通過核苷酸修飾調節短幹擾核糖核酸(siRNA)的免疫刺激特性的製作方法

2023-09-18 20:37:55

專利名稱：通過核苷酸修飾調節短幹擾核糖核酸(siRNA)的免疫刺激特性的製作方法
通過核苷酸修飾調節短幹擾核糖核酸(siRM)的免疫刺激特性
背景技術：
因為它新近被'iH人的作為治療劑的可能性，核糖核酸(RM)最近已 經成為強烈關注的焦點。最近已經報導，例如，某些序列特異性的雙 鏈RNA,通常長度為大約21-23個核苷酸，可在稱為RM幹擾(RNAi) 或翻譯後基因沉默的方法中，以選擇性方式用於沉默基因表達。用於 這種類型的RNA幹擾的雙鏈RNA包括，尤其是，所謂的短幹擾RNA (siRNA) 。 Hannon GJ (2002) Nature 418:244-51。相反，最近還 報導，序列非特異性的雙鏈RNA可以誘導免疫刺激作用，通過Toll 樣受體3 (TLR3)發揮作用。Alexopoulou L等 (2001) Nature 413:732-8。此外，最近也已報導，某些單鏈RNA，通常包括鳥嘌呤核 苷(G)和尿嘧咬核苷(U)，而且特別地包括某些序列基序，也是免疫刺 激性的。Lipford等US 2003/0232074 Al。
在開發用於臨床應用的siRNA的努力中，至少一些siRM也是免 疫刺激性的最近已經變得明顯。在有些情況下，同時具有基因沉默和 免疫刺激可能是需要的。然而，在其它的環境中，反而可能需要具有 基因沉默而不伴有免疫刺激。
發明概述
本發明提供了涉及siRM的組合物和方法，該siRM的特徵在於 有義鏈內的某些核苷酸修飾，以致得到的具有修飾的siRNA的免疫刺 激性低於對應的沒有修飾的siRNA。有義鏈中的修飾對siRM沉默靶
基因的能力幾乎沒有影響。
一個方面，本發明是一種包括雙鏈短千擾核糖核酸(siRM)的組 合物，該雙鏈短幹擾核糖核酸(siRNA)具有有義鏈和反義鏈，每條鏈 具有5'末端和3'末端，其中反義鏈與靶序列互補，而且其中有義鏈包括至少一個具有2'修飾的糖的修飾核普酸，附帶條件是具有2'修飾的 糖的修飾核苷酸不是鎖核酸(LNA)或2'-0-曱基核苷酸。
在一個方面，本發明是一種用於降低雙鏈短幹擾核糖核酸(s iRNA) 的免疫刺激可能性的方法，所述siRNA具有有義鏈和反義鏈，每條鏈 具有5'末端和3'末端，其中反義鏈與靶序列互補。該方法包括引入至 少一種具有2M務飾的糖的修飾核苷酸到siRNA的有義鏈中的步驟，附 帶條件是具有2'修飾的糖的修飾核苷酸不是鎖核酸(LNA)或2'-0-甲 基核苷酸。
在一個方面中，本發明是一種用於降低具有靶序列的基因表達的 方法。根據這個方面的方法，包括使包含具有靶序列的基因的細胞與 有效量的雙鏈短幹擾核糖核酸(s iRNA)接觸的步驟，以降低具有靶序列 的基因表達，該雙鏈短幹擾核糖核酸(siRNA)具有有義鏈和反義鏈，每 條鏈具有5'末端和3'末端，其中反義鏈與靶序列互補，而且其中有義 鏈包括至少一種具有2'修飾的糖的修飾核苷酸，附帶條件是該具有2' 修飾的糖的修飾核苷酸不是鎖核酸(LNA)或2' -O-甲基核苷酸。
在一個實施方案中，包括具有2'修飾的糖的修飾核苷酸的有義鏈， 是包括僅僅一種具有2'修飾的糖的修飾核苷酸的有義鏈。
在一個實施方案中，包括具有2M務飾的糖的修飾核苷酸的有義鏈， 是包括許多具有2'修飾的糖的修飾核苷酸的有義鏈，其中具有2'修飾 的糖的每種修飾核普酸的選擇獨立於任何其它的核苷酸。
在一個實施方案中，2'修飾選自2'-0-烷基，2'-0-烯烴基，和 2'-0-炔烴基，附帶條件是2'-0-烷基排除2'-0-曱基。
在一個實施方案中，2'修飾選自2'-甲氧基乙基，2'-0-烯丙基， 2'-丙炔基，2'-氨基炔丙基，和2'-0-(3-氨丙基)，2'-0-丙基和2'-0-丁基。
在一個實施方案中，2'修飾選自2'-脫氧基，2'-氟代和2'-氨基。 在一個實施方案中，2'修飾是2'-氟代。
在一個實施方案中，2'修飾選自2'-0-烯烴基，2'-O-炔烴基，2'-甲氧基乙基，2'-氨基炔丙基，2'-0-(3-氨基丙基)和2'-氨基。在一個實施方案中，具有2'修飾的糖的至少一種修飾核苷酸存在 於有義鏈的5'末端。在一個實施方案中，具有2'修飾的糖的至少一種 修飾核苷酸存在於有義鏈的5'末端，不包括任何突出。
在一個實施方案中，具有2'修飾的糖的至少一種修飾核苷酸存在 於有義鏈的3'末端。在一個實施方案中，具有2'修飾的糖的至少一種 修飾核苷酸存在於有義鏈的3'末端，不包括任何突出。
在一個實施方案中，相對於有義鏈的5'末端和3'末端，具有2' 修飾的糖的至少一種修飾核苷酸存在於內部。在一個實施方案中，相 對於有義鏈的5'末端和3'末端，具有2'修飾的糖的至少一種修飾核 苷酸存在於內部，不包括任何突出。
在一個實施方案中，有義鏈包括位於有義鏈的5'末端的具有2' 修飾的糖的至少一種修飾核苷酸，和位於有義鏈的3'末端的具有2' 修飾的糖至少一種修飾核苷酸。在一個實施方案中，有義鏈包括位於 有義鏈的5'末端的具有2'修飾的糖的至少一種修飾核苷酸，和位於有 義鏈的3'末端的具有2'修飾的糖的至少一種修飾核苷酸，不包括任何 突出。
在一個實施方案中，有義鏈具有磷酸二酯主鏈。
在一個實施方案中，有義鏈具有穩定的主鏈，其包括至少一個穩 定的核苷酸間鍵。
在一個實施方案中，有義鏈具有穩定的主鏈，其包括至少一個穩 定的核苷酸間鍵，該核苷酸間鍵選自thioformacetal，硫代磷酸酯， 甲基膦酸酉旨，boranophosphonate和formacetate。
附圖簡述
