細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑及使用方法

2023-12-08 20:13:31

專利名稱：細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑及使用方法
技術領域：
本發明公開的主題涉及保護健康細胞免受DNA損傷和增加諸如生長因子的毒性降低劑(toxicity reducing agent)的效力的方法和組合物。此外，本發明公開的主題涉及通過阻斷某些免疫細胞的增殖來治療自身免疫病的方法和組合物。特別地，本發明公開的主題涉及使用選擇性細胞周期蛋白依賴性激酶4/6(CDK4/6)抑制劑在哺乳動物個體內的某些幹細胞和祖細胞群體中誘導藥理性靜止，從而增強該個體的臨床結果。縮寫
%=百分比
μβ = 微克 KL =微升 μΜ =微摩爾濃度
2BrIC =2-溴-12,13-二氫-511-吲哚並[2,3-&]吡咯並[3,4]-咔唑-5，6-二酮
BM =骨髓 BM-MNC =骨髓單核細胞
BrdU = 5-溴-2-脫氧尿苷
5BUN=血尿素氮(blood area nitrogen)
CAFC=鵝卵石區形成細胞
CBC=全血細胞計數
CDK=細胞周期蛋白依賴性激酶
CDK4/6=細胞周期蛋白依賴性激酶4和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6
CLP=淋巴共同祖細胞
CMP=髓共同祖細胞
CNS=中樞神經系統
DMEM=達爾伯克改良伊格爾培養基
DMSO=二甲基亞碸
DNA=脫氧核糖核酸
DOX=多柔比星
EPO=紅細胞生成素
Etop=依託泊苷
FACS=螢光激活細胞分選術
FBS=胎牛血清
g=克
GC=生發中心
G-CSF=粒細胞集落刺激因子
GEMM=基因工程小鼠模型
GM-CSF=粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子
GMP=粒細胞-單核細胞祖細胞
Gy=戈瑞
h=小時
HPLC=高效液相層析
HSC=造血幹細胞
HSPC=造血幹細胞和造血祖細胞
IC50=50%抑制濃度
IHC=免疫組織化學
IL=白介素IP =腹膜內
IR =電離輻射
ITP =特發性血小板減少性紫癜
kg = 千克
LT-HSC =長期造血幹細胞
MEP =巨核細胞-紅細胞類祖細胞
mg = 毫克
MPP =多能祖細胞
nM =納摩爾濃度
NP-CGG =硝基苯乙醯-雞γ球蛋白
PD = 6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌嗉-1-基-Π比啶
-2-基氨基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮(也稱為PD 0332991)
RA =類風溼性關節炎
RB =視網膜母細胞瘤抑癌蛋白
RLU =相對光單位
SEM =平均標準誤差
SLE =系統性紅斑性狼瘡
ST-HSC =短期造血幹細胞
Sv =西弗特
tHDF =調聚的人二倍體成纖維細胞 TTP 二血栓性血小板減少性紫瘢
背景技術：
癌症的治療常包括使用DNA損傷性藥物和/或其他DNA損傷性物質，如電離輻射。 這些治療對於正常的快速分裂細胞可以是非特異性和有毒的，特別是在高劑量下。這常在接受癌症治療的患者中引起各種副作用。例如，骨髓抑制(骨髓中血細胞生成嚴重降低)是此類副作用之一。它的特徵是骨髓抑制(貧血、中性白細胞減少症、粒細胞缺乏症和血小板減少)和淋巴細胞減少。中性白細胞減少症的特徵是循環嗜中性粒細胞數的選擇性降低和對細菌感染的易感性提高。 在美國，貧血(紅細胞或紅血球數、血紅蛋白量或紅細胞壓積(通過測定血細胞比容表徵) 降低)影響約67%的接受化療的癌症患者。參見BioWorld Today，第4頁，2002年7月23 日。血小板減少症是血小板數降低伴有出血易感性增高。淋巴細胞減少症是化療的常見副作用，其特徵是循環淋巴細胞(也稱為T-細胞和B-細胞)數量降低。淋巴細胞減少症患者易受到多種感染。因此，醫生通常必須平衡化療和放療技術在破壞異常增殖細胞中的效力與相關的對正常細胞的細胞毒性效應。因此，化療和放療技術的治療指數變窄，常導致不完全的腫瘤縮小、腫瘤復發、增加腫瘤負荷以及誘導抗化療和/或抗輻射腫瘤。已設計了各種方法以努力減少正常組織損傷，同時仍遞送有效治療劑量的DNA損傷劑。關於IR，這些技術包括近距離照射、分次和高分次劑量給藥、複雜劑量調度和遞送系統、以及用線性加速器的高壓治療。然而，這類技術僅試圖取得輻射的治療效果和不期望的效果之間的平衡，而並未實現完全效力。小分子已用來減輕某些化療化合物的一些副作用。例如，亞葉酸已用來緩解甲氨蝶呤(methotrexate)對骨髓細胞和對胃腸道黏膜細胞的效應。氨磷汀已用來減輕接受烷基化或含鉬化療劑的患者的中性白細胞減少症相關的發熱和黏膜炎的發病。此外，右雷佐生已用來提供對於蒽環類抗癌化合物的心臟保護。不幸的是，許多化療保護劑例如右雷佐生和氨磷汀在相伴給藥時存在可能降低化療效力的問題。其他化療保護治療包括使用生長因子。造血生長因子可在市場上以重組蛋白的形式得到。這些蛋白包括粒細胞集落刺激因子(G-CSF)和粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子 (GM-CSF)及它們用於治療中性白細胞減少症的衍生物，以及紅細胞生成素(EPO)及其用於治療貧血的衍生物。然而，雖然生長因子可以加速一些血液細胞系的恢復，但是它們不治療血小板、巨噬細胞、T-細胞或B-細胞的抑制。已證明非選擇性激酶抑制劑星形孢菌素在一些培養的細胞類型中防止DNA損傷齊[J。參見 Chen et al. , J. Natl. Cancer Inst.，92，1999—2008 (2000)禾口 Oieda et al., Int. J. Radiat.Biol.，61，663-667 (1992)。星形孢菌素是天然產物，並且是高親合性地結合大多數哺乳動物激酶的非選擇性激酶抑制劑。參見Karaman et al. ,Nat. Biotechnol.， 26,127-132(2008)。取決於細胞類型、藥物濃度和暴露時間長度，星形孢菌素治療可以引發一系列細胞反應，包括細胞凋亡、細胞周期停滯和細胞周期關卡破壞(compromise)。 例如，已證明星形孢菌素通過幾種報導的機制(包括消除G2關卡反應)使細胞對DNA 損傷劑例如電離輻射和化療敏感(參見Bernhard et al.，Int. J. Radiat.Biol. ,69, 575-584(1996) ;Teyssier et al.，Bull. Cancer,86,345-357(1999) Hallahan et al.， Radiat. Res.，129，345-350(1992) ZhanR et al.，J.Neurooncol.，15，1-7(1993) ；Guo et al. , Int.J. Radiat. Biol. ,82,97-109(2006) ；Bucher and Britten, Br.J.Cancer, 98，523-528(2008) Laredo et al.，Blood,84，229-237(1994) ;Luo et al.，Neoplasia, 3,411-419(2001) ;ffang et al. , Yao Xue Xue Bao，31，411-415 (1996) ;Chen et al.， J. Natl. Cancer Inst.，92，1999-2008 (2000)；和 Hirose et al.，Cancer Res.,61, 5843-5849(2001))。尚不清楚星形孢菌素治療在一些培養的細胞類型中防止DNA損傷劑的機制，所提出的幾種可能的機制包括抑制蛋白激酶C或降低CDK4蛋白水平。參見Chen et al.，J. Natl. Cancer Inst.，92，1999—2008 (2000)禾口 Oieda et al.，Int. J. Radiat. Biol.， 61,663-667(1992)。已證明星形孢菌素對造血祖細胞無效應，已證明恰在暴露於DNA損傷劑之後使用星形孢菌素不能提供保護。此外，在向哺乳動物體內給藥後，星形孢菌素的非選擇性激酶抑制產生與其對細胞周期的效應無關的顯著毒性(例如高血糖)，並且這些毒性已阻止其臨床使用。
