藥，如西咪替丁、雷尼替丁、法莫替丁、和質子泵抑制劑等；第三類為增加胃黏膜防禦能力的藥物，如鉍製劑等。消化性潰瘍是一種世界性的常見病和多發病，估計約10%的人群在一生中曾患過這種疾病。消化性潰瘍主要係指胃潰瘍和十二指腸潰瘍，是一種多病因疾病，其發病與多種因素有關，如胃酸、胃蛋白酶、幽門螺旋桿菌(邵)感染、遺傳、體質、環境、飲食、生活習慣、神經精神因素等，通過不同途徑或機制，導致上述侵襲作用增強和或防護機制減弱，均可促發潰瘍發生。隨著人們對胃酸生成機制和胃黏膜防禦功能認識的不斷深入，對消化性潰瘍疾病的治療方法也在不斷改進，目前主要的治療方法有(參見時宇，胃潰瘍的治療與胃酸分泌，生物學通報，1994，29(12)，14-15):抗酸藥物療法目前，公認胃內pH值維持在3.5—4.0以上是滿意的潰瘍癒合環境和必備的治療條件。因此抑制胃酸分泌，提高胃內pH是消化性潰瘍治療的基礎。抗酸藥一般是鹼性藥物，如小蘇打等，通過和鹽酸發生中和反應來降低胃內酸度，但這種中和的效用只能暫時相安，不久胃酸又會分泌過多，若再用鹼性藥反覆中和，更能引起胃酸大量分泌，無異火上澆油。這是因為這類藥物只能中和已分泌入胃腔的胃酸，結果在短時間內胃腔pH值迅速升高，這反而減弱了胃酸的負反饋抑制胃酸分泌的作用，使壁細胞生成更多的胃酸，引起"反跳"，因此抗酸藥目前只用作潰瘍治療的輔助用藥。受體阻斷劑療法在體內，有三種物質可以直接作用於壁細胞，促進胃酸的生成和分泌，它們分別為乙醯膽鹼、胃泌素、組織胺。當人們發現這三種生理性刺激因素均是作用於壁細胞膜上的受體而促進胃酸分泌後，便試圖尋找相應的受體阻斷劑，以阻斷壁細胞膜上的受體，減少胃酸的生成。最早用於臨床的是膽鹼能受體阻斷劑阿託品(atropine)。阿託品只能減少一部分胃酸的生成，對部分患者有效。但因阿託品也同時作用於機體其它部分的M受體，因而有口乾、視覺模糊等副作用。近年來，特異性的M型受體阻斷劑哌侖西平(pirenzepine)的發現，已替代了阿託品的使用，效果比阿託品更好。H型受體阻斷劑主要有西咪替丁、雷尼替丁、法莫替丁、尼扎替丁、羅沙替丁等藥物，它們通過阻斷胃壁細胞H2受體而抑制胃酸分泌，具有療效確切、不良反應少、經濟實惠等特點。胃泌素受體雖經多年尋找，目前仍處於實驗階段，沒有用於臨床治療。由於三種刺激因素通過各自受體獨立發揮作用，因而，使用受體阻斷劑進行治療，只能在一定程度上或者僅對一部分患者有效。質子泵抑制劑(PPI)療法由於質子泵是產生胃酸的最終步驟，因而，減少胃酸最有效的方法是抑制質子泵的活動。近年來研製的質子泵抑制劑如奧美拉唑(Omeprazole)可直接作用於質子泵，抑制其分泌胃酸的作用。奧美拉唑在國外已被廣泛用於臨床治療，效果很好。但由於胃潰瘍是一種慢性疾病，而且酸泵代謝很快，必須堅持長期服用奧美拉唑，這導致治療成本昂貴，超出了許多患者的承受能力，因此，該藥還不適合在國內大規模臨床使用。根除i/p的藥物治療對Z/p陽性的潰瘍應接受/^的根除治療，主要療法是聯合使用抗生素與抗酸藥。抗生素如克拉黴素、阿莫西林、替硝唑等，起到抑菌或殺菌作用，但這些抗生素均不耐酸，其藥效依賴於pH值；抑酸劑如PPI，能提供一個適宜的pH環境，在此環境下許多不耐酸的抗生素將發揮最大效力。慢性胃炎也是一種常見病、多發病，其發病率在各種胃病中居於首位，約佔門診胃鏡檢査患者的90%，年齡越大，發病率越高，特別是中老年患者更為多見。