去氫厄弗酚在製備抗腫瘤及抑制腫瘤新生血管生成藥物、保健食品或化妝品中的應用的製作方法

2023-12-09 03:07:21 1

專利名稱：去氫厄弗酚在製備抗腫瘤及抑制腫瘤新生血管生成藥物、保健食品或化妝品中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種去氫厄弗酚在製備抗腫瘤藥物及血管生成抑制物或保健食品或化妝品中的應用。
背景技術：
據2010年2月衛生部統計資料，每年全球癌症死亡人數達1000萬。目前全球四分之一人口死亡的原因是癌症所致，並預測若按目前的趨勢發展下去，到2050年將有二分之一的死亡者是由於患了癌症。我國每年有220萬人患癌症，更令人矚目的是惡性腫瘤發病率以每年2. 5-5%速度增長，已成為嚴重危害我國人民生命的元兇。儘管世界各國對腫瘤的治療已做了很大的努力，對某些腫瘤已取得了一些進展，但從整體而言現有抗腫瘤藥物對大部分惡性腫瘤療效欠佳，其重要原因之一是缺乏有效的抗癌藥物。因此，研發有效抗癌新藥是目前治療惡性腫瘤的當務之急。中醫藥治療腫瘤的歷史源遠流長。長期以來，已有紫杉、喜樹、砒霜、綠茶、靈芝、人參、長春花、天門冬、半枝蓮、天葵子等用於臨床治療癌症；目前已有多種中藥製劑用於中西醫治療惡性腫瘤，包括失笑散加味、二陳湯、海藻玉壺湯、附子理中湯、膈下逐瘀湯、柴芍六君子湯、參苓白朮散、八珍湯，參芪扶正注射液、康萊特注射液、巖舒注射液、華蟾素注射液、 苦參鹼注射液等。中醫藥治療在改善癌症病變，減輕放、化療毒副作用，防止腫瘤轉移和復發等方面取得了一些較好的效果，抗癌中草藥已在中醫醫院和中醫領域得到廣泛應用。然而，迄今中草藥尚未在國內外成為首選抗癌藥物，現有臨床中草藥的抗癌療效亟需進一步提高。長期以來，人們應用傳統思維、理念和方法研發抗癌中草藥，雖然已取得了進步，但收效甚微。腫瘤細胞仍每時每刻都在危害著成千上萬癌症病人的生命，惡性腫瘤已成為嚴重威脅我國人民生命的罪魁禍首。我國中醫中藥是一個偉大的寶庫，在抗癌治療方面具有很大的潛力，若採用古為今用、洋為中用的策略，應用現代生物醫藥科學技術，進行中藥有效部位、有效組份、有效成分的創新中藥研究，很有可能研發出新型有效抗癌新藥。血管為人體正常組織器官的形態發生與功能維護所必需，它與人體發育失調和多種病因導致的種種疾病密切相關。腫瘤血管生成在腫瘤發生、發展、轉移和復發中具有舉足輕重的作用。一系列研究表明只要有效地抑制腫瘤血管生成或破壞已有腫瘤血管，就能抑制腫瘤生成、轉移與復發。此外，糖尿病和風溼性關節炎等疾病都有血管增生，其血管異常與腫瘤血管非常相似。因此，血管增生抑制劑也可用於治療糖尿病和風溼性關節炎等血管增生性疾病。近年來，人們對腫瘤血管生成機制的研究不斷深入，五種抗腫瘤血管生成的藥物如Avastin、Angiostatin等相繼被開發出來，已在臨床上推廣應用。這類藥物不但可以用於大多數實體腫瘤的治療，還可以用於腫瘤的預防，同時對其他與血管生成有關的疾病如糖尿病視網膜病變、風溼性關節炎、銀屑病、血管瘤、動脈粥樣硬化等的預防與治療，都具有一定的理論和現實意義。
去氫厄弗酚(dehydroeffusol，化學名為2，7_ 二羥基甲基_5_乙烯基菲，分子式=C17H14O2-分子量250)為燈心草中特徵性的成分之一。燈心草(Juncus effusus L.) 為燈心草科(Juncaceae)燈心草屬(Juncus L.)植物燈心草(Juncus effusus L.)的乾燥莖髓或全草，別名燈心草、燈草，又名虎鬚草、燈心、碧玉草、水燈心、鐵燈心等。燈心草分布於全球各地，全國各地均有生產，主產於江蘇、四川、雲南、貴州等地。性微寒，味甘、淡，歸心、肺、小腸經，功能清心火，利小便，可治療心煩少眠、高熱口渴、尿少澀痛、小兒疳積、口舌生瘡等症。目前研究表明，燈心草中的菲類成分具有抗菌、抗氧化、抗微生物及抗藻活性。

發明內容