因此，仍然需要實用的方法以保護預定接受、有風險接受或已經接受DNA損傷劑和/或事件暴露的個體，以及增加毒性降低劑的效力的方法。此外，仍然需要通過阻斷免疫細胞的增殖來治療自身免疫病的方法和組合物。發明概述在一些實施方案中，本發明公開的主題提供一種增加毒性降低劑在需要治療的個體中的效力的方法，所述方法包括提供個體，所述個體已暴露於、正暴露於或有風險暴露於DNA損傷劑或事件；向所述個體給予毒性降低劑；以及向所述個體給予藥學有效量的選擇性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)的化合物。在一些實施方案中，所述毒性降低劑為化療毒性降低劑。在一些實施方案中，所述毒性降低劑為輻射毒性降低劑。在一些實施方案中，所述毒性降低劑包括一種或多種選自包括但不限於以下物質的組的物質生長因子、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、聚乙二醇化G-CSF、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、血小板生成素、紅細胞生成素、聚乙二醇化紅細胞生成素、白介素(IL)-12、青灰因子(steel factor)、角質形成細胞生長因子或者上述物質的衍生物。在一些實施方案中，所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物在所述個體內的一種或多種細胞中誘導藥理性靜止(pharmacologic quiescence)。在一些實施方案中，所述一種或多種細胞各自選自包括以下細胞的組血液細胞、血液幹細胞和血液前體細胞。在一些實施方案中，在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之前、在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件的同時、或者在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之後向所述個體給予所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。在一些實施方案中，在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之後約M至約48小時之間向所述個體給予所述選擇性抑制⑶K4和/或⑶K6的化合物。在一些實施方案中，本發明公開的主題提供一種在需要治療的個體的非血液細胞或組織暴露於DNA損傷劑或事件之前或之後緩解所述細胞或組織中的DNA損傷的方法，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。在一些實施方案中，所述非血液細胞或組織包括來自包括以下的組中的一種的細胞或組織腎、 腸、心臟、肝、腦、甲狀腺、皮膚、腸黏膜、聽覺系統、肺、膀胱、卵巢、子宮、睪丸、腎上腺、膽囊、 胰、胰島、胃、血管、骨及它們的組合。在一些實施方案中，本發明公開的主題提供一種減少或抑制需要治療的個體中的記憶T細胞增殖的方法，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的對所述個體選擇性抑制⑶K4和/或⑶K6的化合物。在一些實施方案中，所述個體患有或有風險發展自身免疫病或變應性疾病。在一些實施方案中，所述自身免疫病或變應性疾病選自包括以下疾病的組系統性紅斑性狼瘡 (SLE)、類風溼性關節炎(RA)、自身免疫性關節炎、硬皮病、溶血性貧血、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性粒性白細胞減少、I型糖尿病、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、銀屑病、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、接觸性皮炎、風溼性多肌痛、葡萄膜炎、免疫性肺炎、自身免疫性肝炎、免疫性腎炎、免疫性腎小球腎炎、多發性硬化、自身免疫性神經病、白癜風、盤狀狼瘡、韋格納肉芽腫、過敏性紫癜、硬化性膽管炎、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性脈管炎、皮肌炎、外在和內在反應性呼吸道疾病(哮喘)、重症肌無力、自身免疫性卵巢衰竭、惡性貧血、艾迪生病、自身免疫性甲狀旁腺功能減退以及不適當的細胞免疫應答的其他症候群。在一些實施方案中，本發明公開的主題提供一種減少或抑制需要治療的個體中的 B細胞祖細胞增殖的方法，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的對所述個體選擇性抑制⑶K4和/或⑶K6的化合物。在一些實施方案中，所述個體患有或有風險發展自身免疫病或變應性疾病。在一些實施方案中，所述自身免疫病或變應性疾病選自系統性紅斑性狼瘡(SLE)、類風溼性關節炎(RA)、硬皮病、溶血性貧血、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、獲得性血友病(acquired inhibitors in hemophilia)、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、肺出血腎炎症候群、冷和溫凝集素病(cold and warm agglutin disease)、冷球蛋白血症以及不適當的抗體生成的症候群。在一些實施方案中，本發明公開的主題提供一種緩解需要治療的個體的自身免疫病或變應性疾病的方法，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的選擇性抑制CDK4和/ 或CDK6的化合物，其中所述化合物減少或抑制記憶T細胞增殖、B細胞祖細胞增殖、或者記憶T細胞增殖與B細胞祖細胞增殖。在一些實施方案中，所述自身免疫病或變應性疾病選自包括以下疾病的組系統性紅斑性狼瘡(SLE)、類風溼性關節炎(RA)、自身免疫性關節炎、硬皮病、溶血性貧血、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性粒性白細胞減少、I型糖尿病、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、銀屑病、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、接觸性皮炎、風溼性多肌痛、葡萄膜炎、免疫性肺炎、自身免疫性肝炎、免疫性腎炎、免疫性腎小球腎炎、多發性硬化、自身免疫性神經病、白癜風、盤狀狼瘡、韋格納肉芽腫、過敏性紫癜、硬化性膽管炎、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性脈管炎、皮肌炎、外在和內在反應性呼吸道疾病(哮喘)、重症肌無力、自身免疫性卵巢衰竭、惡性貧血、艾迪生病、自身免疫性甲狀旁腺功能減退、不適當的細胞免疫應答的其他症候群、肺出血腎炎症候群、冷和溫凝集素病、冷球蛋白血症以及不適當的抗體生成的症候群。在一些實施方案中，本發明公開的主題提供一種治療需要治療的個體的癌症的方法，其中所述癌症的特徵是升高的細胞周期蛋白依賴性激酶2 (CDD)活性水平或者是降低的視網膜母細胞瘤抑癌蛋白或視網膜母細胞瘤家族成員蛋白的表達，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。在一些實施方案中，所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物在癌細胞中不誘導藥理性靜止。在一些實施方案中，所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物提高癌細胞對DNA損傷劑的敏感性。在一些實施方案中，所述敏感性的提高增加癌細胞死亡。在一些實施方案中，所述升高的CDK2活性水平與MYC原癌基因擴增或過量表達有關。在一些實施方案中，所述升高的CDK2活性水平與細胞周期蛋白E1、細胞周期蛋白E2或細胞周期蛋白A的過量表達有關。在一些實施方案中，給予所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物緩解與暴露於DNA損傷劑或事件相關的血液毒性。在一些實施方案中。給予所述選擇性抑制CDK4和 /或CDK6的化合物緩解與暴露於DNA損傷劑或事件相關的長期毒性，如繼發性惡性腫瘤和脊髓發育不良。在一些實施方案中，在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之前、在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件的同時、或者在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之後向所述個體給予所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。在一些實施方案中，在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之後約M至約48小時之間向所述個體給予所述選擇性抑制⑶K4和/或⑶K6的化合物。在一些實施方案中，本發明公開的主題提供一種緩解個體中的化療誘導或放療誘導的血液起源或非血液起源的繼發性惡性腫瘤的方法，所述方法包括向所述個體給予藥理有效量的選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。在一些實施方案中，在所述個體接受化療或基於輻射的療法以治療原發性惡性腫瘤之前或期間向所述個體給予所述選擇性抑制 ⑶K4和/或⑶K6的化合物。本發明公開的主題的目的是提供通過向個體給予有效量的選擇性CDK4/6抑制劑化合物來保護所述個體中的健康細胞免受DNA損傷劑的影響和治療某些疾病狀況的方法。結合下文充分描述的附圖，隨著進一步描述，上文已述並通過本發明公開的主題全部或部分地實現的本發明公開的主題的目的，以及其他目的會變得顯而易見。