慢性胃炎的一般治療方法，通常是採用質子泵抑制劑治療，減少胃酸對胃黏膜的刺激，減輕症狀；或膠體鉍劑類藥物治療，此類藥物由於其膠體特性，可在酸性環境下與黏膜滲出的蛋白結合在一起，在胃黏膜尚形成牢固的保護膜；或抗生素類藥物或其它非藥物輔助治療等。(參見1、張彥，慢性胃炎的治療現狀，河北職工醫學院學報第24巻第4期；2、郭守軍，慢性胃炎的診治，中華臨床醫學研究雜誌，2007年1月第13巻第2期)。綜上所述，胃酸過多症、消化性潰瘍、慢性胃炎等疾病均為常見的多發病，它們的治療大多需要降低胃內酸度，繼續尋找安全有效的廣譜治療藥物仍是一個需要解決的問題。發明人經過多年實驗研究，出人意料地發現一種老鸛草提取物具有很好的抑制胃酸分泌、降低胃液酸度的活性，在治療或預防胃酸過多症、消化性潰瘍、慢性胃炎等疾病方面有很好的效果，並基於以上發現完成本發明。
發明內容本發明一方面提供一種新的老鸛草提取物，所述老鸛草提取物中式I的柯裡拉京佔提取物總質量的百分比為5%-25%，優選15%—25%，最優選20%。本發明另一方面提供所述的老鸛草提取物的製備方法，其特徵在於，將老鸛草(Geram'wm^/mn'cw附)粉碎，5—8倍量的乙醇回流提取2—4次，提取液合併濃縮，加水溶解後，有機溶劑提取，提取液濃縮至幹，柱層析分離，不同比例的氯仿甲醇為洗脫劑，收集氯仿甲醇=5:1的洗脫液合併，濃縮至幹即得。其中所述的有機溶劑選自石油醚、乙酸乙酯。具體的製備方法為將老鸛草(Geram'wmda/mn'cww)粉碎，力Q5—8倍量40%的乙醇，回流提取2—4次，濾去藥渣合併提取液，濃縮得浸膏，加水溶解後，依次用石油醚、乙酸乙酯進行萃取，將乙酸乙酯提取液減壓濃縮至幹，分批上矽膠柱，依次用氯仿，氯仿甲醇=10:1，氯仿甲醇=8:1，氯仿甲醇二5:l進行洗脫，將氯仿甲醇二5:1的洗脫液合併，濃縮至幹，得到含有柯裡拉京的老鸛草提取物。更具體的製備方法為取老鸛草(Gera"/wm^/mn'cwm)粉碎，加8倍量40%的乙醇，回流提取三次，每次2小時。濾去藥渣合併3次提取液，減壓濃縮得浸膏，加適量水溶解後，依次用石油醚、乙酸乙酯進行萃取。將乙酸乙酯提取液減壓濃縮至幹，分批上矽膠柱(100—200目矽膠G)，依次用氯仿，氯仿甲醇=10:1，氯仿甲醇=8:1，氯仿甲醇=5:1進行洗脫，以薄層層析法檢測。將氯仿甲醇二5:1的洗脫液合併，濃縮至幹，得到所述含有柯裡拉京的老鸛草提取物，其中柯裡拉京的含量為5%—25%。本發明再一方面提供所述老鸛草提取物抑制胃酸分泌，降低胃液酸度的用途。本發明再一方面提供所述老鸛草提取物治療或預防胃酸過多症、消化性潰瘍、慢性胃炎等疾病的用途。本發明再一方面提供一種用於抑制胃酸分泌，降低胃液酸度的藥物組合物，其包含所述的老鸛草提取物和一種或幾種藥學上可接受的輔料。本發明再一方面提供一種用於治療或預防胃酸過多症、消化性潰瘍、慢性胃炎等疾病的藥物組合物，其包含所述的老鸛草提取物和一種或幾種藥學上可接受的輔料。本發明中所述的老鸛草主要選自櫳牛兒苗科植物中的粗根老鸛草(Gera"/w/wc/b/mn'cwm)、野老鶴草(Gfenarm'i/mcaro//"z'z"ww)、毛蔬老鶴草(Geraw/wmen.oWe附o")、級背老鶴草(Ge;raw/wwv/awon'a"w附)、青島老鶴草(G^ram'w附加'wgtowe附e)、大根老鸛草(Gera"/ww附acra^rA&w附)中的一禾中或兩種以上的植物。