本發明目的在於提供一種去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用，提供了一種用於治療腫瘤及抑制血管生成的新用途。本發明人在分離出燈心草抗腫瘤有效組份後，進一步分離純化出具有抗腫瘤的有效單體，經化學結構分析該活性單體名為去氫厄弗酚(dehydroeffusol)。經文獻調研和查新，去氫厄弗酚對腫瘤細胞及腫瘤血管生成的影響，國內外至今未見文獻報導。為了解決現有技術中的這些問題，本發明提供的技術方案是本發明人研究證明去氫厄弗酚具有很好的抗腫瘤和抑制腫瘤血管生成作用。本發明提供一種去氫厄弗酚在製備抑制腫瘤及血管生成的藥物或保健食品或化妝品中的應用，並提供了一種新的抑制腫瘤及腫瘤血管生成的防治方案，為研發新型抗腫瘤藥物和發現藥物作用新的靶點提供科學依據和重要信息，為中醫藥抗腫瘤治療提供創新中藥。所述去氫厄弗酚來源於天然藥物燈心草屬植物提取或化學合成。本發明提供一種去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用。本發明具體的技術方案如下燈心草抗腫瘤及腫瘤血管生成有效成分去氫厄弗酚的製備方法是乾燥的燈心草藥材壓碎，浸提，富集，得去氫厄弗酚粗品，薄層層析(TLC)檢識，用體外腫瘤細胞增殖和腫瘤類血管生成模型測定其活性。去氫厄弗酚粗品經反覆分離純化即得去氫厄弗酚純品，去氫厄弗酚的化學結構和分子式見圖1，其純度達95%以上。去氫厄弗酚用於製備抗腫瘤及抑制腫瘤血管生成藥物，可被製成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、口服劑、膏劑、霜劑、 乳劑或納米劑，這些藥物含有有效劑量的去氫厄弗酚及常規藥用載體和/或賦形劑。本發明提供了一種去氫厄弗酚在製備抑制腫瘤及腫瘤血管生成的藥物或保健食品或化妝品中的應用。去氫厄弗酚的靶標為多種惡性腫瘤，包括各種淋巴瘤、白血病、淋巴細胞白血病、T淋巴細胞瘤、腫瘤幹細胞引起的腫瘤、乳腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤、腦膠質瘤、 肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌、腎癌、骨髓瘤、卵巢癌和宮頸癌等。優選的技術方案中包括所述抑制腫瘤及腫瘤血管生成的藥物中含有藥學上有效量的去氫厄弗酚及其藥學上可接受的載體。優選的技術方案中包括所述抑制腫瘤及腫瘤血管生成的藥物劑型選自注射液、 片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、口服劑、膏劑、霜劑或乳劑。優選的技術方案中包括所述抑制腫瘤及腫瘤血管生成的藥物用於防治至少一種選自下述之一的疾病血管瘤、血管纖維瘤、白血病、新生血管性青光眼、糖尿病視網膜病變、早熟視網膜病及視網膜靜脈閉塞、視網膜變性、晶體後纖維組織增生、顆粒性結膜炎、血管生成引起的角膜疾病、更年期黃斑和黃斑變性、牛皮癬、老年盤狀斑變性、風溼性關節炎、 銀屑病、毛細管擴張、膿性肉芽腫、傷口癒合中抑制斑痕形成、動脈粥樣硬化、脂溢性皮炎和痤瘡。優選的技術方案中包括所述抑制腫瘤及腫瘤血管生成的藥物用於腫瘤或腫瘤轉移的化學療法或輔助治療。本發明的用途如下(1)本發明的去氫厄弗酚用於防治和或治療至少一種以上選自下述之一的疾病 癌症(請詳見以上第一頁權利5所述)和或癌症轉移，白血病、淋巴瘤、血管瘤，血管纖維瘤，新生血管性青光眼，糖尿病視網膜病變，早熟視網膜病及視網膜靜脈閉塞，視網膜變性， 晶體後纖維組織增生，顆粒性結膜炎，血管生成引起的角膜疾病，更年期黃斑和黃斑變性， 牛皮癬，老年盤狀斑變性及風溼性關節炎，銀屑病，毛細管擴張，膿性肉芽腫，傷口癒合中抑制斑痕形成，動脈粥樣硬化，脂溢性皮炎和痤瘡。(2)本發明的去氫厄弗酚有抗腫瘤、腫瘤血管生成及其他與血管生成有關疾病治療、預防的用途，還有用於腫瘤化療和/或輔助治療的用途。本發明的去氫厄弗酚抑制腫瘤及腫瘤血管生成保健食品或化妝品。(3)本發明的去氫厄弗酚可以單獨使用或與其他藥物配合製備成災臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物，例如注射液、片齊 、粉齊 、顆粒齊 、膠囊劑、口服劑、膏齊 、霜齊 、乳劑或納米劑等多種形式。(4)本發明中去氫厄弗酚可以應用於抗腫瘤、腫瘤血管生成及其他與血管生成有關疾病治療和預防。