圖1 ⑶K4/6抑制增強紅細胞生成素介導的DNA損傷之後類紅細胞譜系的恢復的效力。向輻照(6.5Gy)的野生型小鼠(FVB/n)群組(8隻小鼠每群組)給予安慰齊U、紅細胞生成素(EPO)、CDK4/6抑制劑(PD033^91)或者CDK4/6抑制劑與EPO的組合 (PD0332991+EP0)o在治療之後的第17天進行連續取血，並且進行全血細胞計數以測定紅細胞、各種白細胞亞群和血小板的數量。處理對血小板的影響如左上角的圖所示，紅細胞 (RBC)在右上角的圖中，血紅蛋白(Hb)在左下角的圖中，而血細胞比容(HCT)在右下角的圖中。誤差棒代表+/-SEM。圖2A ⑶K4/6抑制在原代人腎近端小管上皮細胞中誘導G1停滯。用不同濃度的 PD033^91處理16小時的原代人腎近端小管上皮細胞的細胞周期分析的代表性直方圖。將細胞收穫、固定、染色並通過流式細胞術分析。利用來自Verity (Verity Software House, Topsham，Maine，United States of America)的 Mod-Fit 軟體擬合數據。增加 CDK4/6 抑制劑的濃度產生「完全(clean) 」Gl停滯，沒有細胞毒性的證據。圖2B ⑶K4/6抑制在原代人腎近端小管上皮細胞中誘導G1停滯。用不同濃度的 PD033^91處理16小時的原代人腎近端小管上皮細胞的細胞周期分析。將細胞收穫、固定、 染色並通過流式細胞術分析。利用來自Verity (Verity Software House, Topsham, Maine, United States of America)的 Mod-Fit 軟體擬合數據。Gl (菱形)、G2/M (方形)和 S (三角形)中的細胞的相應％如圖上所示。圖3 :CDK4/6抑制阻斷原代人腎近端小管上皮細胞的增殖。將細胞用不同濃度的 PD0332991 處理 72 小時。培養之後，利用 CellTiter-Glo (Promega，Madison，Wisconsin, United States of America)定量細胞增殖。數據代表4個重複的平均值(相對光單位， RLU)+/-標準差。圖4 :CDK4/6抑制在原代人腎近端小管上皮細胞中抑制依託泊苷誘導的DNA損傷。將細胞用PD033^91預處理16小時，然後用依託泊苷(Etop)預處理8小時。將細胞收集、固定、用抗YH2AX FITC染色並通過流式細胞術分析。利用？10燈0(1^擾計￡11~，111(3.， Ashland, Oregon, United States of America)分析數據。Y H2AX 陽性細胞的％如附圖所不。圖5 :CDK4/6抑制保護原代人腎近端小管上皮細胞免受依託泊苷誘導的細胞死亡。PD033^91以cdk4/6依賴性方式抑制化療誘導的細胞毒性。將原代人腎近端小管上皮細胞與30nM或IOOnM PD033^91培養16小時。加入依託泊苷(Etop，2. 5 μ M)，保持8小時。培養之後，用新鮮培養基替換該培養基，並且將所述細胞培養額外的7天。在第7天， 利用 CellTiter-Glo (Promega，Madison，Wisconsin，United States of America)評價細胞增殖。誤差棒示出+/-標準差。圖6 :CDK4/6抑制在用順鉬處理的小鼠中阻斷EdU摻入全腎。在腹膜內(IP)注射順鉬(10mg/kg)之前1小時將小鼠通過口腔管飼用PD0332991(150mg/kg)處理。處死之前每M小時IP給予EdU(100 μ g/小鼠)。採集腎，製備單細胞分離物並染色EdU摻入。通過流式細胞術評價增殖。數據代表未處理、順鉬處理和順鉬/PD033^91處理的細胞中EdU染色的％。圖7 ⑶K4/6抑制在用順鉬處理的小鼠中保護腎功能。單獨用順鉬(10mg/kg IP) 處理(方形)、單獨用PD033^91 (150mg/kg P0)處理(菱形)或者在順鉬(10mg/kg)之前立即用PD033^91 (150mg/kg P0)(三角形)處理小鼠群組。在第7天通過mg/dL的血尿素氮(BUN)和mg/dL的血清肌酸酐(血清Cr)的定量來測量腎功能。數據代表6隻動物每群組的平均值+/_平均標準誤差。圖8 :CDK4/6抑制增強Rb缺陷細胞的增殖。將RB缺失(H69，H82，H209, H345)或具有完整RB(H417)的小細胞肺癌細胞系與PD033^91培養M小時。培養之後，替換培養基，並且使該細胞生長7天。利用WST-I試劑評價細胞增殖。每個數據點代表4個重複的平均值+/-SEM。⑶K4/6抑制提高RB缺陷細胞系的細胞增殖。圖9 ⑶K4/6抑制在RB缺陷乳腺癌的小鼠模型中增強化療的效力。在3周中每7 天用單獨的PD0332991(150mg/kg P0)、單獨的卡鉬(90mg/kgIP)或卡鉬聯合PD0332991 (卡鉬+PD033^91)處理小鼠。數據為腫瘤體積的％變化，並且代表至少15隻動物每群組的平均值 +/-SEM。圖10 ⑶K4/6抑制在RB缺陷乳腺癌的小鼠模型中增強化療的效力。在3周中每 7天用單獨的卡鉬(90mg/kg IP)(深色陰影方形)或聯合PD0332991(150mg/kg PO ；淺色陰影方形)處理小鼠。數據為腫瘤體積的％變化，並且代表至少15隻動物每群組的平均值 +/-SEM0圖1IA ⑶K4/6的急性抑制在小鼠中選擇性阻抑記憶T細胞穩態增殖。用 PD0332991 (150mg/kg通過口腔管飼)處理小鼠。利用BrdU和流式細胞術評價T-細胞的增殖。圖IlB 示出圖IlA所示的T-細胞增殖數據所示的數據的圖。圖IlC ⑶K4/6的急性抑制在小鼠中選擇性阻抑生發中心形成。用 PD0332991(150mg/kg通過口腔管飼)處理小鼠。通過Ki67免疫組織化學評價生發中心形成。
圖12 作為人免疫抑制劑的CDK4/6抑制劑。測試CDK4/6抑制劑作為人免疫抑制劑的實驗設計。圖13 當通過TCR途徑刺激時⑶K4/6抑制劑阻抑記憶和幼稚(naiVe)區室的T細
胞增殖。利用Automacs通過⑶3陽性選擇純化人外周血T細胞，然後用⑶K4/6抑制劑處理並用PMA和肌黴素刺激48hr。通過BrdU+或Ki_67+細胞的FACS染色測量PMA和肌黴素刺激之後記憶(⑶45RA+)或幼稚T細胞的增殖。示出抑制的百分比，其顯示記憶區室的抑制多於幼稚區室。圖14 當通過TCR途徑刺激時⑶K4/6抑制劑阻抑T細胞增殖。當通過TCR途徑刺激時T細胞具有更活躍的增殖，這被CDK4/6抑制所阻止。在CD8+區室中也觀察到相似抑制。通過BrdU或Ki67摻入測定增殖。L4D = 2BrIC，誤差棒示出+/-SEM。圖15 ⑶K4/6抑制之後⑶4T細胞組成的變化。當通過TCR途徑刺激時⑶K4/6 抑制劑阻抑T細胞增殖。示出中樞記憶(CCR7-CD45RA-)、效應記憶(CCR7+CD45RA+)、幼稚 (CCR7+⑶45RA+)和終末分化T細胞(CCR7-⑶45RA+)。如通過BrdU摻入所評價的，⑶K4/6 抑制之後記憶和終末分化T細胞分數減少。L4D = 2BrIC。⑶8+區室中的相似結果。圖16 ⑶K4/6抑制之後⑶4T細胞組成的變化。當通過TCR途徑刺激時⑶K4/6 抑制劑阻抑T細胞增殖。示出中樞記憶(CCR7-CD45RA-)、效應記憶(CCR7+CD45RA+)、幼稚 (CCR7+CD45RA+)和終末分化T細胞(CCR7-CD45RA+)。如通過Ki67染色所評價的，CDK4/6 抑制之後記憶和終末分化T細胞分數減少。L4D = 2BrIC。圖17A:⑶4+T細胞中記憶T細胞和TD細胞增殖的優先抑制。示出中樞記憶 (CCR7-CD45RA-)、效應記憶(CCR7+CD45RA+)、幼稚(CCR7+CD45RA+)和終末分化 T 細胞 (CCR7-CD45RA+)。所示處理的代表性流式點圖媒介物(DMSO)、PD0332991或2BrIC。圖17B ⑶4+T細胞中記憶T細胞和TD細胞增殖的優先抑制。示出圖17A所示數據的記憶T細胞/幼稚T細胞的比例的圖。CDK4/6抑制之後記憶和終末分化T細胞分數減少。L4D = 2BrIC。誤差棒示出+/-SEM。圖17C ⑶4+T細胞中記憶T細胞和TD細胞增殖的優先抑制。圖量化圖17A所示數據的T細胞的％。⑶K4/6抑制之後記憶和終末分化T細胞分數減少。誤差棒示出+/-SEM。圖18:⑶8+T細胞中記憶T細胞和TD細胞增殖的優先抑制。示出中樞記憶 (CCR7-CD45RA-)、效應記憶(CCR7+CD45RA+)、幼稚(CCR7+CD45RA+)和終末分化 T 細胞 (CCR7-CD45RA+)。CDK4/6抑制之後記憶和終末分化T細胞分數減少。L4D = 2BrIC。圖19 記憶T細胞和TD細胞增殖的優先抑制。⑶K4/6抑制劑抑制通過PMA和離子黴素的T細胞活化。用PMA和離子黴素刺激純化的人外周T細胞，有或無CDK4/6抑制劑處理。通過FACS測量刺激時活化的T細胞(⑶25+)分數。發現⑶K4/6抑制劑處理之後T 細胞活化減少。L4D = 2BrIC。圖20 通過BCR刺激之後⑶K4/6抑制劑阻抑B細胞增殖。通過⑶19+細胞的 Automacs選擇來純化B細胞。在有或無⑶K4/6抑制劑處理的抗IgM刺激之後測定純化的人外周B細胞的BrdU摻入。L4D抑制之後增殖B細胞的分數減少 10倍。L4D = 2BrIC。圖21 :CDK4/6抑制阻斷T和B細胞增殖。將動物用CDK4/6抑制劑(PD033^91， 空心棒)或媒介物(實心棒)處理M小時並安樂死。分離脾細胞並染色B和T細胞標誌。 達到適當的群體之後，進行Ki67染色作為增殖和S期的指示物。誤差棒示出+/-SEM。
