聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用的製作方法
2023-06-01 12:49:01
專利名稱：聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，尤其是聯苯環辛二烯木脂素在製備抗腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑藥物中的應用。
背景技術：
腫瘤是引起人類死亡的主要原因之一，腫瘤化療是治療腫瘤的一種主要手段。然而腫瘤化療會因腫瘤細胞獲得抗藥性而失敗。
腫瘤細胞產生多藥耐藥的原因有多種，其中最主要的是腫瘤細胞表達ATP結合的轉運蛋白[ATP binding cassette(ABC)transporters]。P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)，多藥耐藥相關蛋白1(multidrug resistant associatedprotein 1，MRP1)和乳癌抗藥蛋白(breast cancer resistance protein BCRP，也被稱為MXR或ABCG2)，是目前公認的幾個導致腫瘤多藥耐藥的主要蛋白質。這些蛋白質均為跨膜蛋白質，他們的作用相當於藥泵，可將進入腫瘤細胞內的藥物排出細胞外，使得細胞內的藥物濃度很低，腫瘤細胞因此可逃避抗腫瘤藥的攻擊。(GottesmanMM，Fojo T Bates SE.Nature Review/cancer.248-58，2002)。
目前在臨床上使用的抗癌藥如阿黴素、絲裂黴素、表阿黴素、柔紅黴素、長春新鹼、高三尖杉酯、米脫蒽醌等藥都逃脫不了腫瘤抗藥性的命運，因為這些藥物均為P-糖蛋白、或MRP1或BCRP的底物。因此，當腫瘤細胞內P-糖蛋白、或MRP1或BCRP高表達後，腫瘤細胞獲得的抗藥性並不僅僅對某一種抗癌藥，而是對多種抗癌藥。要使高表達P-糖蛋白、或MRP1或BCRP的腫瘤細胞重新獲得對抗癌藥的敏感性，最有效的方法就是抑制這些蛋白質的功能，使其不能發揮『藥泵』的功能。因此，研製抑制這些蛋白質功能的藥物對腫瘤的化療有重要的意義。目前，臨床上有很多種抗癌藥，但沒有一種是針對P-糖蛋白、或MRP1或BCRP的藥物。因此，研製出這樣一種藥物刻不容緩。
苯烷胺類衍生物鈣拮抗劑維拉帕米是最早發現並具有較強逆轉P-糖蛋白介導的MDR活性的苯烷胺類衍生物。其對血管、心肌的鈣拮抗活性與其MDR逆轉作用無關，而與心血管系統副作用有關，其副作用嚴重妨礙臨床應用。
聯苯環辛二烯木脂素為五味子木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.或木蘭科植物華中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的乾燥成熟果實中的主要成分，五味子在《神農本草經》中被列為上品，具有收斂、固澀、益氣生津、補腎寧心的作用，是中醫常用的滋補強壯藥，具有多種藥理作用，但未見其有明確抗腫瘤的報導，尤其未見其有抗腫瘤多藥耐藥的報導。
發明內容本發明既是為了提供聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用。
為達到發明目的本發明採用的技術方案是聯苯環辛二烯木脂素應用於製備治療腫瘤藥物。
所述的聯苯環辛二烯木脂素結構如式I所示 式中，R1、R2、R5、R6分別為羥基或甲氧基，或者，R1與R2、R5與R6各自不成環或者R1與R2、R5與R6各自組成烷氧環；R3為下列之一①-O-CH3；②-OH； R4為下列之一①-O-CH3；②-OH； R7為下列之一①-H；②-OH； R8、R9各自為下列之一①-H；②-OH；R10為下列之一①-H；②-OH； 或者，R7與R10連成氧橋，R1～R6、R8、R9定義如上所述；或者，R3與R7組成醯氧環，R1、R2、R4～R6、R8～R10定義如上所述。
上述結構式根據各取代基定義，主要包括以下物質
Schisandrin A Schisandrin B Schisandrol A Schisantherin A Schisandrin C Schisantherin B Schisantherin C Schisantherin D