更具體地，本發明的去氫厄弗酚用於藥物、食品、化妝品。相對於現有技術中的方案，本發明具有以下特點和優點(1)研究的原創性本專利申請人應用自己創立的腫瘤幹細胞和腫瘤新生血管生成模型，從中成藥燈心草中分離出活性成分，在國際上首先發現去氫厄弗酚具有很強的抗腫瘤及抗腫瘤新生血管生成的作用，去氫厄弗酚的抗腫瘤和腫瘤血管生成作用在國內外迄今尚未見報導。本研究成果具有原創性。(2)研究的創新性本專利申請人打破常規，勇於創新，採用現代高新科學技術發掘中醫藥寶庫，以腫瘤幹細胞和腫瘤細胞為靶標，研發中草藥抗癌和抗腫瘤新生血管形成藥物，發現去氫厄弗酚對腫瘤幹細胞和腫瘤細胞具有較強的特異性抑制作用，本研究成果具有創新性和開拓性；研發中草藥來源的特異性高的抗癌藥物和抗腫瘤血管生成創新性藥物具有高科技和中國特色。(3)發明的實用性本專利申請人的研究工作已證明去氫厄弗酚具有較強的抗腫瘤作用和抗腫瘤新生血管形成的活性，而且口服有效、高效低毒、價格便宜、穩定性好。利用該發現製備抑制腫瘤及腫瘤血管生成的藥物可用於治療和預防與腫瘤或腫瘤血管生成相關的疾病，還可用於腫瘤化療和/或輔助化療方面的治療。本發明巧妙地以血管生成作為治療疾病的靶點，研究並闡明去氫厄弗酚的藥用療效和機制，為其新用途開發和發現藥物作用新的靶點提供科學依據和重要信息。去氫厄弗酚可用於藥物、保健品和或化妝品等多種用途。綜上所述，本研究集理論創新、應用創新、技術創新為一體，能獲得具有自主智慧財產權的新藥和藥用前體物質，在祖國傳統醫藥的二次開發中具有前瞻性、先導性和探索性的前沿技術，能為抗腫瘤治療另闢蹊徑。


下面結合附圖及實施例對本發明作進一步描述圖1為去氫厄弗酚化學結構(C17H14O2,分子量250)；圖2為去氫厄弗酚對人胃癌細胞MGC803增殖的影響；圖3為去氫厄弗酚對人胃癌細胞HGC-27增殖的影響；圖4為去氫厄弗酚對人膠質瘤細胞U251增殖的影響；圖5為去氫厄弗酚對人胃癌細胞AGS增殖的影響；圖6為去氫厄弗酚對人腦膠質瘤細胞SHG44增殖的影響；圖7為去氫厄弗酚對人腦膠質瘤幹細胞系SU2增殖的影響；圖8為去氫厄弗酚對人胃癌細胞MGC803類血管生成的影響；圖9為去氫厄弗酚對人胃癌細胞AGS類血管生成的影響；圖10為去氫厄弗酚對小鼠腫瘤幹細胞PMKO 102-3類血管生成的影響；圖11為去氫厄弗酚對人腦膠質瘤幹細胞SU2類血管生成的影響；圖12為去氫厄弗酚對人胃癌細胞MGC803細胞周期的影響；圖13為去氫厄弗酚對人胃癌細胞MGC803細胞凋亡的影響；圖14為去氫厄弗酚對人胃黏膜上皮細胞GES-I生長和死亡的影響；其中DAPI染色為藍色，染細胞核；圖15為去氫厄弗酚對人胃癌細胞MGC803生長和死亡的影響(DAPI為藍色，染細胞核)；圖16為去氫厄弗酚對人胃癌細胞MGC803細胞亞細胞結構的掃描電鏡觀察；圖17為去氫厄弗酚對人胃癌細胞MGC803細胞亞細胞結構的透射電鏡觀察。
具體實施例方式以下結合具體實施例對上述方案做進一步說明。應理解，這些實施例是用於說明本發明而不限於限制本發明的範圍。實施例中採用的實施條件可以根據具體廠家的條件做進一步調整，未註明的實施條件通常為常規實驗中的條件。實施例1去氫厄弗酚的製備乾燥的燈心草藥材壓碎，乙醇浸提，醇液減壓濃縮至無醇味，上樣於已大孔樹脂柱，用水、乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫部位，減壓回收至幹，矽膠拌樣，上樣於矽膠柱，薄層層析(TLC)檢識並富集留份得去氫厄弗酚粗品。去氫厄弗酚粗品再經矽膠柱等反覆分離純化即得去氫厄弗酚純品(純度> 90% )，再經製備型HPLC進一步純化，其純度達95%以上。 去氫厄弗酚的化學結構和分子式見圖1。