圖l是一組4個圖解，其描述了由人外周血單核細胞(PBMC)產生 細胞因子。在存在D0TAP時，指定濃度的指定雙鏈siRNA (有義反義) 與人PBMC —起孵育，並於24 h以後在上清液中通過ELISA測定IFN-oc ( pg/ml; A和B圖)或IL-12p40 (pg/ml; B和D圖)的含量。用 於A和B圖的RNA序列如下MAPK2 s， SEQ ID NO: 1; MAPK2 as，SEQ ID NO:2; MAPK2 Exp27 s， SEQ ID NO: 3; MAPK2 Exp27 as， SEQ ID NO: 4; MAPK2 Exp30 s， SEQ ID NO: 3; MAPK2 Exp30 as, SEQ ID NO: 5。 用於C和D圖的RNA序列如下LaminACs， SEQ ID NO: 6; Lamin AC as, SEQ ID NO: 7; Lamin AC Exp27 s, SEQ ID NO: 8; Lamin AC Exp27 as, SEQ ID NO: 9; Lamin AC Exp30 s， SEQ ID NO: 8; Lamin AC Exp30 as， SEQ ID NO: 10。
圖2是一組12幅圖，描述了通過人PBMC產生細胞因子。在存在 DOTAP時，指定濃度的指定種類RNA (雙鏈siRNA (有義)反義；單 獨的有義鏈；單獨的反義鏈)，與人PBMC—起孵育，並於W小時以 後，在上清液中通過ELISA測定IFN-ot (pg/ml; A和C圖)或IL-12p40 (pg/ml; B和D圖)的含量。用於A和B圖的RNA序列如下MAPK2 s， SEQ ID NO: 1; MAPK2 as, SEQ ID NO: 2; MAPK2 Exp27 s， SEQ ID NO: 3; MAPK2 Exp27 as, SEQ ID NO: 4; MAPK2 Exp30 s, SEQ ID NO: 3; MAPK2 Exp30 as, SEQ ID NO: 5。用於C和D圖的RNA序列如下Lamin AC s， SEQ ID NO: 6; Umin AC as, SEQ ID NO: 7; Umin AC Exp27 s， SEQ ID NO: 8; Umin AC Exp27 as, SEQ ID NO: 9; Lamin AC Exp30 s， SEQ ID NO:8; Lamin AC Exp30 as, SEQ ID NO: 10。
發明詳述
RNA幹擾，包括短幹擾RNA (siRNA)技術，已經成為一種用於特異 基因下調的重要工具，而且siRNA治療已經處於開發中。合成的siRNA 一般由具有磷酸二酯主鏈的長度為21-23個核苷酸的雙鏈寡核糖核苷 酸組成。然而，除siRNA的特異基因靶向作用之外，最近已經描述了 這種技術的非特異性作用。siRNA已經顯示能誘導先天免疫系統的非 特異性激活，包括某些細胞因子的上調，例如，I型和/或II型幹擾 素以及IL-12, IL-6和/或TNF-a生產。這些作用的起因認為是siRNA 對Toll樣受體如TLR7， TLR8和/或TLR3的激活。
而在RNA沉默的情況中，免疫系統的激活常常是一種預期效果， 免疫系統的非特異性激活可幹擾siRNA的實際作用方式，並可能顯著改變治療的結果。
在如下所述的實施例中，某些siRNA構建體的免疫刺激活性，該 siRNA構建體的特徵在於特異性位點的2'核香酸糖的某些修飾，令人 驚訝地發現具有降低的免疫刺激特性，而它們的基因沉默特性沒有顯 著的降低。當存在陽離子脂類^[1-(2，3-二油醯氧基)丙基]-^^^ 三甲基銨(DOTAP;

圖1)，與人PBMC—起孵育時，來源於MAPK2 (Erk2) 和Lamin AC基因(表1 )的序列的siRNA誘導了顯著的細胞因子生產。 細胞因子的誘導被認為是由siRNA的反義和/或有義鏈中存在的免疫 刺激序列誘導的。
根據本發明，發現有義和反義鏈內部的化學修飾可以顯著地抑制 siRNA的免疫刺激活性。引入有義鏈的5'和3'末端的2'糖修飾(圖1 )， 和反義鏈的3'末端另外的2'糖修飾，完全消除了 siRNA的IL-12p40 和TNF-oc生產，而且顯著降低了 IFN-a生產。
令人驚訝地，根據本發明，發現引入的修飾只影響有義鏈(單鏈 RNA )和包含有義鏈和反義鏈的雙鏈siRNA的免疫刺激活性，而不是仍 然保留它的大部分免疫刺激活性的反義鏈(單鏈RNA)。因此，通過 修飾有義鏈而不是反義鏈，來抑制dsRNA或siRM的刺激活性仿佛是 可能的。這是重要的，因為認為僅僅反義鏈負責siRNA沉默作用，因 此可以把化學修飾引入到有義鏈中以控制免疫刺激，而不影響反義鏈， 並因此不影響沉默作用。
根據本發明，也令人驚訝地發現，僅僅在5'和3'末端引入RNA有 義鏈的修飾，而且特別地，不在可能的免疫刺激序列中，仍然導致強 烈的或完全的免疫刺激活性抑制。
另外，根據本發明，令人驚訝地發現，甚至免疫刺激單鏈中的單 個2'修飾強烈影響免疫應答，表明有義鏈中的這種單個修飾能足以影 響siRNA或dsRNA的免疫刺激活性。
在來自Hornung等(Nature Medicine 11 :263-70， 2005)的最新 出版物中，報導3'末端的免疫刺激基序的鎖核酸(LM)修飾，削弱了 siRNA的免疫刺激特性。與Hornung等報導的相反，根據本發明，出乎意料地發現，修飾不需要在免疫刺激基序內部，而且對非刺激性的 有義鏈單獨的修飾足以抑制免疫刺激活性。
在一個方面，本發明一般涉及組合物和方法，其涉及包括某些修