Schisantherin E Schisantherin F Schisantherin G Schisantherin H Schisantherin I Schisantherin J
Schisantherin K Schisantherin LR1＝OH，R2＝OAngSchisantherin MR1＝OTig，R2＝OangSchisantherin NR1＝OAc，R2＝Oang Schisantherin O Schisandrol B，Schisantherinol B Schisandrol D，Schisantherinol DSchisandrol E，Schisantherinol E Methylschisandrol E Angelogomisin PR＝AngMethylschisantherinol E TiglogomisinPR＝Tig
Gomisin A Gomisin D Gomisin E Gomisin F Gomisin G
Gomisin H Angeloylgomisin H Tigloylgomisin HBenzoylgomisin H Gomisin JGomisin K1 Gomisin K2Gomisin K3
Gomisin M1Gomisin M2 Angeloylgomisin M1angeloylgomisin R Gomisin N Gomisin O
Epigomisin O Gomisin Q Gomisin RAngelogomisin O Angeloisogomisin O Benzoylgomisin O
Benzoylgomisin PBenzoylgomisin Q Benzoylisogomisin OkadsurinR＝-COCH3 kadsurarinR＝-COCH3
kadasutherinisokadsuranin neokadsuranin5，8-epoxy-6，7-dimethyl2′，3′，2″，3″-dimethylenedioxy-4′，1″-dimethoxy-1，23，4-dibenzo-1，3-cyclootadiene 進一步，所述的聯苯環辛二烯木脂素結構式如下
式中，R1、R2、R5、R6分別為羥基或甲氧基，或者，R1與R2或R5與R6各自組成烷氧環；R7為下列之一①-H；②-OH； R8、R9各自為下列之一①-H；②-OH；R10為下列之一①-H；②-OH； 優選的，所述的聯苯環辛二烯木脂素為下式之一①五味子素A；②五味子素B；③五味子素C；④五味子酯A；⑤五味子酯B；⑥五味子酯C；⑦五味子酯D；⑧五味子酯E；⑨五味子醇A⑩五味子醇B。
尤其的，所述的聯苯環辛二烯木脂素可應用於製備腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑藥物。
所述的逆轉劑藥物還可含有對聯苯環辛二烯木脂素作為腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑敏感的抗腫瘤藥物，及藥物賦形劑或載體。
所述的對腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑敏感的抗腫瘤藥物為下列之一或其任意比例的混合①P-糖蛋白的底物②多藥耐藥相關蛋白(multidrug resistant associatedprotein，MRP1)的底物③乳腺癌抗藥蛋白(breast cancer resistantprotein，BCRP)的底物。
具體的，所述的對腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑敏感的抗腫瘤藥物為下列之一或其任意比例的混合Doxorubicin阿黴素；Actinomycin放線菌素；Altreatamine；Bleomycin博來黴素；Busulphan白消安；Capecitabine卡培他濱；Carboplatin卡鉑；Carmustine卡莫司汀；Chlorambucil苯丁酸氮芥；Cisplatin順鉑；cyclophosphamide環磷醯胺；cytarbine阿糖胞苷；dacarabazine，daunorubicin柔紅黴素；epirubicin表阿黴素；etoposide依