圖22 :CDK4/6抑制劑阻斷B-細胞增殖。將動物用CDK4/6抑制劑(150mg/kg通過每天口腔管飼)或媒介物處理4天，並且用飲用水中的BrdU處理3天。BrdU處理之後，使動物安樂死。分離脾細胞並染色B細胞標誌。達到適當的群體之後，進行BrdU染色作為增殖的指示物。圖23 ⑶K4/6抑制劑阻斷胸腺作用(Thymopoiesis)。將動物用⑶K4/6抑制劑 (150mg/kg通過每天口腔管飼)或媒介物處理4天，然後通過雙陰性(DN ⑶4-⑶8_)、雙陽性(DP :CD4+CD8+)或者CD4或CD8單陽性細胞的流式細胞術評價胸腺細胞數目。CDK4/6抑制導致新DP細胞生成的顯著減少，對DN和SP分數有適度影響。發明詳述參考所附的實施例(其中給出代表性的實施方案)，在下文中更充分地描述本發明公開的主題。但是，本發明公開的主題可以以不同的形式體現，而不應解釋為受限於本文列舉的實施方案。更確切地，提供這些實施方案以使本公開充分且完整，並且這些實施方案會向本領域技術人員充分傳達本發明的實施方案的範圍。除非另外限定，本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所述主題所屬領域的技術人員的通常理解相同的含義。本文提及的所有出版物、專利申請、專利及其他文獻整體援引加入本文。在整個說明書和權利要求中，特定的化學式或化學名應包括所有活性的旋光異構體和立體異構體，以及外消旋混合物(若存在此類異構體和混合物)。I.定義雖然我們認為本領域技術人員完全理解以下術語，但是為了便於說明本發明公開的主題解釋以下定義。遵循長期的專利法常規，術語「一個(a) 」、「一個(an) 」和「這個(the) 」在本申請包括權利要求中使用時是指「一個(種)或多個(種)」。因此，例如，提及「化合物」或「細胞」包括多個這樣的化合物或細胞等。與「包括」 「含有」或「特徵是」同義的術語「包含」是包容性或開放性的，並且不排除額外的未列舉的元素或方法步驟。「包含」是用於權利要求語言的專門術語，其表示所列舉的元素是必不可少的，但是可以加入其他元素，並且仍然形成權利要求的範圍內的構成。在本文中使用時，短語「由...組成」排除權利要求中未指明的任何元素、步驟或成分。當短語「由...組成」出現在權利要求的主體的條款中而不是緊接在序言之後時，其僅限制該條款所列出的元素；其他元素並未從整個權利要求排除。在本文中使用時，短語「基本上由...組成」將權利要求的範圍限制在指定的物質或步驟，加上不會實質上影響所要求保護的主題的基本和新特徵的物質或步驟。關於術語「包含」、「由...組成」和「基本上由...組成」，當本文中使用這三個術語中的一個時，本發明公開和要求保護的主題可以包括另外兩個術語的使用。術語「和/或」，當用於描述兩種項目或情況，例如CDK4和/或CDK6時，是指兩種項目或情況均存在或均適用的情況，以及僅所述項目或情況之一存在或適用的情況。因此， ⑶K4和/或⑶K6抑制劑可以是抑制⑶K4和⑶K6的化合物、僅抑制⑶K4的化合物或者僅抑制⑶K6的化合物。「健康細胞」或「正常細胞」是指個體中的不表現出疾病(例如但不限於癌症或其他增殖性疾病)的特徵、症狀和/或標誌的任何細胞。在一些實施方案中，所述健康細胞是幹細胞。在一些實施方案中，所述健康細胞是造血幹細胞或造血祖細胞(HSPC)。祖細胞包括但不限於長期造血幹細胞(LT-HSC)、短期造血幹細胞(ST-HSC)、多能祖細胞(MPP)、髓共同祖細胞(CMP)、淋巴共同祖細胞(CLP)、粒細胞-單核細胞祖細胞(GMP)以及巨核細胞-紅細胞類祖細胞(MEP)。祖細胞還可以包括來源於造血幹細胞的成熟效應細胞，包括但不限於紅細胞、血小板、粒細胞、巨噬細胞、T-細胞以及B-細胞。在一些實施方案中，所述健康細胞是非造血組織中的細胞，例如但不限於肝、腎、 胰、腦、肺、腎上腺、小腸、腸、胃、皮膚、聽覺系統、骨、膀胱、卵巢、子宮、睪丸、膽囊、甲狀腺、 心臟、胰島、血管等。本文中「DNA損傷劑或事件」是指DNA損傷性化合物以及DNA損傷的其他效應物 (例如，電離輻射)。因此，DNA損傷劑或事件可以包括為了特定目的，例如但不限於醫學目的(例如，治療癌症或與細胞的過度增殖相關的其他疾病)所提供的化療和輻射治療。DNA 損傷劑和事件還可以涉及偶然暴露於DNA損傷性化合物和/或其他物質，例如其可以由於意外的環境暴露而發生(例如，在工作場所或另一環境中由於例如化學物質溢出、化學或放射性廢物的不適當的處理或其他不適當的操作、使用DNA損傷性化學物質或輻射期間安全措施和/或個人防護裝備故障、恐怖襲擊、戰爭、或者工業和/或核電廠事故)。在本文中使用時，術語「電離輻射」是指當被細胞和組織吸收時典型地誘導反應性氧物質(species)形成和DNA損傷的具有足夠能量的輻射。電離輻射可以包括X-射線、Y 射線和粒子轟擊(例如，中子束、電子束、質子、介子等)，其應用的目的包括但不限於醫學試驗和治療、科學用途、工業試驗、生產和滅菌，以及武器和武器開發。輻射通常以吸收劑量單位例如拉德或戈瑞(Gy)，或者以劑量當量的單位例如雷姆或西弗特(Sv)進行量度。「有風險暴露於DNA損傷劑或事件」是指預定(例如預定的放療或化療療程)在將來暴露於DNA損傷劑或事件的個體，或者有機會在將來無意地暴露於DNA損傷劑或事件的個體。無意的暴露包括意外的或無計劃的環境或職業暴露(例如，放射性或化學武器恐怖襲擊、化學物質溢出或輻射洩露或者在戰場上暴露於放射性或化學武器)。在本文中使用時，術語「癌症」是指由不受控制的細胞分裂和細胞轉移或者在其他部位形成新生物(new growth)的能力導致的疾病。術語「惡性腫瘤」、「瘤」、「腫瘤」及其變體是指癌細胞或癌細胞組。癌症的具體類型包括但不限於皮膚癌、結締組織癌、脂肪癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、 胰腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、肛殖癌(anogenital cancer)、腎癌、膀胱癌、結腸癌、前列腺癌、頭頸癌、腦癌、中樞神經系統(CNQ癌、視網膜癌、血癌和淋巴癌。在一些實施方案中，術語癌症是指特徵是(例如，具有細胞，其表現出)升高的 CDK2活性水平或者降低的視網膜母細胞瘤抑癌蛋白或視網膜母細胞瘤家族成員蛋白(例如但不限於P107和pl30)表達的癌症。升高的⑶K2活性水平或者降低的視網膜母細胞瘤抑癌蛋白或視網膜母細胞瘤家族成員蛋白表達可以是例如與正常細胞相比升高或降低。在一些實施方案中，升高的⑶K2活性水平可以與MYC原癌基因擴增或過量表達有關(例如， 可以由MYC原癌基因擴增或過量表達所導致或伴隨著MYC原癌基因擴增或過量表達觀察到)。在一些實施方案中，升高的CDK2活性水平可以與細胞周期蛋白E1、細胞周期蛋白E2 或細胞周期蛋白A的過量表達有關。
在本文中使用時，術語「化療」是指用細胞毒性化合物(例如但不限於DNA損傷性化合物)來減低或消除不期望的細胞(例如但不限於癌細胞)的生長或增殖的治療。因此， 在本文中使用時，「化療化合物」是指用於治療癌症的細胞毒性化合物。所述化合物的細胞毒性效應可以但不必須是以下的一種或多種效應的結果核酸嵌入或結合、DNA或RNA烷基化、抑制RNA或DNA合成、抑制另一種核酸相關的活性(例如，蛋白合成)或任何其他細胞毒性效應。因此，「細胞毒性化合物」可以是也稱為「抗腫瘤」劑或「化療劑」的化合物中的任一種或任何組合。此類化合物包括但不限於DNA損傷性化合物和可以殺死細胞的其他化學物質。「DNA損傷性化合物」包括但不限於烷化劑、DNA嵌入劑、蛋白合成抑制劑、DNA或 RNA合成抑制劑、DNA鹼基類似物、拓撲異構酶抑制劑和端粒酶抑制劑或結合端粒DNA的化合物。例如，烷化劑包括烷基磺酸酯，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶類，例如 benzodiz印a、卡波醌、美妥替哌和烏瑞替派；乙烯亞胺和甲基蜜胺類，例如六甲蜜胺、三亞乙基密胺、三亞乙基磷醯胺、三亞乙基硫代磷醯胺和三羥甲嘧胺；氮芥類，例如苯丁酸氮芥、 萘氮芥、環磷醯胺、雌莫司汀、異環磷醯胺、氮芥、鹽酸氧氮芥、美法侖、新恩比興、膽固醇苯乙酸氮芥、潑尼莫司汀、曲磷胺和烏拉莫司汀；以及亞硝基脲類，例如卡莫司汀、氯脲菌素、 福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀。用於治療癌症的抗生素包括放線菌素D、柔紅黴素、多柔比星、伊達比星、硫酸博來黴素、絲裂黴素、普卡黴素和鏈佐星。化療抗代謝藥包括巰嘌呤、硫鳥嘌呤、克拉屈濱、 磷酸氟達拉濱、氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷、阿糖胞苷、噴司他丁、甲氨蝶呤和硫唑嘌呤、阿昔洛韋、腺嘌呤β-I-D-阿拉伯糖苷、甲氨喋呤(amethopterin)、氨蝶呤、2-氨基嘌呤、阿非科林、8-氮鳥嘌呤、偶氮絲氨酸、6-氮尿嘧啶、2'-疊氮-2'-脫氧核苷、5-溴脫氧胞苷、胞嘧啶β -I-D-阿拉伯糖苷、重氮氧正亮氨酸(diazooxynorleucine)、雙脫氧核苷類、5_氟脫氧胞苷、5-氟脫氧尿苷和羥基脲。化療蛋白合成抑制劑包括相思豆毒蛋白、金精三羧酸、氯黴素、大腸桿菌素E3、 環己醯亞胺、白喉毒素、伊短菌素A、依米丁、紅黴素、乙硫氨酸、氟化物、5-氟色氨酸、夫西地酸、鳥苷醯亞甲基二磷酸(guanylyl methylene diphosphonate)和鳥苷醯亞胺二磷酸 (guanylyl imidodiphosphate)、卡那黴素、春雷黴素、黃色黴素和0_甲基蘇氨酸。其他蛋白合成抑制劑包括蒴蓮根毒蛋白、新黴素、正纈氨酸、密旋黴素、巴龍黴素、嘌羅黴素、蓖麻毒蛋白、志賀毒素、焦土黴素、司帕黴素、大觀黴素、鏈黴素、四環素、硫鏈絲菌肽和甲氧苄啶。DNA合成抑制劑包括烷化劑，例如硫酸二甲酯、絲裂黴素C、氮芥和硫芥；嵌入劑，例如吖啶染料、放線菌素類、阿黴素、蒽類、苯並芘、溴乙啶、二碘化丙啶-纏繞劑(propidium diiodide-intertwining)；及其他物質，例如偏端黴素和紡錘菌素。