本發明提供的老鸛草提取物中柯裡拉京的含量採用高效液相色譜法檢測，具體條件及方法如下儀器高效液相色譜儀泵島津LC-10ATvp檢測器島津SPD-10Avp工作站浙大NC2000流動相乙腈-1%磷酸溶液(13:87)波長h268nm色譜柱ThermoHypersilBDSC18(4.6x250mm,5pm)流速1.0ml/min柱溫30°C對照品柯裡拉京(按照中國專利ZL97104154.7中的方法製得)，面積歸一化含量為95%計算方法對照品溶液濃度約20^ig/ml(C對)，配製待測溶液濃度約100ng/ml(C樣)，進樣量20pl，記錄對照品溶液峰面積(A對)，待測溶液峰面積(A樣)C對xA樣含量％=------------------xi00%A對xC樣本發明提供的藥物組合物可以是含有柯裡拉京的老鸛草提取物與藥學上可接受的輔料混合，按照常規的藥物製劑工藝，製備成的任何一種適合臨床上使用的藥物製劑，例如膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液體製劑等。藥學上可接受的輔料包括藥學上可接受的填充劑、崩解劑、粘合劑和潤滑劑、矯味劑等。合適的填充劑選自乳糖、微晶纖維素、預膠化澱粉、澱粉、糊精、甘露醇、纖維素、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇等。合適的崩解劑選自交聯聚維酮、羧甲基澱粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯羥丙基甲基纖維素等。合適的粘合劑選自聚維酮、羥丙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素等。合適的潤滑劑選自微粉矽膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸鈣、硬脂酸、精製氫化植物油、棕櫚酸、滑石粉、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸鎂等。合適的矯味劑選自蔗糖、單糖漿、甘油、山梨醇、甘露醇、甜菊甙、糖精鈉等。本發明所述的消化性潰瘍包括胃潰瘍和十二指腸潰瘍。本發明通過結紮大鼠幽門，收集6個小時分泌的胃液來評價所述含有柯裡拉京的老鸛草提取物對胃酸分泌的影響，試驗結果表明，所述老鸛草提取物能有效抑制大鼠的胃酸分泌，降低胃液酸度。在評價對消化性潰瘍的治療效果時，採用以下三種實驗動物模型幽門結紮型大鼠胃潰瘍模型、水浸應激性大鼠胃潰瘍模型、乙酸灼傷型大鼠胃潰瘍模型。其中，幽門結紮法為Shay，s傳統經典大鼠胃潰瘍模型法，結紮幽門後，胃液滯留胃中，胃壁防禦能力減弱，導致胃潰瘍形成。顯微鏡下觀察見白細胞浸潤和組織壞死，潰瘍深達肌層。此模型與人類胃酸過多引起的胃潰瘍相似。水浸應激性大鼠胃潰瘍模型的造模機理為，動物受到應激剌激後，交感神經系統興奮性升高，血管收縮，引起黏膜缺血缺氧，抵抗力下降。副交感神經-垂體-腎上腺系統興奮升高，引起胃酸、胃蛋白酶和胃泌素分泌增加，從而引起應激性潰瘍。乙酸法直接以乙酸燒灼胃槳膜形成漬瘍，此法可靠、重複性好，潰瘍深而大，與人類的慢性胃潰瘍極為相似。其自然癒合需60天左右，也有個別動物在200天以上仍不癒合，因而適用於觀察藥物促進潰瘍修復癒合的作用，可作為篩選治療慢性胃潰瘍藥物的實驗模型。