託泊甙；足葉乙甙；鬼臼乙叉甙；fludarbine氟阿糖腺苷酸；fluorouracil氟尿嘧啶；gemcitabine吉西他濱；herceptin赫賽汀；hydroxyurea羥基脲；idarubicin伊達比星；ifosfamide異環磷醯胺；irinotecan依立替康；lomustine洛莫司汀；環己亞硝脲；melphalan美法侖；左旋苯丙氨酸氮芥；mercaptopurine巰基嘌呤；methotrexate氨甲蝶呤；mitomycin絲裂黴素；mitozantrone米託蒽醌；二羥基蒽酮；oxaliplatin奧沙利鉑；procarbazine丙卡巴肼；甲(基)苄肼；rituxan美羅華；steroids類固醇；streptozocin鏈佐星；鏈脲黴素；taxol紫杉醇，taxotere泰索帝；tamozolomide，thioguanine硫鳥嘌呤；thiotepa噻替哌；硫替哌；三胺硫磷；tomudex雷替曲塞(raltitrexed)；topotecan拓撲替康；treosulfan曲奧舒凡；uracil-tegufur尿嘧啶；vinblastine長春鹼；長春花鹼；vindesine長春地辛；vinorelbine長春瑞賓。
所述的治療腫瘤藥物可製成下列之一的劑型①針劑②片劑③膠囊劑④顆粒劑⑤緩釋劑。
所述的聯苯環辛二烯木脂素也可應用於製備提高腫瘤對化療藥物的增敏劑藥物。
所述的聯苯環辛二烯木脂素還可應用於製備促進腫瘤細胞凋亡的藥物。
所述的聯苯環辛二烯木脂素應用於治療腫瘤藥物時也可採用兩種或兩種以上的混合物，所述聯苯環辛二烯木脂素以不同比例混合。
本發明所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用的有益效果如下(1)具有臨床應用前景，聯苯環辛二烯木脂素可有效逆轉腫瘤的多藥耐藥性，該化合物作用於P-糖蛋白，可抑制P-糖蛋白的功能；(2)聯苯環辛二烯木脂素具有較低的毒性，因此，聯苯環辛二烯木脂素具有很好的臨床腫瘤化療的應用前景。
圖1為P-糖蛋白在多藥耐藥細胞中的表達百分比。
圖2為P-糖蛋白在多藥耐藥細胞中的表達量。
圖3為MRP1在多藥耐藥細胞中的表達百分比。
圖4為MRP1在多藥耐藥細胞中的表達量。
圖5為10種聯苯環辛二烯木脂素增加柔紅黴素在P-糖蛋白高表達的MDR細胞K562/Adr細胞中的積聚。
圖6為10種聯苯環辛二烯木脂素可增加柔紅黴素在MRP1高表達的MDR細胞HL60/adr細胞中的積聚。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述實施例1多藥耐藥細胞的P-糖蛋白(P-gp)和MRP1的檢測。
(1)實驗材料
細胞株K562/adr、MCF7/adr和KBV200多藥耐藥細胞株為Pgp蛋白高表達的細胞。K562/adr由浙江大學腫瘤研究所誘導建系，MCF-7/adr和KBV200多藥耐藥細胞株購自中國醫學科學院血液研究所。HL60/adr為MRP1高表達的多藥耐藥腫瘤細胞株，購自中國醫學科學院血液研究所。
試劑P-gp的單克隆螢光標記抗體為美國BD公司R-PE-17F9。MRP1單克隆螢光抗體購自美國Santa Cruz公司。
儀器培養瓶，培養板，二氧化碳培養箱，流式細胞儀(FACS Calibur，美國Becton-Dickinson公司)。
(2)實驗方法細胞P-gp和MRP1表達測定取對數生長期各株細胞，收集細胞製成1×106/ml的懸液，加入P-gp或MRP1單抗(1∶400)，4℃避光反應45min，PBS洗三次，用PBS垂懸後，流式細胞儀檢測細胞螢光強度。
(3)實驗結果圖1為K562/ADR，MCF7/adr，KBV200的P-gp(P-glycoprotein)的表達與其親本藥敏細胞K562，MCF-7和KBV200的比較。K562/adr細胞中有98％的細胞表達P-gp，而K562細胞只有1％的細胞有P-gp的表達；MCF7/adr細胞中有96％的細胞表達P-gp，而MCF-7細胞只有3％的細胞有P-gp的表達；KBV200細胞中有92％的細胞表達P-gp，而KB細胞只有1％的細胞有P-gp的表達。