實施例2去氫厄弗酚對多種腫瘤細胞/腫瘤幹細胞增殖的影響1、腫瘤細胞株(62株)名稱人成巨核細胞白血病細胞MEG-01、Dami和Daudi、人慢性髓原白血病細胞PBL985 和K562、人原髓細胞白血病細胞HL-60、人白血病細胞株NB-4、人紅白細胞白血病細胞 HEL、人單核細胞白血病細胞THP-1、UC-CUC、SHI-I和SHI-2、人Burkitt 『 s淋巴瘤細胞Raji, Namalva、人T淋巴細胞白血病細胞Jurkat、人T淋巴細胞系H9、人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞CCRF、人骨髓瘤細胞系82沈、My-5、opm2、KMSll和LP-1、人骨肉瘤細胞 Saos-2、MG-63、U-20S和SW1353、人膠質瘤幹細胞系SU2、人膠質瘤細胞SHG44、U251、A172 和U-87MG、人臍帶靜脈血管內皮細胞Eahy擬6、人臍靜脈內皮細胞ECV-304、人肺微血管內皮細胞HLMVEC、人卵巢癌細胞系H0-8910PM和HeylB、人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231、 人乳腺浸潤性導管癌旁皮膚細胞CCD-1095SK、人肝癌細胞H印G2和HCCC-9810、人肺癌細胞 SPC-A-U95-D和HU99、人結腸癌細胞系HT-四和SW480、人黑色素瘤高轉移細胞株C8161 和A375、人回盲腸癌細胞CCL-M4、人盲腸腺癌細胞(未分化)Hce-8693、人宮頸癌腸轉移細胞Caski、人宮頸癌細胞Hela、人腎上腺神經母細胞瘤細胞(腦轉移)KP_N_NS、人胃癌細胞 MGC803、HGC-27、SGC-7901和AGS、人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞RD、人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞Caki-I、小鼠腫瘤內皮細胞3B11、小鼠脂肪肉瘤細胞SW872、小鼠腫瘤幹細胞2C4G2均來自本所實驗室細胞庫。細胞培養基RPMI 1640和DMEM(高糖)為Hyclone公司產品。Alamarblue試劑為 INVITR0GEN公司產品。2、受試藥物去氫厄弗酚(按實施例1方法製備)用二甲基亞碸(DMSO)溶解，用RPMI 1640或 DMEM (高糖)培養基稀釋成所需濃度。3、實驗方法細胞培養細胞用含體積分數10%小牛血清及雙抗(青黴素和鏈黴素)的 RPMI1640或DMEM(高糖)培養液常規培養。每48-7 用0. 25%胰酶消化，1 2 1 4 擴瓶傳代。(1)貼壁細胞用0. 25%胰酶消化貼壁細胞，離心後計數，以合適的濃度接種於96孔板，37°C、 5% CO2培養箱中培養Mh，分別加入不同濃度的去氫厄弗酚，另外以單純的培養液和未經藥物作用的細胞作為空白對照和陰性對照，每組設3個復孔，培養4 後，加入AlamarBlue試劑IOul/孔，繼續培養池，用微孔檢測儀進行測定螢光下0D560nm/0D590nm，按以下公式計算平均抑制率細胞抑制率(％ ) = 1_(加藥孔RFU-空白對照RFU)/(對照組RFU-空白對照 RFU) X 100%。(2)懸浮細胞吸取懸浮細胞懸液，離心計數，以合適的濃度與不同濃度的去氫厄弗酚混合後，接種於96孔板，分別以單純的培養液和未經藥物作用的細胞作為空白對照和陰性對照，每組設3個復孔，37°C>5% CO2培養箱中培養4 後，加入AlamarBlue試劑IOul/孔，繼續培養 2h,用微孔檢測儀進行測定螢光下0D560nm/0D590nm，按上述公式計算平均抑制率。4、實驗結果結果表明去氫厄弗酚對各種淋巴瘤、白血病、淋巴細胞白血病、T淋巴細胞瘤、腫瘤幹細胞、乳腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤、腦膠質瘤、肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌、腎癌、骨髓瘤、卵巢癌、宮頸癌等62種腫瘤細胞的增殖具有明顯的抑制作用，且隨著藥物濃度的增加，對62 種腫瘤細胞增殖抑制作用相應地增強，其中去氫厄弗酚對人胃癌細胞增殖的抑制效果最強，見表1所示。表1去氫厄弗酚對62種腫瘤細胞增殖的影響
權利要求
1.一種去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制腫瘤血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用。