動物試驗結果顯示本發明提供的含有柯裡拉京的老鸛草提取物能夠減少胃酸分泌，降低幽門結紮型和水浸應激性胃潰瘍模型中大鼠的潰瘍發生率與潰瘍指數；並對乙酸燒傷型胃潰瘍模型中大鼠胃潰瘍的癒合有顯著的促進作用，可增加潰瘍癒合百分率，減少潰瘍指數。本發明提供的含有柯裡拉京的老鸛草提取物製備工藝簡單，並可以減少胃酸分泌，降低胃液酸度，降低潰瘍的發生率與潰瘍指數，具有良好的治療或預防消化性潰瘍的效果，並可按照本領域的常規方法方便地製備成治療消化性潰瘍的藥物組合物以供臨床使用。具體實施例方式11下面以具體實施例來詳細說明本發明的內容，以下實施例並不意味著對本發明的任何限制。實施例l製備含柯裡拉京的老鸛草提取物取粗根老鸛草(C7era"/Mm由/2wn'CMw)2000g，粉碎，加8倍量40%的乙醇，回流提取三次，每次2小時。濾去藥渣合併3次提取液，減壓濃縮得浸膏280g，加適量水溶解後，依次用石油醚(500mlx4)、乙酸乙酯(500mlx4)進行萃取。將乙酸乙酯提取液合併，減壓濃縮至幹，分批上矽膠柱(矽膠用100200目的矽膠G)，依次用氯仿，氯仿甲醇=10:1，氯仿甲醇=8:1，氯仿甲醇=5:l進行洗脫，採用薄層層析法跟蹤檢測。將氯仿甲醇=5:1的洗脫液合併，濃縮至幹，得到含有柯裡拉京的老鸛草提取物25g，用高效液相色譜法檢測其中柯裡拉京的含量為20%。實施例2製備含柯裡拉京的老鸛草提取物取青島老鸛草(Gera"/ww加'"gtowe"^)2000g，粉碎，力口8倍量40%的乙醇，回流提取兩次，每次2小時。濾去藥渣合併2次提取液，減壓濃縮得浸膏220g，加適量水溶解後，依次用石油醚(500mlx4)、乙酸乙酯(500mlx4)進行萃取。將乙酸乙酯提取液合併，減壓濃縮至幹，分批上矽膠柱(矽膠用100200目的矽膠G)，依次用氯仿，氯仿甲醇=10:1，氯仿甲醇=8:1，氯仿甲醇=5:l進行洗脫，採用薄層層析法跟蹤檢測。將氯仿甲醇=5:1的洗脫液合併，濃縮至幹，得到含有柯裡拉京的老鸛草提取物18g，用高效液相色譜法檢測其中柯裡拉京的含量為25%。實施例3製備含柯裡拉京的老鸛草提取物取絨背老鸛草(Gera"/wmv/owov/a"wm)2000g，粉碎，加5倍量40%的乙醇，回流提取四次，每次2小時。濾去藥渣合併4次提取液，減壓濃縮得浸膏250g，加適量水溶解後，依次用石油醚(500mlx4)、乙酸乙酯(500mlx4)進行萃取。將乙酸乙酯提取液合併，減壓濃縮至幹，分批上矽膠柱(矽膠用100200目的矽膠G),依次用氯仿，氯仿甲醇=10:1，氯仿甲醇==8:1，氯仿甲醇二5:l進行洗脫，採用薄層層析法跟蹤檢測。將氯仿甲醇=5:1的洗脫液合併，濃縮至幹，得到含有柯裡拉京的老鸛草提取物16g，用高效液相色譜法檢測其中柯裡拉京的含量為6%。實施例4含有柯裡拉京的老鸛草提取物對大鼠胃酸分泌的影響l材料U試劑老鸛草提取物，按照實施例1的方法製得鹽酸雷尼替丁由江西匯仁藥業有限公司提供奧美拉唑由阿斯利康製藥有限公司提供羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)由國藥集團化學試劑有限公司提供注射用青黴素鈉由華北製藥股份有限公司提供水合氯醛由國藥集團化學試劑有限公司提供氫氧化鈉由南京化學試劑一廠提供酚酞來由海精析化工科技有限公司提供1.2動物清潔級SD大鼠，雄性，體重180-200g，上海斯萊克實驗動物有限責任公司1.3儀器SartoriusBS110S電子天平北京賽多利斯天平有限公司LDZ5-2離心機北京醫用離心機廠1.4組別及藥物劑量設置模型組CMC-Na(0.5%)雷尼替丁組100mg/kg奧美拉唑組老鸛草提取物200mg/kg老鸛草提取物lOOmg/kg1.5藥物配製及給藥途徑藥物以CMC-Na(0.5。