圖2為K562/ADR，MCF7/adr，KBV200的P-gp(P-glycoprotein)的表達量與其親本藥敏細胞K562，MCF-7和KBV200的比較。K562/adr、MCF7/adr KBV200細胞P-gp的表達量分別為其藥敏親本細胞K562、MCF-7和KB細胞的24.4，25.3和24.2倍。
圖3為HL60/adr的MRP1的表達與其親本藥敏細胞HL60的比較。HL60細胞中有97％的細胞表達MRP1，而HL60細胞只有1％的細胞有MRP1的表達；圖4為HL60/adr的MRP1的表達量與其親本藥敏細胞HL60的比較。HL60/adr細胞MRP1的表達量為其藥敏親本細胞HL60細胞的23.4倍。
(4)結論K562/ADR，MCF7/adr，KBV200為P-gp高表達的多藥耐藥細胞株。即P-gp為這些細胞多藥耐藥的主要原因。HL60/adr為MRP1高表達的多藥耐藥細胞株，即MRP1為這些細胞多藥耐藥的主要原因。
實施例2聯苯環辛二烯木脂素的逆轉P-糖蛋白介導的腫瘤多藥耐藥性為證明帶有聯苯環辛二烯的木脂素均有逆轉P-糖蛋白介導的腫瘤多藥耐藥性的作用，我們用10種結構不同的聯苯環辛二烯木脂素做了研究。這10種聯苯環辛二烯木脂素分別為五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A、五味子酯B、五味子酯C、五味子酯D、五味子酯E、五味子醇A、和五味子醇B。這些木脂素購自中國生物製品與藥物鑑定所和成都思科華生生物技術有限公司。
細胞株K562/adr、MCF7/adr、KBV200多藥耐藥細胞株以Pgp蛋白高表達為主要耐藥機制。
試劑將各種聯苯環辛二烯木脂素分別溶於DMSO，配成10mg/ml作為母液，再以RPMI-1640配成工作液；RPMI-1640培養基；柔紅黴素。
儀器培養瓶，培養板，FCM。
(2)實驗方法FACS法分析細胞內柔紅黴素DNR積聚K562/adr、MCF7/adr、KBV200細胞培養於無藥物的新鮮培養液中。實驗分為2組，對照組和逆轉組。對照組加入新鮮培養液，逆轉組加入聯苯環辛二烯木脂素至終濃度為10μg/ml，孵育1h後加入柔紅黴素DNR，濃度分別為2μg/ml，37℃溫育90分鐘後用FCM分析藥物在細胞內的積聚。
(3)實驗結果圖5說明10種聯苯環辛二烯木脂素均可增加柔紅黴素在MDR細胞K562/Adr細胞中的積聚。圖中AK562/adr細胞+柔紅黴素；BK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子素A；CK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子素B；DK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子素C；EK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯A；FK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯B；GK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯C；HK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯D；IK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯E；JK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子醇A；KK562/adr細胞+柔紅黴素+五味子醇B。
結論聯苯環辛二烯木脂素可抑制P-糖蛋白的功能，恢復MDR腫瘤細胞內的藥物積聚。這10種聯苯環辛二烯木脂素逆轉P-糖蛋白介導的MDR的活性並不相同。
實施例3聯苯環辛二烯木脂素抑制MRP1介導的腫瘤多藥耐藥性(1)實驗材料細胞株HL60/adr多藥耐藥細胞株以MRP1蛋白高表達為主要耐藥機制。
試劑將各種聯苯環辛二烯木脂素分別溶於DMSO，配成10mg/ml作為母液，再以RPMI-1640配成工作液；柔紅黴素。
儀器培養瓶，培養板，FCM。
(2)實驗方法FACS法分析細胞內柔紅黴素積聚HL60/adr細胞培養於無藥物的新鮮培養液中。實驗分為2組，對照組和逆轉組。對照組加入新鮮培養液，逆轉組加入聯苯環辛二烯木脂素至終濃度為10μg/ml，孵育1h後加入柔紅黴素DNR，濃度分別為2μg/ml，37℃溫育90分鐘後用FCM分析藥物在細胞內的積聚。
