B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片及其試劑盒的製作方法
2023-10-10 14:11:09 2
專利名稱：：B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片及其試劑盒的製作方法
技術領域：
：本發明屬於臨床檢測的基因晶片
技術領域：
，具體地說涉及一種B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片及其試劑盒。
背景技術：
：我國是世界上B肝病毒感染最嚴重的國家。通常對B肝進行兩對半檢測是臨床診斷與血液篩查的重要內容。B肝e抗原是檢測中的一項重要指標。e抗原來源於B型肝炎病毒的核心。查出e抗願，其意義就等於査出核心抗原，表示病毒複製活躍，並且傳染性較強。要了解HBsAg陽性的人有沒有傳染性，比較常用而又可靠的檢測方法就是驗e抗原和e抗體。B肝e抗原免疫逃避可引起臨床血清學對B肝e抗原的漏檢，從而不利於判斷病人的傳染性及治療愈後情況。目前臨床上還沒有針對B肝e抗原漏檢採取專門診斷方法。
發明內容為了提供一種檢測B肝e抗原漏檢的方法，提供了一種B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片及其試劑盒。本發明採用下述技術方案提供一種B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片，在固相載體上固定檢測B肝e抗原免疫逃避的特異DNA探針，所說的探針序列可以為probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT所述的固相載體是NC膜，尼龍膜，矽膠片，或玻片，固相載體是經過化學修飾的，固相載體可以是經過醛基化修飾的玻片。本發明還提供一種如上所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片試劑盒，由B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片和配套使用的試劑組成；配套使用的試劑包括對血清樣本進行處理的處理液，對處理樣本進行擴增標記的擴增液，與微陣列進行雜交反應的雜交液，洗滌液，酶標工作液，和檢測液；在血清樣本的檢測過程中配套試劑盒與B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片是聯合使用的。所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片的試劑盒，其特徵在於，所述的配套使用的試劑可以擴增標記引起B肝e抗原免疫逃避的突變DNA基因片斷，所述的樣本擴增液由B肝e抗原免疫逃避的突變DNA基因片斷擴增引物和聚合酶鏈式反應液組成，所述的引物有生物素標記，所述的引物序列可以是Primer5，-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3，-B1965tcagaaggcaaaaatcagagt所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片的試劑盒，其特徵在於，所述的與微陣列進行雜交反應的雜交液，和用於洗滌的洗滌液主要成分是SSC和SDS。所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片的試劑盒，其特徵在於，所述的酶標工作液由辣根過氧化物酶標記的親和素組成，所述的檢測液由發光物和過氧化氫二種試劑組成，使用前混合，所述的發光物為魯米諾、異魯米諾或其衍生物。綜上所述，本發明提供了一種經濟簡便的方法，用於對B肝e抗原免疫逃避的檢測，避免臨床血清學對B肝e抗原的漏檢，從而判斷病人的傳染性及治療愈後情況。圖1為檢測B肝e抗原免疫逃避基因的探針矩陣示意圖具體實施方式本發明的目的，是這樣實現的，將設計的特異性探針固定於玻片、膜、矽片、高分子材料載體表面上，形成具有微陣列的基因檢測晶片。將待測樣本經過處理，用專門設計的引物擴出所需片斷，與載體表面探針微陣列經過雜交，再用發光儀進行檢測得到結果。探針設計probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT引物設計-Primer5'-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3'-B1965tcagaaggcaaaaatcagagt實施例1:按以下方法對各測試血請樣品進行檢測1.按照產品說明書對血清樣本進行處理，提取病毒核酸。2.加入PCR擴增液，對處理得到的核酸樣品進行擴增標記，用帶BIOTIN標記的引物給產物標記上生物素。3.加入反應區域，10-20ul。4.42'C保溫保溼反應60分鐘。5.用洗液洗滌4-6次，每次2分鐘，振動。6.加入親和反應液，10-20ul。7.在42'C反應15-20min。8.用洗液洗滌4-6次，每次2分鐘，晃動。9.加檢測液20ul/孔，使檢測液均勻分布於反應區域。10.CCD檢測，視發光信號強度曝光30-60秒。實施例2:按以下方法對各測試血請樣品進行檢測1.按照產品說明書對血清樣本進行處理，提取病毒核酸。2.加入PCR擴增液，對處理得到的核酸樣品進行擴增標記，用帶螢光標記的引物給產物標記上螢光。3.加入反應區域，10-20ul。4.42'C保溫保溼反應60分鐘。5.用洗液洗滌4-6次，每次2分鐘，振動。6.用共聚焦螢光顯微鏡或螢光掃描儀檢測獲得結果。結果判定依據不同指標的CutOff值，參考標準品梯度曲線，判定樣品血清的陰陽性。與此同時，用常規方法對測試的血清樣品進行常規檢測。結果表明，用本發明的試劑盒得出的測試結果與常規方法相同。序列表tableseeoriginaldocumentpage6權利要求1.一種B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片，其特徵在於固相載體上固定有帶有B肝e抗原免疫逃避相關核酸序列的DNA探針，所說的探針的核酸序列可以為如下一組序列probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT2.如權利要求l所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片，其特徵在於，所述的固相載體是硝酸纖維素膜，尼龍膜，矽膠片，或玻片，固相載體是經過化學修飾的，固相載體可以是經過醛基化修飾的玻片。3.—種包含如權利要求l所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片的試劑盒，'由B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片和配套使用的試劑組成；配套使用的試劑包括對血清樣本進行處理的處理液，對經過處理的樣本進行擴增標記的擴增液，與微陣列進行雜交反應的雜交液，洗滌液，酶標工作液，和檢測液。4.如權利要求3所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片的試劑盒，其特徵在於，所述的擴增液由B肝e抗原免疫逃避突變基因片段的擴增引物和聚合酶鏈式反應液組成，所述的引物有生物素標記，所述的引物序列可以是-Primer5'-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3、B1965tcagaaggcaaaaatcagagt5.如權利要求3或4所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片的試劑盒，其特徵在於，所述的與微陣列進行雜交反應的雜交液，和洗滌液的主要成分是SSC和SDS。6.如權利要求3或4所述的B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片的試劑盒，其特徵在於，所述的酶標工作液由辣根過氧化物酶標記的親和素組成，所述的檢測液由發光物和過^化氫二種試劑組成，所述的發光物為魯米諾、異魯米諾或其衍生物。全文摘要本發明提供一種B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片及其試劑盒，屬於臨床檢測的基因晶片
技術領域：
，包括固相載體上固定有檢測B肝e抗原免疫逃避的特異DNA探針的基因晶片和配套使用的試劑；配套使用的試劑包括對血清樣本進行處理的處理液，對處理樣本進行擴增標記的擴增液，與微陣列進行雜交反應的雜交液，洗滌液，酶標工作液，和檢測液；在血清樣本的檢測過程中配套試劑與B肝e抗原免疫逃避檢測基因晶片是聯合使用的。本發明可用於B肝e抗原免疫逃避的檢測，避免臨床上B肝e抗原漏檢，從而有利於判斷B肝病人的傳染性及治療愈後情況。文檔編號C12Q1/68GK101333559SQ20071004322公開日2008年12月31日申請日期2007年6月29日優先權日2007年6月29日發明者汪寧梅,穆海東,羅芳英,颯黎申請人:上海裕隆生物科技有限公司