飾的雙鏈siRNA。相較於對應的沒有修飾的siRNA，特異性修飾降低了 siRM的免疫刺激可能性。如這裡使用的，siRNA將涉及特定類型的長 度為大約21-23核苷酸的分離雙鏈核糖核酸(RNA)分子，單鏈有義鏈和 單鏈反義鏈，其中反義鏈具有與靶核苷酸序列互補的核苷酸序列，其 RNA分子，當遞送到表達由靶序列編碼的蛋白的細胞中時，降低了該 細胞中乾核苷酸序列(和編碼的蛋白)的含量。
siRNA的有義和反義鏈具有這樣的核苷酸序列，其彼此嚴格地或 至少基本上互補，以致它們可以在合適的條件下，體內或體外形成穩 定的雙重結構。在某些實施方案中，任何一條鏈的一個或兩個末端可 以延伸超過雙重結構中另一條鏈的對應末端或兩個末端，從而允許 siRNA的任何一個或兩個末端存在短的突出序列(一般長度為1-2個 核苷酸)。
siRNA —般包括具有與RNA共有的規範的核苷鹼基的核苷酸亞基， 例如，腺噤呤，胞嘧啶，鳥嘌呤和尿嘧啶，但是不是這樣有限的。其 它的核苷鹼基，包括但是不限於胸腺嘧啶和次黃嘌呤，也可以存在於 一些實施方案中。
如這裡使用的，關於任何RM分子，免疫刺激可能性指RNA分子 刺激免疫應答的能力，例如，刺激免疫系統的細胞而成為激活的，以 增殖，分化，增強與免疫細胞激活相關的分泌產物的表達，增強與免 疫細胞激活相關的細胞表面標記或共同刺激分子的表達，或其任何結 合。與免疫細胞激活相關的分泌產物是本領域公知的，而且可以包括， 非限制性的，細胞因子，趨化因子和抗體。
作為本發明的一個特徵，本發明siRNA的有義鏈包括具有2'修飾 的糖的修飾核苷酸，附帶條件是該具有^修飾的糖的修飾核苷酸不是 鎖核酸(LM)或2'-0-甲基核普酸。有義鏈可以包括僅僅一種具有？ 修飾的糖的修飾核苷酸，或者它可以包含兩種或多種具有2'修飾的糖的修飾核苷酸，每種核苷酸的選擇都獨立於任何其它的核苷酸。在一
個實施方案中，有義鏈只包括具有2'修飾的糖的修飾核苷酸，每種核 苷酸的選擇都獨立於任何其它的核苷酸。更典型地，有義鏈將包括1 到6種具有2'修飾的糖的修飾核苷酸，每種核苷酸的選擇都獨立於任 何其它的核苷酸。當存在超過l個具有2'修飾的糖的修飾核苷酸時， 具有2'修飾的糖的修飾核苷酸可以，如它們的數量容許，以相鄰的核 苷酸，以非相鄰的核苷酸，或者以相鄰的和非相鄰的核苷酸的組合存 在。
如這裡使用的，核苷酸指與磷酸酯基團並與可互換的有機鹼(例 如，核苷鹼)連接的糖(例如，核糖或者脫氧核糖)，該有機鹼是取 代的嘧啶(例如，胞嘧啶，胸腺嘧啶或者尿嘧啶)或者取代的嘌呤(例 如，腺嘌呤或者鳥嘌呤)。如這裡使用的，具有胞嘧啶，胸腺嘧啶， 尿嘧啶，腺嘌呤或者鳥嘌呤作為它們的核苷鹼的核苷酸，分別以它們 的常規單字母符號c， T， U， A或者G表示。核糖核苷酸包括規範的C， U, A和G核糖核普酸，但是不是如此有限的。
如這裡使用的，關於任何種類的RNA，具有2'修飾的糖的修飾核 苷酸指這樣的核苷酸，其中糖在2'位置具有取代基，其對於核糖核苷 酸是非標準的。在一個實施方案中，2'修飾的糖是2'脫氧核糖的糖， 因此對應的核苷酸是脫氧核糖核苷酸。在一個實施方案中，2'修飾選 自2'-0-烷基，2'-0-烯基和2'-0-炔烴基，附帶條件是2'-0-烷基排 除2'-0-甲基。在一個實施方案中，2'修飾選自2'-甲氧基乙基，2'-0-烯丙基，2'-烯丙基，2'-氨基炔丙基，2'-0- (3-氨基丙基)，2'-0-丙基和2'-0-丁基。在一個實施方案中，2'修飾選自2'-脫氧，2'-氟 代-2'-脫氧(即，2'-氟代)和2'-氨基-2'-脫氧(即，2'-氨基)。 在一個實施方案中，2'修飾是2'-氟代。在一個實施方案中，2'修飾 選自2'-0-烯基，2'-0-炔烴基，2'-甲氧基乙基，2'-氨基炔丙基， 2'-0-(3-氨基丙基)和2'-氨基。
如這裡使用的，鎖核酸(LNA)指RNA衍生物，其中核糖環被2'-氧 與4'-碳之間的亞甲基連接限制。Wahlestedt C et al. (2000) ProcNatl Acad Sci USA 97:5633-8。
一般說來，具有2'修飾的糖的修飾核苷酸可以存在於有義鏈的任 何地方。尤其是，在一個實施方案中，具有2'修飾的糖的修飾核苷酸 可以存在於有義鏈的5'末端。在一個實施方案中，具有2'修飾的糖的 修飾核苷酸存在於有義鏈的3'末端。在一個實施方案中，具有2'修飾 的糖的修飾核苷酸存在於有義鏈的5'末端和有義鏈的3'末端。具有 2'修飾的糖的修飾核苷酸不必存在於有義鏈的一個末端，而是可以存 在於有義鏈的兩個末端之間，即，相對於有義鏈的5'末端與3'末端的 內部。在某些實施方案中，具有2'修飾的糖的修飾核苷酸存在於有義 鏈的5'末端與3'末端中的一個末端或兩個末端，以及相對於有義鏈的 5'末端與3'末端的內部。
有義鏈，反義鏈，或者有義鏈和反義鏈兩者的核苷酸序列可以任選 包括免疫刺激序列或者基序。在一個實施方案中，免疫刺激序列或者基 序是5'-RURGY-3、其中每個R獨立地代表嘌呤核糖核苷酸，Y代表嘧啶 核糖核苷酸。在不同的實施方案中，5'-RURGY-3'可以特別地包括，但不 限於，5'-GUGGU-3' ， 5'-GUGGC-3' ， 5'-GUAGU-3' ， 5'-GUAGC-3'， 5'-AUGGU-3'， 5'-AUGGC-3'， 5'-AUAGU-S'和5'-AUAGC-3'。在一個實施 方案中，免疫刺激序列或者基序是5'-GUAGUGU-3'。在一個實施方案中， 免疫刺激序列或者基序是5'-GUUGB-3'，其中B代表U， G或者C。在不 同的實施方案中，5'-GUUGB-3'特別地包括5'-GUUGU-3', 5'-GUUGG-^ 和5'-GUUGC-3'。在一個實施方案中，免疫刺激序列或基序是 5'-GUGUG-3'。在一個實施方案中，免疫刺激序列或基序是 5'-GUGUUUAC-3'。在一個實施方案中，免疫刺激序列或基序是 5'-GUAGGCAC-3'。在一個實施方案中，免疫刺激序列或基序是 5'-CUAGGCAC-3'。在一個實施方案中，免疫刺激序列或基序是 5'-CUCGGCAC-3'。