(3)實驗結果圖6說明10種聯苯環辛二烯木脂素均可增加柔紅黴素在MDR細胞HL60/adr細胞中的積聚。圖中AHL60/adr細胞+柔紅黴素；BHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子素A；CHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子素B；DHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子素C；EHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯A；FHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯B；GHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯C；HHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯D；IHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子酯E；JHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子醇A；KHL60/adr細胞+柔紅黴素+五味子醇B。
結論聯苯環辛二烯木脂素可抑制MRP1的功能，增加MDR腫瘤細胞內的藥物積聚。
實施例4聯苯環辛二烯木脂素逆轉P-gp介導的腫瘤多藥耐藥性的量效關係細胞K562/adr多藥耐藥細胞株以Pgp蛋白高表達為主要耐藥機制。
試劑五味子素A或五味子酯A溶於DMSO，配成10mg/ml作為母液，再以RPMI-1640配成工作液；RPMI-1640培養基；柔紅黴素。
實驗方法細胞接種到96孔細胞培養板，每孔8000個細胞，培養過夜後，加入不同濃度的五味子素A或五味子酯A和不同濃度的柔紅黴素(1、10、100、1000、10000ng/ml)，繼續培養72小時後，做MTT實驗。細胞抑制率(IR)＝[1-(實驗孔A均值/對照孔A均值)]×100％。計算IR採用Origin 7.0數據處理軟體用Sigmodel函數擬合求出半數抑制濃度(IC50)，每實驗重複三次。聯苯環辛二烯木脂素對MDR細胞的抗藥逆轉倍數為IC50(加一種聯苯環辛二烯木脂素)除以IC50(不加聯苯環辛二烯木脂素)。
實驗結果五味子素A和五味子酯A在濃度為1μg/ml至20μg/ml範圍內，對多藥耐藥的逆轉呈劑量依賴性，試驗結果見表2表2聯苯環辛二烯木脂素五味子素A和五味子酯A逆轉K562/adr對柔紅黴素抗藥性的量效關係
實施例5聯苯環辛二烯木脂素對P-gp介導的腫瘤多藥耐藥性的逆轉細胞K562/adr、MCF7/adr、KBV200多藥耐藥細胞株以Pgp蛋白高表達為主要耐藥機制。
試劑五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A、五味子酯B、五味子酯C、五味子酯D、五味子酯E、五味子醇A、和五味子醇B分別溶於DMSO，配成10mg/ml作為母液，再以RPMI-1640配成工作液；RPMI--1640培養基；阿黴素，長春新鹼，紫杉醇。
儀器培養瓶，培養板，FCM。
實驗方法細胞接種到96孔細胞培養板，每孔8000個細胞，培養過夜後，加入一種聯苯環辛二烯木脂素和抗癌藥(阿黴素、長春新鹼或紫杉醇等)，繼續培養72小時後，做MTT實驗。細胞抑制率(IR)＝[1-(實驗孔A均值/對照孔A均值)]×100％。計算IR採用Origin 7.0數據處理軟體用Sigmodel函數擬合求出半數抑制濃度(IC50)，每實驗重複三次。聯苯環辛二烯木脂素MDR細胞的抗藥逆轉倍數為IC50(加一種聯苯環辛二烯木脂素)除以IC50(不加聯苯環辛二烯木脂素)。
實驗結果聯苯環辛二烯木脂素可逆轉多藥耐藥腫瘤細胞的抗藥性。結果見表3、表4、表5。
表3.10種聯苯環辛二烯木脂素逆轉多藥耐藥腫瘤細胞對阿黴素的耐藥性
括號內的數值代表抗藥性的逆轉倍數。
表4.10種聯苯環辛二烯木脂素逆轉多藥耐藥腫瘤細胞對長春新鹼的耐藥性
