一種淡水輪蟲休眠卵的快速生產方法

2023-06-08 02:48:36 2

專利名稱：一種淡水輪蟲休眠卵的快速生產方法
技術領域：
本發明屬於水產學科生物技術和生態學環境檢(監)測領域，具體是涉及一種淡水輪蟲休眠卵的快速生產方法。
背景技術：
輪蟲(rotifer)是淡水生態系統主要功能群，90%以上魚類早期開口生物餌料，也是環境汙染和環境風險評價受試動物。輪蟲休眠卵是餌料生物規模化生產種源來源和生態毒理學研究標準起始材料。在水產養殖業，輪蟲對苗種成活率和育成率起到舉足輕重作用。 目前水產生產部門在魚類繁殖期間基本靠大量勞動力在天然水體撈取。無法保證魚類苗種期間餌料供應。以本生產方法，在不需要特殊儀器的、不消耗大量勞動力情況下，生產輪蟲休眠卵，在生產季節直接萌發休眠卵，獲得幼體投餵魚苗，或以此為輪蟲種源擴大培養餌料生物生產。本方法不受季節和場地限制，具有成本低、操作簡便，生產快速特點。

發明內容
本發明的目的是提供一種淡水輪蟲休眠卵快速便捷生產方法。所提供方法包括輪蟲休眠卵種源獲取、輪蟲通用培養液配製、餌料微藻培養液配製、外源性激素配製、休眠卵生產溫度、光照和培養操作。本發明所述的淡水輪蟲休眠卵的快速生產方法，是將經擴大培養的輪蟲接種到微綠球藻中，添加甲基睪丸酮濃度10-3(^g/L，接種輪蟲密度。0. 5ind/mL,微綠球藻2500-5000轉/分鐘離心10分鐘或採用絮凝沉澱收集，用輪蟲培養液調製藻濃度至 3 X 106ind/mL,培養光照20-40W日光燈管2隻，持續光照；溫度25_28°C，生產期間不再添加食物，5天後收穫。本發明中使用培養基均為常用培養基，其中輪蟲通用培養基為人工配置培養基 (EPA 配方)，每升含有 NaHCO3 96mg、CaSO4. 2H20 60mg、MgSO4. 7H20 123mg、KCl 4mg。根據需要利用HCl和NaOH調節pH值7. 5左右。微藻培養基為常用BBM培養基，每升含有KNO3 250mg, CaCl2. 2H20 25mg， MgSO4. 7H20 75mg, K2HPO4 175 mg, NaH2PO4 175mg, NaCl 25 mg 微量元素和維生素各 2mL。甲級睪丸酮IOmg溶解在ΙΟΟΟμ 4%的丙酮中低溫保存。生產中適宜添加劑量為 30μ§/Ιο光照採用20-40W日光燈，光照時間24小時，生產溫度控制在25_30°C，每日搖動若干次或利用旋轉培養裝置，轉速10-15轉/分鐘。本發明的原理為利用輪蟲密度擁擠效應和激素調節輪蟲生活史原理，將孵化的個體在短時間內迅速擴大種群密度，抑制食物供給，使輪蟲在短時間內形成休眠卵。該方法操作簡便，快速，經濟，便於推廣應用，能在短期內獲得大量輪蟲休眠卵。
具體實施方式
在本發明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。下面結合具體實施例，並參照數據進一步詳細地描述本發明。應理解，這些實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的範圍。在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。 所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明，其後所用相同試劑如無特殊說明，均以首次標明的內容相同。實施例中所說的輪蟲是從養殖水體挑選的單個體，室內「克隆」培養分離培養獲得。起始材料_輪蟲休眠卵為間歇性收集4°C帶水或乾燥_18°C保藏。實施例1 輪蟲單克隆挑選 (1)種類篩選
利用13號浮遊物網從養殖池塘表層撈取活體樣本200mL。帶回實驗室，加入過濾池塘水稀釋到5L。按10 ppm濃度加入95%敵百蟲乳劑，10分鐘後過濾，挑選1個攜帶非混交雌體，移入微孔細胞培養板中。微孔加入微綠球藻濃度3X106ind/mL的EPA混合懸液。在 20-40W日光燈下連續光照培養、溫度25-28° C。2天後在體視顯微鏡下檢查，分離、擴大培養。(2)擴大培養
用16X150 mm試管，加入IOmL利用輪蟲培養液EPA和離心微藻配製的懸液，在20-40W 日光燈下連續光照培養、溫度25-28° C。擴大培養2天後備用。實施例2 輪蟲休眠卵生產實例
甲基睪丸酮濃度10、15、30、50和lOOOPg/L，接種輪蟲密度0. 5ind/mL,微綠球藻 2500-5000轉/分鐘離心10分鐘或採用絮凝沉澱，用EPA調製藻濃度3 X 106ind/mL，培養光照20-40W日光燈管2隻，持續光照。溫度25-28°C，生產期間不再添加食物，5天後收穫。 休眠卵生產量為(見表1)不添加激素平均產量166 ind/lOmL，添加lOPg/L甲級睪丸酮的平均產量為178. 75ind /10mL，添加15Pg/L時，平均產量為186. 75 ind/10mL，添加30μβ/1 時平均產量202. 25 ind/IOmL0添加50和lOOOPg/L具有毒性和抑制作用(平均產量分別為 40. 25 ind/10mL和13. 75ind/10mL)。統計分析顯示添加3(^g/L時能顯著增加休眠卵產量(p=0. 02) ο表1.5日輪蟲休眠卵產量實驗
權利要求
1.一種淡水輪蟲休眠卵的快速生產方法，是將經擴大培養的輪蟲接種到微綠球藻中， 添加甲基睪丸酮10-30μβ/1 ；接種輪蟲密度0. 5ind/mL，微綠球藻2500-5000轉/分鐘離心 10分鐘濃縮收集或採用絮凝沉澱收集，用輪蟲培養液調製藻密度至3 X 106ind/mL,培養光照20-40W日光燈管2隻，持續光照；溫度25-28°C，生產期間不另添加食物，5天後收穫。
2.根據權利要求1所說的快速生產方法，其特徵在微綠球藻GVaz70^Wori1Soculata), 微綠球藻採用BBM配方恆溫連續關照培養沉澱收集休眠卵、低溫無光保藏。
全文摘要
本發明涉及一種淡水輪蟲休眠卵的快速生產方法。該方法是將經擴大培養的輪蟲接種到微綠球藻中，添加甲基睪丸酮10-30μg/L；接種輪蟲密度0.5ind/mL，微綠球藻2500-5000轉/分鐘離心10分鐘濃縮收集或採用絮凝沉澱收集，用輪蟲培養液調製藻密度至3×106ind/mL，培養光照20-40W日光燈管2隻，持續光照；溫度25-28℃，生產期間不另添加食物，5天後收穫。本發明方法簡方便，快速，經濟，便於推廣應用，能在短時間獲得高密度輪蟲休眠卵。
文檔編號A01K67/033GK102428896SQ20111031558
公開日2012年5月2日 申請日期2011年10月18日 優先權日2011年10月18日
發明者楊家新 申請人:南京師範大學