拓撲異構酶抑制劑(例如香豆黴素、萘啶酸、新生黴素和奧索利酸)；細胞分裂抑制劑(包括秋水仙醯胺、秋水仙鹼、長春鹼和長春新鹼)；以及RNA合成抑制劑(包括放線菌素D、α -鵝膏蕈鹼及其他真菌鵝膏蕈毒素、蛹蟲草菌素(3'-脫氧腺苷)、二氯呋喃核糖基苯並咪唑、利福平、曲張鏈菌素和利迪鏈菌素)也可以用作DNA損傷性化合物。因此，其毒性效應可被本發明公開的選擇性CDK4/6抑制劑緩解的現有化療化合物包括但不限於阿黴素、5-氟尿嘧啶(5FU)、依託泊苷、喜樹鹼、放線菌素-D、絲裂黴素、順鉬、過氧化氫、卡鉬、丙卡巴胼、氮芥、環磷醯胺、異環磷醯胺、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、亞硝基脲、放線菌素D、柔紅黴素、多柔比星、博來黴素、普卡黴素、他莫昔芬、紫杉醇、反鉬、 長春鹼和甲氨蝶呤等。「毒性降低劑」是指用於降低物質或事件(例如但不限於DNA損傷劑或事件)的細胞毒性效應的化合物或其他物質。在一些實施方案中，毒性降低劑是除了選擇性抑制一種或多種細胞周期蛋白依賴性激酶的化合物之外的化合物。毒性降低劑是可以在用DNA損傷劑或事件處理或以其他方式暴露於DNA損傷劑或事件的細胞、組織或個體中防止或減少 DNA損傷的物質。毒性降低劑所引起的DNA損傷的防止或減少可以影響個體中的某些細胞 (例如，某些健康的)，但是在個體中的其他細胞(例如，疾病和/或腫瘤細胞)中不提供任何效應。因此，使用毒性降低劑可以保護個體中的某些細胞以便在疾病治療方案中允許更頻繁或更高劑量使用DNA損傷劑。在一些實施方案中，毒性降低劑降低歸因於使用化療劑的不期望的細胞毒性。在一些實施方案中，毒性降低劑可以降低輻射所導致的不期望的細胞毒性。在一些實施方案中，毒性降低劑為生長因子或其他天然存在的化合物，或者它們的衍生物。在一些實施方案中，毒性降低劑選自包括但不限於以下物質的組生長因子、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、聚乙二醇化G-CSF、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、 血小板生成素、紅細胞生成素、聚乙二醇化紅細胞生成素、白介素(IL)-12、青灰因子、角質形成細胞生長因子或者上述物質的衍生物(例如，具有基於上述毒性降低劑之一的結構的化學修飾的化合物，例如烷基化或酯化衍生物)。「增加毒性降低劑的效力」是指選擇性CDK4和/或CDK6抑制劑增加毒性降低劑的效力的能力。因此，該術語可以指毒性降低劑和選擇性CDK4和/或CDK6抑制劑的組合的有益用途。例如，使用該組合可以導致與單獨給予毒性降低劑(或選擇性CDK4和/或CDK6 抑制劑)時個體會具有的耐受性相比，個體對給定量或給定頻率給予DNA損傷劑或事件的更高的耐受性。使用該組合可以提供更高水平的保護免受DNA損傷性事件所引起的副作用 (例如但不限於骨髓抑制的更大降低或發生繼發性惡性腫瘤的更低概率)。使用該組合還可以提供保護免受歸因於暴露於DNA損傷劑或事件的更大範圍的副作用，和/或保護個體中更多類型的細胞和/或組織。例如，在一些實施方案中，選擇性CDK4和/或CDK6抑制劑在與生長因子聯用時可以提供協同效應以從DNA損傷劑或事件拯救和支持各種造血群體。「化合物的藥學有效量」是指在個體中有效提供有益結果的量。例如，其可以是有效降低或消除與DNA損傷劑或事件(例如，化療或個體中的健康HSPC的其他暴露於細胞毒性化合物、或者IR)相關的毒性的量。在一些實施方案中，有效量是暫時(例如，幾小時或幾天)抑制個體中的造血幹細胞的增殖(即，在造血幹細胞中誘導靜止狀態)所需的量。在一些實施方案中，選擇性抑制⑶K4和/或⑶K6的化合物沒有脫靶 (off-target)效應。「沒有」可以指選擇性CDK4/6抑制劑化合物不具有不期望的或脫靶效應，特別是當其在體內使用或者通過基於細胞的測定進行評價時。因此，「沒有」可以指選擇性CDK4/6抑制劑不具有脫靶效應，例如但不限於長期毒性、抗氧化效應、雌激素效應、酪氨酸激酶抑制效應、對除CDK4/6之外的CDK的抑制效應；和/或非CDK4/6依賴性細胞中的細胞周期停滯。「基本上沒有」脫靶效應的選擇性⑶K4/6抑制劑是這樣的⑶K4/6抑制劑，其可以具有一些較小(minor)的脫靶效應，所述脫靶效應不幹擾所述抑制劑提供對抗CDK4/6依賴性細胞中的細胞毒性化合物的保護作用的能力。例如，「基本上沒有」脫靶效應的CDK4/6抑制劑可以對其他⑶K具有一些較小的抑制效應(例如，對⑶Kl或⑶K2的IC5tl > 0. 5μΜ； > 1. 0 μ M或者> 5. 0 μ Μ)，只要所述抑制劑提供⑶Κ4/6依賴性細胞中的選擇性Gl停滯。「減輕」或「預防」或其語法變體分別是指，減少效應或者防止效應完全發生。「緩解」可以指減輕和/或預防。「藥理性靜止」是指細胞周期的暫時停滯。「有風險發展自身免疫病」是指因為以下原因疑似具有發展自身免疫病的可能性的個體，所述原因包括但不限於，例如，由於具有與自身免疫病相關的一種或多種遺傳標記、具有自身免疫病的家族病史和/或已暴露於疑似觸發自身免疫病的發生的環境物質。 該術語還可以應用於先前已診斷患有自身免疫病但是在緩解期和/或目前無症狀的個體。在一些實施方案中，本發明公開的主題中所治療的個體期望是人個體，但是應當理解本文所述的方法對所有脊椎動物物種(例如，哺乳動物、鳥類等)有效，術語「個體」旨在包括所有脊椎動物物種。更具體地，本文提供哺乳動物的治療，例如，人，以及由於瀕危而具有重要性的那些哺乳動物(例如西伯利亞虎)、對人類具有經濟重要性(為了供人食用而在農場飼養的動物)和/或社會重要性(作為寵物飼養或在動物園中飼養的動物)的那些哺乳動物，例如， 除了人之外的食肉動物(例如貓和狗)、豬類(豬、肉豬和野豬)、反芻動物(例如牛、公牛、 綿羊、長頸鹿、鹿、山羊、野牛和駱駝)和馬。因此，本文所述的方法的實施方案包括家畜的治療，包括但不限於家養豬(豬和肉豬)、反芻動物、馬等。在本文中使用時，術語「烷基」是指C1,(含端值)、線性的(即，「直鏈的」)、支鏈的、或環狀的、飽和的、或者至少部分不飽和的以及在一些情況中完全不飽和的(即，烯基和炔基)烴鏈，包括例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、辛基、 乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、辛烯基、丁二烯基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基和丙二烯基基團。「支鏈的」是指其中低級烷基基團例如甲基、乙基或丙基與直鏈烷基鏈相連的烷基基團。「低級烷基」是指含有1-約8個碳原子，例如1、2、3、4、5、6、7或 8個碳原子的烷基基團(即C"烷基)。「高級烷基」是指含有約10-約20個碳原子，例如 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳原子的烷基基團。在某些實施方案中，「烷基」 特指C"直鏈烷基。在其他實施方案中，「烷基」特指C"支鏈烷基。烷基基團可以任選地由一個或多個烷基基團的取代基取代(「取代的烷基」)，所述取代基可以相同或不同。術語「烷基基團的取代基」包括但不限於烷基、取代的烷基、滷代、芳基氨基、醯基、羥基、芳氧基、烷氧基、烷硫基、芳硫基、芳烷基氧基、芳烷基硫基、羧基、 烷氧基羰基、氧代和環烷基。可以沿著烷基鏈任選地插入一個或多個氧原子、硫原子或者取代或未取代的氮原子，其中氮的取代基是氫、低級烷基(本文也稱為「烷基氨基烷基」)或芳基。因此，在本文中使用時，術語「取代的烷基」包括本文定義的烷基基團，其中所述烷基基團的一個或多個原子或官能團被另外的原子或官能團(包括例如烷基、取代的烷基、 滷素、芳基、取代的芳基、烷氧基、羥基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫酸酯和巰基) 替代。本文使用的術語「芳基」是指芳香族部分，其可以是單個芳香環，或者稠合的、共價連接的或連接至共有基團(例如但不限於亞甲基或亞乙基部分)的多個芳香環。所述共有的連接基團還可以是羰基(如在二苯甲酮中)、氧(如在二苯醚中)或氮(如在二苯胺中)。 術語「芳基」具體地包括雜環芳香化合物。芳香環可以包括苯基、萘基、聯苯基、二苯醚、二苯胺和二苯甲酮等。在特定的實施方案中，術語「芳基」是指含有約5-約10個碳原子(例如5、6、7、8、9或10個碳原子)並且包含5元-和6-元烴和雜環芳香環的環狀芳香基團。芳基基團可以任選地由一個或多個芳基基團的取代基取代(「取代的芳基」)，所述取代基可以相同或不同，其中「芳基基團的取代基」包括烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳烷基氧基、羧基、羰基、醯基、商代、硝基、烷氧基羰基、 芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、醯氧基、醯基氨基、芳醯基氨基、氨基甲醯基、烷基氨基甲醯基、 二烷基氨基甲醯基、芳硫基、烷硫基、亞烷基和-NR' R"(其中R'和R"可以各自獨立地為氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基和芳烷基)。因此，在本文中使用時，術語「取代的芳基」包括本文定義的芳基基團，其中所述芳基基團的一個或多個原子或官能團被另外的原子或官能團(包括例如烷基、取代的烷基、 滷素、芳基、取代的芳基、烷氧基、羥基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫酸酯和巰基) 替代。芳基基團的具體實例包括但不限於環戊二烯基、苯基、呋喃、噻吩、吡咯、吡喃、批啶、咪唑、苯並咪唑、異噻唑、異噁唑、批唑、批嗪、三嗪、嘧啶、喹啉、異喹啉、吲哚、咔唑等。術語「雜芳基」是指其中芳香環或環的骨架中的至少一個原子是除碳以外的原子的芳基基團。因此，雜芳基基團含有一個或多個選自包括但不限於氮、氧和硫的非碳的原子。在本文中使用時，術語「醯基」是指其中羧基基團的-OH已被另一個取代基替代的有機羧酸基團(即，由RCO-表示，其中R是本文定義的烷基或芳基基團)。因此，術語「醯基」具體地包括芳基醯基基團，例如乙醯基呋喃和苯甲醯甲基基團。醯基基團的具體實例包括乙醯基和苯甲醯基。「環狀的」和「環烷基」是指含有約3-約10個碳原子(例如3、4、5、6、7、8、9或10