當有義鏈包括一個可識別的免疫刺激序列或者基序時，在一個實 施方案中，具有2M務飾的糖的修飾核苷酸存在於可識別的免疫刺激序 列或者基序內部。作為選擇，而且顯著地，當有義鏈包括一個可識別的免疫刺激序
列或者基序時，在一個實施方案中，具有2'修飾的糖的修飾核苷酸存 在於可識別的免疫刺激序列或者基序外面。當有義鏈包括一 個可識別 的免疫刺激序列或者基序，而且具有2'修飾的糖的修飾核苷酸存在於 可識別的免疫刺激序列或者基序外面時，在一個實施方案中，具有2'
在一個實施方案中，緊i;鄰是緊接著免疫刺激i列;者基序的5'。 在一個實施方案中，緊密相鄰是緊接著免疫刺激序列或者基序的3'。 在其它的實施方案中，其中有義鏈包括一個可識別的免疫刺激序列或 者基序，而且具有2'修飾的糖的修飾核苷酸存在於可識別的免疫刺激 序列或者基序外面，該具有2'修飾的糖的修飾核苷酸存在至少一個從 該免疫刺激序列或者基序除去的核苷酸。具有2'修飾的糖的修飾核苷 酸與免疫刺激序列或者基序之間的核苷酸的數量，在不同的實施方案 中，可以是l， 2， 3， 4， 5， 6， 7， 8， 9, 10， 11， 12， 13， 14， 15， 16， 17或者18。
有義鏈的任何核苷酸，包括任何具有2'修飾的糖的修飾核苷酸， 如上限定的，任選可包括涉及磷酸基團的修飾。在一個實施方案中， 有義鏈具有磷酸二酯主鏈，即，有義鏈的核苷酸被磷酸二酯鍵一個接 一個地連接。這種磷酸二酯鍵與磷酸二酯主鏈是核酸分子的代表，因 為它們天然存在，而且它們對體內核酸酶裂解相對敏感。
在一個實施方案中，有義鏈具有穩定的主鏈。穩定的主鏈包括至 少一個穩定的核苷酸間鍵，其導致產生與磷酸二酯主鏈相比，相對耐 體內或體外核酸酶裂解的主鏈。在一個實施方案中，穩定的主鏈只包 括穩定的核苷酸間鍵。在一個實施方案中，穩定的核苷酸間鍵選自 thioformacetal，硫代磷酸酉旨，曱基膦酸酯，boranophosphonate和 formacetate。在一個實施方案中，穩定的核苷酸間鍵是硫代磷酸酯鍵。
本發明的siRNA可以使用自動化技術和設備，應用，例如，氨基 磷酸酯或H-膦酸酯化學作用合成。用於產生其它的核酸主鏈修飾和取 代的方法已經描述，而且打算用於本發明。UhlmannE等(1990) ChemRev 90:544; Goodchild J (1990) Bioconjugate Chem 1:165.
有義鏈和反義鏈可以單獨地合成。作為選擇，有義鏈和反義鏈可 以作為單個的構建體合成，然後進行處理以剪去或者相反除去幹擾或 外來的核苷酸或連接部分。無論它們是如何合成的，所需的siRNA或 組件有義鏈和反義鏈優選分離自外來的合成試劑，而且，任選地，在 使用之前進行純化。
本發明的組合物認為可用於要求使用siRNA的任何狀況。因此， 靶序列可以是任何適合的靶序列。要求使用siRNA的臨床狀況包括， 非限制性的，患有癌症的個體的治療，患有傳染病的個體的治療，患 有自身免疫性疾病的個體的治療，患有移植排斥反應的個體的治療， 和患有敏感症或孝喘的個體的治療。本領域的技術人員熟悉如何選擇 適合的靶序列，和分析RM幹擾用於靶的功效。用於分析RNA幹擾用
成，如定量逆轉錄酶-聚合酶鏈反應(qRT-PCR)，免疫印跡法和酶聯免 疫吸附測定(ELISA)，只要這種技術適於特定的靶，例如通過擴增引物 和抗體的正確選擇。
一個方面，本發明提供了一種降低siRM的免疫刺激潛能的方 法。在一個實施方案中，該方法可用於降低前面表徵的siRNA的免疫 刺激潛能。在一個實施方案中，該方法可用於降低預先未表徵的siRNA 的免疫剌激潛能，例如在首次設計和合成siRNA中。該方法包括引入 具有2'修飾的糖的修飾核苷酸到具有有義鏈和反義鏈的雙鏈s i RNA的 有義鏈中的步驟，其中反義鏈與靶序列互補，附帶條件是具有2'修飾 的糖的修飾核苷酸不是鎖核酸(LNA)或2'-0-甲基核苷酸。如本發明的 這個方面中所使用的，引入具有2'修飾的糖的修飾核苷酸指，用如上 述限定的具有2'修飾的糖的修飾核苷酸取代現有的或天然存在的核 苷酸。例如，在現有的siRNA中，反義鏈具有G，其要求在有義鏈有 一個C，脫氧胞苷(dC)取代C。引入具有2'修飾的糖的修飾核苷酸到 有義鏈的步驟，因此一般涉及以使所需的修飾核苷酸整合到產物有義 鏈的所需位置的方式，設計並進行有義鏈的合成。一個方面，本發明是一種使用本發明的siRNA實踐RNA幹擾的方 法。更特別地，根據本發明這個方面的方法，是一種用於降低具有把 序列的基因表達的方法。如這裡使用的，在一個實施方案中，降低具 有靶序列的基因表達，指降低從目標特定基因轉錄的信使RNA的量。 也如這裡使用的，在一個實施方案中，降低具有乾序列的基因表達， 指降低目標特定基因編碼的細胞中存在的蛋白產物的含量。根據本發 明的這個方面的方法，包括使包含具有靶序列的基因的細胞與有效量 的具有有義鏈和反義鏈的雙鏈短幹擾核糖核酸(s iRM)接觸的步驟，其 中反義鏈與靶序列互補，而且其中有義鏈包括具有2M務飾的糖的修飾 核苷酸，附帶條件是具有2'修飾的糖的修飾核苷酸不是鎖核酸(LM) 或2'-0-甲基核普酸，以降低具有靶序列的基因表達。根據本發明這 個方面的方法，可體外和體內進行。當體內實施該方法時，接觸步驟 另外需要施用本發明的組合物給個體。
本發明的siRM可特別用於治療患有癌症的個體，患有傳染病的 個體，患有自身免疫性疾病的個體，患有敏感症的個體以及患有哮喘 的個體，但不僅僅限於此。