括號內的數值代表抗藥性的逆轉倍數。
表5.10種聯苯環辛二烯木脂素逆轉多藥耐藥腫瘤細胞對紫杉醇的耐藥性
括號內的數值代表抗藥性的逆轉倍數。
結論各種聯苯環辛二烯木脂素均可抑制P-gp介導的腫瘤多藥耐藥性，雖然每種聯苯環辛二烯木脂素逆轉腫瘤多藥耐藥性的活性有強弱之分。
實施例6聯苯環辛二烯木脂素逆轉MRP1介導的腫瘤多藥耐藥性細胞HL60/adr多藥耐藥細胞株以MRP1蛋白高表達為主要耐藥機制。
試劑各種聯苯環辛二烯木脂素分別溶於DMSO，配成10mg/ml作為母液，再以RPMI-1640配成工作液；RPMI-1640培養基。
儀器培養瓶，培養板，FCM。
實驗方法
細胞接種到96孔細胞培養板，每孔8000個細胞，培養過夜後，加入各種聯苯環辛二烯木脂素和抗癌藥(紫杉醇、阿黴素或長春新鹼等)，繼續培養72小時後，做MTT實驗。細胞抑制率(IR)＝[1-(實驗孔A均值/對照孔A均值)]×100％。計算IR採用Origin 7.0數據處理軟體用Sigmodel函數擬合求出半數抑制濃度(IC50)，每實驗重複三次。各種聯苯環辛二烯木脂素對MDR細胞的抗藥逆轉倍數為IC50(加一種聯苯環辛二烯木脂素)除以IC50(不加聯苯環辛二烯木脂素)。
實驗結果各種聯苯環辛二烯木脂素可逆轉多藥耐藥腫瘤細胞HL60/adr的抗藥性。結果見表6。
表6.聯苯環辛二烯木脂素逆轉多藥耐藥腫瘤細胞的耐藥性
括號內的數值代表抗藥性的逆轉倍數。
結論聯苯環辛二烯木脂素可抑制MRP1功能，逆轉MRP1介導的腫瘤多藥耐藥性。
實施例7聯苯環辛二烯木脂素的促腫瘤細胞的凋亡作用。
(1)實驗材料細胞株HMMC7721為肝癌細胞系，由中科院上海細胞所提供。
試劑將各種聯苯環辛二烯木脂素分別溶於DMSO，配成10mg/ml作為母液，再以RPMI-1640配成工作液；阿黴素。
儀器培養瓶，培養板，FCM。
(2)實驗方法FACS法分析聯苯環辛二烯木脂素的促腫瘤細胞的凋亡作用HMMC7721細胞培養於無藥物的新鮮培養液中。實驗分為4組，對照1為細胞無阿黴素和木脂素處理；對照2為僅用木脂素(10μg/ml)處理；阿黴素組為用0.5μg/ml的阿黴素處理；阿黴素+木脂素組為先用木脂素(10μg/ml)處理24小時後，再加阿黴素(0.5μg/ml)處理。以上細胞培養24小時後，分別用碘化丙啶(Propidium iodide，PI)染色法和AnnexinV-FITC染色法用FACS測定細胞凋亡數。PI和AnnexinV-FITC試劑盒均購自美國Sigma公司。
PI法收集細胞，用冷PBS洗細胞兩次，將細胞用70％乙醇固定，混勻，固定，按試劑盒說明書對細胞染色，用FACS檢測，激發波長488nm，發射波長630nm。凋亡細胞為亞二倍體。
AnnexinV-FITC法收集細胞，用冷PBS洗細胞兩次，按試劑盒按試劑盒說明書對細胞染色，用FACS檢測，激發波長488nm，發射波長525nm(AnnexinV-FITC)。凋亡細胞為被Annexin V-FITC標記的細胞。
實驗結果表7說明，HMMC7721肝癌細胞經過聯苯環辛二烯木脂素(10μg/ml)處理24小時後，顯著促進抗腫瘤藥誘導的腫瘤細胞的凋亡。
表7.碘化丙啶(Propidium iodide，PI)染色法檢測聯苯環辛二烯木脂素促進阿黴素誘導HMMC7721肝癌細胞的凋亡(亞二倍體細胞)。
表中對照1為細胞無阿黴素和木脂素處理；對照2為僅用木脂素(10μg/ml)處理；阿黴素組為用0.5μg/ml的阿黴素處理；阿黴素+木脂素組為先用木脂素(10μg/ml)處理24小時，再加阿黴素(0.5μg/ml)處理。表中括號內的數據為增敏倍數，即阿黴素組+木脂素組的凋亡細胞除以阿黴素組的凋亡細胞。
用AnnexinV-FITC法檢測聯苯環辛二烯木脂素促進阿黴素誘導腫瘤細胞的凋亡，得到與表7相似的結果。
表8AnnexinV-FITC法檢測聯苯環辛二烯木脂素促進阿黴素誘導HMMC7721肝癌細胞的凋亡。
表中對照1為細胞無阿黴素和木脂素處理；對照2為僅用木脂素(10μg/ml)處理；阿黴素組為用0.5μg/ml的阿黴素處理；阿黴素+木脂素組為先用木脂素(10μg/ml)處理24小時，再加阿黴素(0.5μg/ml)處理。表中括號內的數據為增敏倍數，即阿黴素組+木脂素組的凋亡細胞除以阿黴素組的凋亡細胞。