個碳原子)的非芳香的單環或多環體系。環烷基基團任選地可以是部分不飽和的。環烷基基團還可以任選地由本文定義的烷基基團的取代基、氧代和/或亞烷基取代。沿著環烷基鏈可以任選地插入一個或多個氧原子、硫原子或者取代或未取代的氮原子，其中氮的取代基是氫、烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，由此得到雜環基團。代表性的單環環烷基環包括環戊基、環己基和環庚基。多環的環烷基環包括金剛烷基、八氫萘基、萘烷、樟腦、莰烷和降金剛烷基(noradamantyl)。術語「雜環」或「雜環的」是指其中環狀環的骨架碳原子中的一個或多個被雜原子 (例如氮、硫或氧)替代的環烷基基團(即，上文所述的非芳香的環狀基團)。雜環的實例包括但不限於四氫呋喃、四氫吡喃、嗎啉、二氧雜環己烷、哌啶、哌嗪和吡咯烷。「烷氧基(alkoxyl)」或「烷氧基(alkoxy) 」是指烷基_0_基團，其中烷基如上所述。在本文中使用時，術語「烷氧基」可以指例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、 叔丁氧基和戊氧基。術語「氧基烷基」可以與「烷氧基」互換使用。「芳氧基(aryloxyl) 」或「芳氧基(aryloxy) 」是指芳基_0_基團，其中芳基基團如上所述，包括取代的芳基。在本文中使用時，術語「芳氧基」可以指苯氧基或己氧基，以及被烷基、取代的烷基、商代或烷氧基取代的苯氧基或己氧基。「芳烷基」是指芳基-烷基-基團，其中芳基和烷基如上所述並且包括取代的芳基和取代的烷基。示例性芳烷基基團包括苄基、苯乙基和萘甲基。「芳烷基氧基(aralkyloxyl)」或「芳烷基氧基(aralkyloxy) 」是指芳烷基_0_基團，其中所述芳烷基基團如上所述。示例性芳烷基氧基基團是苄氧基。術語「氨基」是指-NR』 R」基團，其中R』和R」各自獨立地選自包括以下基團的組 H以及取代和未取代的烷基、環烷基、雜環、芳烷基、芳基和雜芳基。在一些實施方案中，氨基基團是-NH2。「氨基烷基」和「氨基芳基」是指-NR』 R」基團，其中分別地，R』如上文關於氨基所定義的，R」是取代或未取代的烷基或芳基。「醯氨基」是指醯基-NH-基團，其中醯基如上所述。術語「羰基」是指-(C = 0)-，或者與上文命名的母體基團的碳原子連接的成雙鍵的氧取代基。術語「羧基」是指-COOH基團。在本文中使用時，術語「滷代」、「滷化物」或「滷素」是指氟、氯、溴和碘基團。術語「羥基(hydroxyl)，，和「羥基(hydroxy)，，是指-OH基團。術語「氧代」是指其中碳原子被氧原子替代的上文已述的化合物。術語「氰基」是指-CN基團。術語「硝基」是指-NO2基團。術語「硫代」是指其中碳或氧原子被硫原子替代的上文已述的化合物。II.防止DNA損傷劑或事件的化合物和方法組織特異性幹細胞和其他定居增殖細胞的亞群能夠自我更新，意指它們能夠在整個成年哺乳動物壽命中通過被調節的複製進行自我更新。此外，幹細胞不對稱地分裂產生 「子代」細胞或「祖」細胞，其繼而產生特定器官的各種組分。例如，在造血系統中，造血幹細胞產生祖細胞，其繼而產生血液的所有分化的組分(例如，白細胞、紅細胞、淋巴細胞和血小板)。本發明公開的主題部分涉及成年哺乳動物中早期造血幹細胞/祖細胞(HSPC)和其他增殖細胞的特定生化需求。具體地，已發現為了細胞複製，諸如HSPC的某些特定增殖細胞需要增殖性激酶細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶 6(CDK6)的酶活性。相比之下，成年哺乳動物中的絕大多數增殖細胞不需要CDK4和/或 ⑶K6(即，⑶K4/6)的活性。這些分化的細胞可以通過利用其他增殖性激酶例如細胞周期蛋白依賴性激酶2 (CDK2)或細胞周期蛋白依賴性激酶1 (CDKl)在CDK4/6活性不存在的情況下增殖。因此，認為用選擇性CDK4/6抑制劑處理哺乳動物可以導致抑制諸如HSPC的非常有限的細胞區室中的增殖(即，藥理性靜止)。例如，用選擇性⑶Κ4/6抑制劑PD 0332991 短暫處理(例如但不限於在少於48、24、20、16、12、10、8、6、4、2或1小時的時間中)使造血幹細胞及其相關的造血祖細胞靜止。人們相信靜止的細胞比增殖細胞對DNA損傷劑或事件的細胞毒性效應更具抗性。因此，在一些實施方案中，本發明公開的主題提供通過用無毒性的選擇性⑶Κ4/6 抑制劑(例如但不限於口服可利用的無毒性的CDK4/6抑制劑)短暫(例如但不限於在少於48、24、20、16、12、10、8、6、4、2或1小時的時間中)處理迫使造血幹細胞和造血祖細胞(HSPC)進入靜止狀態來保護哺乳動物免受化療化合物的急性和慢性的毒性效應的方法。在靜止期中，個體的HSPC對化療化合物的某些效應更具抗性。用所述抑制劑處理停止之後， HSPC從此暫時靜止期中恢復，然後正常發揮功能。因此，用選擇性⑶K4/6抑制劑處理可以提供顯著的骨髓保護，並且可以使化療和/或放療後的外周血細胞計數(血細胞比容、血小板、淋巴細胞和髓樣細胞)更快速地恢復。Davis等人的美國專利第6，369，086號(下稱「 『086專利」)看來描述選擇性⑶K 抑制劑可以用於限制細胞毒性劑的毒性並且可以用來防止化療誘導的脫髮。具體地，『086 專利描述了作為特異性CDK2抑制劑的羥吲哚化合物。相關的期刊文獻(參見Davis et al.，Science,291,134-137(2001))看來描述CDK2的抑制產生細胞周期停滯，降低上皮細胞對細胞周期活性的抗腫瘤藥的敏感性，並且可以預防化療誘導的脫髮。但是，該期刊文獻由於不可再現結果而後被撤回。不同於這些標榜的選擇性CDK2抑制劑的保護效應(通過撤回所述期刊文章而對其質疑)，在一些實施方案中，本發明公開的主題涉及保護HSPC和防止血液毒性。保護幹細胞/祖細胞的能力在癌症治療中以及在緩解意外暴露於或過量使用細胞毒性化學物質、輻射或其他DNA損傷劑的效應中均是期望的。選擇性CDK4/6抑制劑的保護效應可以通過用所述抑制劑預治療(即，預定用DNA損傷劑治療或有風險暴露於DNA損傷劑的個體的預先CDK4/6抑制劑治療)，用CDK4/6抑制劑與DNA損傷劑同時治療，或者用 CDK4/6抑制劑後治療(即，在暴露於DNA損傷劑之後用CDK4/6抑制劑治療)來向個體提供。因此，在一些實施方案中，本發明公開的方法涉及選擇性⑶K4/6抑制劑化合物向正接受或將接受化療化合物或輻射治療的個體提供保護的用途，以及保護個體免受對細胞毒性化合物和/或輻射的其他暴露的用途。在本文中使用時，術語「選擇性CDK4/6抑制劑化合物」是指這樣的化合物，其選擇性抑制⑶K4和⑶K6中的至少一種，或者其主要的作用模式是通過抑制⑶K4和/或⑶K6。 因此，選擇性⑶K4/6抑制劑是這樣的化合物，其一般具有比對其他激酶更低的對⑶K4和 /或⑶K6的50%抑制濃度(IC5tl)。在一些實施方案中，所述選擇性⑶K4/6抑制劑對其他 CDK(例如CDKl和CDK2)的IC5tl可以是所述化合物對CDK4或CDK6的IC50的至少2、3、4、 5、6、7、8、9或10倍。在一些實施方案中，所述選擇性⑶K4/6抑制劑對其他⑶K的IC5tl可以是所述化合物對CDK4或CDK6的IC5tl的至少20、30、40、50、60、70、80、90或100倍。在一些實施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑對其他CDK的IC5tl可以是所述化合物對CDK4或 ⑶K6的IC5tl的100倍以上或1000倍以上。在一些實施方案中，所述選擇性⑶K4/6抑制劑化合物是選擇性抑制CDK4和CDK6的化合物。在一些實施方案中，所述CDK4/6抑制劑不是天然存在的化合物(例如，異黃酮)。在一些實施方案中，所述CDK4/6抑制劑是一種或多種酪氨酸激酶的較差的抑制劑(例如，> ΙμΜ體外IC5(1)。在一些實施方案中，所述⑶K4/6 抑制劑是絲氨酸和/或蘇氨酸激酶的高效抑制劑。在一些實施方案中，所述CDK4/6抑制劑是較差的⑶Kl抑制劑(例如，(例如，> IyM體外IC5tl)。在一些實施方案中，所述⑶Κ4/6 抑制劑的特徵是與CDKl相比具有10倍或50倍或100倍或更大的抑制CDK4或CDK6的相對效力。在一些實施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑化合物是選擇性誘導CDK4/6依賴性細胞中的Gl細胞周期停滯的化合物。因此，當按照本發明公開的方法用所述選擇性CDK4/6抑制劑化合物處理時，處於Gl期的CDK4/6依賴性細胞的百分比升高，而處於G2/M 期和S期的CDK4/6依賴性細胞的百分比降低。