如這裡使用的"癌症"，指細胞不受控制的生長，其妨礙身體器 官和系統的正常發揮功能。從它們的起始位置和種子活器官移動的癌 症，最終會通過受影響的器官的功能性衰竭而導致個體的死亡。造血 的癌症，如白血病，能在竟爭中勝過個體中正常的造血間隔，從而導 致造血故障(以貧血，血小板減少和中性白細胞減少的形式)，最終 導致死亡。
如這裡使用的，患有癌症的個體指具有可檢測的癌症細胞的個體。 轉移性病灶是癌細胞區域，不同於原發腫瘤位置，其源於癌細胞 從原發腫瘤散布到身體的其它部分。在診斷原發腫瘤塊的診斷，可以 監控個體的轉移性病灶的存在。最常通過核磁共振成像(MRI)掃描，計 算層析成象(CT)掃描，血液和血小板計數，肝功能研究，胸X-射線， 和骨掃描的單獨或組合使用，以及監控特異性症狀，來檢測轉移性病 灶。癌症包括，但不限於，皮膚基底細胞癌，膽道癌；膀胱癌；骨癌； 腦和CNS癌；乳腺癌；宮頸癌；絨毛膜癌；結腸和直腸癌；結締組織 癌；消化系統的癌症；子宮內膜的癌症；食道癌；眼癌；頭部和頸部 的癌症；胃癌；上皮細胞內的贅生物；腎癌；喉癌；白血病；肝癌； 肺癌(例如，小細胞和非小細胞)；淋巴瘤包括霍奇金氏和非霍奇金氏 淋巴瘤；黑素瘤；骨髓瘤；成神經細胞瘤；口腔癌(例如，唇，舌， 口腔和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成視網膜細胞瘤；橫紋肌 肉瘤；直腸癌；腎癌；呼吸系統的癌；肉瘤；皮膚癌；胃癌；睪丸癌； 甲狀腺癌；子宮癌；泌尿系統的癌症以及其它的癌和肉瘤。
如這裡使用的"傳染病"，指由傳染性的微生物表面，局部或全 身地侵入宿主而引起的紊亂。傳染性微生物包括細菌，病毒，寄生蟲 和真菌。
如這裡使用的，患有傳染病的個體，指已經暴露於傳染性的生物 體，而且體內具有急性或慢性可檢測水平的生物體的個體。暴露於傳 染性的生物體一般發生在個體的外表面，例如，皮膚或黏膜的膜，和/ 或指傳染性的生物體穿透個體的外表面。
人類中已經發現的病毒的例子包括，但不限於，逆轉錄病毒(例 如人類免疫缺陷性病毒，如HIV-1 (也稱為HDTV-III， LAVE或 HTLV-III/LAV，或HIV-III;及其它的分離物，如HIV-LP;細小核糖 核酸病毒(例如骨髓灰白質炎病毒，A型肝炎病毒；腸道病毒，人柯 薩奇病毒，鼻病毒，艾柯病毒)；Calciviridae (例如引起胃腸炎的 菌林)；披蓋病毒科(例如馬腦炎病毒，風滲病毒)；Flaviridae(例 如登革熱病毒，腦炎病毒，黃熱病毒)；冠狀病毒科(例如冠狀病毒)； 彈狀病毒科(例如水泡性口膜炎病毒，狂犬病病毒)；纖絲病毒科(例 如伊波拉病毒)；副粘病毒科(例如副流感病毒，腮腺炎病毒，麻滲 病毒，呼吸道合胞病毒)；正粘病毒科(例如流感病毒)；Bimgaviridae (例如漢坦病素，寄生性野恭病毒，白蛉病毒和內羅病毒)；沙粒病 毒科(出血熱病毒)；呼腸孤病毒科(例如呼腸孤病毒，環狀病毒和 輪狀病毒)；雙核糖核酸病毒科；肝DNA病毒科(B型肝炎病毒)；微小病毒科(細小病毒)；乳多空病毒科(乳頭狀瘤病毒，多形瘤病 毒)；腺病毒科(大多數腺病毒)；皰滲病毒科(單純皰滲病毒(HSV) l和2，水痘帶狀皰滲病毒，巨細胞病毒(CMV)，皰滲病毒；痘病毒 科(天花病毒，牛痘病毒，痘病毒)；和虹彩病毒科(例如非洲豬瘋 病毒)；和未分類的病毒(例如A肝炎病原體(認為是一種B型肝炎 病毒的有缺陷的隨體)，非甲非B型肝炎病原體(l類-內部傳送；2 類-腸胃外傳送(即C型肝炎)；諾瓦克和相關病毒，以及星狀病毒)。
革蘭氏陰性與革蘭氏陽性細菌都用作脊推動物中的抗原。這種革 蘭氏陽性細菌包括，但不限於，巴斯德菌屬，葡萄球菌屬和鏈球菌屬 菌種。革蘭氏陰性細菌包括，但不限於，大腸桿菌，假單胞菌屬和沙 門氏菌屬菌種。感染菌的具體實例包括，但不限於，幽門螺桿菌，布 氏疏螺旋體，侵肺軍團菌，分支桿菌屬數種(例如結核分支桿菌，鳥 分支桿菌，胞內分支桿菌，堪薩斯分支桿菌，戈登分支桿菌)，金黃色 葡萄球菌，淋病奈瑟氏菌，腦膜炎奈瑟氏球菌，單核細胞增生利斯特 氏菌，釀膿鏈球菌(A組鏈球菌屬)，無乳鏈球菌(B組鏈球菌屬)， 鏈球菌屬(viridans組)，糞鏈球菌，牛鏈球菌，鏈球菌屬(厭氧種)， 肺炎鏈球菌，病原性的彎曲桿菌屬菌種，腸球菌菌種，流感嗜血桿菌， 炭疽桿菌，白喉棒桿菌，棒狀桿菌屬菌種，紅斑丹毒絲菌，產氣莢膜 梭菌，破傷風桿菌，產氣腸桿菌，克雷白氏桿菌，多殺巴斯德氏菌， 畸形菌體菌種，具核梭桿菌，念珠狀鏈桿菌，蒼白密螺旋體，雅司螺 旋體，鉤端螺旋體屬，立克次氏體和伊氏放線菌。
真菌的實例包括新型隱球菌，莢膜組織胞漿菌，粗球孢子菌，皮 炎芽生菌，沙眼衣原體，白色假絲酵母。
其它的傳染性生物體(即，原生生物)包括瘧原蟲屬數種如鐮狀 痴原蟲，三日痴原蟲，卵形瘧原蟲，和間日瘧原蟲以及龔地弓形蟲。 血液帶有的和/或組織寄生蟲包括瘧原蟲屬數種，果氏巴貝蟲，分歧巴 貝蟲，熱帶利什曼蟲，利什曼原蟲數種，巴西利什曼蟲，杜氏利什曼 蟲，甘比亞錐蟲和羅德西亞錐蟲(非洲昏睡病)，南美洲錐蟲(恰加 斯氏病)和龔地弓形蟲。文獻中已經廣泛地描述了其它的醫學上相關的微生物，例如，參
見，C. G. A Thomas, Medical Microbiology, Bailliere Tindall, Great Britain 1983，以其全部內容引入這裡作為參考。