HMMC7721不是一個抗藥細胞株，為一對抗癌藥敏感的肝癌細胞系。以上結果表明，聯苯環辛二烯木脂素能顯著促進阿黴素誘導HMMC肝癌細胞的凋亡，因此，聯苯環辛二烯木脂素可應用於腫瘤化療的增敏劑的製備。
實施例1至6說明聯苯環辛二烯木脂素可有效抑制P-gp和MRP1，這兩個『藥泵』可使腫瘤細胞產生對多種抗癌藥的抗性(詳見Gottesman MM et alNature Medicine，248-58，2001；Krishna R etalEuropean Journal of Pharmaceutical Science11265-283，2000)。在MDR逆轉藥物的研究中，公認只要確定MDR逆轉藥物作用的靶點，並能逆轉MDR細胞對典型抗癌藥的抗藥性，就可認為該藥物可逆轉MDR腫瘤對其他藥物的抗藥性(Teodori E etalIl Parmaco 57385-415，2002；Seelig A etalEuropean Journal of Pharmaceutical Sceinces 1231-40，2000；United StatesPatent Serial No 003215；United States Patent Serial No 714506；United StatesPatent Serial No 354443)。在實施例中證實了聯苯環辛二烯木脂素的作用靶點(P-gp，MRP1)，並明確聯苯環辛二烯木脂素可有效逆轉MDR腫瘤細胞對的典型藥物的抗藥性逆轉，因此推論聯苯環辛二烯木脂素也可逆轉MDR腫瘤對其他抗腫瘤藥物的抗藥性。
在實施例中用了10種帶有聯苯環辛二烯母核結構的木脂素，這些化合物均有逆轉P-糖蛋白和MRP1介導的腫瘤多藥耐藥性的功能，因此，帶有聯苯環辛二烯母核結構是該類化合物逆轉P-糖蛋白和MRP1介導的腫瘤多藥耐藥性的關鍵結構。因此也可在帶有聯苯環辛二烯母核結構的化合物上做化學修飾而得到新的腫瘤多藥耐藥逆轉劑。
綜上所述聯苯環辛二烯木脂素可有效逆轉由P-gp、MRP1、BCRP等介導的腫瘤多藥耐藥性，因此，聯苯環辛二烯木脂素可製成逆轉腫瘤多藥耐藥性的藥物。其安全性好，因此具有較大的臨床應用前景。
權利要求
1.聯苯環辛二烯木脂素應用於製備治療腫瘤藥物。
2.如權利要求1所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的聯苯環辛二烯木脂素結構如式I所示 式中，R1、R2、R5、R6分別為羥基或甲氧基，或者，R1與R2、R5與R6各自不成環或者R1與R2、R5與R6各自組成烷氧環R3為下列之一①-O-CH3；②-OH； R4為下列之一①-O-CH3；②-OH； R7為下列之一①-H；②-OH； R8、R9各自為下列之一①-H；②-OH；R10為下列之一①-H；②-OH； 或者，R7與R10連成氧橋，R1～R6、R8、R9定義如上所述；或者，R3與R7組成醯氧環，R1、R2、R4～R6、R8～R10定義如上所述。
3.如權利要求2所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的聯苯環辛二烯木脂素結構式如下 式中，R1、R2、R5、R6分別為羥基或甲氧基，或者，R1與R2、R5與R6各自不成環或者R1與R2、R5與R6各自組成烷氧環；R7為下列之一①-H；②-OH； R8、R9各自為下列之一①-H；②-OH；R10為下列之一①-H；②-OH；
4.如權利要求3所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的聯苯環辛二烯木脂素為下式之一①五味子素A ②五味子素B ③五味子素C④五味子酯A ⑤五味子酯B ⑥五味子酯C⑦五味子酯D ⑧五味子酯E ⑨五味子醇A ⑩五味子醇B。
5.如權利要求1～4之一所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的聯苯環辛二烯木脂素應用於製備腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑藥物。
6.如權利要求5所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的逆轉劑藥物還可含有對聯苯環辛二烯木脂素作為腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑敏感的抗腫瘤藥物，及藥物賦形劑或載體。
