雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱保護劑及其製備工藝的製作方法

2023-06-02 00:23:36 1

專利名稱：雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱保護劑及其製備工藝的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種動物病毒活疫苗的耐熱保護劑，特別是指一種雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱保護劑及其製備工藝。
背景技術：
凍幹保護劑及其製備工藝是活疫苗生產中的一項關鍵技術，對疫苗的保存、運輸和使用有很大影響。目前，在我國獸用疫苗中，活凍幹疫苗佔相當大的比例，國內常用的保護劑主要為牛奶，蔗糖、明膠等，其組方簡單，對疫苗的保護功能差。採用這些傳統的保護劑凍幹的疫苗，通常要求製品保存在_15°C以下，這給生產廠家及使用者造成很大的不便，是疫苗的長期保存和運輸受限，且可能由於疫苗保存不當，造成疫苗失活，效力降低，達不到防疫目的，造成巨大經濟損失。 耐熱凍幹保護劑與常規的凍幹保護劑相比，凍幹疫苗具有耐高溫保存期長的特點，因而耐熱保護劑的性能要比傳統保護劑更為優良，使活疫苗可在有效期內保存在2 8°C條件下，即使在較高的室溫下也可以保存幾十天，因此使活疫苗的儲存、運輸和使用都更方便、經濟。發達國家對耐熱保護劑的研究起步較早，目前他們的凍幹活疫苗基本上均使用耐熱保護劑，但未見詳細報導。國內獸用生物製品保護劑的研製相對滯後，近年我國也有一些相關的研究報導，主要包括雞新城疫、雞馬立克氏病、雞法氏囊病、雞傳染性支氣管炎、雞痘和豬瘟凍幹活疫苗等的耐熱凍幹保護劑研究。目前已有中國專利CN 1772302 A雞新城疫活疫苗耐熱凍幹保護劑、其製備方法及應用，使用明膠、乳糖、精氨酸、山梨醇作為保護劑。中國專利CN101612404 A公開了雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗的耐熱凍幹保護齊IJ，在2 8°C可以保存24個月。但這些專利中都存在使用過程中凍幹時間長的問題，影響了耐熱保護劑的推廣與應用。因此研製一種配製方法簡單，成本低、凍幹時間短，能夠大規模生產、具有良好保護性能的雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑就顯得尤為迫切重要。

發明內容
有鑑於此，本發明的主要目的在於提供一種雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑，由A液和B液根據I : I的體積比組成；其中，所述的A液由以下各組分組成L-穀氨酸鈉4 6g,鹿糖4 6g, D-山梨醇I 3g,硫代硫酸鈉2 4g,維生素C O. I O. 3g，用注射用水補至IOOmL ;所述的B液由以下各組分組成聚乙烯吡咯烷酮
4 6g,用注射用水補至100mL。優選地，本發明雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑中，所述的A液由以下各組分組成A液組成成分為L-穀氨酸鈉4g，蔗糖5g，D-山梨醇2g，硫代硫酸鈉2g，維生素C O. 2g，用注射用水補至100mL。
優選地，本發明雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑中，所述的A液由以下各組分組成L-穀氨酸鈉6g，蔗糖6g，D-山梨醇3g，硫代硫酸鈉3g，維生素C O. 3g，用注射用水補至100mL。本發明雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑中，所述的B液由以下各組分組成聚乙烯吡咯烷酮4g，用注射用水補至lOOmL。優選地，本發明雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑中，所述的B液由以下各組分組成聚乙烯吡咯烷酮6g，用注射用水補至lOOmL。本發明的另一目的在於提供一種雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑的配製方法，包括以下步驟(I)A液的配製按所述質量配比將L-穀氨酸鈉，蔗糖，D-山梨醇，硫代硫酸鈉，維生素C充分溶解在注射用水中後過濾除菌；