本發明的siRNA也可用於治療和預防自身免疫性疾病。自身免疫 性疾病是這樣一類疾病，其中個體自身的抗體與宿主組織發生反應， 或者其中免疫效應性T細胞與內源的自身肽自動發生反應，並引起組 織破壞。因此免疫應答被確定為抗個體自身的抗原，其稱為自體抗原。 自身免疫疾病包括，但不限於，類風溼性關節炎，克羅恩氏病，多發 性硬化，系統性紅斑狼瘡(SLE)，自身免疫腦脊髓炎，重症肌無力(MG)， 橋本氏甲狀腺炎，古德帕斯徹氏症候群，天皰瘡(例如，尋常天皰瘡)， Grave氏病，自身免疫性溶血性貧血，自身免疫性血小板減少性紫癜， 帶有抗膠原蛋白抗體的硬皮病，混合結締組織病，多肌炎，惡性貧血， 自發的青銅色皮膚病，自身免疫相關的不育症，血管球性腎炎(例如， 新月形的血管球性腎炎，增生性的血管球性腎炎)，大皰的類天皰瘡， 舍格倫氏症候群，胰島素抵抗力和自身免疫糖尿病。
如這裡使用的，敏感症指對物質(過敏原)獲得的超敏反應。過 敏疾病包括但不限於，溼疹，過敏性鼻炎或鼻炎，花粉熱，變應性結 膜炎，支氣管性哮喘，蕁麻疹和食品變應性，其它的特應性的疾病包 括特應性皮炎；過敏性反應；藥物過敏和血管性水腫。過敏性疾病包 括但不限於鼻炎(花粉熱)，哮喘，蕁麻疹和特應性皮炎。
如這裡使用的，患有敏感症的個體是具有對過敏原的過敏性反應 的個體。
過敏原指能在敏感的個體中誘導過敏或氣喘應答的物質(抗原)。 過敏原的數目是巨大的，而且可以包括花粉，昆蟲毒液，動物頭皮屑 塵屑，真菌孢子和藥物(例如青黴素)。天然的，動物和植物過敏原 的實例包括，但不限於，對下列屬特異性的蛋白質Canis (家犬)； 塵蟎屬(例如粉塵蟎)；Felis (Felis domesticus ) ; Ambrosia (Ambrosia artemiisfolia);黑麥草屬(例如黑麥草或多花黑麥草)； 柳杉(Cryptomeriajaponica);鏈格孢屬(鏈格孢)；榿木；榿木屬(Alnus gultinoasa);樺屬(Betula verrucosa );櫟屬(Quercus alba); 齊墩果(01ea europa);艾屬(艾蒿)；車前(例如長葉車前)；墻 草(例如牆草officinalis或牆草judaica) ; Blattella (例如德國 小蠊)；Apis (例如Apis multiflor認)；Cupressus (例如地中海 柏木,Cupressus arizonica和Cupressus macrocarpa ); 檜屬(例 :i口檢屬sabinoides，鑽筆;+白，歐洲刺;t白和Juniperus ashei ) ; Thuya (例如Thuya orientalis ) ; Chamaecyparis (例如曰本扁柏)；大蠊 屬(例如美洲大蠊)；冰草屬(例如匍旬冰草)；黑麥屬(例如黑麥)； 小麥屬(例如小麥)；鴨茅屬(例如鴨茅)；Festuca (例如牛尾草)； Poa (例如Poa pratensis或扁早熟禾h燕麥屬(例如燕麥)；Holcus (合i]:i(口械毛草)；Anthoxanthum (伊J:i口黃花茅)；燕、麥草屬(命J:ft口燕、 麥草)；Agrostis (例如小糠草)；Phleum (例如梯牧草)；Phalaris (例如鶴草);雀稗屬(例如百喜草);高粱(例如Sorghum halepensis ) 和Bromus (例如無芒雀麥草)。
如這裡使用的，哮喘指呼吸系統紊亂，其特徵為炎症，導氣管狹 窄，和導氣管對吸入劑增強的反應性。哮喘經常，不過不是專門地， 與特應性或過敏性狀況相關。津喘的症狀包括源於氣流阻塞的喘息， 氣喘，胸緊密，以及咳嗽的復發性事件。與哮喘相關的導氣管炎症可 以通過觀察許多生理變化來檢測，如，導氣管上皮細胞的剝蝕，基底 膜下的膠原蛋白沉積，浮腫，肥大細胞激活，炎性細胞浸潤，包括嗜 中性白細胞，inosineophil和胸腺依賴性細胞。由於導氣管炎症的結 果，哮喘患者常常經歷導氣管極度應答，氣流受限，呼吸性症狀，和 慢性疾病。氣流受限包括急性支氣管收縮，導氣管浮腫，宮頸管粘液 栓形成，和導氣管重新塑造，其常常導致支氣管阻塞。在哮喘的有些 情況中，基底膜下成纖維化會發生，其導致肺功能的持久性異常。
如這裡使用的，患有津喘的個體是具有呼吸系統紊亂的個體，其 特徵為炎症，導氣管狹窄，和導氣管對吸入劑增強的反應性。哮喘經 常，不過不是專門地，與特應性或過敏性症狀相關。哮喘還經常，不 過不是專門地，與接觸引發劑相關。如這裡使用的"引發劑"指引起哮喘的組合物或環境條件。引發劑包括，但不限於，過敏原，氣溫酷
寒，鍛鍊，病毒感染，so2。
本發明的siRNA可以單獨使用或者與其它的治療劑組合使用。在 一個實施方案中，其它的治療劑是本發明的另一種siRNA。 siRNA和其 它的治療劑可以同時或相繼施用。當其它的治療劑同時施用時，它們 可以相同的或單獨的製劑施用，但是同時施用。當其它的治療劑與 siRNA的施用暫時是分離的時，其它的治療劑彼此以及與siRNA相繼 施用。這些化合物施用之間的時間間隔可以為幾分鐘或者可以更長。 其它的治療劑包括，但不限於，抗微生物劑，抗癌劑，抗過敏劑，等 等。
本發明的siRM可與抗微生物劑一起施用給個體。如這裡使用的， 抗微生物劑，指天然存在的或合成的化合物，其能殺死或抑制傳染性 微生物。可用於本發明的抗微生物劑的種類取決於個體被感染的或處 於成為被感染的風險中的微生物的種類。抗微生物劑包括，但不限於， 抗菌劑，抗病毒劑，抗真菌劑和抗寄生蟲劑。短語如"抗感染劑"，
"抗菌劑，，，"抗病毒劑"，"抗真菌劑"，"抗寄生蟲劑"和"殺 寄生蟲劑，，，對本領域普通技術人員來說具有很確定的含義，而且在 標準醫藥教科書中有定義。簡而言之，抗菌劑殺死或抑制細菌，而且 包括具有類似功能的抗生素以及其它的合成或天然化合物。抗生素是 低分子量分子，其由細胞如微生物，生產作為次級代謝產物。 一般， 抗生素幹擾一種或多種細菌功能或結構，其是微生物特異性的，而且 宿主細胞中不存在。抗病毒劑可以從天然來源分離或者合成，而且可 用於殺死或抑制病毒。抗真菌劑用於處理表面的真菌感染以及條件性 病原微生物，和初級的全身性真菌感染。抗寄生蟲劑殺死或抑制寄生 蟲。