/。)混懸，灌胃給藥，10ml/kg。2方法2.1造模方法各組大鼠灌胃給藥，1次/d，連續5d。實驗前禁食48h。實驗時將大鼠用水合氯醇(0.30g/kg)麻醉，進行幽門結紮術，並十二指腸給藥l次，術後禁食禁水，6h後處死動物，收集胃液於刻度離心管。以3000r/min，離心15min，取上清液。2.2觀察指標2.2.1胃液量造模6h後，處死大鼠，收集胃液於刻度離心管。以3000r/min，離心15min，取上清液，精確測量胃液體積。2.2.2總酸度造模6h後，處死大鼠，收集胃液於刻度離心管。以3000r/min，離心15min，取上清液，以0.01mol/LNaOH通過酸鹼中和滴定(酚酞為指示劑)測定總酸度，並根據胃液分泌量計算總酸排出量。2.3統計學處理數據用亍士SD表示，以SPSS11.0進行統計學處理，各組間兩兩比較用最小顯著差異法。3.實驗結果表l.老鸛草提取物對幽門結紮大鼠胃液分泌的影響(i士SD)組別劑量(mg/kg)動物數(n)胃液量(ml)總酸度(mol/L)總酸排出量(mmol)空白對照—84.93±0.840.10±0.0250.48±0.12雷尼替丁10083.96土0.99'0.073士0.018'0.29士0.10'奧美拉唑13.684.04士0.81'0.065士0.015'0.26士0.07"老鸛草提取20083.9肚0.61'0.074±0.019*0.28土0.06"物10084.16±0.940.077士0.013'0.33±0.11*注與空白對照組比較，'屍<0.05,"屍O.Ol。4結論老鸛草提取物能降低大鼠胃液總酸度及總酸排出量，提示老鸛草提取物具有抑制胃酸分泌的作用，可以用於治療胃酸過多症、慢性胃炎。實施例5含有柯裡拉京的老鸛草提取物的抗胃潰瘍動物實驗1實驗材料U動物SD大鼠，雄性，180-220g，由揚州大學實驗中心提供1.2藥物及試劑老鸛草提取物按照實施例1的方法製得陽性藥鹽酸雷尼替丁膠囊，由中諾藥業有限公司提供乙酸上海凌風化學試劑有限公司提供戊巴比妥鈉中國醫藥上海化學試劑公司提供1.3器材大鼠固定板，手術剪，手術刀，鑷子，持針器，微量注射器，天平實驗大鼠分籠飼養，餵飼全價顆粒飼料，自由飲水，室溫20±2°C，溼度50-70%2.幽門結紮型大鼠胃潰瘍模型2.1實驗方法大鼠按體重隨機分為4組，每組10隻空白對照組，雷尼替丁組(135mg/kg)，老鸛草提取物高劑量組(150mg/kg)，老鸛草提取物低劑量組C75mg/kg)。給藥組大鼠分別按照10ml/kg連續灌胃給藥5天，空白對照組給予等量蒸餾水。第1次給藥後大鼠開始禁食不禁水，末次給藥2小時後將大鼠用0.7ml/只1%的戊巴比妥鈉淺麻，自胸骨劍突下沿腹中線切開腹壁，切口約2-3cm。在左側肋緣部位，用指輕輕往上一推，使胃暴露於切口。在胃幽門下穿一線(勿傷及血管)將幽門結紮(不要將鄰近的其他血管結紮)，縫合腹壁切口，用生理鹽水清洗，碘酒消毒，用紗布包紮切口。禁食禁水18h後處死動物，打開腹腔，結紮賁門後將胃取出。收集胃液，計算體積。沿胃大彎剪開胃，用生理鹽水洗去胃內容物，平鋪於白紙上，觀察腺胃部潰瘍發生的情況，記錄每組產生潰瘍的鼠數、潰瘍數、潰瘍程度、潰瘍面積及病變情況，計算潰瘍指數。