7.如權利要求6所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的對腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑敏感的抗腫瘤藥物為下列之一或其任意比例的混合①P-糖蛋白的底物 ②多藥耐藥相關蛋白的底物 ③乳腺癌抗藥蛋白的底物。
8.如權利要求7所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的對腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑敏感的抗腫瘤藥物為下列之一或其任意比例的混合Doxorubicin阿黴素；Actinomycin放線菌素；Altreatamine；Bleomycin博來黴素；Busulphan白消安；Capecitabine卡培他濱；Carboplatin卡鉑；Carmustine卡莫司汀；Chlorambucil苯丁酸氮芥；Cisplatin順鉑；cyclophosphamide環磷醯胺；cytarbine阿糖胞苷；dacarabazine，daunorubicin柔紅黴素；epirubicin表阿黴素；etoposide依託泊甙；足葉乙甙；鬼臼乙叉甙；fludarbine氟阿糖腺苷酸；fluorouracil氟尿嘧啶；gemcitabine吉西他濱；herceptin赫賽汀；hydroxyurea羥基脲；idarubicin伊達比星；ifosfamide異環磷醯胺；irinotecan依立替康；lomustine洛莫司汀；環己亞硝脲；melphalan美法侖；左旋苯丙氨酸氮芥；mercaptopurine巰基嘌呤；methotrexate氨甲蝶呤；mitomycin絲裂黴素；mitozantrone米託蒽醌；二羥基蒽酮；oxaliplatin奧沙利鉑；procarbazine丙卡巴肼；甲(基)苄肼；rituxan美羅華；steroids類固醇；streptozocin鏈佐星；鏈脲黴素；taxol紫杉醇，taxotere泰索帝；tamozolomide，thioguanine硫鳥嘌呤；thiotepa噻替哌；硫替哌；三胺硫磷；tomudex雷替曲塞(raltitrexed)；topotecan拓撲替康；treosulfan曲奧舒凡；uracil-tegufur尿嘧啶；vinblastine長春鹼；長春花鹼；vindesine長春地辛；vinorelbine長春瑞賓。
9.如權利要求5所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的治療腫瘤藥物可製成下列之一的劑型①針劑 ②片劑 ③膠囊劑 ④顆粒劑 ⑤緩釋劑。
10.如權利要求1～4之一所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的聯苯環辛二烯木脂素應用於製備提高腫瘤對化療藥物的增敏劑藥物。
11.如權利要求1～4之一所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的聯苯環辛二烯木脂素應用於製備促進腫瘤細胞凋亡的藥物。
12.如權利要求1～4之一所述的聯苯環辛二烯木脂素在製備治療腫瘤藥物中的應用，其特徵在於所述的治療腫瘤藥物為所述的聯苯環辛二烯木脂素的混合物。
全文摘要
本發明提供了提供了聯苯環辛二烯木脂素在製備抗腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑藥物中的應用。本發明所述的聯苯環辛二烯類化合物在製備治療腫瘤藥物中的應用的有益效果如下(1)具有臨床應用前景，聯苯環辛二烯木脂素可有效逆轉腫瘤的多藥耐藥性，該化合物作用於P－糖蛋白，可完全抑制P－糖蛋白的功能；(2)聯苯環辛二烯木脂素具有較低的毒性，但對某些腫瘤細胞有毒性，因此，聯苯環辛二烯木脂素具有很好的臨床腫瘤化療的應用前景。
文檔編號A61P35/00GK1833636SQ20051004938
公開日2006年9月20日 申請日期2005年3月16日 優先權日2005年3月16日
發明者胡汛 申請人:胡汛, 寧波英諾藥業科技有限公司