(2)B液的配製將所述質量配比將聚乙烯吡咯烷酮充分溶解在注射用水中後高壓滅菌；(3)將配製好的A液和B液根據I : I的體積比例混合在一起後，即得。優選地，本發明雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑的製備方法中，步驟I)中所述的除菌過濾採用0. 22 μ m微孔濾膜過濾除菌。優選地，本發明雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑的製備方法中，步驟2)中所述的高壓滅菌為在116°C的溫度下滅菌30分鐘。本發明還提供了一種雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑在配製雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱劑型中的應用。優選地，本發明雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑的應用方法是將雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑與雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗以I : I的體積比例進行配苗，分裝後進行冷凍乾燥。更優地，本發明雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑的應用方法中，所述的冷凍乾燥的時間少於28小時。由上可以看出，申請人通過大量實驗對耐熱凍幹保護劑的配方進行了調整，解決了凍幹保護劑在凍幹步驟中耗時太長的問題，在保證凍幹保護劑的耐熱保護效果的前提下，獲得了一種配製方法簡單，能耗更低，成本更少能夠大規模生產、具有良好保護性能的雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑，特別是將凍幹時間減少到28小時以內，大大提高了耐熱凍幹保護劑的在保護雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗中的使用效率。
具體實施例方式下面以具體實施例進一步詳述本發明的技術方案。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和範圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本範明的保護範圍內。實施例I雞新城疫、雞傳染性支氣管炎耐熱凍幹保護劑的製備配方I :A液組成成分為L_穀氨酸鈉4g，蔗糖5g，D-山梨醇2g，硫代硫酸鈉2g，維生素CO.2g,完全溶解後用注射用水補至lOOmL。經O. 22 μ m濾膜過濾除菌,備用。B液組成成分為聚乙烯吡咯烷酮4g，完全溶解後用注射用水補至lOOmL。116°C高壓滅菌30分鐘，備用。A液和B液按照I : I的體積配比混合，即為配方I的耐熱凍幹保護劑。配方2 A液組成成分為L_穀氨酸鈉5g，蔗糖4g，D-山梨醇lg，硫代硫酸鈉4g，維生素C
O.Ig,完全溶解後用注射用水補至lOOmL。經O. 22 μ m濾膜過濾除菌,備用。 B液組成成分為聚乙烯吡咯烷酮5g，完全溶解後用注射用水補至lOOmL。116°C高壓滅菌30分鐘，備用。A液和B液按照I : I的體積配比混合，即為配方2的耐熱凍幹保護劑。配方3 A液組成成分為L_穀氨酸鈉6g，蔗糖6g，D-山梨醇3g，硫代硫酸鈉3g，維生素C
O.3g,用完全溶解後注射用水補至lOOmL。經O. 22 μ m濾膜過濾除菌,備用。B液組成成分為聚乙烯吡咯烷酮6g，完全溶解後用注射用水補至lOOmL。116°C高壓滅菌30分鐘，備用。A液和B液按照I : I的體積配比混合，即為配方3的耐熱凍幹保護劑。實施例2雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗的耐熱凍幹保護劑的配苗及保護效力實驗I.試驗材料及試劑I. I 毒株雞新城疫病毒Lasota株購自中國獸醫藥品監察所。雞傳染性支氣管炎病毒H120株、H52株購自中國獸醫藥品監察所。I. 2SPF雞蛋購自北京梅裡亞實驗動物技術有限公司。I. 3試劑本發明所有試劑購自Sigma公司。2.試驗組二聯活疫苗與凍幹保護劑的配苗及冷凍乾燥程序的設定按照實施例I的三個配方的凍幹保護劑分別與雞新城疫、雞傳染性支氣管炎活疫苗按I : I體積比例配苗後，無菌分裝於西林瓶中，分別為A、B、C三組(即配方I的凍幹劑為A，配方2的凍幹劑為B，配方3的凍幹劑為C)，每組分別試驗01、02、03三個批次。-40°C條件下入箱，製品在此溫度預凍3小時後，啟動真空泵，達最大真空後啟動加熱裝置，一次乾燥溫度設定為-10 _5°C，用時在18小時以內；二次乾燥溫度設定為25°C，用時在5小時以內。因此，二次凍幹時間僅為23小時。如果算上中間調整溫度時間，整個凍幹周期也不超過28h。3.試驗組製品技術參數及檢驗方法3. I產品的物理性狀、無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗、特異性檢驗、安全檢驗、剩餘水分測定和真空度測定按《中華人民共和國獸用生物製品規程》(2005版)的方法及標準進行。3. 2病毒含量測定方法及標準以雞胚半數感染量(EID50)作為衡量疫苗效價的標準。效價測定方法按照《中華人民共和國獸用生物製品規程》(2005版)雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗效價檢測方法進行。