潰瘍指數評定方法沒有出現胃穿孔的大鼠以小潰瘍數及潰瘍面積來計算潰瘍指數。計算所有最大直徑超過lmm的潰瘍的面積總和，每個潰瘍的面積按照S二7ixnxr2計算，n和r2分別為直徑和寬徑；直徑和寬徑均小於lmm的潰瘍按照小潰瘍計數，以小潰瘍數和潰瘍總面積作為綜合評定指數。評定標準見下表tableseeoriginaldocumentpage16潰瘍抑制百分率％=(空白對照組潰瘍指數-用藥組潰瘍指數)/空白對照組潰瘍指數xiooy。潰瘍發生率發生潰瘍的動物數佔實驗動物數的百分比。2.2實驗結果對幽門結紮型胃潰瘍的影響(^士S)tableseeoriginaldocumentpage17與空白對照組比較^代表P0.05，"代表PO.01;以上結果表明本次實驗中大鼠幽門結紮後形成明顯的潰瘍，顯示造模成功。陽性對照藥物雷尼替丁能減少胃酸分泌，降低潰瘍的發生率與潰瘍指數。老鸛草提取物的高、低劑量都能減少胃酸分泌，降低潰瘍的發生率與潰瘍指數。老鸛草提取物在高劑量時減少胃酸分泌，降低潰瘍的發生率和潰瘍指數等效果優於雷尼替丁組。3水浸應激性大鼠胃潰瘍模型3.1實驗方法大鼠按體重隨機分為4組，每組10隻空白對照組、雷尼替丁組(135mg/kg)、老鸛草提取物高劑量組(150mg/kg)、老鸛草提取物低劑量組(75mg/kg)。大鼠按10ml/kg連續灌胃給藥5天，空白對照組給予等量蒸餾水，末次給藥前24小時大鼠禁食，給藥後1小時將大鼠的四肢綁紮固定於木板上，浸於20'C左右的水槽中，液面保持在胸骨劍突水平。20小時後處死大鼠，打開腹腔，結紮賁門與幽門後將胃取出，由幽門向胃內注入1%甲醛溶液10ml，並將胃浸入1%甲醛溶液中10分鐘，固定內外層。沿胃大彎剪開胃，用生理鹽水洗去胃內容物，平鋪於白紙上，觀察腺胃部潰瘍發生的情況。潰瘍的程度以潰瘍指數表示，並計算潰瘍抑制百分率與潰瘍的發生率來評價藥物的作用。潰瘍指數潰瘍的長徑大於lmm者，直接測量長度，每lmm為1分；若寬徑大於lmm者則計分加倍，對於長徑和寬徑都小於lmm者，按潰瘍數目計分，每個潰瘍計0.5分。每隻動物的累計總分即為該動物的潰瘍指數。潰瘍抑制百分率％=(空白對照組潰瘍指數-用藥組潰瘍指數)/空白對照組潰瘍指數xl00n/。潰瘍發生率潰瘍發生的動物數佔試驗動物數的百分比。3.2實驗結果對水浸應激性胃潰瘍模型的影響(又士s)tableseeoriginaldocumentpage18與空白對照組比較傘代表P0.05，^代表PO.01;實驗結果表明本次實驗中大鼠水浸後形成了明顯的胃潰瘍，顯示造模成功。陽性對照藥物雷尼替丁對潰瘍形成具有明顯的抑制作用，並能夠顯著減少潰瘍指數。老鸛草提取物高劑量時與雷尼替丁的作用效果相近，對應激性大鼠胃潰瘍模型的潰瘍形成有抑制作用，且量效關係明顯，高劑量組效果優於低劑量組。4乙酸灼傷型大鼠胃潰瘍模型4.1實驗方法大鼠按體重隨機分為4組，每組10隻空白對照組、雷尼替丁組(135mg/kg)、老鸛草提取物高劑量組(150mg/kg)、老鸛草提取物低劑量組(75mg/kg)。將大鼠禁食24小時後，用5mg/100g體重戊巴比妥鈉進行腹腔注射麻醉，然後將其仰臥位固定於手術臺上。剪掉腹壁毛，用酒精常規消毒，自劍突下向下沿腹中線剪口約2cm，將胃移出腹腔，在胃的腹側面，胃體部與幽門竇交界處，將微量注射器平刺入漿膜下0.4-0.5mm，注入50pl10%的乙酸，形成丘疹。