可用於人給藥的抗寄生蟲劑，也稱為殺寄生蟲劑的例子包括，但 不限於，丙硫咪唑，兩性黴素B，苄硝唑，硫雙二氯酚，氯喹HC1，氯 全磷酸鹽，氯林肯黴素，去氫吐根鹼，乙胺嗪，二氯散糠酸酯，依氟 鳥氨酸，呋喃唑酮，糖皮質激素，氯氟菲醇，雙碘喹啉，異阿凡曼菌素，甲苯咪唑，曱氟喹，葡曱胺，銻酸鹽，米拉索普，美曲磷脂，甲 硝噠唑，貝螺殺，硝呋噻氧，羥胺硝喹，巴龍黴素，戊烷脒羥乙基磺 酸鹽，哌嗪，吡喹酮，伯氨喹啉磷酸鹽，氯胍，雙羥萘酸奮嘧咬，
pyrimethanmine-氨磺醯，pyrimetha認ine-周效碌胺，套吖因HC1， 硫酸奎寧，葡糖酸奎尼定，螺旋黴素，葡萄糖酸銻鈉，蘇拉明，四環 素，強力黴素，噢苯咪唑，磺甲硝咪唑，trimethroprim-磺胺甲基-5 異噁唑和錐蟲胂胺，其中的一些單獨使用或與其它的聯合使用。
抗菌劑殺死或抑制細菌的生長或功能。 一大類抗菌劑是抗生素。 抗生素，其可有效的殺死或抑制各種各樣的細菌，稱為廣鐠抗菌素。 其它種類的抗生素能顯著有效的抗格蘭氏陽性或革蘭氏陰性類的細 菌。這些種類的抗生素稱為窄諳性的抗生素。能有效的抗單一生物體 或疾病，而不抗其它種類的細菌的其它抗生素，稱為有限i昝抗生素。 有時根據它們的主要作用方式，對抗菌劑進行分類。 一般，抗菌劑是 細胞壁合成抑制劑，細胞膜抑制劑，蛋白質合成抑制劑，核酸合成或 功能性抑制劑，以及竟爭性抑制劑。
抗病毒劑是這樣的化合物，其防止病毒對細胞的感染，或病毒在 細胞內部複製。存在的抗病毒劑比抗菌劑少，因為病毒複製的過程與 宿主細胞內的DNA複製是如此密切相關，以致非特異性的抗病毒劑對 宿主將常常是有毒的。病毒感染過程中有幾個階段可以被抗病毒劑阻 斷或抑制。這些階段包括，病毒對宿主細胞的附著(免疫球蛋白或結 合肽)，病毒的脫殼(例如氨基三環癸烷)，病毒mRNA的合成或翻譯 (例如幹擾素)，病毒RNA或DNA的複製(例如核苷酸類似物)，新 的病毒蛋白質的成熟(例如蛋白酶抑制劑)，和病毒的出芽和釋放。
核苷酸類似物是合成化合物，其與核苷酸相似，但是其具有不完 全的或異常的脫氧核糖或核糖基團。 一旦核苷酸類似物處於細胞中， 它們被磷酸化，產生形成的三磷酸鹽，其與正常的核苷酸竟爭整合到 病毒DNA或RNA中。 一旦核苷酸類似物的三磷酸鹽形式整合到增長的 核酸鏈中，它引起與病毒聚合酶的不可逆結合，並從而鏈終止。核苷 酸類似物包括，但不限於，無環鳥苷(用於治療單純皰疹病毒和水痘-帶狀皰疹病毒)，gancyclovir (用於治療巨細胞病毒)，碘普，病毒 唑(用於治療呼吸道合胞病毒)，雙脫氧肌苷，雙脫氧胞苷，疊氮胸 苷(愛滋病防護藥)，。米唾莫特和resimiquimod。
幹擾素是由感染病毒的細胞以及免疫細胞分泌的細胞因子。幹擾 素通過與受感染細胞相鄰的細胞上的特異性受體結合發揮作用，導致 細胞中的改變，其保護細胞免於被病毒感染。oc和p-千擾素還誘導受 感染細胞表面上的I型和II型MHC分子表達，產生增強的抗原呈遞 用於宿主免疫細胞識別。ct和p-幹擾素作為重組形式是有效的，而且 已經用於治療慢性乙型和C型肝炎感染。以抗病毒治療有效的劑量， 幹擾素具有嚴重的副作用如發燒，不適和體重減輕。
可用於本發明的抗病毒劑包括，但不限於免疫球蛋白，氨基三環 癸烷，幹擾素，核苷酸類似物和蛋白酶抑制劑。抗病毒的具體的實例 包括，但不限於乙醯嗎喃；無環鳥苷；無環鳥苷鈉；阿德福韋；阿洛 夫定；阿韋舒託；鹽酸金剛烷胺；珠嚢殼素；阿立酮；阿的維定甲磺 酸鹽；阿夫立定；西多福韋；西潘茶鹼；鹽酸阿糖胞苷；地拉夫定甲 磺酸鹽；脫氧無環鳥苷；2'，3'-雙脫氧肌苷；二惡沙利；依度尿苷； 恩韋拉登；恩韋肟；泛西洛維；抑感靈鹽酸鹽；非西他濱；非阿尿苷； 膦酸利酯；膦曱酸鈉；Fosfonet鈉；9-(1， 3-二羥-2-丙氧甲基)鳥嘌 呤；9-(1，3-二羥-2-丙氧甲基)鳥噪呤鈉；碘苷；乙氧二羥丁酮；拉米
夫定；洛布卡韋；甲氧笨異喹鹽酸鹽；甲吲噻腙；奈韋拉平；噴西洛 維；吡羅達韋；病毒唑；鹽酸金剛乙胺；沙奎那韋甲磺酸鹽；索金剛 胺鹽酸鹽；索利夫定；匐支青黴菌素；雙脫氧胸苷；雙二乙氨乙基芴 酮鹽酸鹽；三氟尿苷；伐昔洛韋鹽酸鹽；阿糖腺苷；阿糖腺苷磷酸酯； 阿糖腺苷磷酸鈉；韋羅肟；2'，3'-雙脫氧胞苷；疊氮胸苷和淨韋肟。
抗真菌劑用於治療和預防傳染性的真菌。抗真菌劑往往通過它們 的作用機理進行分類。 一些抗真菌劑作為細胞壁抑制劑通過抑制葡萄 糖合酶發揮作用。這些包括，但不限於，basiungin/ECB。其它的抗真 菌劑通過使膜完整性不穩定來發揮作用。這些包括，但不限於，咪唑 類，如克黴唑，絲他康唑，氟康唑，依曲康唑，酮康唑，咪康唑，和伏立康唑，以及FK 463，兩性黴素B， BAY 38-9502， MK 991，普拉米 星，UK 292，布替那非和特比萘芬。其它的抗真菌劑通過破壞幾丁質 (例如幾丁質酶)或免疫抑制(501乳骨劑)發揮作用。
本發明的siRNA也可以與抗癌治療一起施用。抗癌治療包括癌藥 物，放射和外科手術方法。如這裡使用的，"癌藥物"指施用給個體 用於治療癌症的用途的藥劑。如這裡使用的，"治療癌症"包括防止 癌症的發展，減輕癌症的症狀，和/或抑制已形成的癌症的生長。在其 它的方面，癌症藥物被施用給處於生長癌症的風險中個體，以便降低 生長癌症的風險。這裡描述了用於治療癌症的各種類型的藥物。為了 本說明書的目的，癌症藥物被分為化療劑，免疫治療劑，癌症疫苗， 激素治療和生物反應調節物。