2.根據權利要求1所述的去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制腫瘤新生血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用，其特徵在於去氫厄弗酚用於腫瘤的化學治療或腫瘤的輔助治療。
3.根據權利要求1所述的去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制腫瘤血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用，其特徵在於所述抑制腫瘤和/或腫瘤新生血管生成的藥物中含有藥學上有效量的去氫厄弗酚及其藥學上可接受的載體，包括各種納米載體。
4.根據權利要求1所述的去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制腫瘤血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用，其特徵在於所述去氫厄弗酚來源於天然藥物燈心草屬植物提取或化學合成。
5.根據權利要求4所述的去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制腫瘤血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用，其特徵在於所述抑制腫瘤和/或血管生成的藥物劑型選自注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、口服劑、膏劑、霜劑、乳劑或納米劑。
6.根據權利要求4所述的去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制腫瘤血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用，其中所述的腫瘤包括各種淋巴瘤、白血病、淋巴細胞白血病、T淋巴細胞瘤、腫瘤幹細胞引起的腫瘤、乳腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤、腦膠質瘤、肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌、腎癌、骨髓瘤、；卵巢癌、宮頸癌等。
7.根據權利1所述的去氫厄弗酚在製備抗腫瘤或抑制腫瘤血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用，其特徵在於所述藥物用於預防或治療原發或繼發產生的血管瘤、血管纖維瘤、新生血管性青光眼、糖尿病視網膜病變、早熟視網膜病及視網膜靜脈閉塞、視網膜變性、晶體後纖維組織增生、顆粒性結膜炎、血管生成引起的角膜疾病、更年期黃斑和黃斑變性、牛皮癬、老年盤狀斑變性及風溼性關節炎、銀屑病、毛細管擴張、膿性肉芽腫、傷口癒合中抑制斑痕形成、動脈粥樣硬化、脂溢性皮炎和痤瘡。
全文摘要
本發明公開了一種去氫厄弗酚(dehydroeffusol，化學名為2，7-二羥基-1-甲基-5-乙烯基菲，分子式C17H14O2，分子量250)在製備抗腫瘤和抑制腫瘤血管生成藥物或保健食品或化妝品中的應用。該發明首次發現中草藥燈心草單體去氫厄弗酚具有抑制腫瘤及腫瘤血管生成的活性，利用該發現製備抑制腫瘤及腫瘤血管生成的藥物可用於治療或預防和惡性腫瘤以及與腫瘤血管生成相關的疾病，還可用於腫瘤化療和/或輔助化療方面的治療。本發明巧妙地以腫瘤幹細胞、腫瘤細胞和腫瘤血管生成作為靶標，研究並闡明去氫厄弗酚的藥用療效和作用機制，為去氫厄弗酚的抗腫瘤創新中藥研發奠定了基礎，也為惡性腫瘤的中藥治療提供科學依據和重要信息。
文檔編號A23L1/29GK102423307SQ20111032495
公開日2012年4月25日 申請日期2011年10月24日 優先權日2011年10月24日
發明者周泉生, 成旭東, 曹志飛, 朱峰妍, 蔣小崗, 顧振綸 申請人:周泉生, 蘇州中藥研究所