將胃輕輕送回，縫合腹壁肌層，然後縫合皮膚。用碘酒、酒精消毒，常規飼養。從手術次日起，各組每日按10ml/kg灌胃給藥，連續給藥7日，空白對照組給等量蒸餾水。第7天將動物全部處死。開腹結紮幽門和賁門，取胃浸於1%甲醛溶液中，固定IO分鐘。沿胃大彎剪開，將胃外翻，倒掉內容物，再用乳頭吸管輕輕衝掉食物殘渣。潰瘍呈圓形或橢圓形，中心凹陷，四周微微隆起，密布毛細血管。已癒合的潰瘍，周圍稍有隆起，表面紅潤，可見有放射狀細紋。用潰瘍的最長徑和最短徑的均值表示潰瘍指數，進行統計學處理計算潰瘍癒合百分率，評定藥物對潰瘍癒合的促進作用。潰瘍癒合百分率(％)=(空白對照組潰瘍直徑均值總和-用藥組潰瘍直徑均值總和)/空白對照組潰瘍直徑均值總和xlOOn/。4.2實驗結果對大鼠乙酸灼傷型胃潰瘍的影響(^士s)tableseeoriginaldocumentpage19與空白對照組比較*代表P<0.05，**代表PO.01;老鸛草提取物高劑量時對大鼠胃潰瘍的癒合有顯著的促進作用，可增加潰瘍癒合百分率，減少潰瘍指數，降低潰瘍的發生率和潰瘍指數等效果均與雷尼替丁組接近。低劑量時對潰瘍癒合和潰瘍指數的影響不大。權利要求1.一種老鸛草提取物，其特徵在於該提取物中，式I的柯裡拉京佔提取物總質量的百分比為5％-25％。式I2.根據權利要求1的老鸛草提取物，其中柯裡拉京佔提取物總質量的百分比為15%畫25%。3.根據權利要求1的老鸛草提取物，其中柯裡拉京佔提取物總質量的百分比為20%。4.一種製備權利要求l、2或3所述的老鸛草提取物的方法，包括如下步驟將老鸛草(Geram'ww^/mn'cww)粉碎，5—8倍量的乙醇回流提取2—4次，提取液合併濃縮，加水溶解後，有機溶劑提取，提取液濃縮至幹，柱層析分離，不同比例的氯仿甲醇為洗脫劑，收集氯仿甲醇=5:1的洗脫液合併，濃縮至幹即得。5.權利要求4的提取方法，其中所述的有機溶劑選自石油醚、乙酸乙酯。6.—種製備權利要求l、2或3所述的老鸛草提取物的方法，包括如下步驟將老鸛草(Geram'w附da/zwWo/附)粉碎，加5—8倍量40%的乙醇，回流提取2—4次，濾去藥渣合併提取液，濃縮得浸膏，加水溶解後，依次用石油醚、乙酸乙酯進行萃取，將乙酸乙酯提取液減壓濃縮至幹，分批上矽膠柱，依次用氯仿，氯仿甲醇=10:1，氯仿甲醇=8:1，氯仿甲醇=5:1進行洗脫，將氯仿甲醇=5:1的洗脫液合併，濃縮至幹，得到老鸛草提取物。7.權利要求l、2或3的老鸛草提取物在製備抑制胃酸分泌、提高胃液酸度的藥物中的用途。8.權利要求l、2或3的老鸛草提取物在製備治療或預防胃酸過多症、消化性潰瘍、慢性胃炎等疾病的藥物中的用途。9.一種用於抑制胃酸分泌、提高胃液酸度的藥物組合物，其含有權利要求1、2或3的老鸛草提取物，以及一種或幾種藥學上可接受的輔料。10.—種用於治療或預防胃酸過多症、消化性潰瘍、慢性胃炎等疾病的藥物組合物，其含有權利要求l、2或3的老鸛草提取物，以及一種或幾種藥學上可接受的輔料。全文摘要本發明涉及一種新的老鸛草提取物及其製備方法，具體地涉及含有柯裡拉京的老鸛草提取物，還涉及所述老鸛草提取物治療或預防胃酸分泌過多相關疾病的藥物中的用途。文檔編號A61K36/185GK101461831SQ20081012928公開日2009年6月24日申請日期2008年6月25日優先權日2007年12月21日發明者偉宋,張喜全,徐宏江,洋李,李新祝,楊永安,鴦王申請人:江蘇正大天晴藥業股份有限公司