(I)雞新城疫弱毒凍幹苗的標準A.凍幹後病毒損失小於O. 3個滴度。B.凍幹後每羽份病毒含量彡IO7 0EID500C.凍幹後製品放於37°C保存IOd進行病毒含量測定，病毒含量下降在I個滴度以內。D.凍幹後製品放於2 8°C保存24個月，每羽份病毒含量彡IO6 2EID500(2)雞傳染性支氣管炎弱毒凍幹苗的標準A.凍幹後病毒損失小於O. 3個滴度。B.凍幹後每羽份病毒含量彡IO4 5EID500 C.凍幹後製品放於37°C保存IOd進行病毒含量測定，病毒含量下降在I個滴度以內。D.凍幹後製品放於2 8°C保存24個月，每羽份病毒含量彡IO3 6EID5004.試驗結果及比較表I. 37°C保存效價測定(EID50/羽份)新城疫部分
權利要求
1.雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑，其特徵在於由A液和B液根據I : I的體積比組成；其中，所述的A液由以下各組分組成L-穀氨酸鈉4 6g，蔗糖4 6g, D-山梨醇I 3g,硫代硫酸鈉2 4g,維生素C O. I O. 3g,用注射用水補至IOOmL ;所述的B液由以下各組分組成聚乙烯卩比咯燒酮4 6g,用注射用水補至100mL。
2.根據權利要求I所述的雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑，其特徵在於所述的A液由以下各組分組成A液組成成分為L-穀氨酸鈉4g，蔗糖5g，D-山梨醇2g，硫代硫酸鈉2g，維生素C O. 2g，用注射用水補至100mL。
3.根據權利要求I所述的雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑，其特徵在於所述的A液由以下各組分組成L-穀氨酸鈉6g，蔗糖6g，D-山梨醇3g，硫代硫酸鈉3g,維生素C O. 3g,用注射用水補至100mL。
4.根據權利要求I所述的雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑，其特徵在於所述的B液由以下各組分組成聚乙烯吡咯烷酮4g，用注射用水補至100mL。
5.根據權利要求I所述的雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑，其特徵在於所述的B液由以下各組分組成聚乙烯吡咯烷酮6g，用注射用水補至100mL。
6.一種製備權利要求1-5任何一項所述雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑的方法，包括 (1)A液的配製按所述質量配比將L-穀氨酸鈉，蔗糖，D-山梨醇，硫代硫酸鈉，維生素C充分溶解在注射用水中後過濾除菌； (2)B液的配製將所述質量配比將聚乙烯吡咯烷酮充分溶解在注射用水中後高壓滅菌； (3)將配製好的A液和B液根據I: I的體積比例混合在一起後，即得。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於步驟I)中所述的除菌過濾採用0.22μπι微孔濾膜過濾除菌。
8.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於步驟2)中所述的高壓滅菌為在116°C的溫度下滅菌30分鐘。
9.權利要求1-5任一項所述的雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑在配製雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱劑型中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特徵在於，將權利要求1-5任意一項所述雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑與雞新城疫和雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗以I : I的體積比例進行配苗，分裝後進行冷凍乾燥。
11.根據權利要求10所述的應用，其特徵在於，所述的冷凍乾燥的時間少於28小時。
全文摘要
本發明公開了雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗耐熱凍幹保護劑及其製備工藝。本發明耐熱凍幹保護劑由A液和B液根據1∶1的體積比組成；其中，所述的A液由以下各組分組成L-穀氨酸鈉4～6g，蔗糖4～6g，D-山梨醇1～3g，硫代硫酸鈉2～4g，維生素C 0.1～0.3g，用注射用水補至100mL；所述的B液由以下各組分組成聚乙烯吡咯烷酮4～6g用注射用水補至100mL。所述的B液由以下各組分組成聚乙烯吡咯烷酮4g，用注射用水補至100mL。本發明所獲得的保護劑配製方法簡單，能夠大規模生產、能耗更低，成本更少，特別是將凍幹時間減少到28小時以內，大大提高了使用效率。對雞新城疫、雞傳染性支氣管炎二聯活疫苗具有良好保護性能，能夠實現該疫苗在2～8℃下保存24個月以上。
文檔編號A61P31/14GK102908625SQ20111021882
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月1日 優先權日2011年8月1日
發明者張許科, 孫進忠, 白朝勇 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司