化療劑可以選自氨甲喋呤，長春新鹼，阿黴素，順氯氨鉑，含有 非糖物質的氯乙基硝基脲，5-氟尿嘧啶，絲裂黴素C，爭光黴素，亞 德利亞黴素，氮烯唑胺，紫杉酚，fragyline， Meglamine GLA，戊柔 比星，卡莫司汀和poliferposan, MMI270, BAY 12-9566， RAS famesyl 轉移酶抑制劑，famesyl轉移酶抑制劑，匪P ， MTA/LY231514 ， LY264618/Lometexo1, Glamolec, CI-994, TNP-470，和美新/託泊替 康，PKC412,伐司樸達/PSC833,諾消靈/Mitroxantrone， Metaret/ 蘇拉滅，巴馬司他，E7070， BCH-4556， CS-682, 9-AC， AG3340， AG3433， Incel/VX-710， VX-853， ZD0101， ISI641, 0DN 698， TA 2516/Marmistat， BB2516/Marmistat， CDP 845， D2163, PD183805， DX8951f，乳桿菌 製劑DP 2202， FK.317,溶鏈菌/OK-432， AD 32/戊柔比星，氯化鍶/ 鍶衍生物，Temodal/替莫唑胺，阿黴素脂質體/脂質體亞德利亞黴素， Yewtaxan/紫杉醇，紫杉酚/紫杉醇，希羅達/卡培他濱，氟鐵龍/去氧 氟尿苷，Cyclopax/口服的紫杉醇，口服的紫杉烷，SPU-(n"7/順氯氨鈿， ■ 1275/Flavopirido1， CP-358 (774)/EGFR， CP-609 (754)/RAS致 癌基因抑制劑，BMS-182751/口服鉑，UFT (Tegafur/尿嘧啶)，左旋 咪唑/左旋四咪唑，恩尿嘧啶/776C85/5FU增強劑，依立替康/左旋四 咪唑，鹽酸依立替康和山梨醇注射劑/依立替康，Tumodex/Ra 1 i t r exed ，克拉立平/克拉屈濱，Paxex/紫杉醇，鹽酸多柔比星脂質體/脂質體亞 德利亞黴素，Caelyx/脂質體亞德利亞黴素，福達華/氟達拉濱， Pharmarubicin/表柔比星，DepoCyt ， ZD 1839 , UJ 79553/雙 Naphtalimide， LU 103793/多拉司他汀，Caetyx/脂質體亞德利亞黴 素，健擇/吉西他濱，ZD 0473/Anormed， YM 116，碘種子，CDK4和 CDK2抑制劑，PARP抑制劑,D4809/Dexifos諸ide， Ifes/鎂鈉針劑/ 異磷醯胺，威猛/表鬼臼毒噻吩糖苷，鉑爾定/卡鉑，順鉑/順氯氨鉑， 足葉乙苷/鬼臼亞乙苷，ZD 9331，紫杉特爾/紫杉萜，鳥嘌呤阿糖腺苷 的前體藥物，紫杉烷類似物，亞硝基脲，烷化劑如melphelan和環磷 醯胺，氨魯米特，天冬醯胺酶，白消安，卡鉑，Chlorombucil，阿糖 胞苷HC1，放線菌素，道諾紅菌素HC1，雌氮芥磷酸酯鈉，鬼臼亞乙苷 (VP16-213) , 5-氟脫氧尿苷，氟尿嘧啶(5-FU)，氟他胺，羥基脲，異 磷醯胺，幹擾素cc-2a， ct-2b，醋酸亮丙瑞林醋酸鹽(LHRH-釋放因子 類似物)，環己亞硝脲(CCNU)， 二氯曱二乙胺HC1(氮芥子氣)，巰基 嘌呤，巰乙磺酸鈉，米託坦(o. p'-DDD)，米託蒽醌HC1，奧曲肽， 光輝黴素，普魯節肼HC1，鏈脲黴素，枸櫞酸它莫西芬，2-氨基嘌呤 -6-硫醇，硫替派，硫酸長春鹼，安丫啶(m-AMSA),阿扎胞苷，促紅 細胞生成素，六甲三聚氰胺(H醒)，白細胞介素2，丙脒腙(甲基-GAG; 甲基乙二醛雙丙咪腙；MGBG)，噴司他丁 (^脫氧柯福黴素)，甲基 環己亞硝脲(曱基-CCNU)，表鬼臼毒噻吩糖苷(VM46)和去乙醯長春 醯胺硫酸鹽，但是不是如此有限。
免疫抑制劑選自Ributaxin，赫賽汀，Quadramet，單抗17-1A， IDEC-Y2B8， BEC2， C225, Oncolym， SMART M195, ATRAGEN， Ovarex， Bexxar， LDP-03， ior t6, MDX-210, MDX-ll， MDX-22， OV103, 3622 W94，抗VEGF，Zenapax，MDX-220，MDX-447,MELI醒UNE-2，MELI麗UNE-1， CEACIDE, Pretarget, NovoMAb-G2, TNT, Gliomab-H, GNI-250 , EMD-72000， LymphoCide, CMA 676， Monopharm-C， 4B5, ioregf.r3， ior c5， BABS,抗FLK-2， MDX-260， ANA Ab， SMART 1D10 Ab， SMART ABL 364 Ab和ImmuRAIT-CEA，但是不是如此有限。癌症疫苗可以選自EGF，抗獨特型癌症疫苗，Gp75抗原，GMK黑 素瘤疫苗，MGV神經節苷脂綴合物疫苗，Her2/neu， 0varex， M-Vax， O-Vax， L-Vax， STn-KHL theratope， BLP25 (MUC-1 )，脂質體獨特 型疫苗，Melacine，肽抗原疫苗，毒素/抗原疫苗，基於MVA的疫苗， PACIS， BCG疫苗，TA-HPV， TA-CIN， DISC-病毒和ImmuCyst/TheraCys， 但是不是如此有限。
本發明的siRNA可與哮喘/過敏性藥物一起施用給個體。如這裡使 用的，"哮喘/過敏性藥物"是一種組合物，其降低哮喘或過敏性反應 的症狀，防止津喘或過敏性反應的發展，或抑制津喘或過敏性反應。 診斷和處理哞喘的指南中描述了用於治療津喘和過敏的各種藥物，專 家組報告2， NIH
發明者C·舍特, E·尤爾曼, I·安迪奧, J·沃爾莫, M·朱爾克, M·韋伯, S·皮施 申請人:科利製藥公司;快而精有限公司