在一些實施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑是這樣的化合物，其誘導CDK4/6依賴性細胞中的基本上純粹的(pure) ( 8卩「完全的」) Gl細胞周期停滯(例如，其中用所述選擇性CDK4/6抑制劑處理誘導細胞周期停滯，以致按照標準方法(例如，碘化丙錠染色或其他)測定，大多數的細胞停滯於G1，處於G2/M和S期的細胞群體合計為總細胞群體的20%、15%、12%、10%、8%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少)。雖然已報告非特異性激酶抑制劑星形孢菌素在一些細胞類型中間接地誘導Gl停滯(參見 Chen et al.，J. Nat. Cancer Inst.，92，1999-2008 Q000))，但是選擇性CDK4/6 抑制劑可以直接且選擇性地誘導細胞(例如特定部分的HSPC)中的Gl細胞周期停滯以提供化學防護和輻射防護，具有減低的長期毒性，並且不需要在暴露於DNA損傷劑之前用所述抑制劑長時(例如，48小時或更長)治療。具體地，雖然一些非選擇性激酶抑制劑可以通過降低CDK4蛋白水平引起一些細胞類型中的Gl停滯，但是，不拘於任何一種理論，認為本發明公開的方法的益處至少部分歸因於選擇性CDK4/6抑制劑能夠直接抑制HSPC中的CDK4/6 的激酶活性而不降低它們的細胞濃度。在一些實施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑化合物是基本上沒有脫靶效應(特別是與抑制除CDK4和/或CDK6之外的激酶相關)的化合物。在一些實施方案中，所述選擇性⑶K4/6抑制劑化合物是除⑶K4/6之外的⑶K(例如，⑶K 1和⑶K2)的較差的抑制劑 (例如，> 1 μ M IC50)。在一些實施方案中，所述選擇性⑶Κ4/6抑制劑化合物在非⑶Κ4/6 依賴性細胞中不誘導細胞周期停滯。在一些實施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑化合物是酪氨酸激酶的較差的抑制劑(例如，> ΙμΜ IC5tl)。其他不期望的脫靶效應包括但不限於長期毒性、抗氧化效應和雌激素效應。抗氧化效應可以通過本領域已知的標準測定進行測定。例如，無顯著抗氧化效應的化合物是不顯著地清除自由基例如氧自由基的化合物。可以將化合物的抗氧化效應與抗氧化活性已知的化合物例如染料木黃酮比較。因此，無顯著的抗氧化活性的化合物可以是抗氧化活性為染料木黃酮的抗氧化活性的約1/2、1/3、1/5、1/10、1/30或1/100的化合物。 雌激素活性也可以通過已知的測定進行測定。例如，非雌激素化合物是不顯著地結合和激活雌激素受體的化合物。基本上沒有雌激素效應的化合物可以是雌激素活性為具有雌激素活性的化合物(例如，染料木黃酮)的約1/2、1/3、1/5、1/10、1/20或1/100的化合物。可以按照本發明公開的方法使用的選擇性CDK4/6抑制劑包括任何已知的小分子 (例如，< 1000道爾頓，< 750道爾頓、或者少於< 500道爾頓)選擇性⑶Κ4/6抑制劑，或者其藥學可接受的鹽。在一些實施方案中，所述抑制劑是非天然的化合物(S卩，自然界中未發現的化合物)。已報導幾類化合物具有CDK4/6抑制能力(例如，在無細胞測定中)。用於本發明公開的方法的選擇性CDK4/6抑制劑可以包括但不限於，吡啶並[2，3-d]嘧啶(例如，吡啶並[2，3-d]嘧啶-7-酮和2-氨基-6-氰基-吡啶並[2，3-d]嘧啶-4-酮)、三氨基嘧啶、芳基[a]吡咯並[3，4-d]咔唑、含氮的雜芳基取代的脲、5-嘧啶基-2-氨基噻唑、苯並噻二嗪、吖啶硫酮和異喹啉酮。在一些實施方案中，所述吡啶並[2，3_d]嘧啶為吡啶並[2，3_d]嘧啶酮。在一些實施方案中，所述吡啶並[2，3-d]嘧啶酮為吡啶並[2，3-d]嘧啶-7-酮。在一些實施方案中，所述吡啶並[2，3-d]嘧啶-7-酮由氨基芳基或氨基雜芳基基團取代。在一些實施方案中，所述吡啶並[2，3-d]嘧啶-7-酮由氨基吡啶基團取代。在一些實施方案中，所述吡啶並 [2, 3-d]嘧啶-7-酮為2- -吡啶基)氨基吡啶並[2，3-d]嘧啶-7-酮。例如，所述吡啶並[2，3-d]喃啶-7-酮化合物可以具有Barvian等人的美國專利公開第2007/0179118號中所述的式(II)的結構，該專利公開整體援引加入本文。在一些實施方案中，所述吡啶並 [2，3-d]嘧啶化合物為6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶並[2，3-d]嘧啶-7-酮(即，PD 0332991)或其藥學可接受的鹽。參見Toogood et al. , J. Med. Chem.，2005，48，2388-2406。在一些實施方案中，所述吡啶並[2，3_d]嘧啶酮為2-氨基-6-氰基-吡啶並[2， 3-d]喃啶-4-酮。例如，Tu等人描沭了包括2-氨基-6-氰基-吡啶並[2，3-d]嘧啶_4_酮在內的詵擇件⑶K4/6抑制劑。參見Tu et al.，Bioorg. Med. Chem. Lett.，2006，16, 3578-3581 在本文中使用時，「三氨基嘧啶」是其中嘧啶環中的至少三個碳原子由具有式-NRJ2的基團取代的嘧啶化合物，其中禮和1 2獨立地選自H、烷基、芳烷基、環烷基、雜環、 芳基和雜芳基。每個禮和&的烷基、芳烷基、環烷基、雜環、芳基和雜芳基基團可以進一步由一個或多個羥基、商代、氨基、烷基、芳烷基、環烷基、雜環、芳基或雜芳基基團取代。在一些實施方案中，所述氨基基團中的至少一個是具有-NHR結構的烷基氨基基團，其中R為C1-C6 烷基。在一些實施方案中，至少一個氨基基團是環烷基氨基基團或羥基取代的環烷基氨基基團，具有式-NHR，其中R是由或不由羥基基團取代的C3-C7環烷基。在一些實施方案中， 至少一個氨基基團是雜芳基取代的氨基烷基基團，其中所述雜芳基基團可以進一步由芳基基團取代基取代。芳基[a]吡咯並[3,4-d]咔唑包括但不限於萘基[a]吡咯並[3，4_c]咔唑、 吲哚並[a]吡咯並[3，4_c]咔唑、喹啉基[a]吡咯並[3，4_c]咔唑和異喹啉基[a]吡咯並[3，4-c]咔唑。參見例如 EngIer et al.，Bioorg. Med. Chem. Lett.，2003，13， 2261-2267 ;Sanchez-Martinez et al.，Bioorg. Med. Chem. Lett.，2003，13，3835-3839 ； Sanchez-Martinez et al. , Bioorg. Med. Chem. Lett. ,2003,13, 3841-3846 ；Zhu et al., Bioorg. Med. Chem. Lett.，2003，13，1231—1235 ；禾口 Zhu et al.，J. Med Chem.，2003，46， 2027-2030。合適的芳基[a]吡咯並[3，4_d]咔唑還公開於美國專利公開第2003/02290 號和第2004/0048915號中。含氮的雜芳基取代的脲是包含脲部分的化合物，其中脲氮原子之一由含氮的雜芳基基團取代。含氮的雜芳基基團包括但不限於包含至少一個氮原子的5-10元芳基基團。因此，含氮的雜芳基基團包括例如吡啶、批咯、噴哚、咔唑、咪唑、噻唑、異噁唑、批唑、異噻唑、 吡嗪、三唑、四唑、嘧啶、噠嗪、嘌呤、喹啉、異喹啉、喹喔啉、噌啉、喹唑啉、苯並咪唑、苯鄰二甲醯亞胺等。在一些實施方案中，所述含氮的雜芳基基團可以由一個或多個烷基、環烷基、 雜環基、芳烷基、芳基、雜芳基、羥基、商代、羰基、羧基、硝基、氰基、烷氧基或氨基基團取代。 在一些實施方案中，所述含氮的雜芳基取代的脲為吡唑-3-基脲。所述吡唑可以進一步由環烷基或雜環基團取代。在一些實施方案中，所述吡唑-3-基脲為
權利要求
1.一種增加毒性降低劑在需要治療的個體中的效力的方法，所述方法包括提供個體，所述個體已暴露於、正暴露於或有風險暴露於DNA損傷劑或事件；向所述個體給予毒性降低劑；以及向所述個體給予藥學有效量的選擇性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4 (CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)的化合物。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述毒性降低劑為化療毒性降低劑。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述毒性降低劑為輻射毒性降低劑。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述毒性降低劑包括一種或多種選自以下組中的物質生長因子、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、聚乙二醇化G-CSF、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、血小板生成素、紅細胞生成素、聚乙二醇化紅細胞生成素、白介素 (IL)-12、青灰因子、角質形成細胞生長因子或者上述物質的衍生物。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物在所述個體內的一種或多種細胞中誘導藥理性靜止。
6.如權利要求5所述的方法，其中所述一種或多種細胞各自選自血液細胞、血液幹細胞和血液前體細胞。
7.如權利要求1所述的方法，其中在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之前、在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件的同時、或者在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之後向所述個體給予所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。
8.如權利要求1所述的方法，其中在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之後約24 至約48小時之間向所述個體給予所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。
9.一種在需要治療的個體的非血液細胞或組織暴露於DNA損傷劑或事件之前或之後緩解所述細胞或組織中的DNA損傷的方法，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的選擇性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)的化合物。
10.如權利要求9所述的方法，其中所述非血液細胞或組織包括來自由以下組成的組中的一種的細胞或組織腎、腸、心臟、肝、腦、甲狀腺、皮膚、腸黏膜、聽覺系統、肺、膀胱、卵巢、子宮、睪丸、腎上腺、膽囊、胰、胰島、胃、血管、骨及它們的組合。
11.一種減少或抑制需要治療的個體中的記憶T細胞增殖的方法，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的對所述個體選擇性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4 (CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)的化合物。
12.如權利要求11所述的方法，其中所述個體患有或有風險發展自身免疫病或變應性疾病。
13.如權利要求12所述的方法，其中所述自身免疫病或變應性疾病選自系統性紅斑性狼瘡(SLE)、類風溼性關節炎(RA)、自身免疫性關節炎、硬皮病、溶血性貧血、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性粒性白細胞減少、I型糖尿病、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、 銀屑病、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、接觸性皮炎、風溼性多肌痛、葡萄膜炎、免疫性肺炎、自身免疫性肝炎、免疫性腎炎、免疫性腎小球腎炎、多發性硬化、自身免疫性神經病、 白癜風、盤狀狼瘡、韋格納肉芽腫、過敏性紫癜、硬化性膽管炎、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性脈管炎、皮肌炎、外在和內在反應性呼吸道疾病(哮喘)、重症肌無力、自身免疫性卵巢衰竭、惡性貧血、艾迪生病、自身免疫性甲狀旁腺功能減退以及不適當的細胞免疫應答的其他症候群。
14.一種減少或抑制需要治療的個體中的B細胞祖細胞增殖的方法，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的對所述個體選擇性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/ 或細胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)的化合物。
15.如權利要求14所述的方法，其中所述個體患有或有風險發展自身免疫病或變應性疾病。
16.如權利要求15所述的方法，其中所述自身免疫病或變應性疾病選自系統性紅斑性狼瘡(SLE)、類風溼性關節炎(RA)、硬皮病、溶血性貧血、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、 獲得性血友病、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、肺出血腎炎症候群、冷和溫凝集素病、冷球蛋白血症以及不適當的抗體生成的症候群。
17.一種緩解需要治療的個體的自身免疫病或變應性疾病的方法，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的選擇性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4 (CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)的化合物，其中所述化合物減少或抑制記憶T細胞增殖、B細胞祖細胞增殖、或者記憶T細胞增殖與B細胞祖細胞增殖。
18.如權利要求17所述的方法，其中所述自身免疫病或變應性疾病選自系統性紅斑性狼瘡(SLE)、類風溼性關節炎(RA)、自身免疫性關節炎、硬皮病、溶血性貧血、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性粒性白細胞減少、I型糖尿病、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、 銀屑病、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、接觸性皮炎、風溼性多肌痛、葡萄膜炎、免疫性肺炎、自身免疫性肝炎、免疫性腎炎、免疫性腎小球腎炎、多發性硬化、自身免疫性神經病、 白癜風、盤狀狼瘡、韋格納肉芽腫、過敏性紫癜、硬化性膽管炎、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性脈管炎、皮肌炎、外在和內在反應性呼吸道疾病(哮喘)、重症肌無力、自身免疫性卵巢衰竭、惡性貧血、艾迪生病、自身免疫性甲狀旁腺功能減退、不適當的細胞免疫應答的其他症候群、肺出血腎炎症候群、冷和溫凝集素病、冷球蛋白血症以及不適當的抗體生成的症候群。
19.一種治療需要治療的個體的癌症的方法，其中所述癌症的特徵是升高的細胞周期蛋白依賴性激酶2(CDD)活性水平或者是降低的視網膜母細胞瘤抑癌蛋白或視網膜母細胞瘤家族成員蛋白的表達，所述方法包括向所述個體給予藥學有效量的選擇性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)的化合物。
20.如權利要求19所述的方法，其中所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物在癌細胞中不誘導藥理性靜止。
21.如權利要求19所述的方法，其中所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物提高癌細胞對DNA損傷劑的敏感性。
22.如權利要求21所述的方法，其中所述敏感性的提高增加癌細胞死亡。
23.如權利要求19所述的方法，其中所述升高的CDK2活性水平與MYC原癌基因擴增或過量表達有關。
24.如權利要求19所述的方法，其中所述升高的CDK2活性水平與細胞周期蛋白E1、細胞周期蛋白E2或細胞周期蛋白A的過量表達有關。
25.如權利要求19所述的方法，其中給予所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物緩解與暴露於DNA損傷劑或事件相關的血液毒性。
26.如權利要求25所述的方法，其中在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之前、在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件的同時、或者在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之後向所述個體給予所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。
27.如權利要求25所述的方法，其中在所述個體暴露於所述DNA損傷劑或事件之後約 24至約48小時之間向所述個體給予所述選擇性抑制⑶K4和/或⑶K6的化合物。
28.一種緩解個體中的化療誘導或放療誘導的血液起源或非血液起源的繼發性惡性腫瘤的方法，所述方法包括向所述個體給予藥理有效量的選擇性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4 (CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)的化合物。
29.如權利要求28所述的方法，其中在所述個體接受化療或基於輻射的療法以治療原發性惡性腫瘤之前或期間向所述個體給予所述選擇性抑制CDK4和/或CDK6的化合物。
全文摘要
本發明公開的主題涉及保護健康細胞免受歸因於DNA損傷劑的損傷的方法和組合物。具體地，本發明公開的主題涉及向已暴露於或有風險暴露於DNA損傷的個體給予的選擇性細胞周期蛋白依賴性激酶4/6(CDK4/6)抑制劑的保護作用。
文檔編號A61K38/20GK102458443SQ201080031866
公開日2012年5月16日 申請日期2010年5月13日 優先權日2009年5月13日
發明者K-K·王, N·E·沙普爾斯, P·J·羅伯茨, S·詹森, Y·劉 申請人:北卡羅來納大學查珀爾希爾分校